冻干b型流感嗜血杆菌结合物疫苗中磷含量测定方法建立及验证

目的:建立冻干b型流感嗜血杆菌(Hib)结合疫苗磷含量检测的超滤法联合紫外分光光度法,并对该方法进行验证及初步应用。方法:用去离子水将样品溶解后超滤,收集超滤管中Hib多糖,采用等体积比硫酸高氯酸消解样品,使用钼酸铵在酸性条件下与磷形成磷钼酸,与维生素C生成蓝色化合物,在825 nm下有最大吸收。对该方法进行线性、精密度、稳定性、准确度验证。用建立的方法检测3批次商业化冻干Hib结合疫苗磷含量。结果:标准磷在质量浓度1~10μg·mL^(-1)内线性关系良好(r=1.000),线性方程为Y=8.878×10^(-2)X+2.402×10^(-3),方法在低、中、高浓度水平下回收率均值分别为在97.35%、96.65%、97.42%(n=3),RSD分别为2.55%、0.95%、0.95%;重现性试验的RSD为2.81%;中间精密度RSD 2.14%;磷标准品衍生物溶液室温放置1 h稳定,RSD为0.39%。结论:该方法结果准确、可靠,可用于冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗磷含量检测,同时也为其他多糖蛋白结合疫苗磷含量测定提供了思路。

高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法测定吸附无细胞百(三组分)白破灭活脊髓灰质炎和b型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗的多糖含量

目的 采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法测定吸附无细胞百(三组分)白破灭活脊髓灰质炎和b型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗(以下简称DTac P-s IPV-Hib)中多糖含量,并对方法进行验证。方法 在1 ml样品中加入0.02 g柠檬酸钠,振荡混匀后,置于37℃保温24 h,4000×g离心5 min收集上清液,稀释后加入6 mol/L盐酸,100℃下加热2 h,冰浴10 min后加入0.8 ml氢氧化钠(1 mol/L)溶液用于终止酸水解。采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法根据检测信号峰面积计算对应水解荚膜多糖(PRP)含量,通过PRP占多糖含量干重的41.3%计算出总的多糖含量。结果 核糖醇参考品浓度在0.1~1.5μg/ml范围内标准曲线r2>0.99,检测下限可达10ng/ml。核糖醇加标回收率均在95%~105%;对高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法检测多糖的重复性和中间精密度进行验证,相对标准偏差(RSD)均小于5%,方法专属性和耐用性良好。结论 使用柠檬酸钠作为解吸附剂,与高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法相结合可用于DTac P-s IPV-Hib中Hib多糖的含量检测,为产品的质量控制和稳定性研究提供参考。

我国儿童b型流感嗜血杆菌(Hib)疫苗接种率的meta分析

目的综合评价我国b型流感嗜血杆菌(Hib)疫苗接种率。方法检索中国期刊全文数据库(CNKI)、维普数据库(VIP)、万方数据库、中国生物医学文献数据库(CBM)、Pub Med和Science Direct,收集发表年限为2006年至2016年的有关b型流感嗜血杆菌疫苗接种率的相关文献,对符合纳入标准的文献提取数据后进行meta分析。结果共纳入29篇文献,我国儿童b型流感嗜血杆菌(Hib)疫苗接种率的合并值为55.9%(95%CI=52.3%~59.4%);东部、中西部地区儿童Hib疫苗接种率分别为62.9%和48.1%;居住在城市的儿童Hib疫苗接种率为53.9%,农村儿童为41.9%;户籍为本地儿童的Hib疫苗接种率为60%,流动儿童为54.3%;采用非随机抽样方法进行统计的接种率高于采用随机抽样方法统计的接种率。结论我国流感嗜血杆菌(Hib)疫苗接种率偏低,不同地区间接种率差异较大。

关于使用b型流感嗜血杆菌(Hib)偶联疫苗的临时建议

2007年12月13日,默克公司宣布主动召回某些批次的两种b型流感嗜血杆菌（Hib）偶联疫苗,PedvaxHIB（单价Hib疫苗）和Comvax（Hib/乙肝疫苗）。保健人员应根据默克公司网站公布的程序退还未使用的召回批次疫苗。有关这些批次疫苗的进一步信息可在药品食品管理局（FDA）网站上查询。默克公司已暂停了Hib偶联疫苗的生产并打算在2008年第四季度前不重新发放这种疫苗。召回PedvaxHIB和Comvax以及暂停生产会在短期内引起美国Hib疫苗供应的短缺。

吸附无细胞百白破灭活脊髓灰质炎和b型流感嗜血杆菌联合疫苗的安全性和免疫原性

研究吸附无细胞百白破灭活脊髓灰质炎和b型流感嗜血杆菌联合疫苗(DTaP-IPV/Hib)的安全性和免疫原性。方法 运用随机数字表法将2021.1-2022.12我院疫苗接种婴儿(n=200)分为联合疫苗组、非联合疫苗组,每组各100例,前者接种五联疫苗(DTaP-IPV/Hib),后者同时在不同部位分别接种吸附无细胞百白破联合疫苗(DTaP)、脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)、b型流感嗜血杆菌结合疫苗(Hib)。比较各组免疫原性及安全性。结果 联合疫苗组所有婴儿对百日咳、白喉、破伤风、各型脊髓灰质炎、b型流感嗜血杆菌均产生血清学保护浓度抗体;两组抗白喉抗体、抗破伤风抗体、抗脊髓灰质炎抗体、抗b型流感嗜血杆菌荚膜多糖抗体、抗百日咳抗体滴度血清学保护浓度抗体相似;而联合疫苗组抗丝状血凝素抗体滴度98.06%显著高于非联合疫苗组89.15%。联合疫苗组不良反应发生率14.39%显著低于非联合疫苗组27.68%(P<0.05)。结论 对3月龄-18月龄婴幼儿采用(DTaP-IPV/Hib)联合疫苗,可确保免疫原性的同时保障接种安全性。

b型流感嗜血杆菌结合疫苗的制备及免疫学特性

目的制备ｂ型流感嗜血杆菌结合疫苗，观察免疫学特性。方法通过已二酸二肼（ＡＤＨ），将纯 化的荚膜多糖抗原与破伤风类毒素（ＴＴ）蛋白共价结合，制备ｂ型流感嗜血杆菌结合物。以２．５μｇ多糖或含２．５μｇ 多糖结合物经皮下免疫ＮＩＨ雌性小鼠，用ＥＬＩＳＡ法检测小鼠血清ＰＲＰ抗体及Ｔ抗体水平。结果用本实验方法提 取的多糖、合成的多糖衍生物、多糖－蛋白结合物都具有ｂ型流感嗜血杆菌的抗原特异性，其化学组成及结构特性 与国外文献报道结果基本一致。单独用多糖免疫小鼠未能诱导高水平的血清ＰＲＰ抗体，而用结合物免疫小鼠却诱 导出高水平的血清ＰＲＰ抗体及ＴＴ抗体，并存在免疫记忆性。结论本实验为进一步临床评价结合物的体内保护 性效果提供了实验基础。

b型流感嗜血杆菌结合物纯化过程不同部分的生化及免疫学特性

目的分析Hib结合物纯化过程不同部分的生化及免疫学特性。方法制备的Hib结合物经SepharoseCL4B层析柱纯化,从中选5个不同位点取样,检测其生化特性及免疫原性。结果1、2和3部分多糖蛋白质比例在0.4左右,高分子结合物含量均在80%以上,经高压液相分析,这3部分的相对分子质量均在1400000以上,免疫小鼠后均能产生较好的免疫应答。第4部分高分子结合物含量在70%左右,相对分子质量约在670000,免疫小鼠后也能产生较好的免疫应答。第5部分高分子结合物含量为23.7%,相对分子质量在50000左右,基本是以游离状态存在的多糖和载体蛋白,免疫小鼠后仅能产生很低的免疫应答。结论1、2和3部分是Hib结合物纯化中需收集的部分,第4部分虽也以结合状态存在,但相对分子质量相对较低,第5部分主要是游离的多糖和蛋白质。

中国B型流感嗜血杆菌疾病及疫苗的应用

B型流感嗜血杆菌(Hib)是造成我国儿童细菌性脑膜炎和肺炎等感染性疾病及死亡的主要病原菌之一,严重危害儿童健康。但目前国内缺乏对Hib疾病的有效监测和对疾病负担的准确评估。实践证明,Hib结合疫苗安全有效,是控制Hib感染性疾病最有效的手段。而我国Hib疫苗接种覆盖率低,6个月～5岁儿童抗Hib自然抗体水平很低,极易受到疾病侵袭,应在我国进行Hib结合疫苗的大力推广。

b型流感嗜血杆菌荚膜多糖纯化方法的优化

对b型流感嗜血杆菌荚膜多糖纯化工艺中冷酚抽提次数、沉淀核酸的乙醇浓度、沉淀糖精的乙醇浓度进行研究。结果表明,最佳纯化工艺为冷酚抽提4次,300 mL/L的乙醇沉淀核酸,650 mL/L的乙醇沉淀糖。所建立的提取纯化工艺提取的荚膜多糖纯度高,各项指标能够达到WHO的规程要求。

无细胞百白破b型流感嗜血杆菌联合疫苗的研制

目的研制无细胞百白破b型流感嗜血杆菌联合疫苗(DTaP/Hib)。方法按不同抗原配比配制3组联合疫苗,分别检测疫苗的效价及安全性,从中选择最佳配比配制3批联合疫苗,并用相应批原液,按相同配比配制3批DTaP和3批Hib疫苗作为对照,检测联合疫苗中抗原的相容性。结果3组配比的联合疫苗效价及安全性均达到《中国药典》三部(2005版)要求,联合疫苗中以每毫升含AcP18μgPN、D25Lf、T7Lf和Hib多糖抗原20μg为最佳配比。动物实验证明联合疫苗各抗原间不存在免疫干扰。结论已成功研制4种抗原配比合理的DTaP/Hib联合疫苗。

巢式聚合酶链反应技术在流感嗜血杆菌b型检测中的应用

目的评价巢式聚合酶链反应(nested-PCR)技术在b型流感嗜血杆菌(Hib)检测中的应用价值,估计氨苄西林耐药Hi中b型的比率。方法对2000—2003年北京、上海、广州细菌监测项目中,呼吸道感染儿童鼻咽部分离培养的899株Hi,用E试验法检测氨苄西林耐药情况后,用nested-PCR与玻片凝集法对氨苄西林耐药菌株进行b型检测。结果检出74株氨苄西林耐药Hi。nested-PCR与玻片凝集法检测Hib的结果一致,74株氨苄西林耐药Hi中有2株为Hib,约占2.7%。结论nested-PCR b型荚膜检测方法可作为玻片凝集法的一个重要补充。3地4年内呼吸道感染的儿童鼻咽部携带的氨苄西林耐药Hi中,Hib的比率处于相对较低的水平。

b型流感嗜血杆菌-破伤风类毒素结合疫苗与国产DTPw疫苗婴儿同时接种后的反应观察

目的观察婴儿同时接种b型流感嗜血杆菌-破伤风类毒素(Hib-TT)结合疫苗与国产DTPw疫苗后的反应。方法按照开放、随机的原则,将472名11～17周龄的健康男女婴儿分为2组,即DTPw组(234名)和DTPw+Hib组(238名)。DTPw组接种0.5mlDTPw疫苗,DTPw+Hib组同时在不同部位接种0.5mlHib结合疫苗,2组分别于3、4、5月龄各接种1针。在免疫接种后4d内,观察2组接种对象所有症状(征集与非征集的)的发生情况,对接种当日和随后30d报告的非征集性不良反应进行记录,并进行统计学分析。结果在接种疫苗后4d内,DTPw+Hib组与DTPw组所有症状的发生率相似,分别为49.1%和46.0%;在31d内,2组中出现非征集症状的比例分别为9.9%和9.8%,其中上呼吸道感染和咽喉炎是最常见的非征集性症状;未报告严重不良反应。结论婴儿同时接种DTPw疫苗和Hib结合疫苗具有良好的安全性和耐受性。

B型流感嗜血杆菌疫苗的研究进展

B型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)是小儿细菌性感染的主要元凶之一。据世界卫生组织(WHO)2012年4月统计报道,2008年全世界因Hib感染死亡的5岁以下儿童人数为20.3万,而目前预防Hib最有效的措施是接种Hib疫苗。本文回顾了Hib疫苗的发展,对现有Hib结合疫苗的免疫原性、结合方式、结合策略进行综述。

通过CDAP活化多糖制备b型流感嗜血杆菌荚膜多糖-D蛋白疫苗初探

目的用CDAP活化b型流感嗜血杆菌(Hib)荚膜多糖,制备b型流感嗜血杆菌荚膜多糖及D蛋白疫苗。方法采用CDAP法在不同p H值条件下活化Hib荚膜多糖,再通过乙二酰肼(ADH)与D蛋白共价结合,制备Hib荚膜多糖与其D蛋白结合物原液,并对三批结合物原液的各项指标进行检测。获得的结合物原液免疫BALB/c小鼠,应用ELISA法检测血清中的Ig G抗体水平,评价其免疫原性。结果三批结合物原液以上检测指标均符合药典要求,衍生物中ADH含量对结合物的免疫原性有重要影响。结论用CDAP活化工艺制备的Hib荚膜多糖-D蛋白结合物适宜制备结合疫苗,为以D蛋白为载体的Hib结合疫苗的制备及五价联苗的研制奠定实验基础。

一种国产b型流感嗜血杆菌结合疫苗的安全性及免疫原性研究

目的评价一种国产b型流感嗜血杆菌结合疫苗的安全性和免疫原性。方法采用随机、盲态、阳性对照、非劣效性研究设计,选择3月龄~5岁健康婴幼儿为研究对象,分3个年龄组,按照1∶1比例随机接种试验疫苗和对照疫苗;使用日记卡收集安全性数据,采集免疫前和全程免疫后第28天血液标本进行抗体检测;并比较。结果试验组不良反应以一、二级为主,局部反应以红斑为主、全身反应以发热为主;与对照疫苗相当,试验疫苗具有可接受的安全性。两组全程免疫后第28天抗PRP抗体质量浓度≥1.0μg/mL的受试者百分比均为100.00%。仅在3~5月龄组中发现试验组GMC略低于对照组(P=0.041),另2个年龄组中GMCs、GMFIs差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论该b型流感嗜血杆菌结合疫苗安全性可以耐受,免疫原性良好。

药品包装材料与b型流感嗜血杆菌结合疫苗相容性研究

目的考察不同组合的内包装材料对Hib结合疫苗的影响,选出最适合的包装材料。方法对所选药品包装材料按照生产厂家的不同来搭配,共得到12种组合,根据相容性试验设计,将样品置于25±2℃环境下,分别在1、2、3、6个月时取样,进行pH值、内毒素、不溶性微粒3个项目的检测。结果对pH值、内毒素含量、不溶性微粒检测数据进行分析,选出了对Hib结合疫苗影响最小的包装材料组合C+Y组。结论一个适宜的包装内环境对产品的稳定性十分重要。

b型流感嗜血杆菌疫苗

b型流感嗜血杆菌(Hib)是引起儿童发病率和死亡率的主要原因之一,引起的脑膜炎、重症肺炎严重影响了儿童的生存质量。Hib结合疫苗的问世,大大降低了发达国家Hib感染疾病的发病率。现就Hib感染的机理、疫苗的发展情况、现状及存在的问题等作一综述,为研发新型Hib疫苗提供参考依据。

不同部位接种b型流感嗜血杆菌结合疫苗不良反应比较

目的探讨不同部位接种b型流感嗜血杆菌结合疫苗(haemophilus type b conjugate vaccine,Act-Hib)不良反应情况。方法将500例预防接种Act-Hib的2～8月龄婴幼儿随机分为实验组与对照组,每组各250例,分别于大腿前外侧肌和上臂三角肌进行疫苗接种。比较两组婴幼儿接种后局部及全身反应情况。结果实验组婴幼儿局部反应程度明显轻于对照组,两组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论婴幼儿预防接种Act-Hib,在大腿前外侧肌注射接种局部反应程度明显轻于在上臂三角肌注射。

A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗及b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量检测方法的建立与验证

目的建立A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量的检测方法并加以验证。方法参照《中华人民共和国药典》三部（2010年版）中＂毛细管柱顶空进样等温法＂,优化色谱条件,建立A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量的检测方法并对该方法进行验证及初步应用。结果色谱条件为顶空平衡温度70℃,顶空平衡时间40 min,汽化室温度200℃,柱箱温度40℃,检测器温度250℃,进样量为1.0 m L,载气（高纯氮气）流量1.3 m L/min,尾吹气（高纯氮气）流量5 m L/min,分流比1∶1。丙酮质量分数在2×10^-6-5×10^-5范围内具有良好的线性关系（r〉0.99）。丙酮的平均回收率及相对标准偏差（RSD）分别为86.05%-105.11%及2.1%-9.5%,检测限为2×10^-6,定量限为3×10^-6。结论本方法的线性、特异性、准确性、重复性等均符合规定,方法准确、稳定,可用于A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量的检测。