阿托伐他汀对ApoE^(-/-)小鼠载脂蛋白A-Ⅰ和B族1型清道夫受体的影响

目的:观察阿托伐他汀对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)病变形成及载脂蛋白A-I(ApoA-I)和B族1型清道夫受体(SR-B1)表达水平的影响,探讨阿托伐他汀抑制AS病变形成的可能机制。方法:C57BL/6J小鼠10只作为正常对照组常规饲养(A组),ApoE-/-小鼠30只高脂饮食饲养,随机分为ApoE-/-高脂模型组(B组)、阿托伐他汀小剂量组(10mg·kg-1·d-1,C组)和阿托伐他汀大剂量组(20mg·kg-1·d-1,D组)。给予生理盐水或药物干预12周后,测定小鼠血脂水平,HE染色和油红O染色观察各组小鼠胸主动脉粥样斑块的病理改变,采用Western blot法测定肝组织ApoA-I和SR-B1表达水平,实时定量PCR法测定肝组织ApoA-I和SR-B1 mRNA表达水平。结果:与A组相比,B组血清TG、TC、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)明显升高[分别为(2.93±0.18)mmol/L vs(0.59±0.09)mmol/L;(21.78±2.03)mmol/L vs(2.13±0.24)mmol/L;(2.86±0.26)mmol/L vs(0.57±0.10)mmol/L;(18.92±1.87)mmol/L vs(1.54±0.21)mmol/L;P<0.01]。与B组相比,C组和D组TC、LDL-C明显下降[TC B组:(21.78±2.03)mmol/L,C组:(11.79±0.98)mmol/L,D组:(10.07±1.03)mmol/L;LDL-C B组:(18.92±1.87)mmol/L,C组:(8.76±1.15)mmol/L,D组:(7.91±0.77)mmol/L;P<0.01]。胸主动脉粥样斑块面积明显减小[B组:(23.12±3.46)×104μm2,C组:(11.42±1.25)×104μm2,D组:(7.34±1.03)×104μm2,P<0.01];肝组织ApoA-I和SR-B1表达水平明显上调(ApoA-I B组:1.08±0.10,C组:1.36±0.11,D组:1.78±0.14;SRB1B组:0.72±0.07,C组:1.46±0.14,D组:1.50±0.21,P<0.01)。结论:阿托伐他汀可以通过降低ApoE-/-小鼠胆固醇水平,上调ApoAI和SR-B1表达,发挥抗动脉粥样硬化的作用。

有氧运动和膳食脂肪对ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块形成过程中SR-B1基因及蛋白表达的影响

为研究有氧运动和低脂膳食抑制动脉粥样硬化斑块形成的可能机制，本研究探讨了１０周有氧运动和低脂膳食对ＡｐｏＥ基因缺陷小鼠主动脉动脉粥样硬化斑块面积及肝脏ＳＲ－Ｂ１ｍＲＮＡ和蛋白水平的影响。结果表明有氧运动和／或低脂膳食增加ＡｐｏＥ基因缺陷小鼠肝脏ＳＲ－ＢＩ基因及蛋白的表达水平。肝脏ＳＲ－Ｂ１ｍＲＮＡ水平与动脉粥样硬化斑块间存在负相关关系的趋势（相关系数ｒ值为－０．８１４，显著性检验Ｐ值为０．０６２），而且ＳＲ－Ｂ１蛋白水平与动脉粥样硬化斑块间也存在负相关关系（相关系数ｒ值为－０．８７１，显著性检验的Ｐ值为０．０１４）。结果提示在动脉粥样硬化斑块形成过程中，有氧运动和低脂膳食引起的ＳＲ－Ｂ１基因及蛋白表达水平的增加可能是二者具有抗动脉粥样硬化斑块发生作用的潜在机制。

PDZK1敲除对小鼠肝脏胆固醇代谢和胆囊结石形成影响的实验研究

目的探讨敲除PDZK1(Postsynaptic density-95,disks-large,ZO-1-domain K1,PDZK1)基因对小鼠肝脏胆固醇代谢调节和胆囊结石形成的影响。方法雄性成年PDZK1基因敲除小鼠(PDZK1 knockout,KO组)和野生型小鼠(wild type,WT组),每组各10只,以成石饲料分别喂养4周,观察胆囊成石情况,并收集肝脏和胆囊组织。采用蛋白印迹法测定肝脏PDZK1和清道夫受体B族1型(scavenger receptor B type 1,SRB1)表达。采用胆总管插管收集肝胆汁,测定胆汁分泌率和胆汁胆固醇含量。采用试剂盒酶法测定胆囊胆汁成分并计算胆汁胆固醇饱和指数(cholesterol saturation index,CSI)。以实时定量PCR检测肝脏脂质代谢相关基因的mRNA表达。结果成石饲料喂养4周后,WT组小鼠全部成石(10/10),KO组小鼠则为40%(4/10)成石。两组小鼠肝胆汁分泌率差异无统计学意义,但KO组小鼠肝胆汁胆固醇含量显著降低(P<0.05),胆汁酸含量增加(P<0.05),且CSI降低(P<0.05)。KO组小鼠肝脏SRB1蛋白表达降低(P<0.05),甾醇氧-酰基转移酶基因1/2mRNA表达降低(P<0.05),而肝型脂肪酸结合蛋白1和胆汁酸转运相关蛋白(ATP结合盒b11)表达则显著增加(P<0.05)。结论 PDZK1影响SRB1在小鼠肝脏中表达,降低对高密度脂蛋白胆固醇摄取,减少胆汁胆固醇分泌,继而降低胆囊结石形成。

不同剪切应力对内皮细胞表面SR-B1 mRNA表达影响的实验研究

研究不同剪切应力作用下,血管内皮细胞表面高密度脂蛋白(HDL)的特异性B族1型清道夫受体(SR-B1)mRNA的表达水平。采用第2～4代体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)。静态条件下未施加剪切应力培养组为对照组;实验组分为为低剪切应力组(4.2 dyne/cm2)、中等剪切应力组(8.4 dyne/cm2)和高剪切应力组(15dyne/cm2)。剪切应力加载时间分别为为1、2、4、8 h。剪切应力加载后收获细胞提取总RNA,并进行半定量RT-PCR测定脂蛋白受体SR-B1的mRNA表达。结果表明,在低剪切应力组刺激后,与对照组比较,SR-B1 mRNA表达随时间延长明显减弱,在8 h达低谷。在中等剪切应力组,随着作用时间的增加,自1～8 h,SR-B1 mRNA表达呈逐渐增加趋势,与对照组相比,自作用2 h后即出现显著差异;高剪切应力组,随着作用时间的增加,SR-B1 mRNA表达逐渐增加,至4 h达到峰值,然后维持在一个较高水平的平台上,与对照组相比,自作用1 h开始即有统计学差异。由此推断低剪切应力的内皮细胞损伤性机制可能为:通过下调SR-B1受体的表达,降低胆固醇的逆转运及其介导的内皮细胞保护作用,增加血管动脉粥样硬化发生的几率;而生理性高剪切应力的保护性机制与此正好相反。