B型CpG寡聚脱氧核苷酸在细菌性疫苗中的研究进展

CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG oligonucleotide,CpG ODN)是由人工合成的含有非甲基化CpG的ODN,在疾病预防及临床治疗领域具有广阔的应用前景。其中B型CpG ODN因具有强免疫刺激作用等特点被广泛用于疫苗研究中,且部分基序已进入临床试验阶段。随着临床治疗中的细菌耐药性问题日益严重,以B型CpG ODN为佐剂开展细菌性疫苗研发成为研究热点。本文对现有的B型CpG ODN 1826、2006、2007和1668等基序在细菌性疫苗中的研究现状及相关研究进展作一综述,以期为后续细菌性疫苗的开发及应用提供参考。

含CpG寡聚脱氧核苷酸对肿瘤抗原肽P815AB的免疫佐剂效应研究

目的 以肿瘤抗原P815AB抗原肽为模式抗原 ,研究CpG寡聚脱氧核苷酸 (CpGODN)对该肿瘤抗原表位肽的免疫佐剂效应。方法 用 [3H ] TdR掺入法研究CpGODN体外刺激小鼠脾细胞增殖效应 ,用ELISPOT和 [3H] TdR释放法检测不同构成形式的疫苗在体诱发特异性CTL应答的效应。结果 ODN182 6在体外可刺激小鼠脾细胞显著增殖。经 4次免疫 ,在“肽 +ODN182 6 +IFA”组中 ,4/6的小鼠体内出现了特异性CTL应答 ;在“肽 +ODN182 6 +PBS”组 ,有 3只小鼠在完成 4次免疫前先后死亡 ,余 3只中有 1只体内也可检测到相应CTL反应 ;而对照“肽 +IFA”组 ,6只小鼠体内均未诱发出特异性CTL应答。结论 CpGODN对P815AB表位肽有较为理想的免疫佐剂效应 ,但疫苗构成形式对其免疫效果有着决定性的作用 ,“肽 +ODN182 6 +IFA”是本研究中最有效的疫苗形式 。

含CpG基序的寡聚脱氧核苷酸佐剂对乙型肝炎疫苗免疫效果的影响

为提高乙型肝炎疫苗的免疫原性和机体对疫苗的免疫反应性,开发新型疫苗佐剂已成为国内外学者研究的热点。大量的研究表明,CpC基序的寡聚脱氧核苷酸佐剂(CpC ODN)是很有前途的细胞免疫和体液免疫增强剂,与铝佐剂有协同作用,并可克服铝佐剂对细胞免疫的抑制;CpC ODN作为佐剂稳定性较好,对人体安全,尤其是与Al(OH)_3联合作为HBsAg疫苗佐剂时,双剂接种就可以获得很理想的免疫效果,并且价廉,有利于提高发展中国家的乙型肝炎疫苗接种率。本文着重对含有一个或数个非甲基化CpC ODN的研究进展作了综述。

CpG寡聚脱氧核苷酸抑制人膀胱癌细胞在裸鼠体内的生长

目的:观察不同剂量的CpG ODN 1668对裸鼠皮下接种人膀胱移行细胞癌T24细胞生长的抑制作用,并与卡介苗的作用进行比较。方法:通过皮下接种T24细胞,建立裸鼠皮下接种人膀胱癌细胞的动物模型。将裸鼠随机分为5组,(1)对照组;(2)BCG组;(3)小剂量CpG ODN 1668组;(4)中等剂量CpG ODN 1668组;(5)大剂量CpG ODN 1668组。自肿瘤细胞接种后第1天起给药,共4次(第1、8、15、22天),在肿瘤周围多点注射相应药物(早期给药);同样方式另设5组动物,自肿瘤细胞接种后第7天起(第7、14、21、28天)于肿瘤周围多点注射相应药物(延迟给药)。观察肿瘤体积和裸鼠的生存率。结果:早期给药时,在CpG ODN 1668各剂量组和BCG组,肿瘤生长均被抑制,裸鼠的生存期得到延长。中等剂量和大剂量CpG ODN 1668组对肿瘤细胞生长的抑制作用强于BCG组。延迟给药时,CpG ODN 1668各剂量组肿瘤体积和裸鼠的生存率,与对照组和BCG组的差异无显著统计学意义。结论:CpG ODN 1668的早期应用,可抑制人膀胱癌细胞T24在裸鼠体内的生长,并表现为剂量依赖性;其抗肿瘤效应是非T细胞依赖的。当加大使用剂量时,CpG ODN 1668对膀胱癌细胞生长的抑制作用强于BCG。而当肿瘤负荷较大时,CpG ODN 1668和BCG的延迟使用对膀胱肿瘤细胞在裸鼠体内的生长无抑制作用。

CpG寡聚脱氧核苷酸在肿瘤免疫治疗中的应用进展

CpG寡聚脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN)具有激活机体免疫系统的作用。CpG ODN能够直接诱导浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell,pDC)的活化和成熟,促进Th1型细胞因子的分泌和B细胞分化成浆细胞。CpG ODN作为肿瘤疫苗的佐剂已应用于多个临床试验中。单独应用CpG ODN具有抗肿瘤作用,联合其他抗肿瘤治疗(如单克隆抗体、化学治疗、放射治疗和细胞因子等)具有协同抗肿瘤作用。虽然在应用CpG ODN治疗ⅢB～Ⅳ期非小细胞肺癌(non-small celllung cancer,NSCLC)的Ⅲ期临床试验中,与标准化疗方案相比没有延长患者的中位生存期并发生较严重的不良反应,但是在其他临床试验中CpG ODN具有明确的抗肿瘤作用。CpG ODN在抗肿瘤治疗中的有效性和安全性方面还需要进一步的临床试验证实。

CpG寡聚脱氧核苷酸抑制肾癌细胞增殖及肿瘤生长的体内外实验研究

目的研究CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)在体内外对肾癌细胞增殖及肿瘤生长的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度CpG ODN1826和non-CpG ODN1982(ODN1982)干预对体外培养人肾透明细胞癌Caki-1细胞增殖的影响。24只BALB/c裸鼠皮下接种Caki-1细胞建立荷瘤裸鼠模型,4d后根据每周1次的治疗方式随机分为对照组(PBS)、ODN1982组(50μg ODN1982)、小剂量CpG ODN1826组(25μgCpG ODN1826)和大剂量CpG ODN1826组(50μgCpG ODN1826),每组6只。于建模后35d处死动物,比较各组荷瘤裸鼠的肿瘤体积、质量及肿瘤组织学改变;体外分离各组荷瘤裸鼠脾淋巴细胞,乳酸脱氢酶释放法检测不同靶标比例(脾淋巴细胞:Caki-1细胞或脾淋巴细胞:小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞)的荷瘤裸鼠脾淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。结果 ODN1982对Caki-1细胞的体外增殖活性无显著影响;500μg/mLCpG ODN1826干预可显著抑制Caki-1细胞增殖。至实验终止时点,小剂量和大剂量CpG ODN1826组荷瘤裸鼠的肿瘤体积显著小于ODN1982组和对照组(P<0.05);各组间肿瘤质量比较差异均具有统计学意义(P<0.05);组织学观察显示,小剂量和大剂量CpG ODN1826组肿瘤组织较多炎性细胞浸润。当靶标比例为50:1时,大剂量CpG ODN1826组裸鼠脾淋巴细胞对Caki-1细胞和YAC-1细胞的杀伤活性分别为(9.74±1.16)%和(79.65±5.23)%,显著高于对照组的(7.67±0.22)%和(10.12±3.03)%及ODN1982组的(7.66±0.93)%和(27.60±9.83)%(P<0.05)。结论 CpG ODN对体外肾癌细胞增殖及荷瘤裸鼠肿瘤组织生长均具有明显抑制作用,其机制可能与CpG ODN增强荷瘤裸鼠的固有免疫应答有关。

CpG寡聚脱氧核苷酸对变应性联合气道疾病气道重塑的影响研究

背景激素是变应性联合气道疾病(ACAD)常用的治疗方法,但慢性ACAD出现气道重塑,可能影响其疗效,故有必要寻找与激素联合并有协同作用的新型免疫治疗。前期研究发现CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)抑制ACAD气道炎症,但对气道重塑的效果有待研究。目的探讨CpG-ODN对慢性ACAD小鼠模型气道重塑的影响。方法本研究时间为2016年4月-2018年3月。30只清洁级雌性BALB/c小鼠采用随机数字表法分为正常对照组(Control组)、ACAD组、变应性联合气道疾病CpG-ODN干预组(ACAD/CpG-ODN组)、变应性联合气道疾病布地奈德干预组(ACAD/BUD组)、变应性联合气道疾病CpG-ODN+BUD联合干预组(ACAD/CpG-ODN+BUD组)。实验动物腹腔卵清蛋白(OVA)或磷酸盐缓冲液(PBS)致敏,鼻腔OVA/PBS 3周激发,随之6周雾化气道激发。ACAD/CpG-ODN组、ACAD/BUD组和ACAD/CpG-ODN+BUD组分别给予CpG-ODN、BUD和CpG-ODN+BUD滴鼻,其他组给予PBS滴鼻。每次鼻腔或气道激发后10 min内,对小鼠抓鼻和喷嚏次数进行计数。HE和PAS染色观察小鼠鼻腔组织的病理特点。HE、AB-PAS和Masson’s染色观察小鼠肺组织病理变化,并行气道炎症评分。免疫组化检测肺组织转化生长因子β1(TGF-β1)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA),应用Image-Pro Plus图片分析软件定量评估,并进行症状评估。结果各组小鼠抓鼻次数和喷嚏次数比较,差异均有统计学意义(P<0.01);其中ACAD组抓鼻次数和喷嚏次数均多于Control组,ACAD/CpG-ODN组、ACAD/BUD组、ACAD/CpG-ODN+BUD组抓鼻次数和喷嚏次数均少于ACAD组(P<0.05)。HE和PAS染色显示,ACAD/CpG-ODN组和ACAD/BUD组鼻黏膜病理改变较ACAD组减轻,而ACAD/CpG-ODN+BUD组进一步减轻。HE、AB-PAS和Masson’s染色显示,ACAD/CpG-ODN组和ACAD/BUD组肺组织病理改变较ACAD组减轻,而ACAD/CpG-ODN+BUD组进一步减轻。各组气道炎症评分比较,差异有统计学意义(P<0.01);其中ACAD组气道炎症评分高于Control组,ACAD/CpG-ODN组、ACAD/BUD组、ACAD/CpG-ODN+BUD组气道炎症评分均低于ACAD组(P<0.05)。各组肺组织中TGF-β1和α-SMA表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.01);其中ACAD组TGF-β1和α-SMA表达水平均高于Control组,ACAD/CpG-ODN组、ACAD/BUD组、ACAD/CpGODN+BUD组均低于ACAD组(P<0.05)。结论CpG-ODN、布地奈德抑制慢性ACAD模型鼻部炎症和支气管肺组织气道重塑,两者可能具有协同作用。

寡聚脱氧核苷酸抑制巨噬细胞NF-κB活性的实验研究

目的观察寡聚脱氧核苷酸(ODN)对THP-1细胞NF-κB核转位及细胞核内结合活性的抑制作用。方法用脂质体将寡聚脱氧核苷酸转入细胞后,以细菌脂多糖(LPS)刺激30min,分别通过免疫细胞化学、电泳迁移率分析(EMSA)和 RT-PCR检测细胞NF-κB的核移位和细胞核内NF-κB结合活性。结果免疫细胞化学显示转入ODN后以LPS刺激, NF-κB表达仍位于细胞浆内,EMSA显示ODN可明显抑制细胞核内结合活性,RT-PCR显示ODN能够明显抑制 NF-κB相关炎性因子TNF-α mRNA的合成。结论ODN能有效抑制THP-1细胞NF-κB的核移位和细胞核内NF-κB 结合活性,从而抑制相关炎性基因的启动和转录。

新型免疫调节性寡聚脱氧核苷酸的序列设计和筛选分析

目的:探讨免疫调节性寡聚脱氧核苷酸(ODN)设计原则和筛选方法,为研究和开发新型免疫调节性ODN提供参考。方法:利用含有CpG基序的免疫刺激性寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)作为刺激物,将人外周血单个核细胞(hPBMC)作为研究对象,以3H-TdR掺入法检测CpG ODN诱导的细胞增殖水平,对自行设计的ODN的免疫调节活性进行筛选分析。结果:通过对两批免疫调节性ODN的设计和筛选,得到具有较强免疫抑制活性的ODN 667B,与CpG BW006组相比,其抑制率达到66.3%(P<0.01),并具有浓度相关性。结论:总结出免疫调节性ODN的设计原则,同时证明筛选方法可以用于免疫调节性ODN的筛选,为进一步研究开发新型免疫调节性ODN奠定了基础。

CpG寡聚脱氧核苷酸在灵长类动物中免疫调节活性的研究进展

包含CpG基序的寡聚脱氧核苷酸 (ODN)具有类似于微生物DNA激活内在免疫系统的能力 ,可提高适应性免疫力而抑制传染性生物的早期传播。CpGODN在疫苗佐剂的设计以及哮喘、过敏、传染病和癌症的治疗中显示出良好的应用前景。由于CpG识别体系在进化中出现的种间差异 ,在啮齿类动物中表现出最强活性的CpGODN却无法有效地刺激灵长类动物产生免疫应答。已有大量证据表明CpGODN在小鼠中具有治疗活性 ,而其在灵长类动物中作用的研究仍需继续深入。现就作用于灵长类动物的CpGODN的分类、作用机制和其作为疫苗佐剂与免疫保护剂以及在癌症。

免疫调节性寡聚脱氧核苷酸筛选方法的建立、优化和应用

目的:建立一套合理而便捷的实验体系,为开发新型免疫调节性寡聚脱氧核苷酸(ODN)提供筛选方法。方法:利用含有CpG基序的免疫刺激性寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)作为刺激物,将人外周血单个核细胞(PBMC)作为研究对象,分别以细胞的增殖程度和刺激上清的抗病毒活性作为检测指标,优化各项实验条件,综合评定寡聚脱氧核苷酸的免疫调节活性。结果:成功建立了由阳性免疫调节性ODNA151抑制CpG ODN诱导的人PBMC增殖及抗病毒活性的筛选方法。结论:免疫调节性ODN筛选方法的成功建立,为下一步研究开发新型免疫调节性ODN奠定了基础。

局部应用Cp G寡聚脱氧核苷酸联合OX40单抗治疗肝细胞癌小鼠模型的效果分析

目的探讨局部应用CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)联合OX40单抗方案对肝细胞癌的疗效,以及对远处同源肿瘤的治疗效果。方法在BALB/c雄性小鼠四肢腋窝皮下注射H22单细胞悬液,建立荷瘤模型,7 d后筛选出30只荷瘤体积相当的小鼠,随机分成模型对照组、CpG组、CpG+OX40组,每组10只,并在左下肢瘤内注射药物。选取10只同批正常小鼠作为正常对照组。计算荷瘤体积,ELISA法检测血清IL-12和IFNγ浓度,流式细胞术检测脾脏CD8^+T淋巴细胞比例,比较3组小鼠治疗后的生存情况。计量资料多组间比较采用重复测量设计资料的方差分析和单因素方差分析,进一步两两组间比较采用LSD-t检验;采用log-rank检验分析3组小鼠(不包含正常组)生存率,并绘制生存曲线。结果给予治疗后,模型对照组荷瘤呈进行性增长,血清IL-12和IFNγ水平、脾脏CD8^+T淋巴细胞比例较正常对照组均减低(P值均<0.05)。与模型对照组相比,CpG组和CpG+OX40组干预荷瘤体积均缩小(P值均<0.05);CpG+OX40组远处荷瘤体积比CpG组和模型对照组增长减慢(P值均<0.05),但CpG组远处荷瘤体积与模型对照组差异无统计学意义(P>0.05)。与模型对照组相比,两实验组血清中IL-12和IFNγ水平及脾脏CD8^+T淋巴细胞比例均升高(P值均<0.05),且CpG+OX40组高于CpG组(P值均<0.05)。CpG+OX40组小鼠生存率均高于模型对照组和CpG组(P值均<0.05),CpG组与模型对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 OX40单抗联合CpG-ODN可使治疗处肝脏肿瘤缩小,并有效减缓远处肿瘤增长,延长小鼠生存时间。

CpG寡聚脱氧核苷酸应用于变态反应性鼻炎的研究进展

近年来,变态反应性鼻炎发病率呈明显上升趋势.一些研究发现CpGDNA在变态反应性鼻炎治疗中具有其它传统治疗药物无可比拟的优势,虽然目前还处于动物模型及前期临床实验阶段,并且机制还不完全清楚,但越来越受到人们的重视.着重介绍了对目前人们对CpGDNA的认识进行了,并对其用于变态反应性鼻炎治疗的现状进行了综述.

诱骗寡聚脱氧核苷酸在疾病治疗中的研究进展

诱骗寡聚脱氧核苷酸(decoy oligodeoxynucleotide,decoy ODN)通过与目的基因启动子上的转录因子结合位点(trascription factor binding site,TFBS)竞争性地结合转录因子,从而影响转录因子调控的靶基因表达。近年来,越来越多的研究者证实通过识别各种疾病相关的信号通路与转录因子,设计相应的decoy ODN,可以对一些疾病起到治疗效果,这其中包括运用STAT3 decoy ODN治疗恶性肿瘤和运用NF-κB decoy ODN治疗炎症纤维化疾病和心血管疾病。本文将总结分析近5年decoy ODN策略在疾病研究中的运用,为治疗肿瘤、纤维化、心脑血管病等疾病提供新的思路。

CpG寡核苷酸联合Texo对小鼠结肠癌的治疗作用

目的肿瘤细胞分泌的外泌体(tumor-derived exosomes,Texo)是目前肿瘤免疫治疗领域的一个热点。文中主要观察小鼠结肠癌细胞CT-26分泌的Texo联合包含有未甲基化的CpG二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸(CpG Oligodeoxynucleotides,CpG ODN)对小鼠结肠癌细胞CT-26移植瘤的治疗作用。方法使用差速离心法分离和提取CT-26细胞分泌的Texo,紫外分光光度计进行蛋白定量,透射电镜观察Texo的形态。用Texo、CpG ODN1826、CpG ODN1826+Texo(联合组)和等渗盐水(对照组)免疫BALB/c小鼠,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定T细胞对CT-26细胞的体外杀伤活性。建立CT-26小鼠结肠癌皮下移植瘤模型,1周后皮下注射Texo、CpG ODN1826、CpG ODN1826+Texo以及等渗盐水,观察它们对皮下移植瘤生长的抑制作用。结果CT-26细胞分泌的Texo为直径30～100 nm的膜囊泡。CpG ODN1826+Texo联合免疫小鼠的T细胞体外对CT-26细胞的杀伤作用与单药组和对照组相比均明显增强(P<0.05)。动物实验表明,Texo和CpG单药组的抑瘤作用与对照组相比有明显差异(P<0.05),而联合组能更显著地抑制肿瘤生长(P<0.05)。结论与CpG ODN和Texo单药相比,二者联合用药能有效的抑制小鼠结肠癌皮下移植瘤的生长。

特异性寡聚脱氧核苷酸对Hep3B肝癌细胞恶性表型的作用

目的研究一段序列和胰岛素样生长因子2(IGF-2)基因第四启动子互补的特异性寡聚脱氧核苷酸(SODN)对Hep3B肝癌细胞株的抑制效应。方法根据IGF-2基因第四启动子序列人工合成一段与之互补的特异性脱氧核苷酸,并制备其长效的硫代衍生物,通过转染试剂将其导入高表达IGF-2的Hep3B 肝癌细胞株后,采用逆转录聚合酶链反应法和western blot技术分析SODN对IGF-2基因转录和蛋白表达的抑制效应,并通过四甲基偶氮唑盐法、流式细胞术、细胞克隆形成实验以及细胞侵袭和运动实验进一步观察SODN对Hep3B细胞的生长、细胞周期、体外克隆形成能力及侵袭和运动能力所产生的影响。结果空白对照组和导入非特异性寡聚脱氧核苷酸(CODN)对照组相比,导入SODN的Hep3B细胞,其IGF-2 mRNA 和蛋白的表达有明显降低;SODN对Hep3B细胞的增殖及运动能力不产生效应,但可以抑制其在培养板上的克隆形成数和穿透Matrigel的细胞数,抑制率分别为90.2%、95.5%。结论SODN具有"分子开关"作用,可以抑制和下调Hep3B肝癌细胞的IGF-2基因表达,并可逆转其部分恶性表型。

未甲基化寡聚脱氧核苷酸对链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠Toll样受体9和核转录因子B的影响

目的 观察未甲基化寡聚脱氧核苷酸（CpG-ODN）对链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病大鼠Toll样受体9（TLR9）、核转录因子B（NF-κB）及血清辅助性T细胞1型（Th1）、2型（Th2）炎症因子的影响.方法 取5～6周龄雄性SD大鼠40只,随机分为4组：正常对照组（Ⅰ组）、1型糖尿病组（Ⅱ组）、低剂量CpG-ODN（Ⅲ组）和高剂量CpG-ODN 1型糖尿病组（Ⅳ组）.STZ诱导建立1型糖尿病模型,分别给Ⅲ、Ⅳ组皮下注射不同浓度的CpG-ODN,免疫印迹和荧光定量PCR法检测大鼠脾脏和胰腺TLR9和NF-κB的表达;ELISA法测定各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）和白细胞介素-6（IL-6）水平.结果 4组大鼠TLR9蛋白在脾脏的表达均明显高于在胰腺中的表达;脾脏组织中,Ⅲ和Ⅳ组TLR9和NF-κB的mRNA和蛋白的表达较Ⅰ组和Ⅱ组明显升高,Ⅳ组TLR9和NF-κB的mRNA和蛋白表达较Ⅲ组升高;胰腺组织中,Ⅲ组和Ⅳ组TLR9和NF-κB（p65）蛋白的表达较Ⅱ组升高,Ⅳ组TLR9和NF-κB（p65）蛋白表达较Ⅲ组升高;Ⅲ组和Ⅳ组血清TNF-α和IFN-γ水平较Ⅰ和Ⅱ组升高,Ⅳ组血清TNF-α和IFN-γ水平高于Ⅲ组.结论 CpG-ODN激活STZ诱导糖尿病大鼠TLR9通路,胰腺和脾脏NF-κB的表达在一定范围内呈剂量依赖性增加.

含有CpG基序的寡聚脱氧核苷酸2395对鼠巨细胞病毒肝炎新生小鼠的治疗作用

目的 研究含有CpG基序的寡聚脱氧核苷酸2395（CpG ODN2395）对鼠巨细胞病毒（MCMV）肝炎新生小鼠的治疗作用及相关机制.方法 SPF级BALB/c新生小鼠,按窝随机分为对照组、病毒组和治疗组.对照组：腹腔注射9 g/L盐水20×10-6L隔日1次;病毒组：腹腔注射MCMV（病毒致半数细胞感染量TCID50=108.31/L）20×10-6L1次,从接种MCMV当日起隔日腹腔注射9 g/L盐水20×10-6L;CpG治疗组：腹腔注射MCMV（TCID50=108.31/L） 20×10-6L1次,从接种MCMV当日起隔日腹腔注射CpG ODN2395 20 mg/kg.观测小鼠的生长发育情况.HE染色观察肝脏病理,酶联免疫吸附试验检测小鼠血清ALT、IFN-α,PCR法检测肝脏MCMV DNA,反转录（RT）-PCR法检测肝脏IFN-α mRNA,Wester blot法检测肝脏的Toll样受体9（TLR9）和衔接蛋白-髓样分化标志物88 （MyD88）的表达水平.应用SPSS 16.0软件进行分析.结果 1.病毒组小鼠生长发育落后,体质量低于对照组和治疗组,7d、14 d时差异有统计学意义（F=18.919、25.543,P均＜0.05）;治疗组发育介于对照组和病毒组之间,体质量均低于对照组,在7d时差异有统计学意义（t=3.187,P ＜0.05）.2.病毒组小鼠血清ALT高于对照组和治疗组,治疗组血清ALT高于对照组,差异均有统计学意义（F=11.407、11.791、154.565,P均＜0.05）.3.肝组织病理改变：病毒组肝组织病变活动性积分（HAI）值在第3天达高峰,以后逐渐下降;治疗组肝组织HAI均值也在第3天达高峰,但肝损害明显轻于病毒组,以后肝病变逐渐减轻,在第7天和第14天时HAI均值都显著低于病毒组.4.病毒组和治疗组小鼠3d、7d和14 d时肝脏MCMV DNAPCR检测阳性,3个时间点治疗组MCMV DNA负荷量均低于病毒组.5.病毒组和治疗组的3d时血清IFN-α达高峰,7d、14 d时渐下降;治疗组的血清IFN-α高于病毒组和对照组.6.病毒组和治疗组肝脏IFN-α mRNA表达水平在3d时增加,7d时达高峰,14 d时下降,3个时间点表达水平差异有统计学意义.治疗组IFN-αmRNA表达水平高于病毒组和对照组,病毒组高于对照组.7.治疗组肝脏TLR9表达水平高于病毒组和对照组,病毒组高于对照组.治疗组肝脏MyD88表达水平高于病毒组和对照组,病毒组高于对照组.结论 CpGODN2395可能提高TLR9的表达水平,通过MyD88依赖途径激活IFN-α的分泌,抑制MCMV的复制,减轻新生小鼠MCMV肝炎肝功能损害,改善肝脏病变和降低肝脏病毒负荷量具有抗MCMV的活性作用.

CpG寡聚脱氧核苷酸增强树突状细胞疫苗诱导的特异性抗前列腺癌作用

目的观察CpG寡聚脱氧核苷酸（CpG-ODN）对截短的人前列腺特异性膜抗原（tPSMA）基因修饰的树突状细胞（DCs）诱导的抗前列腺癌效应。方法利用复制缺陷性腺病毒AdEasy-1系统，通过基因重组技术构建Ad—tPSMA及Ad—eGFP。将Ad-tPSMA和Ad．eGFP感染鼠源性DCs，用含10μg／L粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、白细胞介素（IL）-4和含10％胎牛血清（FCS）的RPMI1640培养基诱导培养6d后，然后再添加1mg／L的CpG—ODN体外培养1d，最后添加1mg／L的脂多糖（LPS）继续培养1d，使其成熟。流式细胞仪检测DCs细胞表型，CCK-8法检测混合淋巴细胞反应T细胞增殖能力，酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒检测T细胞分泌细胞因子[IL-2、干扰素（INF）-γ]的影响，CCK-8试剂检测T细胞特性杀伤靶细胞活性。结果CpG．ODN促进Ad—tPSMA感染的DCs（CpG／DCs-Ad—tPSMA）高表达MHCII（83．8±3．7）％、CD80（79．8±5．6）％和CD86（78．3±2．8）％，且刺激同种异体T细胞增殖能力明显高于DCs—Ad—tPSMA组、DCs—Ad—eGFP组和未转染的DCs组（P〈0．05）；培养上清中细胞因子IL-2（179．64±2．72）ng／L和INF．1（1581．75±28．61）ng／L，表达水平均明显高于DCs—Ad—tPSMA组、DCs．Ad．eGFP组和未转染的DCs组（P〈0．05）；CpG／DCs—Ad—tPSMA组诱导RM-1-tPSMA细胞特异性杀伤率为（55．3±1．2）％，明显高于DCs—Ad—tPSMA组（40．7±1．4）％、DCs—Ad—eGFP组（12．7±1．2）％和未转染的DCs组（10．8±1．7）％（P〈0．05）。结论CpG—ODN能增强PSMA基因修饰的DCs疫苗诱导的特异性抗前列腺癌效应。