PC及其兼容机上B型病毒的检测及清除实用程序

本文介绍目前在PC及其兼容机上发现的“B-type”型病毒的特征、检测方法、给已经被病毒感染的程序消毒的方法等,并附有检测、清除B型病毒完整的源程序清单。

耐药性流感B型病毒应监测

据Medscape．com 4月3日报道（原载JAMA 2007；297：1435—1442，1492—1493），耐神经氨酸酶抑制剂的流感B型病毒不如A型病毒容易引发流感，但是它能在社区和家庭中传播，所以仍然应该被密切监控。

拉米夫定与恩替卡韦治疗HBeAg阴性的慢性B型病毒性肝炎

目的探讨恩替卡韦治疗HBeAg阴性慢性B型病毒性肝炎的效果和安全性。方法 652例HBeAg阴性慢性B型病毒性肝炎(CHB)患者分别给予恩替卡韦0.5mg或拉米夫定100mg,每日一次持续治疗52周。主要终点是组织学改善(Knodell坏死炎症记分降低≥2分,纤维化无恶化)。结果治疗结束后组织学改善恩替卡韦组211/300例(70.3%),拉米夫定组为150/252例(59.5%)(P=0.02);血清肝炎病毒B(HBV)DNA水平检测转阴患者恩替卡韦组90.0%,拉米夫定组71.5%(P<0.001);丙氨酸转氨酶正常患者分别为79%和70%(P=0.045)。血清HBV-DNA水平平均下降5.0、4.5log10/ml,P<0.001)。恩替卡韦组无耐药现象。两组安全性和不良事件相似。结论 HBeAg阴性CHB病人应用恩替卡韦能够改善组织学和病毒学反应,血清丙氨酸转氨酶水平正常化显著增加,恩替卡韦和拉米夫定治疗的完全性和不良事件相似。

柯萨奇病毒B组5型TaqMan一步法RT-qPCR检测方法的建立

目的建立柯萨奇病毒B组5型(coxsackievirusB5,CV-B5)特异的TaqMan一步法实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测方法。方法根据CV-B5的VP1序列,设计特异性引物和TaqMan探针。将目的基因插入pMD18^(TM)载体,在DH5α感受态细胞中扩增,大肠杆菌体外转录后获得RNA标准品并建立标准曲线,最后对检测方法的重复性、敏感度和特异性进行评价。结果该方法在10^(3)~10^(11)拷贝/微升的模板范围内具有良好的线性关系(r^(2)>0.99),扩增效率E=100.9%,敏感度达1×10^(3)拷贝/微升,只对CV-B5有特异性扩增曲线,且重复性较好。结论本实验建立的TaqMan一步法RT-qPCR检测方法有较高的敏感度、特异性和重复性,有良好的抗干扰性,可用于CV-B5的临床样本检测和绝对定量分析。

柯萨奇病毒B组1型感染动物模型研究进展

柯萨奇病毒B组1型(coxsakievirus B1,CVB1)能引起人类心肌炎、无菌性脑膜炎、新生儿全身感染等多种疾病,幼儿感染后病情较重甚至引发死亡,而目前尚无针对该病毒的疫苗及特效治疗药物。因此,建立并开展相关动物模型研究对CVB1感染后的机体免疫反应、病毒毒力机制、药物疫苗研发等问题的解决具有重要意义,同时也能为临床治疗提供部分依据。本文通过对CVB1病毒感染构建的不同动物模型进行总结,以期望为建立合适的动物模型以及开展相关研究提供参考。

抗柯萨奇病毒B型药物的研究进展

柯萨奇病毒B型(Coxsackieviruses B,CVB)是一种微小、无包膜的单正链RNA病毒,属于小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)肠道病毒属(Enterovirus),主要经消化道传播。CVB感染可以引起多种疾病,如手足口病、腹泻、急性心肌炎、无菌性脑膜炎、骨髓炎及出疹性疾病等。此外,CVB感染也是Ⅰ型糖尿病的诱发因素,严重威胁人们健康。目前,越来越多的天然和人工合成化合物以及单克隆抗体等已经被用于CVB感染的治疗,但是高效抗CVB药物仍然缺乏。本文对抗CVB病毒的药物进行综述,以期为CVB的预防、治疗和药物研发提供思路和依据。

柯萨奇病毒B组3型上海分离株的基因特征分析

为探讨上海市不同来源的柯萨奇病毒B组3型(coxsackievirus B3,CVB3)菌株的循环动态变化及基因特征,本研究对分离自上海市环境污水、健康儿童和急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)病例中的CVB3菌株进行VP1区基因序列测定,并对照全球CVB3代表株进行序列相似性分析和系统发生学分析。结果显示,1989-2021年上海市不同来源的CVB3分离株共有120株,属于D、E基因亚型。上海CVB3分离株的核苷酸和氨基酸相似性差异较大,分别为78.7%~100%和93.3%~100.0%。2016年首次从上海环境污水中分离到E基因亚型CVB3,2021年再次分离到该基因亚型。2021年上海环境污水中的E基因亚型CVB3分离株与2020年的广东手足口病(hand,foot,and mouth disease,HFMD)病例CVB3分离株VP1区的核苷酸相似性较高,但上海暂未有该基因亚型感染病例报道。因此,仍须长期对环境污水和不同肠道病毒感染病例进行监测,以提高肠道病毒监测的敏感性,为肠道病毒相关疾病的诊疗提供数据支撑。

辽宁省首株柯萨奇病毒B组5型全基因组序列分析

研究引起辽宁地区手足口病的柯萨奇病毒B组5型(coxsackievirus B5,CV-B5)基因组特征。对2018年从辽宁省688份肠道病毒核酸阳性的标本中分离到的1株CV-B5进行高通量测序,并对其全基因组进行遗传进化分析。结果表明,CV-B5辽宁分离株与国内流行株的全基因组核苷酸序列同源性为78.5%~97%,氨基酸序列同源性为75.3%~96.7%。基于全基因组的进化分析将CV-B5流行株分为A~D四个基因型,辽宁分离株属于D基因型。通过重组分析发现其在P3区的3D区段发生重组。首次在辽宁地区手足口病患儿中分离出CV-B5,辽宁省分离株(LN2018-23-21/CHN/2018)可能为重组株。

一株蛋鸡血清8b型禽腺病毒的分离鉴定

从山东潍坊地区以包涵体肝炎为病变特征的发病蛋鸡中采集病料,通过接种7日龄SPF鸡胚分离到1株病毒,经PCR检测、测序分析、进化树分析和血清中和试验鉴定,确定为血清8b型禽腺病毒。将该病毒通过肌肉注射接种14日龄SPF鸡,结果仅部分试验鸡出现肝脏轻微坏死变性,这与临床中发病鸡肝脏明显坏死甚至破裂并不相符,分析可能与饲养条件、管理水平、鸡的品种和日龄、药物使用等方面有关。

柯萨奇病毒B组1型感染叙利亚金黄地鼠动物模型建立

目的建立叙利亚金黄地鼠CVB1(Coxsackievirus B1,CVB1)感染动物模型。方法取叙利亚金黄地鼠经鼻腔滴注方式呼吸道感染CVB1,感染剂量每只为10^(7.25)CCID_(50)。观察14 d体重、体温、精神状态、皮肤黏膜变化、行为、粪便状态、是否有神经症状等临床情况;每天采集咽拭子、鼻灌洗液以及粪便进行病毒载量检测,感染第7天取3只实施安乐死,采血进行病毒载量及生化检测;同时采集脑、心脏、肝等多个组织样品进行病毒载量、组织病理学和IHC检测。结果感染CVB1病毒的动物在14 d内均出现不同程度精神萎靡、体温下降,以及口唇部出现典型的红疹及疱疹等类似人类手足口病临床表现。咽拭子、鼻灌洗液、粪便以及血液中能检测到病毒;组织中检测到病毒载量并观察到病毒抗原,同时伴有炎症、增生、出血等病理改变;血清酶中肝功、心肌酶升高。结论CVB1病毒经滴鼻方式感染叙利亚金黄地鼠建立的感染模型,表现出心肌和肝等组织器官的病理损伤特征,可用于人类手足口病的研究。

人乳头瘤病毒6b型病毒样颗粒免疫活性的研究

目的 了解人乳头瘤病毒 (HPV) 6b型病毒样颗粒 (VLP)的免疫活性及其诱导的保护性抗体对HPV11型VLP和牛乳头瘤病毒 1型 (BPV1)VLP的交叉免疫反应。方法 将HPV6b、HPV11和BPV1晚期基因L1的开放读码框架 (ORFs)分别重组到杆状病毒中 ,该重组病毒在感染的昆虫细胞 (Sf 9细胞 )中表达 ,表达的L1蛋白可自行组装成HPV6b、HPV11和BPV1VLP。取 5 0 μg纯化的HPV6bVLP分别在第 0天和第 2 1天经肌肉免疫Balb/c鼠。第二次免疫后 1周及 3个月取血 ,检测血清抗HPV6bVLP、HPV11VLP和BPV1VLPIgG滴度 ;血凝集抑制试验检测HPV6bVLP免疫产生的抗血清是否能阻止HPV11VLP和BPV1VLP与鼠红细胞凝集。结果 免疫后 1周 ,应用ELISA方法检测抗HPV6bVLP、HPV11VLP和BPV 1VLP血清IgG滴度分别为 1∶6 4 0 0、1∶16 0 0和 1∶16 0 0。 3个月后 ,抗HPV6bVLP、HPV11VLP和BPV 1VLP血清IgG滴度分别为 1∶80 0、1∶4 0 0和 1∶10 0。血凝集抑制试验显示HPV6bVLP产生的抗血清能够阻止高度同源性的HPV6bVLP和HPV11VLP与鼠红细胞结合。结论 HPV6bVLP具有很强的免疫原性 ,免疫后产生的抗血清具有阻止HPV6bVLP和HPV11VLP与细胞结合的能力。HPV6b和 11型间确实存在交叉反应的中和表位 。

柯萨奇病毒B组5型非结构蛋白抑制NF-κB信号通路的作用机制研究

目的 柯萨奇病毒B组5型(CVB5)是手足口病的重要病原体之一,可导致发热、皮疹或疱疹等临床症状,重症者出现神经系统疾病,甚至死亡。天然免疫应答是机体抗病毒入侵的第一道防线,其中核因子κB (NF-κB)是宿主天然免疫反应中的重要蛋白质,然而关于CVB5感染后调控NF-κB介导信号通路的研究尚鲜有报道。方法 本研究通过检测启动子活性、促炎因子水平以及通路中关键蛋白表达等,阐明CVB5对NF-κB信号通路的调控作用机制。结果 CVB5感染可抑制促炎因子表达和p65的磷酸化。CVB5非结构蛋白(NSP)可抑制促炎因子表达以及重要蛋白p65和IκBα的磷酸化。经STRING11.1数据库预测表明,CVB5 3CD蛋白与宿主多聚胞嘧啶结合蛋白1 (PCBP1)具有相互作用,且PCBP1可促进IκBα和p65的磷酸化,抑制病毒复制。结论 CVB5 NSP可负调控NF-κB信号通路,且与3CD相互作用的PCBP1蛋白可通过调控NF-κB通路抑制CVB5复制。本研究探索病毒与宿主天然免疫应答的调控作用,从而为研制抗CVB5感染的药物提供作用靶点。

贵州省2013—2016年B型流感病毒流行特征分析

目的了解贵州省B型流感病毒的流行特征和规律,为其预防与控制提供依据。方法采用描述性方法对贵州省2013年4月1日—2016年3月31日B型流感病毒RT-PCR检测结果进行统计。结果贵州省2013—2016年3个监测年度B型流感病毒RT-PCR检测阳性1 904份,其中By系1 215份、Bv系642份,2013年4月—2014年3月、2014年4月—2015年3月2个监测年度B型流感的优势流行株都是By系,而2015年4月—2016年3月是Bv和By系共同流行,流行季节主要在冬春季;B型流感病毒男性检出所占比率较高,占56.83%;15岁以下低年龄组人群B型流感病毒检出数最高(70.80%),而Bv系在0~岁年龄组最高(42.37%),By系在5~岁年龄组最高(35.56%);混合感染病原组合构成主要以By+Bv为主,占67.65%,与B型有关的混合感染数占95.59%。结论贵州省B型流感病毒存在By和Bv两种系别的流行,流行季节为冬春季,男性感染病例多于女性,发病以15岁以下人群为主,加强低年龄群体流感疫苗的接种和监测具有重要意义。

荧光定量RT-PCR快速检测B型流感病毒的研究

目的:利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测B型流感病毒的方法。方法:根据B型流感病毒HA基因的相对保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释法检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线;特异性检验后利用临床标本与普通RT-PCR法进行比较。结果:B型流感病毒检测反应的灵敏度为5.0×10-6TCID50,标准曲线相关系数为0.998,扩增效率为107.8%,5种非B型流感病毒病原体检测均为阴性,说明此方法具有很好的稳定性、重现性和特异性。结论:本研究建立荧光定量RT-PCR技术可以准确检测B型流感病毒,不仅灵敏度高、稳定性好,而且可以对病毒滴度进行定量检测。

山东省2017—2018年B型流感病毒药物敏感性检测及神经氨酸酶基因特征分析

目的检测山东省2017-2018流感监测年度B型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂的药物敏感性,分析其神经氨酸酶(NA)基因特征。方法选取山东省2017—2018年分离的18株B型流感病毒(Yamagata系16株,Victoria系2株),通过生物学耐药实验检测病毒对奥司他韦和扎那米韦的药物敏感性。提取病毒核酸后一步法RT-PCR扩增NA基因片段,双向测定核苷酸序列,对基因序列和氨基酸序列特征比对分析。结果在检测的18株B型流感病毒中,有1株Yamagata系病毒对奥司他韦和扎那米韦2种药物的敏感性均降低,此株病毒的NA基因发生H274Y位点突变。其余15株Yamagata系病毒和2株Victoria系病毒均为奥司他韦及扎那米韦的敏感株。结论随机选取的18株B型流感病毒中大多数病毒对神经氨酸酶抑制剂敏感,临床上可继续使用此类药物对流感患者进行治疗。应加强耐药性监测,警惕耐药株的出现。

一步法多重RT-PCR快速筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒

目的建立能同时筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒的多重RT-PCR技术。方法针对A型流感病毒的M基因、B型流感病毒的NS基因设计通用扩增引物,针对新型甲型H1N1流感病毒的HA基因设计特异性扩增引物,采用一步法建立多重RT-PCR反应体系。通过盲法实验与实时荧光RT-PCR进行比对来评价方法的准确性,并应用于临床评价方法的实用性和有效性。结果琼脂糖凝胶电泳分析多重RT-PCR产物,结果显示目的扩增片段条带清晰明亮,没有非特异性产物出现,可见该方法扩增效率高,特异性强。50份样本的盲法实验结果显示两种方法检测结果完全一致,符合率为100%。结论建立的多重RT-PCR方法能通过一次实验快速、准确地同时筛检A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒,是一项成本低廉、对流感的疫情监测和早期诊断具有实用价值的筛检技术。

B型流感病毒核衣壳蛋白ELISA捕获法的建立和临床应用

目的制备和鉴定B型流感病毒核衣壳(N)蛋白单克隆抗体(mAb),建立双抗体夹心捕获抗原ELISA,用于B型流感病毒感染的早期诊断。方法用重组B型流感病毒N蛋白和B型流感病毒抗原免疫BALB/c小鼠制备mAb,采用ELISA间接法、免疫荧光(IFA)和免疫印迹(WB)进行筛选和鉴定,通过竞争抑制试验分析抗体识别表位,并采用抗体配对试验建立双抗体夹心捕获抗原ELISA检测B型流感病毒N抗原。结果获得12株特异性针对B型流感病毒N蛋白的mAb,识别8个不同的抗原位点,根据mAb识别抗原表位,对mAb进行多种组合的配对试验,筛选出2株单抗BN4和BN8混合作为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的单抗BN1和BN5混合作为测定抗体,建立了双抗体夹心ELISA,测定新鲜的漱口液标本的灵敏度达100%,而对冻融的漱口液标本检测灵敏度为83.9%,与其他呼吸道病毒如A型流感病毒、副流感病毒等无交叉反应,特异度达100%。结论获得特异性好的mAb,经过抗体的配对和优化,建立了一种灵敏度高、特异性强的B型流感病毒抗原的ELISA捕捉法,可用于B型流感病毒感染的早期实验室诊断及流行病学研究。

两株B型流感病毒的基因组序列分析

目的了解两株B型流感病毒的基因组序列特征。方法对两株B型流感病毒进行全基因组序列测定和基因进化特性的分析。结果成功扩增出两株B型流感病毒的全基因组序列,并且两毒株的基因组均属于Yamagata系类似株Ⅱ系。两株病毒的基因组序列与疫苗株B/Florida/4/2006(Yamagata系)以及Victoria系代表株B/Brisbane/60/2008、B/Malay-sia/2506/2004相比,HA基因同源性为89.7%～97.3%,NB基因同源性则为95.4%～98.4%。两株病毒的HA蛋白与WHO推荐的疫苗株B/Florida/4/2006(Yamagata系)相比,存在11处氨基酸突变,其中HA的N131K氨基酸位点突变,可能对抗原性产生影响。NB的S198N氨基酸位点突变可能影响神经氨酸酶抑制剂的灵敏度。结论两株B型流感病毒的遗传进化状态稳定,但是与同分支中的毒株基因序列部分位点存在差异。

儿童急性暂时性髋关节滑膜炎与柯萨奇B组3型病毒感染的相关性研究

目的 :探讨儿童急性暂时性髋关节炎与柯萨奇B组 3型病毒的相关性。方法 :采用ELISA法检测 10 0例急性暂时性髋关节滑膜炎患儿血清及髋关节液中柯萨奇B组病毒 (CoXB)、腺病毒 (AdV )、巨细胞病毒 (CMV)、呼吸道合胞病毒 (RSV)抗体 ,其中 79例作病毒血清免疫学检测 ,2 1例作髋关节病毒学检测 ,怀疑柯萨奇病毒感染者 ,随机抽样 9例作髋关节液中的病毒分离。结果 :急性暂时性髋关节滑膜炎患儿 79例血清免疫学检测查出Coxb lgM阳性 11例 ,AdV lgM阳性 14例 ,CMV lgM阳性 8例 ,RSV lgM阳性 8例 ,3 8例阴性。 2 1例髋关节液中查出CoXB阳性 7例 ,AdV阳性 5例 ,CMV阳性 2例 ,7例阴性。同时在血液和髋关节液中查出CoXB阳性 1例 ,AdV阳性 2例。随机抽样 9例作病毒分离培养 ,1例分离出柯萨奇病毒 ,采用中和试验证实为柯萨奇B组 3型病毒 ,并经电子显微镜检查确认。结论 :柯萨奇B组 3型病毒具有感染儿童导致急性暂时性髋关节滑膜炎的可能性。

A型和B型流感病毒抗原的快速检测方法及临床应用

目的 介绍一种检测 A型和 B型流感病毒抗原的快速方法以便及早确诊病人是否患有流感及所患流感类型 ,从而为临床提供良好的治疗依据。方法 采用一种快速 EIA法检测 A型和 B型流感病毒抗原试剂盒检测有流感症状病人的咽拭子或鼻咽拭子中是否有流感病毒抗原。结果 从 2 0 0 1年 1 0月到2 0 0 3年 6月两年内累计检测了 2 88例病人标本 ,总阳性率为 1 1 .1 % ( 32 /2 88) ,且以 A型流感病毒感染为主 ( 8.3% )。 2 0 0 2～ 2 0 0 3年流感季节 ,流感病毒感染的总阳性率为 1 8.9% ( 2 7/1 43) ,A型流感病毒感染阳性率占 1 6.1 % ( 2 3/1 43) ,B型流感病毒感染阳性率占 2 .8% ( 4 /1 43)。这一季节内阳性结果主要集中在2 0 0 3年 1月 ;5 5例病人标本中 A型流感病毒感染的阳性率为 2 9.1 % ( 1 6/5 5 ) ;B型流感病毒感染的阳性率为 1 .8%。其中 1 2 y以下儿童 2 5例 ,A型流感病毒感染阳性率为 40 % ( 1 0 /2 5 ) ,是 B型的 1 0倍 ( 1 /2 5 )。结论 采用日本生产的快速 EIA法检测 A型和 B型流感病毒抗原试剂盒 1 5 min内可确定标本中是否有流感病毒抗原并能同时区分出两种主要流感病毒感染类型— A型流感或 B型流感 ,有利于疾病的早期诊断、治疗和预防 ,防止社区