B淋巴细胞刺激因子及其受体在狼疮性肾炎中的研究现状

狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)是系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)最常见的并发症,同时也是引起患者死亡的重要原因之一。B淋巴细胞刺激因子(B-cell activating factor,BAFF)在B细胞生长、发育和分化中具有重要的免疫调节作用,BAFF过度表达与SLE、类风湿性关节炎、干燥综合征等自身免疫性疾病的发生发展密切相关;BAFF会导致自身抗体产生和免疫复合物在肾脏沉积,参与LN的发病过程。近年来针对血清BAFF在LN临床诊断、病情评估及相关治疗方面显示出可喜的应用前景,现就BAFF在LN中的相关研究现状做一综述。

B淋巴细胞刺激因子(BLyS)研究进展

B淋巴细胞刺激因子 (BLyS)是 1999年新发现的一种重要的细胞因子 ,属于肿瘤坏死因子 (TNF)超家族成员 .在体液免疫调控中起重要作用 .它能强烈地刺激B淋巴细胞的增殖和分化并分泌大量免疫球蛋白 (主要为IgM) ;在体外其过量表达能促进多种B系肿瘤细胞的生长 .BLyS转基因小鼠出现严重的红斑狼疮样症状 .对BLyS的基因和蛋白质结构、免疫调控功能。

B淋巴细胞刺激因子(BlyS)的功能研究进展

BLyS及其受体TACI、BCMA、BAFF R在B淋巴细胞的发育和体液免疫中起着重要作用 :转基因小鼠呈现出严重的SLE症状TACI Fc和BCMA Fc能明显抑制SLE症状的发生 ,BLyS 与A WySnJ小鼠均导致免疫能力大为下降TACI 和BCMA 小鼠对B淋巴细胞的发育影响不大。此外 ,BLyS能够活化T细胞和抑制B系肿瘤细胞的生长。

小鼠可溶性B淋巴细胞刺激因子真核表达载体pSecTag2B-msBlyS的构建

目的 克隆BALB c小鼠可溶性B淋巴细胞刺激因子 (msBlyS)的cDNA片段并测序分析 ,为研究msBlyS诱导的抗肿瘤作用提供目的基因。方法 采用反转录聚合酶联反应 (RT_PCR)法从BALB c小鼠脾脏组织总RNA中获得 5 6 6bp的msBlyS基因cDNA。通过TA克隆测序无误 ,再将其定向连接到pSecTag2B真核表达载体上 ,转化E .coliXL1_blue。限制性内切酶筛选出阳性克隆pSecTag2B_msBlyS ,末端终止法完成msBlyScDNA的序列测定。结果 测得的msBlyScDNA序列与基因文库中报道序列完全相同 ,插入相位正确 ,未改变目的基因的阅读框架。结论 成功克隆了小鼠可溶性B淋巴细胞刺激因子基因 ,为研究其诱导的抗肿瘤作用奠定了基础。

人B淋巴细胞刺激因子的可溶性功能区（hsBLys）的克隆、表达及分离纯化

在已有的pET30a/hs表达载体的基础上，构建了原核表达载体pET30a/hsBLYS(His6)、经双酶切分析和DNA测序后，转化入表达宿主大肠杆菌M15，IPTG诱导后得到高效表达(目的蛋白约占总菌蛋白的35％)；表达产物大部分以包含体形式存在。采用本室自行研制的Ni^2+亲和层析胶(Ni^2+—IDA)纯化可溶部分的重组融合蛋白，经SDS—PAGE鉴定为单一条带。

外周血单个核细胞Toll样受体4和B淋巴细胞刺激因子表达水平与IgA肾病患者临床指标的关系

目的 探讨外周血单个核细胞Toll样受体4(TLR4)和B淋巴细胞刺激因子(BLyS)表达水平与免疫球蛋白(Ig)A肾病患者临床指标的关系。方法 回顾性分析122例IgA肾病患者的临床资料,比较不同外周血单个核细胞TLR4和BLyS表达水平患者临床指标,并分析外周血单个核细胞TLR4和BLyS表达水平与临床指标的相关性。结果 低TLR4水平组和高TLR4水平组间、低BLyS水平组和高BLyS水平组间性别、收缩压、高血压史、低密度脂蛋白(LDL)、血尿酸、血肌酐和尿素氮差异均有统计学意义;Pearson相关性分析结果显示,IgA肾病患者外周血单个核细胞TLR4、BLyS表达水平与收缩压、LDL、血尿酸和血肌酐水平均呈正相关(均P<0.05)。结论 外周血单个核细胞TLR4和BLyS表达水平与IgA肾病患者收缩压、LDL、血尿酸和血肌酐水平均呈正相关。

多发性骨髓瘤患者B淋巴细胞刺激因子及其受体的表达水平

目的探讨B细胞激活因子（BLyS）及其受体在多发性骨髓瘤（MM）发病中的作用机制.方法用酶联免疫吸附测定法（ELISA）和实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ—PCR），对31例MM患者和30名健康人血清BLyS含量、外周血单个核细胞（PBMCs）中BLyS及其受体mRNA含量进行检测;并比较MM患者血清BLyS含量与外周血PBMCs中BLyS及其受体基因表达水平和β2微球蛋白（β2M）的相关性.结果MM患者血清BLyS含量（6．99±3．28g/L）明显高于健康对照组（2．70±1．09g/L，P〈0．01），并与β2M浓度呈正相关性（r=0．954，P=0．000）;77．42%（24/31），93．55%（29/31），90．32%（28/31）的MM患者血清BLyS蛋白和PBMCs中BLyS，B细胞成熟抗原（BCMA）mRNA表达水平较正常人明显增高，并且也与β2M的含量呈正相关;而64．52%（20/31）患者穿膜蛋白活化物（TACI）mRNA表达水平降低.结论MM患者的血清BLyS蛋白浓度和PBMCs中BLyS及其受体基因表达水平有异常改变，说明BLyS及其受体可能参与MM的发病;BLyS及其受体表达水平也许可作为预后的一个指标.

NSE BLyS APRIL在病毒性脑炎患者中的表达及与预后的相关性

目的研究神经特异性烯醇化酶(NSE)、B淋巴细胞刺激因子(BLyS)、增殖诱导配体(APRIL)在病毒性脑炎患者中的表达及与预后的相关性。方法选取2015—2023年河南科技大学第一附属医院收治的118例病毒性脑炎患者,另选取同期体检、经临床生化和脑脊髓穿刺等常规检查确认健康正常的对照组48例。比较不同病情的病毒性脑炎患者血清NSE、BLyS、APRIL水平,不同预后病毒性脑炎患者的相关资料。采用多因素Logistic分析病毒性脑炎预后不良的影响因素,并采取受试者工作特征(ROC)曲线分析血清NSE、BLyS、APRIL单独及联合检测在病毒性脑炎预后评价中的价值。结果重症组血清NSE、BLyS、APRIL水平均高于轻症组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后良好组入院当天及治疗后血清NSE、BLyS、APRIL水平均低于预后不良组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,年龄、总住院时间、是否进行机械通气、是否存在癫痫发作以及入院当天血清NSE、BLyS、APRIL水平与病毒性脑炎预后不良有关(OR>1,P<0.05)。ROC曲线显示,入院当天血清NSE、BLyS、APRIL联合检测预测预后不良的AUC值(0.895)高于NSE(0.801)、APRIL(0.781)、BLyS(0.776)。结论血清NSE、BLyS、APRIL在病毒性脑炎患者均呈高表达,三者联合检测可较好地预测患者预后。

B淋巴细胞刺激因子在B细胞来源恶性血液病中异常表达及其临床意义

目的:探讨B细胞来源恶性血液病中B细胞刺激因子(BLyS)的表达水平及其临床意义。方法:自2015年3月至2016年7月我院共收入初次确诊为B细胞来源恶性血液病患者57例,其中包括多发性骨髓瘤(MM)患者17例,B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)患者40例,另有30名身体健康的志愿者作为对照组,分别记为A、B、C组。利用ELISA试剂盒测定各组患者外周血BLyS水平,化疗后再次测定并进行比较。结果:B细胞来源的恶性肿瘤患者体内的BLyS水平较正常人明显增高(P<0.05),化疗后所有患者体内的BLyS水平均显著降低(P<0.05)。DLBCL、FL患者外周血BLyS水平明显高于其它类型的B-NHL(P<0.05),Ⅲ-Ⅳ期B-NHL患者外周血BLyS水平明显高于Ⅰ-Ⅱ期B-NHL患者(P<0.05)。结论:B细胞来源恶性血液病中BLyS表达显著升高,且在不同组织学类型和不同分期的B-NHL患者体内表达水平不同,提示临床上通过检测患者体内BLyS表达水平,对B细胞来源恶性血液病的诊断、病情严重程度分期及治疗具有一定指导意义。

原发性胆汁性肝硬化患者B淋巴细胞刺激因子基因表达的测定及临床意义

目的建立检测人B淋巴细胞刺激因子(BLyS)mRNA的相对定量方法,探讨其基因表达水平与原发性胆汁性肝硬化(PBC)的相关性。方法基于TaqM an-MGB探针技术,以18SrRNA为内参照,通过目的基因与内参基因荧光强度达到一定阈值时的循环数之差(△CT值)定量原始模板浓度,建立实时荧光逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)相对定量方法,检测30名正常人和40例PBC患者外周血单个核细胞(PBMC)BLyS基因的表达。结果PBC患者外周血单个核细胞BLyS mRNA表达的△CT值为9.5±2.5,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),其原始模板浓度为正常对照组的4.3倍。PBC患者中抗核抗体(ANA)阳性占80%;其中ANA 1∶100组BLyS检测的△CT为11.4±0.9,与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);而ANA 1∶1 000和ANA 1∶10 000组BLyS的△CT值与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.001),两组间△CT值比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论PBC患者PBMC BLyS mRNA表达水平明显升高,且与ANA滴度相关。

B淋巴细胞刺激因子家族相关分子在系统性红斑狼疮治疗中的应用

B淋巴细胞刺激因子家族(B-lymphocyte activating factor family,BAFF)在B细胞生长、发育和分化中发挥重要的免疫调节作用,其过度表达与系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)等自身免疫性疾病的发病密切相关。针对BAFF及其受体研制相应的阻断剂,通过封闭BAFF分子的特异性免疫调控信号,拮抗其诱导的B淋巴细胞高度活化和病理性自身抗体的产生,有望为SLE治疗提供新的理论和实验依据。

抗-B淋巴细胞刺激因子自身抗体酶联免疫吸附法的建立和临床初步应用

目的:研究B淋巴细胞刺激因子抗体(BlyS-Ab)在临床相关疾病患者中的检出水平,探讨其在自身免疫性疾病中的作用。方法:优化实验反应条件,建立检测BlyS-Ab的酶联免疫吸附法(ELISA),并进行方法学考核和临床应用检测,研究血清BlyS-Ab水平与抗核抗体及其他自身抗体的关系。结果:BlyS-Ab精密度平均变异系数(CV值)为7.8%,特异阻断抑制试验最高抑制率达77.3%。临床研究结果显示,在系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)和重症肌无力患者中均有显著增高的BlyS-Ab阳性检出率,而在过敏性紫癜及慢性肾炎和肾病患者中亦发现有较高水平的BlyS-Ab存在,血清BlyS-Ab水平与抗核抗体(ANA)滴度呈高度正相关关系。在所测63例BlyS-Ab阳性患者中,ANA同时阳性者有59例,而64例BlyS-Ab阴性患者中,ANA阴性者为30例,两者检测结果具有显著的关联和中等程度的一致性(χ2=26.387,Kappa=0.404,P<0.001)。经与其他单特异性自身抗体对比研究发现,BlyS-Ab与抗双股脱氧核糖核酸(dsDNA)、抗干燥综合征A(SSA)、抗干燥综合征B(SSB)及抗核糖核蛋白(RNP)抗体亦存在一定程度的相关性(P<0.01或P<0.05)。结论:成功建立了人血清BlyS-Ab的ELISA测定方法,实验结果敏感、特异、可靠。血清BlyS-Ab检测可能有助于自身免疫性疾病的诊断。

实时荧光定量PCR方法检测非霍奇金淋巴瘤患者B淋巴细胞刺激因子表达水平

目的:建立实时荧光定量PCR方法(RFQ-PCR)检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者B淋巴细胞刺激因子(BAFF)表达水平。方法:47例NHL患者及20例健康对照,采用实时荧光定量PCR方法检测其外周血单个核细胞中的B淋巴细胞刺激因子表达水平。结果:RFQ-PCR检测BAFF含量的示灵敏度为10 pg/ml,低浓度样本批内和批间变异系数(CV)分别为8.56%和11.32%,高浓度样本批内和批间CV分别为0.76%和4.58%。NHL患者和健康对照者BAFF mRNA表达量分别为(0.48±0.023,0.25±0.023),两者具有显著性差异(P=0.0001)。结论:RFQ-PCR检测BAFF mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性。NHL患者BAFF mRNA高表达,提示BAFF可能在NHL发生发展中发挥重要作用。

B淋巴细胞刺激因子及其受体介导的免疫细胞信号转导

肿瘤坏死因子家族成员B淋巴细胞刺激因子(BLyS)与其受体BAFF-R、BCMA和TACI特异性结合后,启动下游MAPK和NF-κB等抗凋亡信号通路,是维持免疫细胞生存、分化以及成熟的重要因素。该文就BLyS/BLyS-受体介导信号转导通路调节免疫细胞功能,参与免疫性疾病的发生以及各信号通路间的相互调控予以综述。

两种中药方剂对MRL/lpr狼疮小鼠血浆中B淋巴细胞刺激因子和IL-10表达的影响

目的探讨两种中药方剂对MRL/lpr狼疮小鼠血浆中的B淋巴细胞刺激因子(Blys)、IL-10的影响,为中药及中西医结合治疗红斑狼疮提供实验和理论基础。方法将34只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为6组。A组:中药方1组(清热凉血、祛风除湿方);B组:中药方2组(养阴清热活血、滋补肝肾方);C组:泼尼松组;D组:中药方1加泼尼松组;E组:中药方2加泼尼松组;F组:空白对照组。ELISA法测小鼠血浆中Blys、IL-10的含量。结果各药物组治疗后的Blys水平均显著低于F组(P<0.01)。D、E组的Blys水平与A、B、C组、激素组差异有统计学意义(P<0.01)。A、B组与F组比较,IL-10水平差异无统计学意义(P>0.05)。D、E组IL-10水平与F组比较,差异有统计学意义(P<0.01)、与C组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论中药方剂与糖皮质激素均对MRL/lpr狼疮小鼠有治疗作用,中西医综合治疗疗效优于单纯使用中药或糖皮质激素,能显著降低Blys水平。

重组人B淋巴细胞刺激因子工程菌生物学特性的稳定性

目的观察重组人B淋巴细胞刺激因子工程菌pKKH-BLyS/DH5α生物学特性的稳定性。方法工程菌连续传50代,每10代进行目的蛋白表达水平、质粒性状检测、透射电镜观察、革兰染色及各项生化检查,观察工程菌生物学特性的稳定性。结果0、10、20、30、40和50代工程菌之间目的蛋白的表达量无明显差异,基本维持在40%左右;双酶切、PCR及测序结果均与原代质粒相符;革兰染色均呈阴性;透射电镜观察及各项生化反应均呈现典型的大肠杆菌特性。结论该菌种生物学特性稳定,可作为生产用菌种。

狼疮性肾炎患者血清和肾内B淋巴细胞刺激因子及BR3的表达

目的探讨B淋巴细胞刺激因子(BlyS)及其Blys受体3(BR3)在狼疮性肾炎(LN)中的作用。方法 ELISA法检测系统性红斑狼疮(SLE)患者及正常健康体检者血清BlyS、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1(IL-1)的表达水平,免疫组化法检测肾活检确诊为LN的患者及正常对照者肾组织中BlyS及其BR3的表达水平。结果 SLE患者血清Blys、TNF-α以及IL-1的水平显著高于正常对照者(P<0.01);正常对照者的肾小管上皮细胞可中等强度表达BlyS,而LN患者除了肾小管上皮细胞外,肾小管间质浸润的炎性细胞也可表达Blys;正常对照肾组织内无BR3的表达,而LN患者肾组织内有极少BR3的表达,仅见于炎性细胞聚集区;LN患者肾内BlyS的表达水平显著高于正常对照者(P<0.01),且Ⅳ型与Ⅴ型LN肾内BlyS的表达水平均明显高于Ⅲ型LN(P<0.05),而Ⅳ型与Ⅴ型LN间BlyS的表达水平虽差异无统计学意义,但有升高趋势。结论 SLE患者血清BlyS的水平升高,LN患者肾内BlyS的表达水平升高,肾内BR3受体有极少量的表达,提示BlyS及其BR3的变化与LN的病理变化有关。

系统性红斑狼疮患者血清B淋巴细胞刺激因子的水平研究

目的研究系统性红斑狼疮(SLE)患者血清B淋巴细胞刺激因子(BLyS)蛋白水平,并探讨其与尿蛋白的关系。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测尿蛋白阳性组(17例)和尿蛋白阴性SLE患者组(20例)血清BLys水平,以健康志愿者(30例)作为对照。结果SLE患者血清BLys水平明显高于健康对照组(P<0.05),但尿蛋白阳性组血清BLys水平与尿蛋白阴性组差异无统计学意义(P>0.05)。结论SLE患者BLys水平升高,提示BLyS可能与SLE的发病有关。

B淋巴细胞活化及凋亡和BlyS、IL-10、IL-6对狼疮性肾炎的影响

目的:探讨B淋巴细胞活化及凋亡、BlyS、IL-10、IL-6对狼疮性肾炎的(LN)影响。方法:以双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法测定LN患者外周血中BlyS水平,流式蛋白分析系统(CBA)测定外周血IL-6、IL-10水平,流式细胞仪测定外周血CD19+CD69+及CD19+凋亡率(AV)水平。结果:(1)①活动期和静止期LN患者CD19+CD69+、AV水平较正常组显著升高(P<0.01);②活动期LN患者IL-10、IL-6、CD19+CD69+、AV水平较静止期显著升高(P<0.01);③活动期、静止期BlyS水平较正常组差异无统计学意义(P>0.05)。(2)LN患者活动指数(SLEDAI)与ds-DNA、IL-10、AV之间呈正相关,与BlyS、CD19+CD69+水平无相关性;BlyS与ds-DNA、IL-10、CD19+CD69+、AV均无相关性;IL-10与ds-DNA、AV呈正相关,与CD19+CD69+无相关性。(3)逐步回归分析发现活动指数与C3、凋亡率、CD69、C4有相关性,C4对活动指数影响最大;凋亡率与IL-6、IL-10有相关性,IL-6对凋亡率的影响最大。结论:(1)活动期和静止期LN患者B淋巴细胞活化率及凋亡率均增多;(2)CD19+CD69+、CD19+凋亡率、IL-6、IL-10可反映狼疮的活动性。