血尿酸与纤维蛋白原Bβ链基因多态性及其功能表达的关系

目的研究尿酸异常与纤维蛋白原(fibrinogen,Fg)Bβ链-854G/A、-455G/A、-249C/T、-148C/T、448G/A和Bcl-1G/A位点基因多态性及其血浆Fg含量和聚合功能表达的关系。方法选取开滦集团离退休职工1386人,均抽取清晨空腹静脉血测定血生化、尿酸(UA)、血浆Fg浓度和纤维蛋白单体聚合反应速率(FMPV)、FMPV/Amax等反映Fg聚合功能的指标,并检测FgBβ链6个位点基因多态性。依据尿酸值将人群分为高尿酸血症组与正常尿酸组,探讨尿酸异常与Fg的关系。结果高尿酸与否人群FgBβ各多态性位点等位基因和基因型频率分布差别无统计学意义(P>0.05);在-854GG型、-455GG型、Bcl-1GG型人群中FMPV/Amax,-249CT+TT型人群中Fg浓度、FMPV、FMPV/Amax,-148CC型、448GG型人群中Fg浓度、Amax均为高尿酸血症组低于正常尿酸组(P<0.05);以有无高尿酸为因变量的Logistic回归分析,依次筛选出肌酐、性别、高血压病、体重指数、年龄、FMPV/Amax等指标。结论尿酸可以影响FgBβ链6个基因多态性位点对于血浆Fg含量和分子活性功能表达的调控作用;高尿酸血症与脂代谢异常及其引发的慢性炎症反应等因素共同作用可导致脑梗死的发病。

血压对多态性纤维蛋白原Bβ链基因功能表达的影响

目的:研究血压对多态性血浆纤维蛋白原(Fg)Bβ链-854G/A、-455G/A、-249C/T、-148C/T、448G/A和Bc l-1G/A基因功能表达的影响。方法:选取开滦集团离退休职工1 391人进行体检和问卷调查,受检者清晨抽取静脉血标本测定血浆Fg浓度和纤维蛋白单体聚合反应速率(FMPV)、最大吸光度(Am ax)、FMPV/Am ax等反映Fg聚合功能的指标,然后立即测定血压;应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)检测Fg Bβ链6个多态性位点的基因型。结果:高血压状态组(HG)与正常血压组(NG)组间6个基因多态性位点等位基因及各基因型的频率分布均无显著差异(P>0.05)。HG与NG的Fg浓度、FMPV/Am ax无显著差异(P>0.05),但HG的FMPV、Am ax低于NG(P<0.05),HG和NG的Bβ-854位点变异基因型组Fg浓度、FMPV、Am ax、FMPV/Am ax均高于野生型(P<0.05),且NG的Bc l-1位点变异基因型的Fg浓度、FMPV高于野生型(P<0.05),但HG的Bβ-854和Bc l-1变异基因型组的Fg、FMPV、Am ax均低于NG(P<0.05)。结论:Fg Bβ-854基因位点是调控Fg功能表达的重要部位,Bc l-1的变异基因型可使血浆Fg浓度和FMPV升高;高血压状态可以明显抑制这种调控作用,并损伤纤维蛋白单体聚合成二聚体的过程,从而导致特殊类型的凝血功能障碍。

血浆纤维蛋白原Bβ链基因多态性与血浆Fg功能表达的相关性研究

目的分析纤维蛋白原-1420G/A、-993C/T、BsmAIG/C位点基因多态性的分布特征及其对血浆Fg浓度和分子活性等功能表达的影响。方法采用整体抽样的方法选取开滦集团职工1248人,均抽取清晨空腹静脉血测定生化指标及Fg浓度、Fg单体聚合反应速率(FMPV)等指标,并检测基因型。结果 Fg浓度、FMPV、Amax、FMPV/Ama在3位点的野生型与变异型组间无差异(P>0.05);男性组FMPV/Amax低于女性组(P<0.05);高UA组中-1420的GA+AA基因型、-993的CT+TT基因型、Bs-mAI的GC+CC基因型分布频率均高于正常组(P<0.01);在无高血压病史人群中-1420 GA+AA组的FMPV/Amax高于GG组(P<0.05)。结论 -1420和-993位点与BsmAI位点之间具有特殊的链锁不平衡关系,这3个SNPs对于血浆Fg浓度和分子功能表达没有直接的影响;但它们可通过引发血UA等特定因子的变化,而影响血浆Fg分子功能的表达。

纤维蛋白原Bβ链变异基因的体外重组

目的:采用基因重组技术将可能与血栓形成有关的纤维蛋白原Bβ链羧基端的KGD结构置换为EGS结构,提供一种简单方便的构建变异克隆的方法。方法:在含有正常BβcDNA的pMLP质粒(简称p668)的溶液中,加入变异引物、筛选引物和dNTP。在T4聚合酶和T4连接酶的作用下,合成除变异碱基外,其他碱基均与原正常Bβ链互补的变异Bβ链,经过两次在不同菌系的大肠杆菌中的表达与筛选,获取变异克隆。结果:由于变异克隆引入了BstBI这个新的酶切位点,可通过电泳证实变异克隆构建的成功与否,本研究经电泳及DNA序列分析证实重组体确系已含变异EGS结构的克隆。结论:本方法为一构建变异克隆的分子生物学技术,可用于任何克隆的构建。本研究成功地获得了纤维蛋白原Bβ链羧基端KGD转换为EGS的变异体。

纤维蛋白原Bβ链基因启动区2个多态位点与冠心病的相关性

目的研究纤维蛋白原(Fg)Bβ链基因启动区上游-148C/T及-455G/A多态性位点与冠心病(CAD)及血浆Fg水平的相关性。方法90例CAD患者及年龄、性别相匹配的115例正常对照者,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测FgBβ-148C/T及-455G/A基因型,比较两组基因型及等位基因频率分布及不同基因型间血浆Fg水平。结果CAD组-148CC基因型频率较对照组减少;而CT及TT基因型较对照组增加;CAD组C等位基因频率为70.56%,对照组为86.09%(P<0.01)。而-455G/A多态位点频率在两组间无显著差异。-148C/T及-455G/A多态性位点均影响CAD组及对照组血浆Fg水平,但对冠脉受累支数无影响。结论FgBβ-148C/T多态性与中国人群CAD及血浆Fg水平相关,T等位基因可能是中国人群CAD的遗传易患因子。

白介素和FgBβ-1420G/A、-993C/T、1689T/G、BsmAIG/C、I6I/D、345C/T、HinfIA/C基因多态性与血浆Fg浓度及分子功能的相关性研究

目的:分析白介素(IL)等细胞因子与纤维蛋白原(Fg)Bβ链-1420G/A、-993C/T、1689T/G、BsmAIG/C、I6I/D、345C/T、HinfIA/C 7个基因多态性位点的关系及其对血浆Fg浓度和分子活性系列指标的影响。方法:采用整群抽样方法选取开滦集团离退休职工864人进行体检和问卷调查,抽取静脉血检测血生化及血高敏C反应蛋白(hsCRP)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和IL-6、IL-8、IL-10,同时测定血浆Fg浓度和纤维蛋白单体聚合反应速率(FMPV)、最大光密度(Amax)、FMPV/Amax等反映Fg分子聚合功能指标,并应用等位基因特异性聚合酶联反应(AS-PCR)和限制性内切酶片段长度多态性技术及直接基因测序分析检测上述7位点的基因多态性。结果:FgBβHinfI为AC+CC型人群TNF-α水平高于AA人群(P<0.05),其他细胞因子在各位点野生基因型与变异基因型组间均无显著性差异(P>0.05)。以FMPV/Amax为因变量进行多元逐步回归分析,依次筛选出年龄、HDL、UA、hsCRP、口服阿司匹林,标准回归系数(β)为-0.089、-0.094、-0.098、0.091、-0.081(P<0.05);以IL-6为因变量则筛选出IL-8、性别、糖尿病史、TNF-α及HinfI基因型,β分别为0.277、-0.136、0.134、0.125、-0.088(P<0.05);以TNF-α为因变量,则筛选出IL-10、IL-6、BsmAI、UA、1689位点,β分别为0.157、0.127、0.202、0.089、-0.130(P<0.05)。结论:白介素、TNF-α等细胞因子水平与FgBβ链基因多态性具有很强的关联性,它们可以通过影响FgBβ链某些位点的白介素反应元件而具有潜在的调节人类血浆Fg浓度和分子活性表达水平的作用。

纤维蛋白原Bβ多位点基因多态性与其功能表达和脑梗死类型的关系

目的:研究人体纤维蛋白原(Fibrinogen,Fg)Bβ-854G/A、-455G/A、-249C/T、-148C/T、448G/A和Bcl-1G/A的基因多态性与血浆Fg浓度、分子聚合活性等功能表达指标和脑梗死类型的关系。方法:采用病例对照研究,选取2002年7月-2003年6月在开滦医院神经内科住院的急性脑梗死患者160例,其中脑动脉主干支梗死组(MCI)54例、脑动脉穿通支梗死组(PCI)106例,选取同期在开滦医院健康查体且结果均正常的志愿者160例为对照组,测定所有样本的血浆Fg浓度、纤维蛋白单体聚合反应速率(FMPV)、最大吸光度(Amax)及其比值(FMPV/Amax)等反映Fg分子聚合功能参数和甘油三酯(TG)、极低密度脂蛋白(VLDL)等血液生化指标,应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性技术进行FgBβ链六位点的基因多态性检测。结果:MCI组Fg浓度、FMPV、FMPV/Amax及PCI组TG、VLDL、FMPV均高于对照组(P<0.05);FgBβ-854 A和Bcl-1 A等位基因在三组间分布频率有统计学差异,且MCI和PCI组的GA、AA型分布频率高于对照组(P<0.05),其余位点等位基因及基因型分布在三组间均无显著性差异(P>0.05);MCI组FgBβ-249T携带者人群Fg、FMPV低于CC型(P<0.05);PCI组-148T携带者人群FMPV/Amax高于CC型(P<0.05);对照组Bcl-1A携带者人群Fg浓度高于GG型(P<0.05),而PCI组此人群则FMPV高于GG型(P<0.05)。结论:FgBβ链5’端启动子区-249多态性位点可影响血浆FMPV功能的表达,-148位点是调控血浆Fg分子聚合功能表达的重要部位;3’端Bcl-1是血浆Fg浓度的重要基因调控位点,其变异基因型人群是MCI的遗传易感人群;血浆Fg浓度、FMPV/Amax和FMPV同时异常是MCI的重要危险因素,而仅FMPV和TG异常则易发PCI。

FgBβ1689T/G、I6I/D、345C/T和HinfIA/C基因多态性与血浆Fg功能表达的相关性研究

目的:分析血浆纤维蛋白原(Fg)Bβ1689T/G、I6I/D、345C/T和Hinf IA/C多态性位点对Fg浓度和分子聚合活性等功能表达指标的影响。方法:采用整群抽样的方法选取开滦集团职工1 021人,均留取清晨空腹静脉血测定血糖、尿酸等生化指标;分别应用PCR-RFLP和基因测序技术确定四位点的基因型;采用微机辅助血浆Fg功能自动监测系统测定血浆Fg浓度和Fg单体聚合反应速率(FMPV)、最大光密度(Amax)、FMPV/Amax等反映Fg分子聚合功能参数。结果:Fg浓度、FMPV、Amax及FMPV/Amax在Bβ1689、I6、345、Hinf I各基因型组间比较均无显著性差异(P>0.05);FMPV/Amax指标在两性之间的差异有统计学意义(P<0.05);在无高血压病的人群中BβHinf I的AA组FMPV/Amax高于CC+AC组(P<0.05),在无脑梗死的人群中Bβ1689的GG+TG组的FMPV/Amax高于TT组(P<0.05)。结论:Bβ1689位点在特定条件下具有参与和影响调解Fg分子聚合活性表达的作用;BβHinf IA/C发生变异时可以使血浆Fg分子活性降低。

FgBβ-1420G/A、-993C/T、1689T/G、BsmAIG/C、I6I/D、345C/T、HinfIA/C基因多态性对血浆Fg浓度和分子功能的影响

目的分析人群纤维蛋白原(fibrinogen,Fg)Bβ-1420G/A、-993C/T、1689T/G、BsmAIG/C、I6I/D、345C/T、HinfIA/C基因分布特征及其与血浆Fg浓度和分子活性功能的关系。方法采用整群抽样的方法选取开滦集团离退休职工940人,均留取清晨空腹静脉血测定血糖、尿酸等生化指标;应用PCR-RFLP、AS-PCR和基因测序方法检测FgBβ链7位点的基因型;采用微机辅助血浆Fg功能自动监测系统测定血浆Fg浓度和纤维蛋白单体聚合反应速率(FMPV)、最大光密度(Amax)、FMPV/Amax等反映Fg分子聚合功能的参数。结果仅FgBβ链-1420基因多态性位点变异基因型的分布频率高于其野生型的分布频率,达61.5%,而其余6位点则均以野生基因型分布占优势。Fg 7个多态性位点各基因型人群之间的血浆Fg浓度、FMPV、Amax及FMPV/Amax均无统计学差异(P>0.05)。依据多因素分析结果进行分层分析,以尿酸分层时可见高尿酸组与尿酸正常组FMPV/Amax比较有统计学差异(P<0.05)。结论 FgBβ链5′端启动子区-1420G/A、-993C/T,转录区外显子345C/T和内含子1689T/G、BsmAIG/C、I6I/D及3′端Hinf IA/C基因多态性位点对血浆Fg浓度和分子活性功能的表达没有直接明显影响,但其形成的特殊基因连锁板块对血浆Fg功能表达的影响尚需进一步研究。

FgBβ基因多态性与其功能表达和肥胖的相关性研究

目的研究体重超重和肥胖与纤维蛋白原（Fg）Bβ链基因多态性以及血浆Fg功能表达的关系，探讨其发生脑梗死等相关疾病的发病机制。方法选取开滦集团离退休职工939人进行体检和问卷调查，依体重指数将其分为体重正常、超重及肥胖三组，受检者均抽取静脉血测定血液生化及血浆Fg浓度和纤维蛋白单体聚合反应速率（FMPV）、FMPV／Amax等反映Fg分子聚合功能的指标，并应用聚合酶链反应．限制性内切酶片段长度多态性等技术进行FgBβ链七位点基因多态性检测。结果三组间七个位点的等位基因和基因型的频率分布均无统计学差异（P〉0．05）；肥胖组Bβ-993位点突变基因型人群Fg浓度、FMPV、Amax均高于野生基因型人群，N6和345位点突变基因型人群Amax也高于野生基因型（P〈0．05）；超重组和肥胖组的高血压病、脑梗死发病率均高于正常体重组（P〈0．05）；以体重指数为因变量进行多元逐步回归分析，依次筛选出高血压病、年龄、脑梗死病史（P〈0．01），结论在正常体重和超重状态下FgBβ上述7位点基因多态性不影响血浆Fg浓度和功能的表达，而肥胖状态可使FgBβI6、-993和345变异基因型携带者的血浆Fg浓度和综合性纤维蛋白聚合功能明显升高，成为发生血栓性疾病的重要病因，提示体重超重与肥胖状态发生脑梗死等血栓性疾病的危险性和发病机制不同。