急性髓系白血病患者细胞淋巴瘤滤过性病毒插入位点1的表达水平与凋亡的关系

目的 分析急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者外周血B细胞淋巴瘤滤过性病毒插入位点1(B cellspecific moloney leukemia virus insert site-1,BMI-1)的表达水平及其与血清B细胞淋巴瘤基因-2家族(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、原癌基因(proto-oncogene,c-myc)的关系。方法 选取2016年2月至2021年2月于安徽医科大学第一附属医院东区就诊的80例AML患者作为观察组,选取同期80例健康体检的志愿者作为对照组。定量反转录PCR检测受试者外周血BMI-1 mRNA表达水平。酶联免疫吸附试验检测两组血清Bcl-2、c-Myc、白细胞介素6、白细胞介素10、转化生长因子-β水平。入组后记录两组受试者白细胞计数、红细胞计数、血小板计数及血红蛋白水平。Pearson分析外周血BMI与血清Bcl、c-Myc水平相关性。结果 观察组患者白细胞计数、红细胞计数、血小板计数和血红蛋白水平明显低于对照组(P<0.05)。观察组患者白细胞介素6、白细胞介素10水平高于对照组,转化生长因子-β水平低于对照组(P<0.05)。观察组患者外周血BMI mRNA表达水平、血清Bcl、c-myc明显高于对照组(P<0.05)。外周血BMI mRNA水平与血清Bcl-2与、c-Myc之间均呈正相关(r=0.624,P=0.023;r=0.454,P=0.035)。结论 BMI mRNA、Bcl、c-myc在AML中表达较高,参与AML的发生发展过程,可为临床诊断和治疗AML提供一定的理论依据。

Bmi-1基因的过表达对人结肠癌细胞株SW480/CD133^+细胞增殖的影响

目的探讨Bmi-1基因过表达对人结肠癌细胞株SW480/CD133^+细胞增殖的影响。方法用携带Bmi-1基因的质粒(pMSCV-Bmi-1)感染人结肠癌SW480/CD133^+细胞,作为观察组(pMSCV-Bmi-1/CD133^+组);以空质粒(pMSCV)感染SW480/CD133+细胞,作为空质粒对照组(pMSCV/CD133^+组);空白对照组不作任何处理,常规培养。用实时荧光PCR和免疫印迹法分别检测细胞中Bmi-1 mRNA水平和蛋白表达的水平;平板克隆实验检测细胞增殖能力的变化。结果观察组Bmi-1 mRNA和蛋白表达的水平均较空质粒对照组和空白对照组显著增高(均P<0.01)。观察组、空质粒对照组和空白对照组的细胞克隆形成率分别为(88.45±5.79)%,(52.33±3.62)%和(54.66±4.03)%,观察组分别高于空质粒对照组和空白对照组(均P<0.01)。结论成功地将Bmi-1基因导入SW480/CD133^+细胞,并能使其在mRNA水平和蛋白水平稳定、持续地表达。Bmi-1过表达可以显著增强人结直肠癌SW480/CD133^+细胞的克隆形成能力,促进SW480/CD133^+细胞增殖。

B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点-1、原癌基因和肝癌缺失基因-1在宫颈癌中的表达及其临床意义

目的研究B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点-1(BMI-1)、原癌基因(C-myc)和肝癌缺失基因-1(DLC-1)在宫颈癌中的表达及其意义。方法收集43例宫颈癌组织为A组,21例宫颈上皮内瘤变组织为B组,以及20例良性病变宫颈组织为C组。用免疫组化PV-9000二步法检测BMI-1、Cmyc和DLC-1蛋白的表达,用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测BMI-1、C-myc和DLC-1 mRNA的表达,并分析其与宫颈癌临床病理因素的关系和三者表达的相关性。结果 A组、B组和C组BMI-1 mRNA的表达量分别为0. 93±0. 09,0. 29±0. 06和0. 17±0. 03,C-myc mRNA的表达量分别为0. 96±0. 08,0. 29±0. 04和0. 16±0. 03,DLC-1 mRNA的表达量分别为0. 11±0. 01,0. 83±0. 11和0. 95±0. 16,两两比较,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。宫颈癌组织中BMI-1、C-myc和DLC-1的表达与患者的年龄、临床病理类型均无明显的相关性(均P> 0. 05),与患者的FIGO临床分期、淋巴结是否转移和分化程度均有明显的相关性(均P <0. 05)。DLC-1的蛋白表达水平与BMI-1、C-myc的蛋白表达水平均呈负相关(均P <0. 01)。结论在宫颈癌中,BMI-1和C-myc呈高表达,DLC-1呈低表达,其均与宫颈癌患者的FIGO分期、分化程度和淋巴结转移密切相关,联合检测BMI-1、C-myc和DLC-1可作为评价宫颈癌生物学行为和判断预后的参考指标。

Bmi-1基因过表达对人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响

目的:探讨原癌基因B淋巴瘤莫洛尼鼠白血病病毒插入区1(Bmi-1)过表达对人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响。方法:采用逆转录病毒介导转染方法将携带原癌基因Bmi-1的质粒或空质粒稳定转染GES-1细胞,通过real-time PCR及Western blotting在mRNA及蛋白水平鉴定转染效果。流式细胞术检测过表达Bmi-1对GES-1细胞周期的影响。应用CCK-8(Cell Counting Kit-8)试剂盒检测稳定转染Bmi-1对GES-1细胞增殖的影响。结果:Real-time PCR及Western blotting结果均表明成功建立稳定转染Bmi-1基因的GES-1细胞株。流式细胞术结果表明,过表达Bmi-1基因使GES-1细胞G0/G1期减少,G2/M期和S期细胞增多。生长曲线显示,过表达Bmi-1基因使GES-1细胞增殖速度明显提高。结论:过表达Bmi-1基因能调控GES-1细胞的细胞周期,促进GES-1细胞的增殖。

miR-135a-5p增强舌鳞状细胞癌细胞对奥沙利铂敏感性研究

目的探讨miR-135a-5p增强舌鳞状细胞癌细胞对奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)敏感性的作用及其可能机制。方法采用实时荧光定量PCR法检测人口腔角质形成细胞(human oral keratinocyte,HOK)和舌鳞状细胞癌细胞系CAL-27、SCC9、SCC25细胞中miR-135a-5p和B淋巴瘤莫洛尼鼠白血病病毒插入区1(B-lymphoma Moloney murine leukemia virus insertion region-1,BMI1)mRNA相对表达量,采用Western blot法检测4种细胞BMI1蛋白相对表达量。对数生长期SCC25细胞分为miR-NC组(转染miR-NC)、miR-135a-5p模拟物组(miR-135a-5p模拟物)和空白对照组(不进行转染操作),采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞miR-135a-5p和BMI1 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测3组细胞BMI1蛋白相对表达量,采用荧光素酶报告实验检测miR-135a-5p与BMI1的靶向关系。SCC25细胞加入不同浓度L-OHP,采用CCK-8实验检测L-OHP对细胞的半数抑制浓度,确定L-OHP在后续实验中的浓度。对数生长期SCC25细胞再分为miR-NC+pcDNA-NC组(转染miR-NC和pcDNA-NC)、miR-135a-5p模拟物+pcDNA-NC组(转染miR-135a-5p模拟物和pcDNA-NC)、miR-135a-5p模拟物+pcDNA-BMI1组(转染miR-135a-5p模拟物和pcDNA-BMI1)、对照组(不进行转染操作),采用实时荧光定量PCR法检测细胞miR-135a-5p和BMI1 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测细胞BMI1蛋白相对表达量,采用EdU增殖实验检测细胞增殖情况,采用Transwell实验检测迁移细胞数和侵袭细胞数,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果CAL-27、SCC9、SCC25细胞miR-135a-5p相对表达量(0.43±0.04、0.62±0.09、0.41±0.07)均低于HOK细胞(1.00±0.15)(P<0.05),BMI1 mRNA(4.57±0.67、2.64±0.59、5.82±0.87)和蛋白(0.61±0.22、0.34±0.28、1.00±0.24)相对表达量均高于HOK细胞(1.00±0.31、0.21±0.14)(P<0.05);与HOK细胞比较,SCC25细胞miR-135a-5p、BMI1 mRNA和蛋白相对表达量差异最大,选用SCC25细胞进行后续实验。miR-135a-5p模拟物组细胞miR-135a-5p相对表达量高于miR-NC组、空白对照组(P<0.05),BMI1 mRNA和蛋白相对表达量均低于miR-NC组、空白对照组(P<0.05);miR-NC组细胞miR-135a-5p、BMI1 mRNA和蛋白相对表达量与空白对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。miR-135a-5p靶向BMI1。miR-135a-5p模拟物+pcDNA-BMI1组、miR-135a-5p模拟物+pcDNA-NC组miR-135a-5p相对表达量均高于对照组、miR-NC+pcDNA-NC组(P<0.05),miR-135a-5p模拟物+pcDNA-BMI1组与miR-135a-5p模拟物+pcDNA-NC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。miR-135a-5p模拟物+pcDNA-BMI1组、miR-135a-5p模拟物+pcDNA-NC组BMI1 mRNA和蛋白相对表达量、L-OHP对细胞的半数抑制浓度、EdU阳性细胞数、迁移细胞数、侵袭细胞数均低于对照组、miR-NC+pcDNA-NC组(P<0.05),miR-135a-5p模拟物+pcDNA-BMI1组均高于miR-135a-5p模拟物+pcDNA-NC组(P<0.05)。miR-135a-5p模拟物+pcDNA-BMI1组、miR-135a-5p模拟物+pcDNA-NC组细胞凋亡率高于miR-NC+pcDNA-NC组、对照组(P<0.05),miR-135a-5p模拟物+pcDNA-BMI1组低于miR-135a-5p模拟物+pcDNA-NC组(P<0.05);以上指标miR-NC+pcDNA-NC组与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论miR-135a-5p通过靶向抑制BMI1表达,增强舌鳞状细胞癌细胞对L-OHP的敏感性。