绝经后骨质疏松患者血清护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配基水平与骨硬化蛋白的相关性

目的探讨绝经后骨质疏松患者血清护骨素(OPG)、细胞核因子κB受体活化因子配基(RANKL)及骨硬化蛋白(SOST)水平,评估SOST与OPG/RANKL通路的相关性。方法利用Real-time PCR的方法检测60例绝经后骨质疏松患者(PMOP组)及60例健康受试者(对照组)SOST基因的mRNA水平,ELISA法测定血清OPG、RANKL及SOST水平并做相关性分析。结果 PMOP组SOST基因的mRNA水平较对照组显著升高(P<0.01),患者血清中OPG含量升高,而RANKL水平明显下降。相关性结果显示,SOST与OPG及OPG/RANKL呈正相关(r=0.432、0.413);SOST与RANKL呈负相关(r=-0.370)。结论 PMOP患者血清OPG/RANKL通路的代偿性激活与SOST密切相关。

Toll样受体2和4在脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞表达细胞核因子-κB受体活化因子配基中的作用

目的观察在脂多糖(LPS)刺激下,人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)中Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)表达水平的抑制对其表达细胞核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)的影响。方法选用100 ng.mL-1、1μg.mL-1、10μg.mL-1大肠杆菌LPS分别刺激HPDLFs,刺激6、12、24、48 h后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HPDLFs表达RANKL的水平。分别运用不同滴度的anti-TLR2+anti-TLR4、anti-TLR2、anti-TLR4抗体预处理HPDLFs,观察1μg.mL-1LPS刺激下,其RANKL表达水平的变化。结果 LPS刺激HPDLFs 6 h后,即可检测到RANKL的表达,24h达到顶峰,然后逐渐下降;各LPS质量浓度组的规律基本一致。分别用anti-TLR2+anti-TLR4、anti-TLR2、anti-TLR4抗体预处理HPDLFs,在1μg.mL-1LPS刺激下,其产生RANKL的水平明显下降(P<0.05);3组中,RANKL的表达水平有明显差异(P<0.05),其中anti-TLR2+anti-TLR4抗体处理组RANKL表达量最少,anti-TLR4抗体处理组次之,anti-TLR2抗体处理组RANKL的表达量最高。结论 TLR2、TLR4均参与了LPS诱导HPDLFs表达RANKL的过程;与anti-TLR2抗体相比,anti-TLR4抗体能更有效地抑制LPS刺激后HPDLFs表达RANKL的能力。

破骨细胞核因子κB受体活化因子配基和骨保护因子在种植体周围软组织及骨组织的表达

目的研究破骨细胞核因子κB受体活化因子配基(RANKL)及其伪受体骨保护因子(OPG)在非负荷期种植体周围软组织和骨组织中的表达变化及时间分布特点。方法选用6只1～2岁龄的雄性Beagle犬建立种植义齿动物模型,分别观测种植体植入后3、7、15、30、60、90 d种植体周围的骨改建情况。取种植体周围软组织进行实时荧光定量聚合酶链反应(PCR);取犬下颌骨进行大体标本观察拍摄X线片;取种植体周围骨组织进行免疫组化染色,检测RANKL和OPG随时间的表达变化及分布特点。结果骨改建的最活跃期为种植体植入后的第7天,种植体周围软组织中的RANKL和OPG mRNA及骨组织中的RANKL和OPG均随种植体植入时间的增加而增加,第7天达高峰,而后均逐渐降低。RANKL和OPG在种植体周围软组织及骨组织中的表达变化规律一致。结论 OPG和RANKL能在种植体周围软组织中表达,且变化规律与种植体周围骨组织改建过程一致。种植体周围组织可以通过OPG/RANKL系统参与破骨细胞的形成,调节骨质吸收,影响骨组织代谢微环境。

长期应用糖皮质激素对大鼠股骨头骨组织骨保护素/NF-κB受体活化因子配基-基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶组织抑制剂系统的影响

目的观察长期应用糖皮质激素对大鼠股骨头骨组织中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/NF-κB受体活化因子配基(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)-基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)/基质金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase,TIMP)系统的影响,探讨其导致股骨头缺血性坏死(avascular necrosis of femoral head,ANFH)的相关机制。方法健康SD大鼠40只,雌雄各半,体重250～300g;随机分为高、中、低剂量激素组和对照组,每组10只。高、中、低剂量激素组动物分别给予肌肉注射醋酸泼尼松龙25.0、12.5、7.0mg/kg,每周2次,共4周;对照组给予等量生理盐水。注射期间观察大鼠一般情况,于4周注射完毕后取各组大鼠左侧股骨头行组织学观察,鉴定骨坏死情况;取右侧股骨头骨组织提取总RNA,RT-PCR检测OPG、RANKL、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2mRNA表达水平。结果注射醋酸泼尼松龙后高剂量激素组4只、中剂量激素组1只于第23～26天因饮食减少、体重下降最终致全身衰竭死亡。HE染色可见各激素组骨小梁和骨单位完整性不同程度破坏,形成不连续的骨碎片,部分骨陷窝内骨细胞消失,被炎性肉芽组织取代;对照组可见骨单位完整,板层围绕血管呈同心圆排列,大多数骨小梁陷窝内可见骨细胞。高、中、低剂量激素组及对照组ANFH发生率分别为83.3%(5/6)、66.7%(6/9)、30.0%(3/10)、0(0/10)。RT-PCR检测示,各激素组与对照组比较,OPG、TIMP-1、TIMP-2mRNA表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05),并且随激素用量增加呈下降趋势;各激素组间OPG mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05);中、低剂量激素组间TIMP-1、TIMP-2mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05),但明显高于高剂量激素组(P<0.05)。各激素组与对照组比较,RANKL、MMP-2、MMP-9mRNA表达均增高,并且随激素用量增加呈上升趋势,其中高、中剂量激素组显著高于对照组(P<0.05);高、中剂量激素组间RANKL mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),但显著高于低剂量激素组(P<0.05);中、低剂量激素组间MMP-2、MMP-9mRNA比较差异无统计学意义(P>0.05),但均低于高剂量激素组(P<0.05)。结论长期应用糖皮质激素致ANFH坏死的效应可能与其调控OPG/RANKL-MMP/TIMP系统表达有关。

己酮可可碱对核因子-κB受体活化因子配基诱导的牙龈间充质干细胞破骨细胞分化功能的抑制作用

目的研究己酮可可碱对核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)诱导的牙龈间充质干细胞破骨细胞分化功能的抑制作用及其相关机制。方法将获得牙龈间充质干细胞(MSCs)用RANKL刺激后分为模型组和己酮可可碱(PTX)组,不进行RANKL刺激MSCs细胞作为空白对照组。4个质量浓度PTX组细胞分别用0.1,0.5,1.0和2.0 mg·mL^(-1)的PTX(命名为0.1-PTX组,0.5-PTX组,1.0-PTX组和2.0-PTX组)处理2 h,模型组和空白对照组用等渗DMSO处理。用细胞计数法8测定细胞活力,抗酒石酸磷酸酶(TRAP)检测破骨细胞(OC)含量,蛋白质印迹法检测抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化抑制蛋白(p-IκB)、磷酸化抑制蛋白激酶α/β(p-IKKα/β)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达水平(灰度值)。结果模型组和4个质量浓度PTX组的细胞活力分别为(100.00±2.57)%,(98.14±2.48)%,(98.07±2.79)%,(76.32±2.21)%和(60.45±2.92)%;空白对照组、模型组、0.1-PTX组和0.5-PTX组的牙龈间充质干细胞的TRAP细胞数量分别为(3.36±0.24),(97.61±2.39),(66.87±2.12)和(42.35±1.46)个;这4组的成骨干细胞的TRAP细胞数量分别为(100.21±2.45),(467.13±5.63),(245.48±3.38)和(141.67±2.72)个;这4组p-Akt/Akt蛋白表达百分率分别为(100.43±2.59)%,(432.25±4.68)%,(307.31±2.63)%和(135.47±1.41)%;这4组p-IκBα/IκBα蛋白表达百分率分别为(100.36±2.32)%,(224.27±2.15)%,(171.45±1.58)%和(124.61±1.29)%。上述这5个指标:模型组与空白对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);不同质量浓度PTX组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论PTX通过抑制牙龈间充质干细胞破骨细胞谱系中RANKL诱导的核因子κB(NF-κB)和Akt活化,特异性地抑制破骨细胞的形成和存活。

核因子κB受体活化因子配基在人继承恒牙缺失的滞留乳牙及乳牙根生理性吸收不同时期表达研究

目的研究核因子κB受体活化因子配基(RANKL)在人继承恒牙缺失滞留乳牙及乳牙根生理性吸收不同时期的表达。方法选取2010年6-12月沈阳市口腔医院正畸科及儿童牙病科10～15岁患者因治疗需要拔除的乳牙18颗,按牙根吸收长度不同分为牙根吸收早、中、晚期(早期组、中期组、晚期组),各6颗。同时选取无恒牙胚滞留乳牙(滞留组)和正畸拔除的正常恒牙(对照组)各6颗。采用免疫组化方法检测RANKL蛋白的表达,并测定累积光密度值。结果牙髓成纤维细胞:对照组RANKL累积光密度值明显低于其余组(均P<0.01);早期组、中期组明显低于晚期组(均P<0.01)。成牙本质细胞:对照组RANKL累积光密度值亦明显低于其余组(均P<0.01);早期组、中期组、晚期组三者间差异均有统计学意义(P<0.01)。破牙细胞:对照组未见破牙细胞;早期组、中期组与晚期组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 RANKL是引起乳牙牙根缓慢吸收的因素之一。

小鼠核因子κB受体活化因子配基活性区的克隆、表达及生物活性分析

核因子κB受体活化因子配基是诱导破骨细胞分化、成熟的关键因子,在生物医学研究中应用广泛。本实验以小鼠的骨髓细胞cDNA为模板,采用PCR技术获得小鼠核因子κB受体活化因子配基活性区基因,并将该基因克隆至His标签的融合蛋白表达载体pET28a(+),经鉴定正确的质粒转化至BL21表达菌株中。通过调节诱导目的蛋白表达的培养温度、IPTG浓度及诱导时间,筛选出重组融合蛋白表达的最佳条件。将纯化后的重组蛋白稀释成不同浓度,刺激小鼠破骨前体细胞Raw264.7细胞分化,经抗酒石酸酸性磷酸酶染色后可见破骨细胞的形成,表明该重组蛋白具有较好的生物活性,可替代商品化的鼠源核因子κB受体活化因子配基。

核因子-κB受体活化因子配体在大鼠正畸牙压力侧骨改建中的作用

目的 :初步探讨在正畸牙移动压力侧核因子 -κB受体活化因子配基 (receptoractivatorofnuclearfactor-κBligand ,RANKL)的表达在破骨细胞诱导和骨改建中的调节作用。 方法 :建立大鼠正畸牙移动模型 ,利用免疫组化的方法对压力侧RANKL的表达及其变化进行检测 ;并进一步观察了RANKL对大鼠骨髓破骨细胞形成的影响。结果 :正畸牙移动压力侧组化结果显示 ,RANKL阳性表达位于牙周膜细胞和位于骨陷窝内的破骨细胞中 ,在正畸牙移动第 3、5和 7天时呈强阳性表达。体外破骨细胞诱导实验结果显示 ,在巨噬细胞集落刺激因子 (macrophageclonestimulatingfactor,M -CSF)协同作用下 ,RANKL呈剂量依赖型诱导TRAP阳性细胞生成。 结论 :大鼠正畸牙移动中 ,RANKL在压力侧的表达上调有诱导破骨细胞形成的作用 。

骨代谢中甲状旁腺激素对相关蛋白和核因子κB受体活化因子的调节

背景:甲状旁腺激素是影响骨代谢功能轴最主要的因素。同时也是调控骨保护素和核因子κB受体活化因子配基表达的重要激素。目的:通过查阅甲状旁腺激素对骨保护素、核因子κB受体活化因子配基调控作用的相关文章,并对其进行综述。方法:以"甲状旁腺激素,骨保护蛋白,核因子κB受体活化因子"或"Parathyroid hormone,osteoprotegerin,receptor activator of nuclear factor κB ligand"为检索词,由第一作者通过计算机检索CNKI、HighWire数据库中关于"甲状旁腺激素与骨保护素/核因子κB受体活化因子配基/核因子κB受体活化剂"的相关的论文报告。选择的文章内容与甲状旁腺激素对信号通路的影响有关、近期发表的文献,按纳入和排除标准对文献进行筛选,共纳入31篇文章。结果与结论:甲状旁腺激素是调节骨代谢最主要的因素,通过增强破骨细胞活动增强而实现的。核因子κB受体活化因子配基是调节骨吸收的关键因子,它通过与核因子κB受体活化剂结合发挥功能。核因子κB受体活化因子配基与核因子κB受体活化剂结合后,启动核因子κB受体活化因子配基信号转导,骨保护素则与核因子κB受体活化因子配基竞争性结合核因子κB受体活化剂,核因子κB受体活化因子配基/骨保护素比值决定破骨细胞分化、成熟及功能。长时间、大强度的运动条件下,机体内甲状旁腺激素的变化是否对于骨保护素、核因子κB受体活化因子配基有影响,进而调节骨代谢的吸收与合成?还有待进一步的研究。

超前镇痛方案对跟骨关节内骨折患者OPG/RANKL信号通路因子表达的影响

目的:探讨超前镇痛方案对跟骨关节内骨折患者骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/核因子-κB受体活化因子配基(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)信号通路因子表达的影响。方法:选择2019年2月-2021年11月在南京中医药大学附属苏州市中医医院诊治的跟骨关节内骨折患者74例,按照入院顺序,根据1∶1随机数字表法把患者分为超前组与对照组各37例。所有患者给予切开复位内固定治疗,对照组给予常规静脉自控镇痛(patient controlled intravenousanalgesia,PCIA),超前组在对照组镇痛的基础上给予术前30 min静注地佐辛超前镇痛。记录两组围手术指标;术前、术后1、2、3、7 d的疼痛状况;两组不良反应发生情况;术后1、7 d检测血清OPG、RANKL含量。结果:超前组的术后引流量、术后引流时间与术后住院时间均少于对照组(P<0.05)。超前组术后1、2、3、7 d的疼痛VAS评分均少于对照组(P<0.05)。超前组术后7 d的恶心呕吐、寒战、延迟苏醒等并发症发生率为8.1%,低于对照组的32.4%(P<0.05)。两组术后7 d的血清OPG、RANKL含量均高于术后1 d(P<0.05),超前组也均高于对照组(P<0.05)。结论:超前镇痛方案应用在跟骨关节内骨折患者中能促进OPG/RANKL信号通路因子表达,能提高镇痛效果,促进患者术后康复,还可减少患者术后并发症的发生。

丹参酮ⅡA调节骨关节炎小鼠骨代谢的作用机制

目的探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)通过介导Yes激酶相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)、核因子-κB受体活化因子配基(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)/核因子κB受体活化因子(eceptor activator of nuclear factor-κB,RANK)/骨保护蛋白(osteoprotegerin,OPG)调节骨关节炎小鼠骨代谢的作用机制。方法建立骨关节炎小鼠模型,将60只小鼠随机分成假手术组、模型组、TanⅡA低剂量组和TanⅡA高剂量组,每组15只,造模成功后灌胃给药,连续4周。HE和番红O固绿染色观察软骨组织病理损伤并进行Mankin评分。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清骨碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase,BALP)、骨钙素(osteocalcin,OC)、Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(C-telopeptide of typeⅠcollagen,CTX)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)。蛋白质印迹法(Western blotting)检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)、YAP、RANK、RANKL和OPG蛋白。结果TanⅡA可改善小鼠软骨组织病理变化并降低Mankin评分。与假手术组比较,模型组BALP、OC水平下降,CTX、TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-8、MMP1、MMP3和MMP13水平升高(P<0.05)。与模型组比较,TanⅡA低剂量组、TanⅡA高剂量组BALP、OC水平升高,CTX、TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-8、MMP1、MMP3和MMP13水平降低(P<0.05)。与假手术组比较,模型组小鼠软骨组织中YAP、OPG和RANK蛋白水平下降,RANKL蛋白水平升高(P<0.05);与模型组比较,TanⅡA 2组小鼠软骨组织中YAP、OPG和RANK蛋白水平上升,RANKL蛋白水平下降(P<0.05)。结论TanⅡA可能通过介导YAP、RANK/RANKL/OPG信号通路调控骨关节炎。

C57BL/6小鼠骨髓单核细胞分离、培养、纯化及向破骨细胞的分化

背景:目前骨髓单核细胞的分离提取国内外文献报道,大多是利用RAW264.7细胞诱导分化为破骨细胞。目的:探讨分离、培养、纯化和鉴定C57BL/6小鼠骨髓单核细胞的方法,观察小鼠骨髓单核细胞体外生长特征,诱导其向破骨细胞分化。方法:无菌分离C57BL/6小鼠股骨和胫骨,取出骨髓细胞,提取过程中先用红细胞裂解液去除红细胞;骨髓细胞过夜培养后(大于16 h),第2天分离出悬浮细胞,在含有巨噬细胞集落刺激因子的培养基中继续培养获得贴壁的小鼠骨髓单核细胞。通过换液对小鼠骨髓单核细胞进行纯化和扩增培养。进行形态学观察,测定生长曲线,用流式细胞仪检测原代小鼠骨髓单核细胞细胞表面抗原,加入巨噬细胞集落刺激因子和核因子κB受体活化因子配基诱导分化为破骨细胞。结果与结论:新分离的小鼠骨髓单核细胞呈小圆形,两端伸出触角,培养5 d后,细胞成椭圆形,两端的触角更明显,增殖依赖巨噬细胞集落刺激因子。流式结果显示分离的小鼠骨髓单核细胞纯度较高,能够诱导分化为破骨细胞。利用间充质干细胞与单核细胞的贴壁能力不同及巨噬细胞集落刺激因子显著促进单核细胞贴壁增殖的特性能有效分离获得稳定生长的小鼠骨髓单核细胞。培养的小鼠骨髓单核细胞性状稳定,表型稳定均一,适于做进一步研究。

炎症因子白介素-6对骨细胞表达RANKL的影响

目的 :通过研究炎症因子白介素-6对骨细胞表达核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)的影响,为更好地理解炎症因子在骨细胞参与骨重塑中的作用,提供理论基础。方法:体外培养MLO-Y4细胞系细胞,并应用不同浓度的人工合成白介素-6(IL-6)和白介素-6受体(IL-6R),共同作用刺激骨细胞24 h后,采用实时荧光定量PCR、免疫印迹试验、免疫荧光等方法,检测RANKL以及酪氨酸激酶2(JAK2)的磷酸化蛋白的表达变化。结果:应用不同浓度人工合成的IL-6和IL-6R,共同作用刺激骨细胞后,RANKL的表达水平随着IL-6的浓度增加而增加,并且IL-6通路中的JAK2蛋白磷酸化亦增加,提示IL-6及其受体可以促进骨细胞表达RANKL,并且与JAK2的活化密切相关。结论 :炎症因子IL-6可以通过增加JAK2蛋白的磷酸化,来促进骨细胞表达RANKL。

rhBMP-2对下颌牵引成骨区的影响及RANKL的表达

目的观察加入外源性的重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)在不同时间对兔下颌骨牵引成骨区新骨中核因子κB受体活化因子配基(RANKL)表达的变化及对牵引成骨区新骨生成的影响。方法在30只成年大耳白兔的一侧下颌骨前部行骨切开术,分别将空白胶原、rhBMP-2 3 mg胶原复合物植入下颌骨切开处,用牵引器延长一侧下颌骨4 mm,稳定期第1、7、14、21、28天分别处死各组动物,游离下颌骨,取牵引区新生骨痂行组织学及RANKL免疫组化染色,通过细胞图像分析仪测量牵引区新骨中RANKL表达情况。结果下颌牵引延长后牵引间隙均有新骨形成,免疫组化染色RANKL在成骨细胞、髓腔衬里细胞和新形成的骨细胞内表达。两组均在第7天RANKL表达增加,第14天表达最高;在稳定期第7天,实验组较对照组RANKL表达的阳性细胞率及阳性面积百分比有差异(P<0.05),第14天更显著(P<0.01)。结论 rhBMP-2在牵引早期能上调RANKL的表达,从而能促进兔下颌骨牵引成骨区新骨的生成。

围绝经期女性外周血OSTF1、OPG/RANKL对骨质疏松症的预测价值

目的探讨围绝经期女性外周血破骨细胞刺激因子1(OSTF1)、护骨素(OPG)/核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)对骨质疏松症的预测价值。方法选择2021年3月至2023年1月河北省妇幼保健中心收治的165例围绝经期骨质疏松症患者为疾病组,并纳入同期120例围绝经期骨密度正常的健康志愿者为对照组。采用Pearson相关分析外周血OSTF1、OPG/RANKL与骨密度的相关性,并收集基线资料,采用单因素分析和多因素Logistic回归分析骨质疏松症发生的影响因素,并使用受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血OSTF1、OPG/RANKL对骨质疏松症的预测价值。结果疾病组患者血清OSTF1、RANKL水平明显高于对照组,血清OPG水平、OPG/RANKL明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。疾病组患者整体骨密度、腰椎骨密度和T值明显低于对照组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,OSTF1、OPG/RANKL、OPG、整体骨密度、腰椎骨密度、T值和RANKL是骨质疏松症发生的影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示:血清OSTF1预测骨质疏松症发生的曲线下面积(AUC)为0.772(95%CI:0.705~0.843);OPG/RANKL的AUC为0.616(95%CI:0.531~0.699);2项联合的AUC为0.906(95%CI:0.864~0.952)。结论围绝经期女性外周血OSTF1、OPG/RANKL异常表达,OSTF1和OPG/RANKL可应用于骨质疏松症预测,值得临床进一步研究并推广。

补肾强督方含药血清对强直性脊柱炎OPG/RANKL通路的作用

目的探讨补肾强督方对强直性脊椎炎(ankylosing spondylitis,AS)骨保护素和核转录因子-κB受体活化因子配基(osteoprotegerin receptor activator for nuclear factorκB ligand,OPG/RANKL)通路的作用机制。方法选取2009年1-5月卫生部中日友好医院中医风湿病科门诊和住院活动期AS患者30例,予补肾强督方,每天1剂,早晚分两次口服,连续3个月;另选取健康志愿者30名。采集治疗前后患者血清及健康人血清。将成骨细胞hFOB1.19分为患者治疗前组、治疗后组及健康人组(对照组)。各组细胞分别于含相应血清的基础培养基中进行培养。取成骨细胞培养上清液,采用ELISA法检测成骨细胞OPG/RANKL含量及mRNA表达,采用RT-PCR检测OPG/RANKL蛋白表达。结果与对照组比较,治疗前组成骨细胞OPG含量、OPG mRNA及蛋白表达、OPG/RANKL mRNA及蛋白表达均降低,RANKL mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与治疗前组比较,治疗后组OPG含量、OPGmRNA及蛋白表达、OPG/RANKL mRNA及蛋白表达升高,RANKL mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 AS患者血清能直接抑制成骨细胞OPG表达、促进RANKL表达、下调OPG与RANKL比率,补肾强督方治疗后的血清能直接促进成骨细胞表达OPG,抑制表达RANKL,上调OPG与RANKL比率,补肾强督方可能是通过直接上调成骨细胞OPG/RANKL而抑制破骨细胞分化和功能,达到促进骨生成,抑制骨吸收。

GLP-1对2型糖尿病大鼠血清OPG、RANKL及骨密度的影响研究

目的探讨GLP-1类似物利拉鲁肽对糖尿病大鼠血清OPG、RANKL及骨密度的影响。方法健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病组(DM)、利拉鲁肽低剂量组(LR-L)、利拉鲁肽高剂量组(LR-H)。高脂高糖饮食联合小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导建立2型糖尿病大鼠模型,低剂量组予利拉鲁肽400μg/(kg.d)皮下注射,高剂量组予利拉鲁肽800μg/(kg.d)皮下注射,给药4w后处死大鼠,测血糖、血钙、血磷、碱性磷酸酶、胆固醇、甘油三酯,ELISA法检测OPG、RANK,DXA法检测大鼠骨密度。结果与NC组比较,1 DM组、LR-L组、LR-H组体重均减轻,LR-L组、LR-H组较DM组更轻,但LR-L组与LR-H组间比较无差异;2DM组、LR-L组、LR-H组血糖均升高,LR-L组、LR-H组血糖较DM组低,但LR-L组与LR-H组间比较无差异;3DM、LR-H、LR-L组血清OPG、RANKL明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05),LR-L组OPG较DM组更高差异有统计学意义(P<0.05),LR-H组OPG高于DM组但差异无统计学意义;LR-H与LR-L组RANKL明显低于DM组;4DM组血清OPG/RANKL比值低于NC组,LR-L、LR-H组血清OPG/RANKL较DM升高,差异具有统计学意义(P<0.05);5DM组、LR-L、LR-H组大鼠全身及各部位骨密度均降低,差异具有统计学意义(P<0.05),但DM组、LR-L组、LR-H组3组间差异无统计学意义。结论利拉鲁肽具有降低2型糖尿病大鼠体重、减低血清RANKL、升高血清OPG的作用,但利拉鲁肽治疗后未见骨密度的提高。

脱氢表雄酮抑制骨吸收的作用机制

目的 研究脱氢表雄酮 (DHEA)治疗绝经后骨质疏松的作用机制。方法 体外分离和培养成骨细胞和破骨细胞 ,在有或无成骨细胞存在的条件下 ,观察 10 - 7mol·L- 1 的DHEA对破骨细胞骨吸收作用的影响 ;经DHEA作用 1,2 ,3d后 ,半定量RT PCR测定护骨素 核因子κB受体活化因子配基 (OPG RANKL)的mRNA水平。结果 10 - 7mol·L- 1 的DHEA能明显增加成骨细胞OPG RANKL的mRNA比值 (P <0 0 1) ;当成骨细胞存在时 ,DHEA可以减少骨吸收陷窝的数目 (P <0 0 5 )和面积 (P <0 0 1)。结论 DHEA只有在成骨细胞存在时可以抑制破骨细胞的骨吸收作用 ,该作用可能通过间接调节成骨细胞OPG RANKL的转录而介导。

硫辛酸对骨质疏松大鼠骨代谢的影响及机制研究

目的探讨氧化应激及抗氧化剂硫辛酸在大鼠骨质疏松发生中的作用及可能的机制。方法选用8周龄Wistar雌性大鼠24只,随机分为对照组、骨质疏松组和硫辛酸干预组,采用双侧卵巢切除法建立骨质疏松大鼠模型,硫辛酸组采用60 mg/kg硫辛酸腹腔注射,干预共8周;检测骨密度,全血碱性磷酸酶(ALP),骨钙素,钙、磷水平,股骨组织MDA、SOD和GSH-Px含量;Western blotting方法测定股骨组织护骨素(OPG)和细胞核因子κB受体活化因子配基(RANKL)蛋白含量,Real-time PCR方法测定股骨组织OPG和RANKL m RNA表达水平。结果骨质疏松组大鼠骨密度,股骨组织中SOD、GSH-Px、OPG m RNA及蛋白表达低于对照组大鼠(P<0.05);血清骨钙素,ALP水平,股骨组织中MDA、RANKL m RNA及蛋白水平都显著高于对照组大鼠(P<0.05)。硫辛酸组大鼠骨密度和股骨组织中SOD、GSH-Px、OPG m RNA及蛋白表达高于骨质疏松组大鼠(P<0.05);血清骨钙素,ALP水平,股骨组织中MDA、RANKL m RNA及蛋白表达水平都显著低于骨质疏松组大鼠(P<0.05)。结论氧化应激可能通过OPG/RANKL通路促进了大鼠骨质疏松的发生,而抗氧化剂硫辛酸可缓解骨质疏松的进展。