B淋巴细胞刺激因子及其受体在狼疮性肾炎中的研究现状

狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)是系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)最常见的并发症,同时也是引起患者死亡的重要原因之一。B淋巴细胞刺激因子(B-cell activating factor,BAFF)在B细胞生长、发育和分化中具有重要的免疫调节作用,BAFF过度表达与SLE、类风湿性关节炎、干燥综合征等自身免疫性疾病的发生发展密切相关;BAFF会导致自身抗体产生和免疫复合物在肾脏沉积,参与LN的发病过程。近年来针对血清BAFF在LN临床诊断、病情评估及相关治疗方面显示出可喜的应用前景,现就BAFF在LN中的相关研究现状做一综述。

小鼠B淋巴细胞活化刺激因子可溶性片段在毕赤酵母中的表达、纯化及其生物学活性的初步鉴定

目的在毕赤酵母中表达小鼠B淋巴细胞活化刺激因子(B cell activating factor belonging to the TNF family,BAFF)可溶性片段(msBAFF),纯化后检测其生物学活性。方法采用RT-PCR法从BALB/c小鼠外周血单核细胞中扩增msBAFF基因,插入表达载体pPICZαA中,构建重组表达质粒pPICZαA-msBAFF,转化巴斯德毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达。表达的重组msBAFF蛋白经硫酸铵沉淀及Q Sepharose XL阴离子交换柱纯化后,分别单独及与anti-IgM共同作用于BALB/c小鼠脾脏B淋巴细胞,检测其对B淋巴细胞活力的影响。结果重组表达质粒pPICZαA-msBAFF经双酶切鉴定构建正确;表达的重组msBAFF蛋白相对分子质量约为20 000,诱导60 h表达量较高;经硫酸铵沉淀、透析除盐及Q Sepharose XL阴离子交换柱纯化,获得了较纯的msBAFF,BCA法测定纯化蛋白的产率为20 mg/L;重组BAFF蛋白具有促进小鼠B淋巴细胞活力的作用。结论成功在毕赤酵母中表达了重组msBAFF蛋白,纯化的重组蛋白具有良好的生物学活性,为进一步研究小鼠BAFF基因的功能及基于BAFF的佐剂与单克隆抗体的制备奠定了物质基础。

外周血单个核细胞Toll样受体4和B淋巴细胞刺激因子表达水平与IgA肾病患者临床指标的关系

目的 探讨外周血单个核细胞Toll样受体4(TLR4)和B淋巴细胞刺激因子(BLyS)表达水平与免疫球蛋白(Ig)A肾病患者临床指标的关系。方法 回顾性分析122例IgA肾病患者的临床资料,比较不同外周血单个核细胞TLR4和BLyS表达水平患者临床指标,并分析外周血单个核细胞TLR4和BLyS表达水平与临床指标的相关性。结果 低TLR4水平组和高TLR4水平组间、低BLyS水平组和高BLyS水平组间性别、收缩压、高血压史、低密度脂蛋白(LDL)、血尿酸、血肌酐和尿素氮差异均有统计学意义;Pearson相关性分析结果显示,IgA肾病患者外周血单个核细胞TLR4、BLyS表达水平与收缩压、LDL、血尿酸和血肌酐水平均呈正相关(均P<0.05)。结论 外周血单个核细胞TLR4和BLyS表达水平与IgA肾病患者收缩压、LDL、血尿酸和血肌酐水平均呈正相关。

多发性骨髓瘤患者B淋巴细胞刺激因子及其受体的表达水平

目的探讨B细胞激活因子（BLyS）及其受体在多发性骨髓瘤（MM）发病中的作用机制.方法用酶联免疫吸附测定法（ELISA）和实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ—PCR），对31例MM患者和30名健康人血清BLyS含量、外周血单个核细胞（PBMCs）中BLyS及其受体mRNA含量进行检测;并比较MM患者血清BLyS含量与外周血PBMCs中BLyS及其受体基因表达水平和β2微球蛋白（β2M）的相关性.结果MM患者血清BLyS含量（6．99±3．28g/L）明显高于健康对照组（2．70±1．09g/L，P〈0．01），并与β2M浓度呈正相关性（r=0．954，P=0．000）;77．42%（24/31），93．55%（29/31），90．32%（28/31）的MM患者血清BLyS蛋白和PBMCs中BLyS，B细胞成熟抗原（BCMA）mRNA表达水平较正常人明显增高，并且也与β2M的含量呈正相关;而64．52%（20/31）患者穿膜蛋白活化物（TACI）mRNA表达水平降低.结论MM患者的血清BLyS蛋白浓度和PBMCs中BLyS及其受体基因表达水平有异常改变，说明BLyS及其受体可能参与MM的发病;BLyS及其受体表达水平也许可作为预后的一个指标.

强直性脊柱炎患者外周血中B淋巴细胞亚群、B细胞活化因子及其受体的表达研究

目的研究强直性脊柱炎(AS)患者外周血中B淋巴细胞亚群、B细胞活化因子(BAFF)及其受体BR3的表达,为进一步探讨AS发病机制提供新的理论依据。方法采用流式细胞术测定24例AS患者及30名正常健康体检者外周血中CD19+总B细胞、CD19+CD20+CD27-初始B细胞、CD19+CD20+CD27+记忆性B细胞、CD19+CD38+抗体分泌细胞、BAFF及其受体BR3的表达百分率;采用免疫散射比浊法测定AS患者和正常体检者血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM浓度;并分析外周血白细胞BAFF的表达水平与B淋巴细胞亚群百分率、免疫球蛋白浓度之间的相关性。结果与正常对照组比较,AS患者的外周血中CD19+总B细胞和CD19+CD38+抗体分泌细胞的表达率、BAFF及其受体BR3的表达比例、血清IgG、IgA浓度均明显升高(P<0.05)。外周血白细胞中BAFF的表达水平分别与外周血白细胞CD19+总B细胞、CD19+CD38+抗体分泌细胞百分率及血清IgG、IgA浓度呈明显正相关(r=0.695,P=0.000;r=0.610,P=0.002;r=0.813,P=0.000;r=0.665,P=0.000)。结论 AS患者外周血中存在异常表达的总B细胞、抗体分泌细胞、BAFF及其受体BR3,提示在AS的发病过程中,B淋巴细胞的异常表达及活化可能发挥致病作用。

狼疮平颗粒对BXSB狼疮性肾炎小鼠B淋巴细胞活化因子表达的影响

目的研究B淋巴细胞活化因子(Blymphocyte activating factor,BAFF)在BXSB狼疮性肾炎小鼠血清和外周血B淋巴细胞(PBBC)中的表达,并观察中药狼疮平颗粒的治疗作用。方法将11周龄雄性BXSB狼疮性肾炎小鼠18只随机分为狼疮对照组、激素治疗组、狼疮平治疗组,每组6只;另取11周龄雄性C57BL/6小鼠6只作为正常对照组。分别给予灌胃生理盐水(10mL/d)、甲泼尼龙[5mg/(kg·d)]、狼疮平颗粒[4g/(kg·d)]、生理盐水(10mL/d),治疗4周,测定各组尿蛋白、ds-DNA和体重,分别应用ELISA、RT-PCR方法检测血清中可溶性BAFF(sBAFF)和外周血B细胞中BAFF-mRNA的表达及变化,并观察肾脏病理活动性计分、24h尿蛋白定量、ds-DNA与sBAFF的关系。结果狼疮性肾炎小鼠血清sBAFF、PBBC中BAFF mRNA水平、24h尿蛋白定量、血清ds-DNA含量均较正常小鼠明显升高。激素和狼疮平治疗组治疗后sBAFF、BAFF mRNA较治疗前明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),两组治疗后sBAFF、BAFF mRNA水平无明显差异(P>0.05)。狼疮性肾炎小鼠血清sBAFF水平与肾病理活动性计分、24h尿蛋白定量、ds-DNA成正相关(r=0.8098、0.8220、0.8535,P<0.01)。结论 BAFF在狼疮性肾炎的发生发展中起着重要的作用,可以监测病情变化并预测复发,是狼疮性肾炎治疗的理想靶点之一。中药狼疮平可以通过降低BAFF水平而改善狼疮性肾炎病情,值得进一步临床推广应用。

B淋巴细胞刺激因子在B细胞来源恶性血液病中异常表达及其临床意义

目的:探讨B细胞来源恶性血液病中B细胞刺激因子(BLyS)的表达水平及其临床意义。方法:自2015年3月至2016年7月我院共收入初次确诊为B细胞来源恶性血液病患者57例,其中包括多发性骨髓瘤(MM)患者17例,B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)患者40例,另有30名身体健康的志愿者作为对照组,分别记为A、B、C组。利用ELISA试剂盒测定各组患者外周血BLyS水平,化疗后再次测定并进行比较。结果:B细胞来源的恶性肿瘤患者体内的BLyS水平较正常人明显增高(P<0.05),化疗后所有患者体内的BLyS水平均显著降低(P<0.05)。DLBCL、FL患者外周血BLyS水平明显高于其它类型的B-NHL(P<0.05),Ⅲ-Ⅳ期B-NHL患者外周血BLyS水平明显高于Ⅰ-Ⅱ期B-NHL患者(P<0.05)。结论:B细胞来源恶性血液病中BLyS表达显著升高,且在不同组织学类型和不同分期的B-NHL患者体内表达水平不同,提示临床上通过检测患者体内BLyS表达水平,对B细胞来源恶性血液病的诊断、病情严重程度分期及治疗具有一定指导意义。

系统性红斑狼疮患者血清B淋巴细胞活化因子的检测及意义

目的探讨血清B淋巴细胞活化因子(BAFF)在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。方法采用ELISA法检测45例SLE患者(SLE组)血清BAFF水平,免疫比浊法检测血清补体C3、C4水平;计算疾病活动性(SLAM)和损伤指数(SLICC/ACR);对BAFF水平与补体C3和C4、SLAM、SLICC/ACR进行相关性分析。对照组为45例查体健康者。结果 SLE组血清BAFF水平明显高于对照组,抗dsDNA抗体阳性者(13例)BAFF水平明显高于阴性者,P均<0.001。BAFF水平与补体C3呈显著负相关(r=-0.298,P=0.047),与补体C4无明显相关性,与SLAM呈显著正相关(r=0.450,P=0.002);与SLICC/ACR呈显著正相关(r=0.388,P=0.009)。结论 BAFF可能参与了SLE的发病与发展,检测血清BAFF水平有助于判断SLE活动性及预后;应用BAFF拮抗剂有望改善SLE病情。

原发性胆汁性肝硬化患者B淋巴细胞刺激因子基因表达的测定及临床意义

目的建立检测人B淋巴细胞刺激因子(BLyS)mRNA的相对定量方法,探讨其基因表达水平与原发性胆汁性肝硬化(PBC)的相关性。方法基于TaqM an-MGB探针技术,以18SrRNA为内参照,通过目的基因与内参基因荧光强度达到一定阈值时的循环数之差(△CT值)定量原始模板浓度,建立实时荧光逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)相对定量方法,检测30名正常人和40例PBC患者外周血单个核细胞(PBMC)BLyS基因的表达。结果PBC患者外周血单个核细胞BLyS mRNA表达的△CT值为9.5±2.5,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),其原始模板浓度为正常对照组的4.3倍。PBC患者中抗核抗体(ANA)阳性占80%;其中ANA 1∶100组BLyS检测的△CT为11.4±0.9,与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);而ANA 1∶1 000和ANA 1∶10 000组BLyS的△CT值与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.001),两组间△CT值比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论PBC患者PBMC BLyS mRNA表达水平明显升高,且与ANA滴度相关。

B淋巴细胞刺激因子家族相关分子在系统性红斑狼疮治疗中的应用

B淋巴细胞刺激因子家族(B-lymphocyte activating factor family,BAFF)在B细胞生长、发育和分化中发挥重要的免疫调节作用,其过度表达与系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)等自身免疫性疾病的发病密切相关。针对BAFF及其受体研制相应的阻断剂,通过封闭BAFF分子的特异性免疫调控信号,拮抗其诱导的B淋巴细胞高度活化和病理性自身抗体的产生,有望为SLE治疗提供新的理论和实验依据。

抗-B淋巴细胞刺激因子自身抗体酶联免疫吸附法的建立和临床初步应用

目的:研究B淋巴细胞刺激因子抗体(BlyS-Ab)在临床相关疾病患者中的检出水平,探讨其在自身免疫性疾病中的作用。方法:优化实验反应条件,建立检测BlyS-Ab的酶联免疫吸附法(ELISA),并进行方法学考核和临床应用检测,研究血清BlyS-Ab水平与抗核抗体及其他自身抗体的关系。结果:BlyS-Ab精密度平均变异系数(CV值)为7.8%,特异阻断抑制试验最高抑制率达77.3%。临床研究结果显示,在系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)和重症肌无力患者中均有显著增高的BlyS-Ab阳性检出率,而在过敏性紫癜及慢性肾炎和肾病患者中亦发现有较高水平的BlyS-Ab存在,血清BlyS-Ab水平与抗核抗体(ANA)滴度呈高度正相关关系。在所测63例BlyS-Ab阳性患者中,ANA同时阳性者有59例,而64例BlyS-Ab阴性患者中,ANA阴性者为30例,两者检测结果具有显著的关联和中等程度的一致性(χ2=26.387,Kappa=0.404,P<0.001)。经与其他单特异性自身抗体对比研究发现,BlyS-Ab与抗双股脱氧核糖核酸(dsDNA)、抗干燥综合征A(SSA)、抗干燥综合征B(SSB)及抗核糖核蛋白(RNP)抗体亦存在一定程度的相关性(P<0.01或P<0.05)。结论:成功建立了人血清BlyS-Ab的ELISA测定方法,实验结果敏感、特异、可靠。血清BlyS-Ab检测可能有助于自身免疫性疾病的诊断。

实时荧光定量PCR方法检测非霍奇金淋巴瘤患者B淋巴细胞刺激因子表达水平

目的:建立实时荧光定量PCR方法(RFQ-PCR)检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者B淋巴细胞刺激因子(BAFF)表达水平。方法:47例NHL患者及20例健康对照,采用实时荧光定量PCR方法检测其外周血单个核细胞中的B淋巴细胞刺激因子表达水平。结果:RFQ-PCR检测BAFF含量的示灵敏度为10 pg/ml,低浓度样本批内和批间变异系数(CV)分别为8.56%和11.32%,高浓度样本批内和批间CV分别为0.76%和4.58%。NHL患者和健康对照者BAFF mRNA表达量分别为(0.48±0.023,0.25±0.023),两者具有显著性差异(P=0.0001)。结论:RFQ-PCR检测BAFF mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性。NHL患者BAFF mRNA高表达,提示BAFF可能在NHL发生发展中发挥重要作用。

B淋巴细胞活化因子在视神经脊髓炎患者血清及脑脊液中的表达及意义

目的探讨B淋巴细胞活化因子(BAFF)在视神经脊髓炎(NMO)患者血清及脑脊液中的表达情况及临床意义。方法收集44例NMO患者及38例多发性硬化(MS)患者的临床资料,患者均为急性复发期。30例健康人和15例非炎性神经系统疾病患者分别作为对照组,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测血清及脑脊液中BAFF水平。结果 NMO组、MS组和对照组血清中BAFF水平分别为250.2±126.9、249.6±130.7和222.9±126.1 pg/ml,3组间两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。NMO组、MS组和对照组脑脊液中BAFF水平分别为525.8±230.0、298.4±141.9和141.4±76.2 pg/ml,3组间两两比较,NMO组和MS组脑脊液中BAFF水平较对照组明显增高,NMO组脑脊液中BAFF水平较MS组明显增高(P<0.05)。且NMO组、MS组脑脊液中BAFF水平与EDSS评分存在相关性,EDSS评分越高,其脑脊液中BAFF水平越高。但是NMO组脑脊液中BAFF水平与AQP4抗体滴度之间不具有相关性。结论脑脊液中BAFF水平可能是NMO和MS鉴别诊断的生物标记物,并在判定疾病严重程度方面具有重要价值。

B淋巴细胞刺激因子及其受体介导的免疫细胞信号转导

肿瘤坏死因子家族成员B淋巴细胞刺激因子(BLyS)与其受体BAFF-R、BCMA和TACI特异性结合后,启动下游MAPK和NF-κB等抗凋亡信号通路,是维持免疫细胞生存、分化以及成熟的重要因素。该文就BLyS/BLyS-受体介导信号转导通路调节免疫细胞功能,参与免疫性疾病的发生以及各信号通路间的相互调控予以综述。

两种中药方剂对MRL/lpr狼疮小鼠血浆中B淋巴细胞刺激因子和IL-10表达的影响

目的探讨两种中药方剂对MRL/lpr狼疮小鼠血浆中的B淋巴细胞刺激因子(Blys)、IL-10的影响,为中药及中西医结合治疗红斑狼疮提供实验和理论基础。方法将34只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为6组。A组:中药方1组(清热凉血、祛风除湿方);B组:中药方2组(养阴清热活血、滋补肝肾方);C组:泼尼松组;D组:中药方1加泼尼松组;E组:中药方2加泼尼松组;F组:空白对照组。ELISA法测小鼠血浆中Blys、IL-10的含量。结果各药物组治疗后的Blys水平均显著低于F组(P<0.01)。D、E组的Blys水平与A、B、C组、激素组差异有统计学意义(P<0.01)。A、B组与F组比较,IL-10水平差异无统计学意义(P>0.05)。D、E组IL-10水平与F组比较,差异有统计学意义(P<0.01)、与C组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论中药方剂与糖皮质激素均对MRL/lpr狼疮小鼠有治疗作用,中西医综合治疗疗效优于单纯使用中药或糖皮质激素,能显著降低Blys水平。

重组人B淋巴细胞刺激因子工程菌生物学特性的稳定性

目的观察重组人B淋巴细胞刺激因子工程菌pKKH-BLyS/DH5α生物学特性的稳定性。方法工程菌连续传50代,每10代进行目的蛋白表达水平、质粒性状检测、透射电镜观察、革兰染色及各项生化检查,观察工程菌生物学特性的稳定性。结果0、10、20、30、40和50代工程菌之间目的蛋白的表达量无明显差异,基本维持在40%左右;双酶切、PCR及测序结果均与原代质粒相符;革兰染色均呈阴性;透射电镜观察及各项生化反应均呈现典型的大肠杆菌特性。结论该菌种生物学特性稳定,可作为生产用菌种。

狼疮性肾炎患者血清和肾内B淋巴细胞刺激因子及BR3的表达

目的探讨B淋巴细胞刺激因子(BlyS)及其Blys受体3(BR3)在狼疮性肾炎(LN)中的作用。方法 ELISA法检测系统性红斑狼疮(SLE)患者及正常健康体检者血清BlyS、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1(IL-1)的表达水平,免疫组化法检测肾活检确诊为LN的患者及正常对照者肾组织中BlyS及其BR3的表达水平。结果 SLE患者血清Blys、TNF-α以及IL-1的水平显著高于正常对照者(P<0.01);正常对照者的肾小管上皮细胞可中等强度表达BlyS,而LN患者除了肾小管上皮细胞外,肾小管间质浸润的炎性细胞也可表达Blys;正常对照肾组织内无BR3的表达,而LN患者肾组织内有极少BR3的表达,仅见于炎性细胞聚集区;LN患者肾内BlyS的表达水平显著高于正常对照者(P<0.01),且Ⅳ型与Ⅴ型LN肾内BlyS的表达水平均明显高于Ⅲ型LN(P<0.05),而Ⅳ型与Ⅴ型LN间BlyS的表达水平虽差异无统计学意义,但有升高趋势。结论 SLE患者血清BlyS的水平升高,LN患者肾内BlyS的表达水平升高,肾内BR3受体有极少量的表达,提示BlyS及其BR3的变化与LN的病理变化有关。

系统性红斑狼疮患者血清B淋巴细胞刺激因子的水平研究

目的研究系统性红斑狼疮(SLE)患者血清B淋巴细胞刺激因子(BLyS)蛋白水平,并探讨其与尿蛋白的关系。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测尿蛋白阳性组(17例)和尿蛋白阴性SLE患者组(20例)血清BLys水平,以健康志愿者(30例)作为对照。结果SLE患者血清BLys水平明显高于健康对照组(P<0.05),但尿蛋白阳性组血清BLys水平与尿蛋白阴性组差异无统计学意义(P>0.05)。结论SLE患者BLys水平升高,提示BLyS可能与SLE的发病有关。

B淋巴细胞活化因子特异的单链DNA适体的人工进化

目的:进化筛选与B淋巴细胞活化因子(B cell activating factor be longing to the TNF family,BAFF)特异结合的单链DNA适体,鉴定其结合力。方法:应用指数方式富集的配体系统进化(systemati cevolution of ligands by exponential enrich-ment,SELEX)技术,将随机序列寡核苷酸文库与BAFF分子相互作用,分离出结合的寡核苷酸配体,经反复扩增、筛选数个循环,获得重组人BAFF的单链DNA适体,应用Dot blotting鉴定其结合力,酶联法比较各适体序列对BAFF的相对结合力。结果:优化实验条件后成功进行了13轮次筛选,随机选取42个阳性克隆测序,各序列GC含量最高达75%,分为6类不同序列;Dotblotting证实这些适体均与BAFF相结合;比较各适体序列结合BAFF的光密度值,以序列44光密度值最高(0.752,P<0.05),具有对BAFF相对最高结合力。结论:首次成功获得特异结合BAFF的高亲和力的单链DNA适体,为研发防治肿瘤和自身免疫疾病新药奠定了基础。