新风胶囊对膝骨关节炎患者B、T淋巴细胞衰减因子及氧化应激的影响

目的探讨膝骨关节炎患者(knee osteoarthritis,KOA)B、T淋巴细胞衰减因子(B and T lymphocyte attenuator,BTLA)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的变化及新风胶囊(XinFeng capsule,XFC)对其影响。方法将60例KOA患者按随机分为2组:30例治疗组,即XFC组(每次3粒,每日3次)和30例对照组,即氨基葡萄糖组(glucosamine,GS组,每次2粒,每日3次);2组治疗均30天为1个疗程,连续1个疗程。流式细胞术检测BTLA表达频率及活化水平,比色法测定血清SOD,采用魏氏法测定血沉(erythrocyte sedimentation rate,ESR),全自动生化分析仪测定hs-C反应蛋白(hypersensitive cross-reacting protein,hs-CRP)。酶联免疫吸附法检测2组血清中白介素(interleukin,IL)-10,IL-1β,丙二醛(methane dicarboxylic aldehyde,MDA)。结果①与NC组比较,KOA患者外周血BTLA在CD3+T细胞(CD3+BTLA+T cell)、CD8+T细胞(CD8+BTLA+T cell),CD4+T细胞上(CD4+BTLA+Tcell)的表达频率明显下降,MAD明显升高。与正常范围比较,60%的KOA患者血清SOD水平降低,且随Lequesne MG的加重及病程的延长而降低,而与年龄、性别无关。②Pearson相关分析结果显示:外周血BTLA表达水平与Lequesne MG呈明显负相关,与RP、RE、BP积分呈正相关;CD3+BTLA+T cell、CD4+BTLA+T cell与IL-1β呈明显负相关,与血清IL-10呈正相关;CD4+BTLA+T cell与血清SOD呈正相关(P<0.05或P<0.01)。③与对照组相比,SF-36总积分、BTLA表达频率、IL-10明显升高,Lequesne MG、症状分级量化评分、IL-1β、MDA明显降低。结论 XFC能提高KOA患者外周血BTLA表达,抑制T细胞活化,降低异常免疫反应和氧化应激损伤,减轻关节疼痛症状,改善患者全身机能,从而提高生活质量水平。

类风湿关节炎患者心肺功能变化及与B、T淋巴细胞衰减因子及氧化应激的相关性分析

目的观察类风湿关节炎患者的心、肺功能变化及其与外周血BTLA和氧化应激指标变化的相关性,探讨心肺功能下降的机制。方法选取RA患者100例并抽取40例健康人作为正常对照。采用肺功能仪检测患者肺功能参数FVC、FEV1、MVV、PEF、MEF25、MEF50、MEF75。采用超声心动图检测2组心功能参数EF%、SV%、FS%、E、A、E/A。流式细胞术检测BTLA表达频率及活化水平,魏氏法测定ESR,全自动生化仪测定hs-CRP。酶联免疫吸附法检测外周血细胞因子(IL-17、TNF-α、IL-4、IL-35)及氧化应激指标(MDA、ROS、SOD、TAOC)。结果 1)与NC组相比,RA患者肺功能参数均有不同程度降低;心功能参数EF、E峰、E/A明显降低,A峰明显升高,SV无明显差异;外周血IL-17、TNF-α和炎性指标ESR、CRP值显著升高,BTLA、IL-4、IL-35值显著降低,ROS、MDA明显升高,SOD、TAOC明显降低。2)相关性分析显示心功能参数与CD24+细胞、CD19+CD24+细胞、TAOC负相关,与BTLA、CD19+Cell、ROS、MDA、SOD呈正相关;肺功能各参数均与ESR、Hs-CRP、DAS28呈负相关,与BTLA、CD19+CD24+、SOD、TAOC、IL-4、IL-35呈正相关,与CD24+BTLA+、ROS、MDA、IL-17、TNF-α呈负相关。结论 RA患者存在心肺功能降低,并与机体BTLA表达减弱、抗氧化能力下降密切相关。

B和T淋巴细胞衰减因子激活在休克／脓毒症诱导的急性肺损伤中的作用

目的探讨B和T淋巴细胞衰减因子（BandTlymphocyteattenuator，BTLA）激活在休克／脓毒症诱导的急性肺损伤（ALI）中的作用。方法24只雄性C57BL／6小鼠随机平均分为三组：对照组、Au模型组和6A6（BTLA激动性抗体）干预组。采用Westernblot观察对照组和AU模型组肺组织BTLA蛋白的表达变化，并测定和比较三组小鼠支气管肺泡灌洗液蛋白浓度，ELISA方法测定肺组织促炎症细胞因子、趋化因子水平及肺组织髓过氧化物酶活性，TUNEL染色评估肺组织细胞凋亡情况；肺组织切片HE染色了解肺组织病理学改变。另外45只小鼠随机平均分为如上三组观察10d生存率。结果BTLA在Au模型组肺组织中表达较对照组明显升高。与Au模型组比较，6A6干预组小鼠支气管肺泡灌洗液蛋白浓度升高，肺部TNF—α和MIP-2、MCP-1水平升高，肺组织MPO活性增加（P均〈0．05）。TUNEL染色显示，6A6干预组小鼠肺细胞凋亡较Au模型组增加。HE染色显示，6A6干预组较Au模型组小鼠肺组织病理学形态损伤加重。6A6干预组较Au模型组小鼠死亡率显著升高。结论BTLA在休克／脓毒症诱导的ALI肺组织中表达升高。BTLA激活使脓毒症诱导的Au小鼠肺通透性增高，肺部炎症因子和趋化因子水平升高，肺部中性粒细胞募集增加，肺细胞凋亡增加，肺组织病理学形态损伤加重，导致ALI小鼠死亡率增加。

可溶性B、T淋巴细胞衰减因子及其配体在单纯疱疹性角膜基质炎小鼠体内的异常表达

目的研究B、T淋巴细胞衰减因子(B and T lymphocyte attenuator,BTLA)及其配体疱疹病毒侵入介体(herpes virus entry mediator,HVEM)在单纯疱疹性角膜基质炎(herpetic stromal keratitis,HSK)小鼠角膜组织中及外周血CD4+T细胞上的表达水平,探讨共抑制信号BTLA-HVEM是否参与了CD4+T细胞介导的HSK免疫病理反应。方法将106PFU的单纯疱疹病毒I型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)KOS毒株接种于BALB/c鼠的角膜上建立HSK动物模型,分别于角膜接种病毒前(0d),接种病毒后的第3、7、10、14、21天,用毛细管取小鼠的左眼眼眶静脉窦血1mL,分离淋巴细胞,行荧光抗体染色,用流式细胞仪检测CD3+CD4+BTLA+T细胞和CD3+CD4+HVEM+T细胞阳性率;在裂隙灯显微镜下观察小鼠角膜变化;免疫组织化学方法检测BTLA蛋白及HVEM蛋白在角膜组织中的表达。结果 BALB/c鼠的角膜接种HSV-1后的1～5d,角膜擦拭液中均检测出HSV-1复制,表明小鼠感染了单纯疱疹病毒。裂隙灯显微镜观察显示:角膜接种HSV-1后第3天,所有小鼠均患了急性上皮性角膜炎,并于感染后1周内痊愈,自病毒接种后第8天起,小鼠出现角膜基质炎的改变,表现为角膜基质呈灰白色混浊,角膜基质混浊于病毒接种后的第10天达到高峰,持续至第14天后逐渐减轻。流式细胞仪检测显示,小鼠外周血淋巴细胞中CD3+CD4+BTLA+T细胞和CD3+CD4+HVEM+T细胞的阳性率,在角膜接种病毒前(0d)分别为(3.15±0.60)%和(9.84±1.06)%,在角膜接种病毒后第10天(HSK疾病程度最严重时)分别增加到(20.47±3.15)%和(45.18±3.90)%(与0d相比差异均有显著统计学意义,均为P<0.01)。免疫组织化学方法检查HSK小鼠角膜组织中BTLA和HVEM的蛋白表达结果一致:HSK临床表现最严重时,即病毒接种后第10天时,BTLA蛋白和HVEM蛋白在角膜组织中表达最强,主要表达于角膜基质层内浸润的炎性细胞上,角膜上皮层和内皮层也有表达。结论在HSK小鼠模型中,BTLA及其配体HVEM蛋白在角膜组织中及外周血CD4+T细胞上表达明显增强,共抑制信号BTLA-HVEM参与了CD4+T细胞介导的HSK的免疫病理过程。

补肺养阴方联合利奈唑胺对复治肺结核患者呼吸功能、炎性因子及B、T淋巴细胞衰减子的影响

目的分析利奈唑胺联合补肺养阴汤用于治疗复治肺结核对改善患者呼吸功能、血清炎性因子和肺组织中B、T淋巴细胞衰减子表达的作用。方法选择进行肺结核再次治疗的86例患者,采取随机数字排列表法将86例患者分成常规组及观察组,每组43例,常规组予以利奈唑胺治疗,观察组予以利奈唑胺联合补肺养阴汤治疗。比较治疗前后两组氧分压、二氧化碳分压、第1秒用力呼气量(FEV1)、用力肺活量(FVC)以及FEV1/FVC水平;白细胞介素(IL)-6、IL-8以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;CD4^+、CD8^+水平以及CD4^+/CD8+比值。对比每组治疗效果以及不良反应发生情况。结果常规组与观察组治疗前氧分压、二氧化碳分压、FEV1、FVC以及FEV1/FVC指标方面比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后观察组氧分压指标高于常规组;二氧化碳分压指标低于常规组;FEV1、FVC以及FEV1/FVC指标均高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。常规组与观察组治疗前在IL-6、IL-8以及TNF-α方面水平比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后观察组在IL-6、IL-8以及TNF-α方面水平均低于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。常规组与观察组治疗前在CD4^+、CD8^+水平以及CD4^+/CD8^+比值方面比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后观察组在CD4^+以及CD4^+/CD8^+比值方面均高于常规组,CD8^+水平低于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组与常规组总有效率分别是97.67%、81.40%,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组与常规组不良反应总出现率分别是9.30%、11.63%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论复治肺结核病患采用利奈唑胺以及补肺养阴方治疗可有效提升患者呼吸功能,改善机体炎症水平,提升机体免疫功能,促进患者生活质量提高。

小鼠B、T淋巴细胞衰减因子真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

目的构建小鼠B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)的真核表达载体,并分析其在人胚肾HEK293细胞中的表达,为单纯疱疹性角膜基质炎的免疫治疗奠定基础。方法应用PCR法获得小鼠BTLA胞外功能区的cDNA片段,将其插入真核表达载体pcDNA3.1中,获得重组表达质粒pBTLA,经酶切鉴定和测序正确后转染HEK293细胞,并利用间接免疫荧光法、实时定量PCR(real-time PCR)、Western blot技术检测BTLA在细胞中的表达。结果重组质粒pBTLA经酶切鉴定和测序,确认插入序列正确,与基因文库中提供的基因序列同源性达98%～100%。Real-time PCR检测可见转染了重组质粒pBTLA的HEK293细胞内BTLA mRNA表达增强(P=0.00),3个组间HEK293细胞内BTLA mRNA表达差异有统计学意义(F=167.83,P=0.00);Western blot结果显示,转染重组质粒pBTLA的HEK293细胞内BTLA蛋白表达明显增强,转染后24～48 h表达最强。间接免疫荧光结果显示BTLA蛋白主要表达在HEK293细胞的细胞膜和细胞质中。结论成功构建了BTLA的真核表达载体,该重组质粒在HEK293细胞中能够表达BTLA,为后续研究BTLA在抗病毒免疫中的作用奠定基础。

原发性肝癌患者外周血淋巴细胞及其亚群B、T淋巴细胞衰减子表达的研究

目的探讨原发性肝癌患者外周血淋巴细胞及其亚群B、T淋巴细胞衰减子（BTLA）的表达情况。方法应用流式细胞术（FCM）检测原发性肝癌组（45例）及健康体检对照组（28例）及乙肝后肝硬化组（20例）外周血CD4^＋、CD8^＋及CD19^＋淋巴细胞BTLA的表达，比较其差异。结果3组对象CD19^＋细胞BTLA均呈高表达；肝癌组患者外周血中CD8^＋,CD4^＋细胞BTLA的表达均明显高于对照组（均P〈0.05），肝硬化组患者外周血中CD4^＋细胞BTLA的表达明显高于对照组（P〈0．05）。结论BTLA这一负性共信号分子的异常表达可能在肿瘤逃逸免疫应答中起一定的调节作用。

克拉维酸钾配伍阿莫西林治疗对老年肺结核外周血自然杀伤细胞表面受体及肺组织中B、T淋巴细胞衰减子表达的影响

目的探究克拉维酸钾联合阿莫西林治疗老年肺结核患者外周血自然杀伤细胞(NK)细胞表面受体和肺组织中B、T淋巴细胞衰减子(BTLA)表达的影响。方法选取老年肺结核患者120例,随机分成研究组和对照组,各60例,对照组采用左氧氟沙星治疗,研究组采用克拉维酸钾配伍阿莫西林并结合左氧氟沙星进行治疗,比较治疗前与治疗后3个月、6个月两组痰菌阴转率、肺部病灶吸收、空洞闭合率情况;并对两组治疗前与治疗后3个月、6个月NK细胞表面受体表达率、肺组织中BTLA表达情况及不良反应发生率进行比较。结果治疗前,两组各指标比较无统计学差异(P>0.05);治疗后3个月,研究组痰菌阴转率、肺部病灶吸收有效率显著高于对照组(P<0.05),治疗后6个月两组痰菌阴转率、肺部病灶吸收有效率比较差异无统计学意义(P>0.05);两组治疗后3个月和6个月空洞闭合率、NK细胞表面受体表达率、肺组织中BTLA表达情况均较治疗前显著降低(P<0.05),且研究组相比于对照组更低(P<0.05);治疗期间两组不良反应发生情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论应用克拉维酸钾配伍阿莫西林治疗对老年肺结核疗效确切,不良反应发生较少,对于老年肺结核外周血NK细胞表面受体及肺组织中BTLA表达有显著调节作用。

痹祺胶囊联合雷公藤多甙治疗强直性脊柱炎的效果及对患者血液高凝状态和B、T淋巴细胞衰减因子的影响

目的 探讨痹祺胶囊联合雷公藤多甙治疗强直性脊柱炎(AS)的效果及对患者血液高凝状态和B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)的影响。方法 选取我院2017年3月至2020年6月收治的140例AS患者作为研究对象,并随机分为对照组(70例,雷公藤多甙)和痹祺胶囊组(70例,痹祺胶囊+雷公藤多甙)。比较两组的治疗效果、临床指标、血液高凝指标和BLTA水平。结果 痹祺胶囊组的治疗有效率明显高于对照组(P<0.05)。治疗后,两组的枕墙距、晨僵时间、臀地距均缩短,BAS-G均降低,且痹祺胶囊组明显优于对照组(P<0.05)。治疗后,两组的PLT及D-D、Fib水平均降低,且痹祺胶囊组明显低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组的CD19+B细胞、CD24+B细胞、CD4+T细胞的BTLA水平均升高,且痹祺胶囊组明显高于对照组(P<0.05)。结论 痹祺胶囊联合雷公藤多甙治疗AS的效果显著,能够有效改善患者的临床指标,改善血液高凝状态,上调BTLA水平。

B、T淋巴细胞衰减因子与系统性红斑狼疮患者疾病活动度及自身抗体的相关性分析

目的分析B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)与系统性红斑狼疮(SLE)患者疾病活动度及自身抗体的相关性。方法纳入2019年5月至2021年5月西安市第五医院收治的90例SLE患者作为研究对象,根据SLE疾病活动度指数(SLEDAI)将其分为低活动度组(56例)和高活动度组(34例),再纳入同期入院体检健康者90例作为对照组。比较三组B、T细胞表面BTLA的表达情况。比较不同自身抗体SLE患者B、T淋巴细胞表面BTLA的表达情况。使用Spearman检验分析SLE患者B、T细胞表面BTLA与疾病活动度、抗核小体抗体(AnuA)、抗双链DNA(anti-dsDNA)抗体的相关性。结果高活动度组的CD19^(+)/BTLA、CD24^(+)/BTLA、CD4^(+)/BTLA、CD8^(+)/BTLA均明显低于低活动度组和对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);低活动度组的CD19^(+)/BTLA、CD24^(+)/BTLA、CD4^(+)/BTLA、CD8^(+)/BTLA均明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。90例SLE患者中,AnuA阳性43例,阴性47例,阳性率为47.78%;anti-dsDNA抗体阳性49例,阴性41例,阳性率为54.44%。AnuA、anti-dsDNA抗体阳性SLE患者的CD19^(+)/BTLA、CD24^(+)/BTLA、CD4^(+)/BTLA、CD8^(+)/BTLA均明显低于阴性患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。SLE患者CD19^(+)/BTLA、CD24^(+)/BTLA、CD4^(+)/BTLA、CD8^(+)/BTLA与疾病活动度、AnuA、anti-dsDNA抗体均呈负相关(P<0.05)。结论SLE患者B、T细胞表面BTLA表达下调,且与疾病活动度、AnuA、anti-dsDNA抗体呈负相关。

RA患者心肺功能的变化与氧化应激指标、外周血淋巴细胞衰减因子的相关性

目的:探讨类风湿关节炎心肺功能变化进行研究,并分析类风湿关节炎心肺功能变化与氧化应激及外周血淋巴细胞衰减因子的相关性。方法:以130例住院类风湿关节炎患者为病例组研究对象,50例健康体检为正常对照。分别检测两组入选对象心功能参数EF%、SV%、FS%、E、A、E/A;肺功能参数FVC、FEV1、MVV、PEF;B、T淋巴细胞衰减因子表达频率及相关活化水平;酶联免疫吸附法检测外周血细胞因子(IL-17、TNF-α、IL-4、IL-35)及氧化应激指标(MDA、ROS、SOD、TAOC)。结果:病例组研究对象心功能各项指标明显低于正常对照组。病例组130例患者中,有103例心功能指标异常,占病例组研究对象的79.23%,而E/A异常率最高。病例组与正常对照组相比,LADd增厚,A峰升高,EF、E峰、E/A降低,相比差异有统计学意义(P<0.05);与正常对照组相比,病例组肺功能各项参数明显降低;病例组130例患者中,有88例肺功能指标异常,占病例组研究对象的67.69%。而其中PEF异常率最高。病例组肺功能各项指标明显低于对照组,相比差异有统计学意义(P<0.05);相关分析显示心功能指标EF与CD24^+细胞和CD19^+CD24^+细胞的相关系数分别为-0.353及-0.457,具有负相关性,与ROS的相关系数为0.459,具有正相关性。心功能指标FS与CD24^+细胞、CD19^+CD24^+细胞的相关系数为-0.395和-0.421,具有负相关性;A峰与CD19^+cell的相关系数为0.423,具有正相关性,E/A与BTLA的相关系数为0.393,具有明显的正相关性;SV与MDA、SOD呈正相关;肺功能的各项参数均与Hs-CRP及ESR呈明显的负相关;肺功能参数FVC与BTLA及CD19^+CD24^+的相关系数0.513和0.596,具有明显正相关性,与CD24^+BTLA^+、TNF-α的相关系数为-0.451和-0.351,呈明显负相关性;参数FEV1与CD19^+CD24^+、TAOC、IL-4的相关系数分别为0.535、0.466及0.519,呈明显正相关性,与CD24^+BTLA^+、MDA的相关系数为-0.461和-0.358,呈明显负相关性;PEF与SOD、TAOC、IL-4、IL-35的相关系数分别为0.547、0.482、0.643及0.452,呈明显正相关性,与MDA、ROS、IL-17的相关系数为-0.451、-0.423及-0.417,呈明显负相关性(P<0.05)。结论:RA氧化应激失衡及细胞免疫失调贯穿于心肺功能损伤的整个过程,因此,在临床上治疗RA患者关节症状的同时,要探讨如何恢复机体氧化还原稳态,以上调BTLA水平,活化B、T细胞,从而抑制免疫炎症反应,降低心肺功能损伤。

哮喘与感染患儿外周血中性粒细胞CD64指数、B淋巴细胞、BTLA的表达差异及临床意义研究

目的研究哮喘与细菌感染患儿外周血中性粒细胞CD64指数、B淋巴细胞、B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)的表达差异及其作用机制。方法选取皖南医学院弋矶山医院儿科2015年6月至2017年1月收住入院的49例患儿,其中3~6岁哮喘患儿26例(哮喘组),同期一般细菌感染患儿为23例(感染组)。两组受试对象在性别、年龄及体质量上差异均无统计学意义(P>0.05)。住院后24h内收集两组清晨空腹外周静脉血,应用流式细胞术检测外周血中性粒细胞CD64指数和B淋巴细胞水平及其BTLA表达水平,散射比浊法测定血清IgE水平,免疫透射比浊法测定血清CRP水平。结果哮喘组外周血中性粒细胞CD64水平高于感染组(P<0.05)。哮喘组B淋巴细胞百分比高于感染组(P<0.05);哮喘组B淋巴细胞表面BTLA表达较感染组减少(P<0.01);哮喘组B淋巴细胞百分比与其表达BTLA成正相关(r=0.569 8,P<0.01)。哮喘组外周血清CRP水平较感染组低(P<0.05)。哮喘组外周血清IgE水平较感染组显著升高(P<0.01)。结论感染是哮喘的诱发因素之一,CD64、CRP的早期检测可指导哮喘患儿抗菌药物的应用。BTLA在哮喘患儿B淋巴细胞表达下调,参与免疫应答的调控。

负性共刺激分子BTLA/HVEM抑制肺结核患者CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)调节性T细胞增殖

目的研究B、T淋巴细胞衰减因子(B and T lymphocyte attenuator,BTLA)及其配体疱疹病毒进入中介体(herpesvirus entry mediator,HVEM)在肺结核患者CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)调节性T细胞(CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg)中的表达及其与患者临床特征的关系。方法选取肺结核患者30例(肺结核组)和20例健康体检者(健康对照组),通过流式细胞术检测2组外周血淋巴细胞CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg细胞的阳性率,以及检测BTLA/HVEM在肺结核患者外周血和淋巴细胞上的表达;利用蛋白芯片法检测结核抗体;通过影像检测结果判断肺结核进展程度;采用罗氏培养法培养结核分枝杆菌。结果结核组CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg所占比例为(9.14±2.66)%,健康对照组CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg所占比例为(6.39±1.73)%,相对于健康对照组,肺结核组患者外周血中CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg比率明显增高;健康对照组CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg上BTLA和HVEM的表达率高于肺结核组;BTLA、HVEM在肺结核组患者CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg上的表达呈正相关;BTLA、HVEM在CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg上的表达在痰涂阳性患者组中更低,而与其他临床特征无关。结论肺结核患者体内的CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg增高,可能是抗结核免疫应答被抑制的原因,提示过度扩增导致数量异常增高的Treg是免疫应答不足和MTB逃逸的一个重要因素。负性共刺激信号BTLA/HVEM在结核患者体内下调提示其参与对CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg的增殖的抑制作用。

新风胶囊治疗对强直性脊柱炎患者BTLA^+T细胞数量和氧化应激的影响

目的探讨强直性脊柱炎(AS)患者B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)及活性氧(ROS)、活性氮(RNS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(TAOC)的变化及新风胶囊(XFC)对其影响。方法将140例AS患者随机等分为XFC组(3粒/次,tid)和柳氮磺吡啶(SASP)组(4片/次,bid);连续治疗3个月。60例健康体检者为对照组。采用流式细胞术检测患者外周血BTLA表达频率及活化水平;采用ELISA检测2组血清中氧化应激指标(ROS、RNS、MDA、SOD、CAT、TAOC)和白细胞介素4(IL-4)、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;采用魏氏法检测血沉(ESR);采用日立7060型全自动生化分析仪检测高敏C反应蛋白(Hs-CRP)。结果 XFC组临床疗效显著优于SASP组,具有统计学意义(P<0.01)。与健康对照组相比,AS患者外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞BTLA的水平显著降低(P<0.01或P<0.05);与对照组相比,AS患者SOD、CAT、TAOC值均显著降低,ROS、RNS、MDA值显著升高(P<0.01或P<0.05);与对照组相比,AS患者血清IL-1β、TNF-α和ESR、Hs-CRP值显著升高(P<0.01),IL-4、IL-10水平显著降低(P<0.01或P<0.05)。与治疗前相比,2组治疗后外周血BTLA+CD3+T细胞、BTLA+CD4+T细胞、SOD、TAOC、IL-4,SF-36量表生理机能(PF)、社会功能(SF)、生理职能(RP)、情感职能(RE)、躯体疼痛(BP)、精神健康(MH)、活力(VT)以及一般健康状况(GH)八个维度积分均显著升高,ROS、MDA、TNF-α、ESR、Hs-CRP、VAS、BASDAI、BASFI、BAS-G均显著降低(P<0.01或P<0.05)。XFC组与SASP组相比,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。Pearson相关分析结果显示:外周血BTLA表达水平与SOD、RP、BP、SF、RE呈正相关;BTLA+CD3+T细胞、BTLA+CD4+T细胞与ROS、MDA、IL-1β、TNF-α、ESR、VAS、BASDAI呈明显负相关,与TAOC、IL-4、IL-10呈正相关;BTLA+CD3+T细胞与RNS、Hs-CRP、BASFI呈明显负相关;BTLA+CD4+T细胞与CAT呈正相关。结论 XFC能增强AS患者外周血BTLA表达,负性调节T细胞的激活与增殖。

风湿病患者肺功能降低与BTLA阳性细胞及调节性T细胞的数量减少有关

目的探讨B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)、调节性T细胞(Treg)与风湿病患者肺功能降低的关系。方法选取482例风湿病患者,包括类风湿性关节炎(RA)198例,强直性脊柱炎(AS)114例、干燥综合征(SS)102例、骨关节炎(OA)68例,应用肺功能仪检测患者肺功能水平,采用流式细胞术检测患者外周血B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)和调节性T细胞(Treg)表达。结果与正常组比较,风湿病患者肺功能降低,外周血BTLA、Treg表达降低;与风湿病BTLA、Treg正常组比较,BTLA、Treg异常组肺功能参数第1秒用力呼气容积(FEV1)、最大呼气流量(PEF)、50%肺活量位的最大呼气流量(FEF50)、FEF75降低(P<0.05或P<0.01);相关分析显示,肺功能参数用力肺活量(FVC)、最大通气量(MVV)、FEV1、FEF25、FEF50分别与BTLA、Treg呈正相关,FVC、FEV1、FEF50、FEF75分别与IgA、IgM呈负相关(P<0.05或P<0.01)。结论风湿病患者肺功能降低可能与BTLA、Treg表达降低,促使T细胞、B细胞过度异常活化有关。

过表达BTLA的树突状细胞对小鼠EAE免疫耐受作用的初步研究

目的探讨过表达B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)的树突状细胞(DC)对C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)免疫反应的调节作用。方法构建携带目的基因BTLA的重组慢病毒载体,以感染复数15转染原代分离培养的C57BL/6小鼠骨髓源性的DC从而在DC上过表达BTLA。构建C57BL/6小鼠EAE模型,发病高峰时分离脾细胞并从中磁珠分选出CD4^+T淋巴细胞并与过表达BTLA的DC共培养,以ELISA法检测共培养体系中辅助性T淋巴细胞Th1类细胞因子干扰素-γ和Th2类细胞因子IL-10的含量。结果成功构建携带BTLA基因的重组慢病毒LPP-Mm26645-Lv203-400,以感染复数15转染培养5 d后的DC,96 h后DC上有BTLA过表达。采用MOG35-55多肽免疫C57BL/6小鼠后,21~24 d出现发病高峰,分选出的CD4^+T淋巴细胞与过表达BTLA的DC共培养72 h,ELISA法检测共培养体系中干扰素-γ分泌明显减少,IL-10分泌明显增多(P均<0.05)。结论过表达BTLA可以增强DC的耐受性,通过逆转Th1/Th2失衡,对EAE产生特异性抗原免疫耐受,负性调节EAE的免疫反应。

转染人BTLA基因细胞株的建立及其生物学功能的初步研究

目的:构建B、T淋巴细胞衰减子(BTLA)基因转染的细胞作为免疫原,并探讨该基因转染细胞在体外的生物学功能。方法:通过RT-PCR法从经PHA活化的人外周血T细胞中克隆出人BTLA编码区全长基因,经EcoR I和BamHI双酶切后插入逆转录病毒载体pEGZ-Term中构建成重组载体pEGZ-Term/BTLA。用脂质体法以重组逆转录病毒载体转染293T细胞,并用Zeocin抗生素进行长期筛选;流式细胞术分析BTLA在基因转染细胞膜上的表达;通过MTT法和流式细胞术探讨基因转染细胞在体外对T淋巴细胞增殖与活化的影响。结果:流式细胞术检测表明BTLA基因转染的293T细胞膜上能稳定地高表达人BTLA蛋白。BTLA基因转染的293T细胞和T细胞体外共培养显示,与未转染的293T细胞相比,该基因转染的细胞能部分地抑制抗人CD3单克隆抗体(mAb)刺激的T细胞增殖;流式细胞术和ELISA法分析揭示,该基因转染的细胞能够下调T细胞表面活化标志CD25的表达并降低IFN-γ和IL-10的分泌。结论:获得稳定高表达人BTLA基因转染的细胞株。该细胞株在体外对抗人CD3 mAb刺激的T细胞的增殖与活化具有部分地抑制作用。

干燥综合征肺功能变化特点及其与T细胞亚群CD3、CD4、CD8、BTLA的相关性分析

目的:观察干燥综合征患者肺功能参数与T细胞亚群CD3、CD4、CD8与B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)的变化,探讨干燥综合征患者肺功能变化与T、B细胞的关系。方法:选取干燥综合征患者120例设为观察组,同时选取健康体检者60例设为对照组。采用肺功能仪检测干燥综合征患者肺功能,流式细胞术检测干燥综合征患者外周血CD3、CD4、CD8表面BTLA表达,观察干燥综合征患者实验室指标的变化。结果:干燥综合征患者肺功能降低率为77.5%;与对照组比较,观察组肺功能参数、CD3+BTLA+T、CD4+BTLA+T、CD8+BTLA+T细胞降低(P<0.05或P<0.01);相关性分析显示,肺功能参数FEV1/FVC与PLT、体倦乏力积分呈负相关,MEF25-75与病程、少气懒言积分呈负相关,MEF50与腮腺肿大积分呈负相关,PEF与病程呈负相关,DLCO与病程、超敏C-反应蛋白、口干咽燥积分、面色萎黄积分呈负相关(P<0.05或P<0.01)。FEV1/FVC与Ig G呈正相关,PEF与泪膜破裂时间、CD8+BTLA+T cell呈负相关,DLCO与唾液流率、CD4+BTLA+T cell呈正相关(P<0.05或P<0.01)。结论:干燥综合征患者存在肺功能下降,且肺功能降低与CD3、CD4、CD8等T细胞亚群、BTLA表达失衡有关。

PD-1、CTLA-4、BLTA在食管鳞状细胞癌患者外周血中的表达及临床意义

目的检测食管鳞癌患者外周血中抑制性协同刺激因子受体PD-1、CTLA-4、BLTA表达情况,并分析其临床意义。方法选取2016年6月—2017年4月河北医科大学第四医院胸外科90例食管鳞状细胞癌患者(其中50例患者行手术治疗)和40例健康对照者为研究对象,收集其外周血液标本,采用酶联免疫吸附方法检测血清中可溶性PD-1(s PD-1)、可溶性CTLA-4(s CTLA-4)及可溶性BLTA(s BLTA)的表达水平。结果食管鳞癌组血清中s PD-1、s CTLA-4及s BLTA水平均明显高于对照组(P<0.05);食管鳞癌组手术前后血清中s PD-1、s CTLA-4及s BLTA水平均无统计学差异(P>0.05)。s PD-1和s BLTA的表达水平与临床病理特征无相关性,s CTLA-4的表达水平与TNM分期相关(P<0.05),与T分期、N分期、肿瘤体积大小、肿瘤部位、组织分化程度、性别、年龄无相关性;血清中s PD-1、s CTLA-4及s BLTA两两间无相关性(P>0.05)。结论食管鳞癌患者血清中s CTLA-4较正常人表达升高,且s CTLA-4的表达水平与TNM分期相关,说明血清中s CTLA-4表达水平与病情发展变化有一定相关性。