老年前列腺癌患者组织B淋巴细胞瘤-2蛋白、细胞FLICE样抑制蛋白表达水平与临床病理特征及预后的关系

目的研究老年前列腺癌患者组织B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、细胞FLICE样抑制蛋白(cFLIP)表达水平与临床病理特征及预后的关系。方法选取2016年6月至2019年6月庐江县人民医院收治的93例行前列腺癌根治术的老年患者作为研究对象。分别留取其的肿瘤组织、癌旁组织及正常前列腺组织标本,采用免疫组织化学法检测3种组织中Bcl-2、cFLIP蛋白表达水平,结合患者临床病理特征进行分析,采用Kaplan-Meier生存曲线对患者24个月的生存情况进行比较。结果肿瘤组织中Bcl-2、cFLIP阳性表达率分别为73.12%和68.82%,与癌旁组织和正常前列腺组织比较,差异具有统计学意义(P<0.05);肿瘤组织Bcl-2、cFLIP阳性率与患者年龄、术前前列腺特异抗原水平无相关性(P>0.05),但与患者Gleason评分、肿瘤TNM分期,以及淋巴结转移、骨转移相关(P<0.05);前列腺癌组织Bcl-2及cFLIP蛋白阳性表达患者24个月生存率明显低于阴性表达患者(P<0.05)。结论Bcl-2、cFLIP蛋白在老年前列腺癌患者组织中高表达,且与患者临床病理特征和预后相关,可能作为老年前列腺癌的治疗靶点。

甘石青黛膏对大鼠亚急性湿疹模型皮损淋巴细胞和角质形成细胞Bcl-2与Bax蛋白表达变化的影响

目的观察甘石青黛膏对大鼠亚急性湿疹模型皮损淋巴细胞和角质形成细胞B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白与Bax蛋白表达变化的影响,探究中药外治湿疹的分子生物学依据。方法造模前取大鼠正常皮肤组织,制作成石蜡切片备用,造模成功后分为治疗组和模型组,治疗组采用中药甘石青黛膏干预,模型组无干预,检测三组大鼠Bcl-2与Bax蛋白表达情况。结果造模前大鼠Bcl-2与Bax蛋白表达均呈阳性,且Bcl-2/Bax比率接近于1;治疗组Bcl-2蛋白表达呈弱阳性,模型组Bcl-2蛋白表达呈强阳性,两者相比具有显著统计学差异(P<0.001);治疗组Bax蛋白表达呈阳性,模型组Bax蛋白表达呈弱阳性,两者相比具有显著统计学差异(P<0.001);治疗组与模型组Bcl-2/Bax比率相比具有显著统计学差异(P<0.001),后者明显高于前者;治疗组与健康组Bcl-2/Bax比率相比无统计学差(P>0.05)。结论甘石青黛膏具有抑制Bcl-2蛋白表达,促进Bax蛋白表达,使细胞凋亡调控系统趋于平衡的作用。

针刺联合黄芪多糖对db/db小鼠胰岛β细胞Bcl-2蛋白表达的影响

目的观察针刺联合黄芪多糖对db/db小鼠胰岛β细胞Bcl-2蛋白表达的影响。方法选用自发性2型糖尿病动物模型C57BL/Ksj-db/db小鼠为本实验动物模型。将5周龄db/db小鼠随机分为模型组、针刺组、药物组和针药组,同时将db/m小鼠作为正常组。针刺组大鼠取后三里(相当于足三里)、内庭和胰俞穴予针刺治疗,药物组用黄芪多糖(1400 mg/kg)灌胃,针药组同时给予针刺和药物治疗,均每日1次,连续12星期。实验结束后,采血检测血糖、胰岛素和抵抗素,免疫组化检测胰岛β细胞Bcl-2的蛋白表达。结果在血糖、胰岛素和抵抗素水平方面,针药组、针刺组、药物组显著低于模型组,针药组显著低于针刺组和药物组,针刺组显著低于药物组;在对胰岛β细胞Bcl-2蛋白表达的影响方面,药物组、针刺组及针药组Bcl-2的表达均高于模型组,差异有统计学意义(P<0.01);针药组Bcl-2的表达高于药物组(P<0.01);药物组与针刺组Bcl-2的表达基本相同,未见明显差异(P>0.05)。结论针刺联合黄芪多糖能够显著降低db/db小鼠血糖、血清胰岛素和抵抗素水平,提高胰岛β细胞Bcl-2蛋白的表达水平,从而有效抑制胰岛β细胞的凋亡,作用强于单一针刺治疗和药物治疗。

妇科再造丸含药血清对人子宫肌瘤细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨妇科再造丸(FKW)含药血清对体外培养人子宫肌瘤细胞凋亡相关蛋白Bax和B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达的影响。方法:对人子宫肌瘤细胞进行原代培养、传代并进行鉴定;60只SD雌性大鼠随机均分为空白组(无药血清组),FKW高、中、低剂量组和桂枝茯苓胶囊(GZFL)组,利用各组大鼠制备无药血清和含药血清分别作用于子宫肌瘤细胞72h时,采用WesternBlot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:培养的细胞经鉴定证实为人子宫肌瘤细胞;与无药血清组比较,FKW含药血清各剂量组均能增加Bax蛋白相对表达量,降低Bcl-2蛋白相对表达量(P<0.05或P<0.01),且作用随剂量的增加而有增强的趋势(P<0.05或P<0.01)。结论:FKW含药血清可影响人子宫肌瘤细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,这可能是FKW临床应用时缓解子宫肌瘤症状的机制之一。

脂毒性应激对Bcl-2蛋白诱导胰岛β细胞凋亡的调节作用

目的探讨脂毒性应激对B淋巴细胞瘤(Bcl)-2蛋白诱导胰岛β细胞凋亡的调节作用。方法利用C57BL/6小鼠构建PUMA-/-小鼠,喂食高脂肪饮食72 h后处死并分离胰岛。分别用棕榈酸酯、蛋白酶体抑制剂MG132处理小鼠胰岛瘤MIN6细胞0、2、4、8、24 h,分别用萝卜硫烷(SFN)、棕榈酸酯、SFN+棕榈酸酯处理小鼠胰岛β细胞0、2、4、8、24 h。以用二甲基亚砜处理相同时间的MIN6细胞和β细胞作为对照。检测细胞蛋白酶体活性,活化转录因子4(ATF4)mRNA、重链结合蛋白(Bip)mRNA、C/EBP同源蛋白(Chop)mRNA、p53上调凋亡调控因子(PUMA)mRNA表达量,Bcl-2、Bcl-XL、Mcl-1和Akt蛋白表达量,同时评估细胞活性。结果与0 h比较,采用棕榈酸酯处理MIN6细胞不同时间的蛋白酶体活性均无明显变化(P>0.05);采用MG132处理MIN6细胞8 h的蛋白酶体活性显著降低(P<0.05);MG132处理MIN6细胞24 h的Ub水平显著升高(P<0.05)。棕榈酸酯组和MG132组处理24 h后,MIN6细胞凋亡数显著高于对照组(P<0.05),棕榈酸酯和MG132处理24 h后,MIN6细胞ATF4 mRNA、Bip mRNA、Chop mRNA、PUMA mRNA表达量高于0 h(P<0.05)。棕榈酸酯和MG132处理24 h后,MIN6细胞Bcl-2、Bcl-XL、Akt蛋白水平显著低于0 h(P<0.05);Mcl-1蛋白水平呈先升后降趋势,棕榈酸处理2 h时Mcl-1蛋白水平最高,MG132处理8 h时Mcl-1水平最高。棕榈酸酯组β细胞凋亡率均显著高于SFN组、SFN+棕榈酸酯组和对照组(P<0.05),SFN组、SFN+棕榈酸酯组及对照组之间β细胞凋亡率差异均无统计学意义(P>0.05)。棕榈酸酯组AFT4蛋白、Chop蛋白、Bip蛋白和PUMA mRNA水平均显著高于对照组(P<0.05);而SFN+棕榈酸酯组与对照组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论靶向泛素-蛋白酶体系统(UPS)和Bcl-2蛋白表达能有效预防胰岛β细胞凋亡。

携带人表皮生长因子受体适配体的RNA纳米颗粒对于结肠肿瘤细胞增殖及凋亡水平的影响

目的探究携带人表皮生长因子受体(EGFR)的RNA纳米颗粒作为新型药物递送囊泡搭载紫杉醇,对于结肠肿瘤细胞的增殖及凋亡水平的影响,以为临床治疗结肠肿瘤提供参考。方法将人结肠癌HCT116细胞系细胞按照处理的方式不同分为3个组别,分别为A组(单纯紫杉醇干预,干预浓度60 ng/mL)、B组(包裹紫杉醇的RNA纳米颗粒干预)及C组(包裹紫杉醇并搭载EGFR的RNA纳米颗粒干预),每组约2×104个细胞,直接在培养基中添加相应的干预药物,3组的培养时间均为24 h。通过流式细胞仪及共聚焦显微镜检测Alexa647偶联的搭载EGFR适配体的三接头RNA(EGFRapt-3WJ)纳米颗粒在结肠细胞系HCT116中的EGFR靶向能力;采用CCK8法检测RNA纳米颗粒搭载紫杉醇治疗后结肠肿瘤细胞的增殖水平;采用流式细胞仪检测结肠癌细胞的凋亡水平;采用蛋白免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)及B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白(Bax)表达水平。结果共聚焦显微镜结果证实,携带了EGFR抗体的AF647标记三接头RNA(3WJ-EGFRapt-AF647)纳米颗粒对于结肠癌细胞系HCT116具有出色的特异性靶向能力;C组细胞吸光度值(OD)值低于A、B组,且A组低于B组;C组细胞的细胞凋亡率均高于A、B组,且A组高于B组;C组细胞BCL-2蛋白表达水平均低于A、B组,且A组低于B组,Bax蛋白表达水平高于A、B组,且A组高于B组(均P<0.05)。结论携带EGFR适配体的RNA纳米颗粒具备靶向递送紫杉醇的特点,显著抑制了结肠癌细胞的增殖能力,并能促进细胞凋亡。

人参皂苷Rb1通过载脂蛋白M/线粒体凋亡途径对肝癌的影响及机制研究

目的:探究载脂蛋白M(ApoM)/线粒体凋亡在肝癌中的作用,以及人参皂苷Rb1(Rb1)通过ApoM/线粒体凋亡途径对肝癌影响的潜在机制。方法:生物信息学分析筛选ApoM在肝癌中的差异性表达及临床验证;分子对接技术确定Rb1与ApoM的靶向结合,体外培养人肝癌细胞(HepG2),并进行细胞活力检测(CCK-8)筛选Rb1最佳干预浓度,克隆实验用于检测HepG2细胞的增殖情况,划痕实验用于检测HepG2细胞的迁移能力,采用蛋白质印迹法(Western Blotting)检测ApoM及线粒体凋亡相关基因Bcl2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)蛋白表达,实时萤光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测ApoM及线粒体凋亡相关基因Bax、Bcl2、Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达水平。结果:生存分析发现ApoM低表达肝癌预后更差,分子对接提示Rb1与ApoM之间具有较高亲和力,克隆及划痕实验提示Rb1有效抑制HepG2细胞增殖,Western Blotting及RT-qPCR验证Rb1可以干预线粒体凋亡相关基因蛋白和mRNA表达。结论:揭示了ApoM/线粒体凋亡在肝癌中发挥重要作用,人参皂苷Rb1可能通过ApoM/线粒体凋亡途径影响肝癌的可能潜在机制。

狼疮肾炎患者自噬水平及其对足细胞相关蛋白表达水平的影响

目的探讨狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)患者自噬水平及其对足细胞相关蛋白表达水平的影响。方法选择2017年5月至2019年5月于榆林市第一医院收治的69例LN患者为LN组,50例系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者为SLE组,50例肾切除手术患者为对照组,观察3组肾脏足细胞内自噬体数量,比较3组肾脏组织中自噬相关蛋白、微管相关蛋白轻链3(LC3)、B淋巴细胞瘤蛋白质-2-相互作用蛋白(Beclin1)的表达,以及足细胞相关蛋白,肾病蛋白(Nephrin)、足突蛋白(Podocin)的表达。分离狼疮肾炎患者肾脏足细胞,将足细胞分为自噬抑制组和自噬诱导组,自噬抑制组加入100 nmol/L 3-甲基腺嘌呤(3-MA),自噬诱导组加入100 nmol/L雷帕霉素(RAPA),比较3组足细胞内自噬体数量及LC3、Beclin-1、Podocin、Nephrin等蛋白的表达。结果LN组、SLE组肾脏足细胞内自噬体数量及LC3、Beclin-1、Podocin、Nephrin蛋白表达量显著高于对照组(P<0.05);SLE组肾脏足细胞内自噬体数量及LC3、Beclin-1、Podocin、Nephrin蛋白表达量显著高于LN组(P<0.05);自噬诱导组足细胞内自噬体数量及LC3、Beclin-1、Podocin、Nephrin蛋白表达量显著高于正常对照组、自噬抑制组(P<0.05);正常对照组足细胞内自噬体数量及LC3、Beclin-1、Podocin、Nephrin蛋白表达量显著高于自噬抑制组(P<0.05)。结论LN患者自噬水平呈升高状态,自噬水平升高可能通过上调足细胞相关蛋白Podocin、Nephrin水平而减轻足细胞损伤,抑制LN病情进展。

艾盐包热敷对顺产产妇子宫复旧及血清血管内皮因子和B淋巴细胞瘤-2蛋白表达的影响

目的分析艾盐包热敷对顺产产妇子宫复旧及血清血管内皮因子(VEGF)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达的影响,分析其可能的疗效机制。方法选取2018年1月1日-6月30日在该院行阴道顺产的400例产妇为研究对象。按照入组顺序编号,单号设为对照组,双号设为观察组,每组200例。两组产妇均按照顺产临床路径实施分娩前后治疗护理,观察组在对照组治疗护理基础上,再予以产后艾盐包热敷下腹部,两组产妇均连续治疗5 d。出院后随访42 d回院随访。比较两组产妇子宫复旧综合情况(产后初始宫高、完成治疗后宫高、子宫下降指数、子宫复旧不良率、宫缩痛发生率、腹痛率、恶露排出情况)。比较两组产妇分娩后即刻血清VEGF和Bcl-2蛋白表达、血清前列腺素E2(PGE2)水平。结果两组产妇产后初始宫高比较,差异无统计学意义(P>0.05),完成治疗后,两组产妇宫高均较分娩后下降,且观察组低于对照组,观察组子宫下降指数高于对照组(P<0.05);观察组产妇宫缩痛率、腹痛率、子宫复旧不良率均低于对照组产妇,差异均有统计学意义(均P<0.05);观察组恶露持续总时间较对照组短,且观察组恶露持续时间<30 d产妇所占百分比高于对照组,>42 d产妇低于对照组(P<0.05);两组产妇分娩后即刻血清VEGF、PGE2及Bcl-2蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05),完成治疗后,两组产妇血清PGE2及Bcl-2表达均较分娩即刻下降,且观察组低于对照组,血清VEGF均较分娩即刻上升,且观察组高于对照组(P<0.05)。结论艾盐包热敷可有效提升顺产产妇子宫复旧质量、恶露排出效率,降低产妇术后子宫相关并发症发生率,可能与艾盐包热敷可提升产妇血清VEGF水平,降低PGE2、Bcl-2表达,从而降低炎性反应、促进内膜血管新生,提升子宫复旧质量有关。

Rab11对膀胱癌细胞顺铂化疗耐药性的影响及机制

目的探讨小鸟苷三磷酸(GTP)酶Rab11对膀胱癌细胞顺铂化疗耐药性的影响及作用机制。方法培养人膀胱癌细胞,分为观察1组、对照1组、观察2组、对照2组,分别加入2μmol/L顺铂诱导凋亡。24 h后,观察1组细胞转染Rab11特异性siRNA,对照1组细胞转染Control siRNA,观察2组细胞转染Rab11过表达质粒,对照2组细胞转染p CMV6质粒。转染48 h后收集各组细胞,采用CCK-8法测算细胞存活率,采用流式细胞术测算细胞凋亡率,采用Western blotting法检测细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达。结果观察1组细胞存活率低于对照1组,观察2组细胞存活率高于对照2组(P均<0.05)。观察1组细胞凋亡率高于对照1组,观察2组细胞凋亡率低于对照2组(P均<0.05)。观察1组细胞Bcl-2蛋白表达低于对照1组,观察2组细胞Bcl-2蛋白表达高于对照2组(P均<0.05)。结论 Rab11能增强膀胱癌细胞对化疗药物顺铂的耐药性,其机制可能为调控凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。

多模态磁共振成像 胶原纤维酸性蛋白及B淋巴细胞瘤-2蛋白诊断新生儿缺氧缺血性脑病的价值

目的 分析多模态磁共振成像(MRI)、胶原纤维酸性蛋白(GFAP)及B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)诊断新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)的价值。方法 选取2021年2月—2022年1月在绍兴第二医院医共体总院诊治的64例HIE患儿为观察组,同期出生无脑损伤的30例新生儿为对照组。两组均给予常规MRI扫描、扩散加权成像(DWI)及动脉自旋标记灌注成像(ASL)扫描,采用反射免疫分析法检测Bcl-2水平,采用酶联免疫吸附法检测GFAP水平。分析多模态MRI参数、GFAP、Bcl-2水平与病情严重程度之间的相关性,分析多模态MRI参数、GFAP、Bcl-2对HIE的诊断价值。结果 对照组T_(1)、表观弥散系数(ADC)、脑血流量(CBF)分别为(1 163.25±57.81)ms、(2.07±0.48)×10^(-3)mm~2/s、(16.36±1.23)ml/(100 g·min),观察组T_(1)、ADC、CBF分别为(1 432.96±64.82)ms、(1.19±0.10)×10^(-3)mm~2/s、(27.08±2.94)ml/(100 g·min)。与对照组相比,观察组T_(1)、CBF升高,ADC降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。轻度、中度、重度HIE患儿T_(1)、CBF、ADC、GFAP、Bcl-2水平比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。HIE患儿T_(1)、CBF、GFAP、Bcl-2与疾病严重程度均呈正相关(r=0.476,0.473,0.512,0.464,均P<0.05);ADC与疾病严重程度呈负相关(r=-0.483,P<0.05)。T_(1)与GFAP、Bcl-2均呈正相关(r=0.442、0.436,均P<0.05);ADC与GFAP、Bcl-2均呈负相关(r=-0.479、-0.525,均P<0.05);CBF与GFAP、Bcl-2均呈正相关(r=0.497、0.513,均P<0.05)。与多模态MRI、GFAP、Bcl-2单独检测相比,联合检测诊断HIE的灵敏度最高。结论 多模态MRI、GFAP、Bcl-2水平与HIE患儿病情严重程度密切相关,三者联合检测可有效提高HIE的临床诊断准确性。

PTD4-Cu/ZnSOD融合蛋白对缺氧复氧损伤模型大鼠心肌细胞H9C2心肌线粒体功能的影响

目的探讨蛋白质转导结构域4-铜锌超氧化物歧化酶(PTD4-Cu/ZnSOD)融合蛋白对缺氧/复氧损伤心肌线粒体功能的影响。方法 H9C2大鼠心肌细胞采用厌氧培养箱培养(85%N_2,10%H_2,5%CO_2)制作缺氧复氧损伤模型,之后在缺氧复氧损伤细胞培养液中不加任何处理因素作为HRI组,分别加入10μmol/L Cu/ZnSOD作为Cu/ZnSOD组、10μmol/L PTD4-Cu/ZnSOD作为PTD4-Cu/ZnSOD组,且以正常培养心肌细胞作为正常组。采用JC-1试剂盒检测线粒体膜电位,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,生化测定心肌细胞线粒体三磷酸腺苷(ATP)酶活性、超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量,Western blot检测心肌细胞线粒体B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白、Bax蛋白的表达。结果 HRI组线粒体膜电位显著低于正常组;PTD4-Cu/ZnSOD组线粒体膜电位较正常组较低。各处理组心肌细胞凋亡指数均明显高于正常组(P<0.01);PTD4-Cu/ZnSOD组心肌细胞凋亡指数较HRI组明显降低(P<0.01)。PTD4-Cu/ZnSOD组线粒体ATP酶活性明显高于HRI组,且超氧化物歧化酶活性较高,显著降低丙二醛含量(P<0.01)。HRI组Bcl-2蛋白表达低于正常组,Bax蛋白表达高于正常组(P<0.01);与HRI组比较,PTD4-Cu/ZnSOD融合蛋白能显著增加Bcl-2蛋白表达,降低Bax蛋白表达(P<0.01)。结论 PTD4-Cu/ZnSOD融合蛋白可提高线粒体ATP酶活性,减轻线粒体损伤;提高线粒体SOD活性,减轻自由基对线粒体损伤;提高线粒体膜Bcl-2蛋白表达,降低Bax蛋白表达,从而发挥心肌保护作用。

Bcl-xL蛋白、LDH、IPF、MMP-9在食管癌术后胸腔感染中的表达及预测脓毒症的效能

背景食管癌患者术后易胸腔感染,但缺乏早期预测机制,基于基质金属蛋白酶-9、未成熟血小板比率、大分子B淋巴细胞瘤、乳酸脱氢酶水平变化均与感染有关,推测可为临床完善相关机制提供参考.目的探讨大分子B淋巴细胞瘤(B-cell lymphoma-extra large,Bcl-xL)蛋白、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、未成熟血小板比率(immature platelet fraction,IPF)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在食管癌(esophageal cancer,EC)术后胸腔感染中的表达及预测脓毒症的效能.方法将2016-02/2020-10期间187例EC术后胸腔感染患者作为观察组,并根据是否发生脓毒症分为脓毒症(16例)、非脓毒症(171例)患者,并选取同期临床资料相匹配的187例EC术后未感染患者作为对照组,比较两组及脓毒症、非脓毒症患者Bcl-xL蛋白、LDH、IPF、MMP-9水平,采用Pearson分析Bcl-xL蛋白、LDH、IPF、MMP-9与脓毒症病情程度的关系,Logistic回归方程分析脓毒症的相关影响因素,受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)分析Bcl-xL蛋白、LDH、IPF、MMP-9预测脓毒症的效能.结果观察组Bcl-xL蛋白、LDH、IPF、MMP-9较对照组显著升高(P<0.05);脓毒症手术时间长于非脓毒症,Bcl-xL蛋白、LDH、IPF、MMP-9水平高于非脓毒症(P<0.05);Bcl-xL蛋白、LDH、IPF、MMP-9水平与APACHEⅡ评分呈正相关(P<0.05);Logistic回归方程分析,结果显示,Bcl-xL蛋白、LDH、IPF、MMP-9高于均值者发生脓毒症的风险分别是低于均值者的1.174、2.883、2.562、1.948倍(P<0.05);经ROC分析Bcl-xL蛋白、LDH、IPF、MMP-9联合预测脓毒症的AUC为0.964,大于任一指标单独预测(P<0.05).结论EC术后胸腔感染患者Bcl-xL蛋白、LDH、IPF、MMP-9水平升高,且与病情进展关系密切,其预测EC术后胸腔感染继发脓毒症具有良好预测效能,便于指导临床完善防治方案.

冬凌草甲素对胆管癌QBC939细胞增殖、凋亡及端粒酶活性的影响

目的探讨冬凌草甲素对胆管癌细胞系QBC939细胞增殖、凋亡及端粒酶活性的影响。方法采用不同浓度冬凌草甲素(0、10、20、40、80、100μmol/L)处理QBC939细胞24、48、72 h,MTT法测定QBC939细胞活力并计算增殖抑制率;不同浓度冬凌草甲素(0、20、40、80μmol/L)处理QBC939细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,Western Blot法检测QBC939细胞B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达,端粒酶重复序列扩增法检测QBC939细胞的端粒酶活性。结果 QBC939细胞增殖抑制率随冬凌草甲素的药物浓度升高、作用时间延长而升高;与0μmol/L冬凌草甲素组相比,其他浓度冬凌草甲素组的S期细胞比例降低;0、20、40、80μmol/L冬凌草甲素组QBC939细胞的凋亡率分别为0.5%、14.8%、25.8%及37.7%;Western Blot结果显示随着药物浓度的升高,QBC939细胞的Bax表达量逐渐升高,Bcl-2表达量逐渐降低;其他浓度冬凌草甲素组QBC939的端粒酶活性均低于0μmol/L冬凌草甲素组,且QBC939细胞的端粒酶活性随冬凌草甲素浓度的升高而降低(P<0.05)。结论冬凌草甲素可抑制QBC939细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制Bcl-2表达以降低端粒酶活性有关。

子宫内膜异位症患者内膜组织中Livin胱氨酸蛋白酶激活剂B淋巴细胞瘤-2蛋白的表达及临床意义

目的探讨子宫内膜异位症患者内膜组织中Livin蛋白、第2个线粒体来源的胱氨酸蛋白酶激活剂(Smac)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达及三者与子宫内膜异位症病情发生发展的相关性。方法选择2016年1月—2018年12月在中宁县中医医院接受手术治疗并经病理检测确诊的60例子宫内膜异位症患者,其中增生期31例、分泌期29例,收集所有患者的在位内膜、异位内膜组织,并选择60例正常内膜组织作为对照组。采用免疫组织化学法(SP法)检测不同内膜组织的Livin、Smac及Bcl-2蛋白的表达情况,并比较Livin、Smac及Bcl-2蛋白在不同病情、不同临床分期之间表达差异及三者之间的相关性。结果Livin、Smac及Bcl-2蛋白在异位内膜细胞、在位内膜细胞及正常内膜细胞组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05);Livin、Bcl-2蛋白在在位内膜细胞、正常内膜细胞增生期的表达均明显高于分泌期(P<0.05);Livin、Bcl-2蛋白在异位内膜细胞的增生期与分泌期表达无明显差异(P>0.05);Smac在正常内膜细胞分泌期的表达明显高于增生期,差异有统计学意义(P<0.05);异位内膜组织Livin、Smac及Bcl-2蛋白表达与临床分期无明显相关性(P>0.05);在异位内膜组织中,Livin与Smac呈负相关(r=-0.142,P=0.011);Livin与Bcl-2呈正相关(r=0.479,P=0.001);Bcl-2与Smac呈负相关(r=-237,P=0.023)。结论子宫内膜异位症患者内膜组织中Livin、Smac、Bcl-2蛋白的异常表达,使得异位内膜细胞增生及抗凋亡能力加强,三者协调共同作用导致了疾病的发生发展。

贝伐珠单抗对复发性卵巢癌Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况及临床治疗效果的影响

目的观察贝伐珠单抗治疗复发性卵巢癌效果及B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达情况。方法选取2014年2月至2017年10月148例复发性卵巢癌患者,按照奇偶法,将纳入患者分为观察组和对照组(每组74例)。观察组采用贝伐珠单抗联合常规化疗方法、对照组采用常规化疗方法。观察和比较两组患者治疗前后实体瘤大小、血清糖类癌胚抗原125(CA125)、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和不良事件及分级。结果按照实体瘤标准,观察组治疗完全缓解率13.51%、总有效率70.27%,均高于对照组的5.41%、52.70%,差异具有统计学意义(P<0.05)。按照CA125标准,观察组治疗完全缓解率17.57%、总有效率85.14%,均高于对照组的9.46%、68.92%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组Bcl-2表达(0.25±0.08)低于对照组的(0.56±0.12),Bax(1.08±0.04)、Caspase-3蛋白表达(1.59±0.10)均高于对照组的(分别为0.58±0.06、1.00±0.07),差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组不良反应构成比64.86%,与对照组的62.16%比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论贝伐珠单抗治疗复发性卵巢癌疗效显著、安全可靠,且能有效调节Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达抑制肿瘤发生与发展,丰富了复发性卵巢癌发生与发展机制学说,为临床治疗提供了一定参考依据。

复方守宫散联合唑来膦酸通过B淋巴细胞诱导成熟蛋白-1/B细胞淋巴瘤因子6通路对肺癌骨转移的研究

目的探讨复方守宫散联合唑来膦酸对肺癌骨转移的治疗作用,及对B淋巴细胞诱导成熟蛋白(B lymphocyte induced maturation protein,Blimp)1/B细胞淋巴瘤因子(B-cell lymphoma factor,Bcl)-6通路的影响。方法建立肺癌骨转移小鼠模型,分为骨转移组、中药低剂量(40 mg/kg复方守宫散)组、中药高剂量(120 mg/kg复方守宫散)组、西药(50μg/kg唑来膦酸)组以及联合用药(120 mg/kg复方守宫散+50μg/kg唑来膦酸)组,另设假手术组,每组10只。21 d后,观察胫骨损伤、病理形态、统计破骨细胞数目、骨转移细胞活体成像系统荧光信号以及胫骨组织中Blimp1、Bcl-6表达水平。结果与假手术组相比,骨转移组破骨细胞数目、肿瘤细胞荧光信号以及Blimp1表达增加,Bcl-6表达降低(P<0.01);与骨转移组相比,中药低、高剂量组以及西药组的破骨细胞数目、肿瘤细胞荧光信号以及Blimp1表达降低,Bcl-6表达增加(P<0.01);联合用药增强肺癌骨转移的治疗作用(P<0.01)。结论复方守宫散联合唑来膦酸治疗肺癌骨转移具有协同作用,其机制可能与抑制Blimp1/Bcl-6通路有关。

血清SIRT1、Fibulin-5、Bcl-2/Bax与颈动脉粥样硬化斑块破裂所致脑梗死的关系及联合检测价值

目的 探讨血清沉默信息调节蛋白1 (SIRT1)、衰老关键蛋白抗原-5 (Fibulin-5)、B淋巴细胞瘤基因-2(Bcl-2)/B淋巴细胞瘤基因-2相关X蛋白(Bax)与颈动脉粥样硬化(CAS)斑块破裂所致脑梗死(ACI)的关系及联合检测价值。方法 选取新疆维吾尔自治区人民医院2021年1月至2023年2月CAS斑块破裂所致ACI患者98例作为研究组,另选取同期CAS斑块未破裂患者98例作为对照组,比较两组血清SIRT1、Fibulin-5、Bcl-2、Bax水平,分析各血清指标对CAS斑块破裂所致ACI风险的影响及与病情的关系,并评价各血清学指标单独及联合预测CAS斑块破裂所致ACI的价值。结果 研究组血清SIRT1、Bcl-2水平低于对照组,Fibulin-5、Bax水平高于对照组(P<0.05);大面积梗死(MCI)患者血清SIRT1、Bcl-2水平<小面积梗死患者<腔隙性梗死(LI)患者,Fibulin-5、Bax水平>小面积梗死患者> LI患者(P<0.05);重度神经功能缺损患者血清SIRT1、Bcl-2水平<中度神经功能缺损患者<轻度神经功能缺损患者,Fibulin-5、Bax水平>中度神经功能缺损患者>轻度神经功能缺损患者(P<0.05);血清SIRT1、Bcl-2低水平患者CAS斑块破裂所致ACI风险是高水平患者的2.311倍、2.921倍,Fibulin-5、Bax高水平患者CAS斑块破裂所致ACI风险是低水平患者的3.470倍、3.184倍(P<0.05);血清SIRT1、Bcl-2与梗死面积、神经功能缺损程度呈负相关,Fibulin-5、Bax与梗死面积、神经功能缺损程度呈正相关(P<0.05);血清SIRT1、Fibulin-5、Bcl-2、Bax预测CAS斑块破裂所致ACI的AUC分别为0.716 (95%CI:0.648~0.778)、0.796 (95%CI:0.733~0.850)、0.728 (95%CI:0.660~0.789)、0.763 (95%CI:0.698~0.821),联合预测CAS斑块破裂所致ACI的AUC为0.909 (95%CI:0.860~0.945),优于各血清指标单独预测。结论 血清SIRT1、Fibulin-5、Bcl-2/Bax与CAS斑块破裂所致ACI及其病情程度密切相关,联合预测价值可靠,对临床开展防治工作具有指导意义。

沉默IL-37表达对骨肉瘤细胞的影响及其作用机制研究

目的探讨IL-37对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测人正常成骨细胞(hFOB1.19)和骨肉瘤细胞(U2OS、MG63、Saos-2)中IL-37 mRNA的表达情况;设计沉默IL-37的小干扰RNA(siRNA)序列转染骨肉瘤细胞系,将转染干扰序列siIL-37沉默IL-37表达的细胞作为siIL-37组,转染阴性对照序列作为阴性对照组(siNC组),检测沉默IL-37后骨肉瘤细胞IL-37 mRNA的表达。采用CCK-8法、Transwell法检测沉默IL-37表达对骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响;流式细胞术检测沉默IL-37表达对骨肉瘤细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹法检测沉默IL-37表达对骨肉瘤细胞中B淋巴细胞瘤(BCL)关联X蛋白(BAX)/BCL-2和Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白表达的影响。结果IL-37 mRNA在U2OS、MG63和Saos-2细胞中均高于其在hFOB1.19细胞中的表达(P均<0.05)。siIL-37组中的IL-37 mRNA相对表达量均低于siNC组(P均<0.05)。与siNC组比较,siIL-37组的细胞增殖比例下降,细胞凋亡率升高,迁移和侵袭细胞数量增多,BAX表达上调而BCL-2表达下调,Wnt/β-catenin信号通路中的关键蛋白c-Myc、β-catenin、转录增强因子1、细胞周期蛋白D1和基质金属蛋白酶-7表达均下调(P均<0.05)。结论IL-37在骨肉瘤细胞中表达升高,沉默IL-37表达可促进骨肉瘤细胞凋亡,并抑制其增殖、迁移和侵袭。IL-37可能通过BAX/BCL-2和Wnt/β-catenin信号通路调控骨肉瘤的发生发展。

B淋巴细胞瘤-2蛋白多位点磷酸化在大鼠脊髓损伤后细胞自噬中的表达研究

目的探讨大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后细胞自噬的变化及其与B淋巴细胞瘤-2(Bcell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白多位点磷酸化的关系。方法取40只8周龄雄性SD大鼠,采用改良Allen法制备SCI模型;将造模成功的36只大鼠随机分为SCI组、自噬抑制剂组、自噬促进剂组,每组12只。另取12只大鼠仅切除椎板、不损伤脊髓,作为假手术组。造模结束后,自噬抑制剂组及自噬促进剂组分别于脊髓鞘内注射20μL600 nmol/L 3-甲基腺嘌呤、25 nmol/L雷帕霉素,假手术组及SCI组仅注射20μL生理盐水;每天1次,连续4周。造模后1 d及1、2、4周,采用BBB评分法评价各组大鼠后肢运动功能。末次注射后24 h处死各组大鼠并取脊髓组织,ELISA法检测脊髓组织中过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性及TNF-α、IL-1β水平;HE染色观察脊髓组织形态学变化;透射电镜观察脊髓组织中线粒体超微结构变化;免疫荧光染色检测自噬相关蛋白(Beclin1)、微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)蛋白表达;TUNEL染色观察脊髓组织神经细胞凋亡;免疫荧光双染检测LC3/TUNEL阳性细胞表达;Western blot检测细胞Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、Bcl-2及p-Bcl-2(Ser87)、p-Bcl-2(Ser70)蛋白表达。结果与假手术组相比,SCI组各时间点BBB评分降低,MPO活性、TNF-α、IL-1β水平升高;神经细胞周围间隙增大,细胞肿胀、出现空泡,线粒体中出现自噬小体;Beclin1及LC3蛋白阳性率、神经细胞凋亡率显著升高;LC3、TUNEL阳性细胞增多;Bax、p-Bcl-2(Ser87)、p-Bcl-2(Ser70)蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低;以上指标比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与SCI组相比,自噬抑制剂组各时间点BBB评分降低,MPO活性、TNF-α、IL-1β水平升高;线粒体中出现少量自噬囊泡;Beclin1及LC3蛋白阳性率降低,神经细胞凋亡率显著升高;LC3阳性细胞减少、TUNEL阳性细胞增多;Bax、p-Bcl-2(Ser87)、p-Bcl-2(Ser70)蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低。而自噬促进剂组结果与自噬抑制剂组相反;以上指标组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论大鼠SCI后通过诱导细胞自噬可降低神经细胞凋亡,保护脊髓功能,其机制可能与抑制Bcl-2蛋白多位点磷酸化有关。