H9N2禽流感病毒血凝素蛋白的主要特性及B/T细胞抗原表位预测分析

目的应用生物信息学方法分析人源和禽源H9N2禽流感病毒血凝素蛋白(hemagglutinin,HA)的主要特性,预测可能的B/T细胞抗原表位。方法以H9N2禽流感病毒HA蛋白的氨基酸序列一级结构为基础分析其保守性,采用ProtParam预测H9N2禽流感病毒HA蛋白的理化特性,SOPMA预测其二级结构,MotifScan预测翻译后修饰位点,DNAStar分析其序列的亲水性指数、柔韧性指数、可及性参数以及抗原指数并推测B细胞抗原表位的可能位置,采用SYFPEITHI的T细胞表位预测工具分别预测CTL和Th细胞表位。结果人源和禽源H9N2禽流感病毒HA蛋白氨基酸序列分别有90和75个变异位点,其中有38个突变位点与氨基酸置换均相同,有14个突变位点相同但氨基酸置换不同。人源和禽源毒株中还各有38和23个特异性突变位点。HA蛋白存在多个糖基化、酰胺化及磷酸化等翻译后修饰位点。除了蛋白激酶C磷酸化位点外,其他类型的翻译后修饰位点在人源和禽源毒株中均有一些变化。经综合各种单参数,HA蛋白均为亲水性蛋白。人源和禽源H9N2禽流感病毒HA蛋白含有4个B细胞表位,8个CTL细胞表位和6个Th细胞表位,以人源和禽源的B细胞和Th细胞表位差异较大,而CTL细胞表位有部分序列相同。结论人源和禽源H9N2禽流感病毒HA蛋白的氨基酸序列有一定差异,其B/T细胞抗原表位的不同,可为H9N2禽流感病毒疫苗的研制提参考。

MERS-CoV棘突蛋白主要特性及B/T细胞抗原表位预测分析

目的应用生物信息学方法分析中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)棘突蛋白(Spike,S)的主要特性,预测可能的B/T细胞抗原表位。结果 MERS-CoV的S蛋白氨基酸序列基本保守,具有多个糖基化、酰胺化及磷酸化翻译后修饰位点。综合各种单参数预测MERS-CoV S蛋白可能存在4个B细胞抗原表位、7个CTL细胞表位和5个Th细胞表位。方法以MERS-CoV S蛋白的氨基酸序列一级结构为基础分析其保守性,采用ProtParam预测S蛋白的理化特性,SOPMA预测其二级结构,MotifScan预测翻译后修饰位点,DNAStar分析其序列的亲水性指数、柔韧性指数、可及性参数以及抗原指数,推测B细胞抗原表位的可能位置,采用SYFPEITHI的T细胞表位预测工具预测CTL和Th细胞表位。结论生物信息学方法预测MERS-CoV S蛋白氨基酸保守序列,该蛋白可能含有B/T细胞抗原表位,为MERS-CoV疫苗研制及其他相关研究奠定了基础。

人易感H10N8禽流感病毒血凝素蛋白主要特性及B/T细胞抗原表位预测分析

目的应用生物信息学方法分析人H10N8禽流感病毒血凝素蛋白(hemagglutinin,HA)的主要特性,预测可能的B/T细胞抗原表位。方法采用Prot Param预测H10N8禽流感病毒HA蛋白的理化特性,SOPMA预测二级结构,Motif Scan预测翻译后修饰位点,DNAStar分析其序列的亲水性指数、柔韧性指数、可及性参数以及抗原指数,推测B细胞抗原表位的可能位置,并采用SYFPEITHI的T细胞表位预测工具分别预测CTL和Th细胞表位。结果人易感H10N8禽流感病毒HA为亲水性蛋白,二级结构中包含218个α-螺旋、108个β-片层、64个β-转角和171个无规卷曲,具有多个糖基化、酰胺化及磷酸化翻译后修饰位点。经综合各种参数,预测出H10N8禽流感病毒HA蛋白可能存在的7个B细胞抗原表位、7个CTL细胞表位和8个Th细胞表位。结论 HA蛋白B/T细胞抗原表位的预测为人易感H10N8染禽流感病毒的疫苗研制奠定了一定的基础。

基于ZnT8表位肽和BTLA的疫苗对CD8^+T细胞的免疫抑制效应

目的探讨ZnT8表位肽和B、T淋巴细胞弱化因子(BTLA)的疫苗对CD8+T细胞的免疫抑制效应。方法制备含有ZnT8表位肽和BTLA的疫苗,免疫人外周血单个核细胞,观察对CD8+T细胞的抑制效应。结果基于ZnT8表位肽和BTLA的疫苗抑制人外周血单个核细胞的CD8+T细胞增殖和活化。结论基于ZnT8表位肽和BTLA的疫苗对CD8+T细胞具有免疫抑制效应,为1型糖尿病的治疗提供了理论基础。

B/T细胞弱化分子—CD28超家族一个新的共抑制分子的研究进展

B/T 细胞弱化分子(BTLA)是最近发现的 CD28家族共抑制分子,主要表达于 B 细胞、T 细胞和抗原递呈细胞表面。BTLA 的配体是 TNF 超家族成员疱疹病毒进入介质(HVEM)。HVEM-BTLA 信号途径对 T、B 细胞的活化起负调节作用,在调节机体免疫应答,维持自身免疫稳定中起着十分重要的作用。深入研究 BTLA 的生物学功能及其作用机制对探寻治疗肿瘤、自身免疫性疾病、移植排斥反应、变态反应性疾病等的新干预措施具有重要意义。

B/T淋巴细胞弱化因子在免疫调控和免疫相关疾病中的作用

B/T淋巴细胞弱化因子(B and T lymphocyte attenuator,BTLA)是免疫调控中重要的检查点分子之一。BTLA属于CD28超家族,其蛋白质结构类似于程序性细胞死亡受体-1(programmed cell death-1,PD-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(cytotoxic T lymphocyte associated antigen-4,CTLA-4)。BTLA主要在B细胞和T细胞中表达,也被发现存在于其它一些先天免疫细胞,例如树突状细胞和单核细胞中。到目前为止,疱疹病毒入侵介质(herpesvirus entry mediator,HVEM)是在人类细胞中发现的BTLA的唯一配体。HVEM属于肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor,TNFR)超家族,其与BTLA的相互作用直接连接了CD28和TNFR两大家族。BTLA与HVEM的结合通常介导免疫抑制效应,并在维持免疫耐受方面发挥重要作用。然而近年来研究发现,BTLA/HVEM通路除了提供负调控信号以外,还能促进T细胞的存活,这种双重信号系统的存在使得BTLA介导的免疫调控更加精细和复杂。越来越多的研究表明,BTLA参与并影响了T细胞、B细胞及树突状细胞等介导的免疫调控,并因此在多种免疫相关疾病,例如炎症、肿瘤、感染性疾病及自身免疫性疾病中发挥重要作用。本文以国内外最新研究进展为基础,就BTLA在免疫调控及免疫相关疾病中的作用进行综述。

HBV核心颗粒作为B细胞/T细胞表位的载体

重组乙型肝炎病毒 (HBV)核心 (HBc)这个 2 0面体病毒样颗粒 (VLP)可被视为外来免疫表位的非感染性载体的基本类型。重组 HBc颗粒用于展示多种病毒、细菌和原虫蛋白的免疫显性表位。 HBc颗粒作为载体的实际运用性是由其在异源性表达系统中高水平的合成和正确的自身装配能力来实现的。HBc壳膜二聚体单位不寻常的 α螺旋结构 ,选择包装成为 T=3和 T=4对称的二十面体 ,并存在长而突出的刺突。这些发现增强了人们对 HBc VLP的兴趣。特别是刺突的顶端似乎是展示长达 2 36个氨基酸残基的外来序列的最佳靶位。大量关于表位展示的实验室数据与精确的结构信息相结合 ,有可能设计出以 HBc颗粒为基础的诊断、疫苗和基因治疗工具。

小鼠BTLA胞外功能区基因克隆表达及其对DC表面B7分子表达的影响

目的:研究重组谷胱甘肽S-转移酶(GST)-小鼠B/T细胞弱化因子包外功能区(mBTLAext)融合蛋白(GST-mBT-LAext)对小鼠树突状细胞系DC2.4表面B7分子表达的影响。方法:采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mB-TLAcDNA。将其胞外功能区基因克隆入原核表达载体pGEX-4T-2中,构建重组表达质粒pGEX-4T-2/mBTLAext并转化E.coliBL21(DE3),以1mmol/L的IPTG诱导表达。提取包涵体,经变性、负性后,采用GlutathioneSepharose4B柱纯化可溶性的GST-mBTLAext。将不同浓度的GST-mBTLAext加入到DC2.4的培养体系中,采用流式细胞术检测其对DC上B7-1和B7-2表达的影响。结果:成功地克隆了mBTLA基因,并构建了重组原核表达载体。变性、复性,经GlutathioneSepharose4B柱纯化,获得了可溶性的GST-mBTLAext融合蛋白。经SDS-PAGE鉴定表明,融合蛋白的相对分子质量(Mr)为43000,同预期的结果一致。流式细胞术检测显示,GST-mBTLAext可上调DC2.4上B7-1的表达并呈剂量依赖性,这一作用可被抗GST-mBTLAext血清阻断。未检测到GST-mBT-LAextDC2.4上B7-2的表达有影响。结论:BTLA对DC2.4表面B7分子表达的上调可能是BTLA-HVEM途径反向信号对DC作用的结果,对进一步研究其对DC生物学行为的影响及其分子机制具有重要的理论意义。

小鼠BTLA胞外段腺相关病毒载体的构建和表达

目的构建小鼠B/T淋巴细胞弱化因子(BTLA)胞外段的腺相关病毒载体,并感染中国仓鼠卵巢上皮细胞(CHO)进行真核表达。方法从C57BL/6小鼠脾脏中提取总RNA,经RT-PCR扩增BTLA胞外段,然后将其克隆到腺相关病毒载体的骨架质粒中,构建重组骨架质粒psBTLA。重组质粒经双酶切鉴定及测序正确后,与pHELP质粒以及pRC质粒3质粒共转染293T细胞,收获含病毒的上清后用氯仿-PEG8000的方法进行纯化浓缩,再用浓缩后的病毒液感染CHO细胞,并用SDS-PAGE和Western blot检测BTLA胞外段的表达。结果获得长度为502 bp的小鼠BT-LA胞外段基因,经测序证实其序列正确。含有BTLA胞外段基因的腺相关病毒载体感染CHO细胞后,SDS-PAGE和Western blot分析证实感染的CHO细胞可表达出约21 kD的BTLA胞外段蛋白。结论成功构建小鼠BTLA胞外段基因的腺相关病毒载体,并感染CHO细胞后表达出相应蛋白,为进一步研究BTLA胞外段的功能效应奠定实验基础。

微小RNA-107及B/T淋巴细胞弱化因子在胰腺癌中的潜在应用进展

胰腺癌是消化道常见的恶性肿瘤之一,由于发病隐匿,早期多无症状,诊断困难。胰腺癌诊断主要借助影像学及血清标志物检查,手术治疗为其主要的治疗手段。但由于被发现时多为疾病晚期,错过手术最佳时机,因此预后极差,生存期较短。有研究表明微小RNA(miRNA,miR)在多种肿瘤的发生发展中起关键作用,其中miR-107表达于胰腺癌组织及血液中,与胰腺癌的发生侵袭有关,且有相关数据库表明miRNA能够靶向调控B/T淋巴细胞弱化因子(BTLA)。BTLA与其配体结合传递共抑制信号,在机体抗肿瘤免疫应答中发挥负性调节作用,并与肿瘤的免疫逃逸机制相关,可能成为肿瘤生物治疗潜在的靶点。本文将通过对miR-107与BTLA进行介绍,预测它们可能是胰腺癌的治疗靶点,有望成为胰腺癌诊断及预后标志物。

淋巴细胞靶向治疗在系统性红斑狼疮中现状与未来

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种典型的侵犯人体多脏器的自身免疫性疾病,对人体危害极大。目前该病在临床上应用最为广泛的治疗方案是以激素治疗为主导,辅以免疫抑制剂、细胞毒性药物等药剂的综合治疗。但现有的激素治疗不能在源头抑制疾病的发生,对病程进展恶化无显著改善,而且还会产生多种副作用。因此,生物技术药物应运而生,因其拥有良好的靶向性为治疗SLE提供了新的思路,其安全性和有效性已在临床试验中得到证明。这类生物技术药物的靶点主要集中在干扰素、细胞因子、B淋巴细胞和B细胞刺激分子、T淋巴细胞和共刺激分子。而目前SLE靶向治疗药物也不能完全适用于临床,其面临的主要问题是识别靶点的特异性不强,即无法区分自身反应淋巴细胞和正常淋巴细胞,或是在不同人群中的应用疗效不一致。因此,如何改善靶向治疗精准度成为今后SLE治疗的重要问题。本文对SLE的淋巴细胞靶向治疗现况以及未来精准治疗可能的突破口做了详细的阐述,希望为今后SLE的精确治疗提供新的思路。

类风湿关节炎外周血BTLA及BMSCs内Nrf2信号通路相关基因表达与肺部感染的关系

目的 探究类风湿关节炎(RA)患者外周血B/T淋巴细胞衰减因子(BTLA)及骨髓间充质干细胞(BMSCs)内核因子E2-相关因子2(Nrf2)信号通路相关基因表达与肺部感染的关系。方法 选取2019年7月-2021年7月贵州航天医院收治的30例RA合并肺部感染患者为感染组,选取同期收治无肺部感染RA患者30例为未感染组。采集感染组患者痰液标本,分析病原菌分布情况;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测BTLA、Nrf2、Keap1及ARE的mRNA表达量。结果 感染组患者分离病原菌36株,革兰阴性菌20株(55.56%)、革兰阴性菌11株(30.56%)、真菌5株(13.89%);感染组患者年龄、病程均大于未感染组(P<0.05),合并糖尿病占比高于未感染组(P<0.05);感染组患者白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙二醛(MDA)水平高于未感染组,感染组患者超氧化物歧化酶(SOD)水平、BTLA、Nrf2、Keap1及ARE的mRNA表达量低于未感染组(P<0.05);高龄、长病程、有糖尿病史均是RA合并肺部感染危险因素(P<0.05);Nrf2、Keap1及ARE mRNA表达量与MDA呈负相关(P<0.05),与SOD呈正相关(P<0.05)。结论 RA患者并发肺部感染与BTLA及Nrf2信号通路相关基因表达水平降低有关,外周血BTLA基因表达量缺失可加重患者炎症反应,BMSCs内Nrf2相关信号通路可负向调节患者氧化应激反应,损伤肺部组织,增加病原菌感染风险。

BTLA—HVEM通路阻断对树突状细胞功能影响的体内外研究

目的探讨阻断BTLA-HVEM（B／T淋巴细胞弱化因子．疱疹病毒进入介质）通路对树突状细胞功能的影响和相关免疫学机制。方法构建小鼠BTLA胞外功能区的真核表达载体psBTLA，转染CHO细胞；HSP70-TC-1肿瘤抗原肽刺激小鼠骨髓来源DCs，流式细胞仪检测处理后DCs表面BTLA、HVEM的表达，同时给予转染了psBTLA质粒的CHO细胞的培养上清处理后，检测DCs表面B7-1的表达，ELISA检测上清中IL-12的分泌；处理后的DCs刺激脾细胞，检测淋巴细胞增殖和细胞因子分泌；检测psBTLA体内转染对宫颈癌细胞系TC-1成瘤小鼠DCs表达B7—1和肿瘤生长的影响。结果成功构建小鼠BTLA胞外段的真核表达载体psBTLA，获得了稳定转染psBTLA的CHO细胞，在其培养上清检测到BTLA胞外段（sBTLA）的表达。DCs经抗原肽刺激后BTLA、HVEM表达均上调，加入含sBTLA的上清处理后上调B7—1，上清中分泌的IL-12增加，与脾细胞共培养时促进细胞增殖和IL-2、IFN-γ的分泌；体内基因转染psBTLA促进DCs表达B7-1以及抑制肿瘤生长。结论通过sBTLA阻断BTLA—HVEM共抑制通路，可以进一步促进DCs的功能，更好地激活淋巴细胞，促进抗肿瘤免疫应答。