肺炎克雷伯菌超广谱β内酰胺酶的临床分布及耐药性分析

目的了解肺炎克雷伯菌超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的临床分布及耐药性。方法采用纸片扩散确证试验对我院分离的156株肺炎克雷伯菌进行ESBLs测验,应用K-B法进行药敏试验。结果156株肺炎克雷伯菌中,产ESBLs99株,阳性率为63.5%。痰及咽拭子中所占比例最高,达59株(37.8%);在新生儿病区产生最高,有34株(21.8%),其次为小儿ICU25株(16%)。156株肺炎克雷伯菌对15种抗菌药物除亚胺培南均有不同程度的耐药.结论产ESBLs在痰及咽试子新生儿病区产生最高。亚胺培南是治疗肺炎克雷伯菌引起感染的首选药物。

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌基因型检测和同源性分析

目的探讨临床分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌基因分型和菌株同源性。方法收集2011年1月至2012年6月临床分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌175株，采用MIC法检测菌株对药物的敏感性，纸片法表型确证试验检测超广谱β内酰胺酶（ESBL），改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型，PCR、DNA测序以及BLAST比对等方法确定菌株耐药酶基因型，重复序列聚合酶链反应（REP—PCR）分析菌株同源性。结果175株肺炎克雷伯菌中Hodge试验阳性140株，阳性率80．0％（140／175）。102株携带blaKPc-2基因，占58．3％（102／175），6株携带blalMP-4基因，占3．4％（6／175）。11．4％（20／175）菌株携带blaDHA-1基因。28．6％（50／175）菌株ESBL表型试验阳性。有89．1％（156／175）菌株携带bla…基因，63．4％（111／175）菌株携带blaTEM基因，50．3％（88／175）菌株携带blaCEx-M基因。66．9％（117／175）菌株同时具有3种以上耐药基因。REP—PCR指纹图谱扩增条带数3—8条，产物最长1600bp，最短200bp，分为12个谱型，其中以G型为主，有71株（40．6％），其次为F型有35株（20．0％）。结论碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌以blaKPC-2基因型为主，其次为blaIMP-4基因型；ESBL以blaCRX-14基因型为主。在某些医院存在克隆株流行，北京A医院与杭州地区流行株不同，北京A医院以G型为主，杭州地区以F型为主。f中华检验医学杂志，2013，36：318—323）

分离自腹泻儿童志贺菌的耐药性及分子流行病学研究

目的调查腹泻儿童临床分离志贺菌的流行及其耐药性，为细菌性痢疾临床治疗和感染控制提供理论依据。方法收集2008年1月至2010年12月浙江萧山医院就诊的≤14岁腹泻患儿粪便分离的志贺菌156株，纸片扩散检测其抗菌药物的耐药性，纸片确认试验检测产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）；采用细菌基因组重复序列聚合酶链反应（REP—PCR）检测产ESBLs宋内志贺菌的分子流行病学特征。结果156株志贺菌中主要为宋内志贺菌（130株，占83．3％）和福氏志贺菌（26株，占16．7％），81株志贺菌产ESBLs，阳性率为51．9％，各年的阳性率分别为2008年32．0％、2009年41．4％、2010年59．8％。药敏结果显示，产ESBLs志贺菌对氨苄西林、复方新诺明、头孢噻肟、哌拉西林耐药率均〉90％，而对头孢吡肟、头孢他啶、左氧氟沙星、环丙沙星耐药率较低；产ESBLs志贺菌与非产ESBLs志贺菌相比，对哌拉西林（100％vs．77．3％）、头孢噻肟（100％vs0）、头孢他啶（14．8％vs ．0）、头孢吡肟（28．4％US．0）、复方新诺明（95．1％m86．7％）的耐药率均较高（X2值分别为20．605，156．000，12．037，24．979，45．040；P均〈0．05），未发现亚胺培南、哌拉西林-他唑巴坦耐药菌株。74株产ESBLs宋内志贺菌共分为7个基因型：A型50株，B型12株，C型8株，D、E、F、G型各1株。结论分离自腹泻患儿的志贺菌产ESBLs阳性率较高，且有逐年增加的趋势；近年来宋内志贺菌存在同一克隆株A型的流行；哌拉西林一他唑巴坦可作为临床治疗儿童感染产ESBLs志贺菌的首选药物。

CMY型AmpC酶新基因亚型的序列分析与表达载体构建

目的对两株弗劳地枸橼酸杆菌所产CMY型AmpC酶进行基因克隆、序列分析和重组表达载体的构建。方法以产CMY型AmpC酶的弗劳地枸橼酸杆菌30、31号总基因组DNA为模板，PCR扩增CMY基因，将其克隆入pGEM—T载体后测定该核苷酸序列：30、31号菌与受体菌进行质粒接合实验，构建pBV220．CMY重组表达载体。对原菌株和重组菌株进行AmpC酶检测。结果PCR扩增出大小为1146bp的基因片段，与GenBank上多种CMY亚型的基因序列同源性为97％。质粒接合实验证实质粒上含CMY基因，为可转移质粒。三维实验结果显示30、31号菌和重组菌株所产的酶均能水解头孢西丁。结论30、31号菌所产的CMY型AmpC酶为CMY新基因亚型，成功构建重组表达载体pBV220-CMY，为下一步酶的表达和纯化提供了依据。