木犀草素通过与B淋巴细胞瘤-2蛋白结合抑制硅肺纤维化的作用机制

目的探究中药丹参有效成分在治疗硅肺中的作用和作用机制。方法运用网络药理学和分子对接技术筛选出中药丹参治疗硅肺的有效成分和关键靶点。热转移实验检测有效成分与关键靶点的结合稳定性,细胞划痕实验检测上皮细胞的迁移能力,蛋白质印迹法检测上皮间质转化的标志蛋白、纤维化标志蛋白以及凋亡相关蛋白的表达水平。结果中药丹参的有效成分木犀草素与硅肺关键靶点B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)具有最低的结合能,热转移实验验证木犀草素与BCL-2蛋白具有较好的结合稳定性。细胞划痕实验显示木犀草素能够抑制转化生长因子-β1刺激的上皮细胞迁移。蛋白质印迹法证明木犀草素能够抑制BCL-2蛋白的表达,与转化生长因子-β1刺激组相比,木犀草素给药及沉默BCL-2后能够抑制上皮间质转化及胶原蛋白的形成,进而抑制纤维化的进程。木犀草素给药及沉默BCL-2后能够促进细胞凋亡。结论木犀草素能够与BCL-2结合进而抑制硅肺纤维化的进程,其作用机制可能与木犀草素能够促进细胞凋亡有关。

B、T淋巴细胞弱化因子和T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3在肺腺癌中的表达与肿瘤免疫逃逸的临床意义

目的探讨B、T淋巴细胞弱化因子(BTLA)和T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(TIM-3)在肺腺癌中的表达情况,并分析其与肿瘤免疫逃逸的相关性,为今后临床治疗肺腺癌提供新思路。方法回顾性分析2018年1月至2023年12月广西医科大学附属民族医院(广西壮族自治区民族医院)收治的58例肺腺癌患者的临床资料,取术后肿瘤组织样本,将其作为肿瘤组织组;另收集同期58例肺炎患者,取肺炎性组织样本,将其作为肺炎性组织组。比较两组组织中BTLA、TIM-3表达情况;分析BTLA、TIM-3表达与肺腺癌临床病理特征的关系;比较手术前后肺腺癌患者外周血T淋巴细胞亚群水平,并分析BTLA、TIM-3表达与术后T淋巴细胞亚群水平的相关性。结果与肺炎性组织相比,肺腺癌肿瘤组织中BTLA和TIM-3阳性表达率均更高;BTLA阳性表达患者中TNM分期为Ⅱ、Ⅲ期的患者占比均高于BTLA阴性表达患者;TIM-3阳性表达患者中低分化及TNM分期为Ⅱ、Ⅲ期的患者占比均高于TIM-3阴性表达患者;与术前比,术后7d患者外周血CD4^(+)水平、CD4^(+)/CD8^(+)比值均升高,而CD8^(+)水平降低(均P<0.05)。斯皮尔曼相关系数分析结果显示,BTLA和TIM-3阳性表达率均与术后7 d外周血CD3^(+)、CD4^(+)水平呈负相关,而与外周血CD8^(+)水平呈正相关(均P<0.05),BTLA和TIM-3阳性表达率与CD4^(+)/CD8^(+)比值的相关性无统计学意义(均P>0.05)。结论BTLA和TIM-3在肺腺癌中高表达,且BTLA和TIM-3阳性表达率均与术后7 d外周血CD3^(+)、CD4^(+)水平呈负相关,与术后7 d外周血CD8^(+)水平呈正相关,BTLA与TIM-3有望成为监测肺腺癌肿瘤免疫逃逸的临床指标。

乳酸脱氢酶同工酶-5和β2-微球蛋白在弥漫大B细胞淋巴瘤诊断及疗效评估中的应用

目的 :分析乳酸脱氢酶同工酶-5(LDH-5)和β2-微球蛋白(β2-MG)在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的诊断及疗效评估中的应用价值。方法 :选取2020年6月至2023年1月福建医科大学肿瘤临床医学院收治的87例DLBCL患者作为研究组,以同期在同一医院门诊体检的120名健康人作为对照组,分析对照组与研究组以及研究组不同临床病理特征患者间LDH-5和β2-MG表达情况,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析LDH-5和β2-MG水平对DLBCL的诊断价值;使用Spearman相关分析方法分析LDH-5和β2-MG与DLBCL患者治疗有效率的相关性。结果 :研究组LDH-5和β2-MG水平明显高于对照组(P <0.05)。87例患者中治疗有效72例,无效15例。LDH-5和β2-MG水平联合检测诊断DLBCL的敏感性、特异性、准确性及ROC曲线下面积(AUC;95%CI)值分别为0.944、0.922、0.931及0.876(0.641-0.910),均显著高于单一指标的诊断价值(P <0.05)。Ann Arbor分期为Ⅲ~Ⅳ期、有骨髓浸润、治疗反应为无效、国际预后指数(IPI)评分为高危者LDH-5和β2-MG水平均分别明显高于Ann Arbor分期为Ⅰ~Ⅱ期、无骨髓浸润、治疗反应为有效、IPI评分为低危者(P <0.05)。Pearson分析结果显示,LDH-5和β2-MG水平均与DLBCL患者治疗有效率呈负相关(P <0.05)。结论:LDH-5和β2-MG在DLBCL患者中呈高表达水平状态,联合检测上述两个指标可提升单一指标对DLBCL患者的诊断价值,为患者预后和疗效评估提供临床参考。

重组人干扰素α-2b凝胶辅助高频电刀宫颈环切术对宫颈癌前病变患者T淋巴细胞的影响

目的探讨重组人干扰素α-2b凝胶辅助高频电刀宫颈环切术对宫颈癌前病变患者T淋巴细胞的影响。方法选取2019年2月至2023年2月如皋市人民医院接收的70例高级别鳞状上皮内病变(HSIL)患者为研究对象,通过随机数字表法分为对照组(n=35)与观察组(n=35),对照组予以高频电刀宫颈环切术治疗,观察组予以重组人干扰素α-2b凝胶辅助高频电刀宫颈环切术治疗。比较两组患者人乳头瘤病毒(HPV)转阴率、治疗前后的HPV病毒载量、T淋巴细胞水平[CD3阳性细胞(CD3^(+))、CD4阳性细胞(CD4^(+))、CD8阳性细胞(CD8^(+))、CD4^(+)/CD8^(+)]、肿瘤标志物[癌胚抗原199(CA199)、细胞角蛋白19(CK19)、鳞状细胞癌抗原(SCCA)]、炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)]水平差异,并对比两组术后并发症发生情况。结果治疗前,观察组与对照组在HPV病毒载量、T淋巴细胞水平、肿瘤标志物、炎症因子水平方面的差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组的HPV病毒载量均显著低于治疗前水平(P<0.05),且观察组治疗后的病毒载量显著低于对照组(P<0.05),观察组患者的HPV转阴率显著高于对照组(P<0.05);两组CD3^(+)和CD4^(+)水平及CD4^(+)/CD8^(+)比治疗前均上升,且观察组显著高于对照组(P<0.05),两组CD8^(+)水平均有下降,且观察组显著低于对照组(P<0.05);两组CA199、CK19、SCCA水平以及TNF-α、IL-6水平较治疗前均显著下降(P<0.05),且观察组显著低于对照组(P<0.05)。观察组中阴道出血、感染及宫颈粘连的总发生率显著低于对照组(2.86%vs.17.14%,P<0.05)。结论重组人干扰素α-2b凝胶辅助高频电刀宫颈环切术可以显著提高HSIL患者的HPV转阴率,降低HPV病毒载量,调整T淋巴细胞水平,降低肿瘤标志物和炎症因子水平,减少术后并发症,是一种有效的治疗方法。

婴儿血管瘤组织中微小RNA-130a、B淋巴细胞瘤-2的表达观察

目的观察婴儿血管瘤(Infantile hemangioma,IH)组织中微小RNA(micro RNA,miR)-130a、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达变化。方法 33例IH患者,其中增殖期17例、退化期16例,留取IH组织、瘤旁正常皮肤组织。采用荧光实时定量PCR法检测IH组织、瘤旁正常皮肤组织中miR-130a和Bcl-2 mRNA,采用SP免疫组织化学法检测IH组织、瘤旁正常皮肤组织BCl-2蛋白,分析IH组织miRNA-130a、Bcl-2 mRNA表达的相关性。结果 IH组织、瘤旁正常皮肤组织中miR-130a相对表达量分别为3.71±1.23、 0.87±0.21,退化期、增殖期IH组织miRNA-130a相对表达量分别为3.68±1.40 、3.72±1.63;IH组织及瘤旁正常皮肤组织Bcl-2 mRNA相对表达量分别为1.213±0.272 、0.614±0.22,退化期、增殖期IH组织Bcl-2 mRNA相对表达量比较分别为3.68±1.40 、 3.72 ±1.63,与瘤旁正常皮肤组织比较,退化期、增殖期IH组织miRNA-130a及Bcl-2 mRNA相对表达量均升高( P 均<0.05)。与瘤旁正常皮肤组织比较,IH组织Bcl-2蛋白光密度值和阳性面积率均升高( P 均<0.05);与退化期IH组织、瘤旁正常皮肤组织比较,增殖期IH组织Bcl-2蛋白光密度值和阳性面积率均升高( P 均<0.05)。IH组织中miR-130a 与Bcl-2 mRNA的表达呈正相关( r =0.451, P =0.008)。结论IH组织miR-130a、Bcl-2 mRNA及蛋白表达均升高,增殖期IH组织Bcl-2蛋白表达高于退化期。miR-130a、Bcl-2可能协同促进IH的发生、发展。

活血化痰胶囊对血管性痴呆大鼠海马区B淋巴细胞瘤-2表达的影响

目的:探讨活血化痰胶囊对血管性痴呆大鼠海马区Bcl-2表达的影响。方法:建模成功的54只血管性痴呆大鼠随机分三组,模型组、西药组与中药组,各18只。西药组与中药组分别给予多奈哌齐、活血化痰胶囊0.77 mg/kg灌胃,模型组以等剂量的生理盐水代替,三组给药时间都为21 d,记录大鼠海马区Bcl-2表达情况。结果:中药组、西药组给药后7、14、21 d的逃避潜伏期都低于模型组,中药组也低于西药组,相比较组间差异均有统计学意义(P<0.05)。中药组海马区域细胞排列比较紧密,仅见少数细胞变性、坏死,胞浆内尼氏体比较丰富。中药组、西药组给药后21 d的SOD活性高于模型组,MDA活性低于模型组,相比较组间差异均有统计学意义(P<0.05),中药组与西药组比较差异有统计学意义(P<0.05)。中药组、西药组给药后21 d的Bax、Bcl-2蛋白相对表达水平高于模型组,中药组高于西药组,相比较组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:活血化痰胶囊在血管性痴呆大鼠中的应用能促进海马区Bcl-2表达,缓解氧化应激反应,促使大鼠具有更好的学习记忆能力。

小儿病毒性肺炎应用不同剂量干扰素α-2b雾化吸入治疗后对患儿血浆细胞因子及T淋巴细胞亚群的影响

目的探讨不同剂量干扰素α-2b雾化吸入对病毒性肺炎患儿血浆细胞因子及T淋巴细胞亚群的影响。方法选择2017年8月—2019年8月于我院就诊的病毒性肺炎患儿150例,随机分为干扰素α2b高剂量组、低剂量组、对照组,高剂量组给予干扰素α2b每次20万U/kg雾化吸入,低剂量组给予每次10万U/kg雾化吸入,对照组给予0.9%生理盐水2 mL雾化吸入。对比治疗前后肺功能、白细胞、血清淀粉样蛋白A(SAA)和生长停滞特异性基因产物6(GAS6)水平、T淋巴细胞亚群变化和不良反应。结果高剂量组(82.00%)和低剂量组(74.00%)总有效率高于对照组(54.00%)(P<0.05),高、低剂量组总有效率无差异(P>0.05)。治疗后3组VPTEF/VE、VT/kg、WBC、CD_(3)^(+)、CD_(4)^(+)、CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)较治疗前升高(P<0.01),呼吸频率、AA、GAS6、CD_(8)^(+)降低(P<0.01),两两比较有显著差异(P<0.05)。三组不良反应发生率无差异(P>0.05)。结论雾化吸入干扰素α-2b能有效改善病毒性肺炎患儿SAA和GAS6水平,缓解炎症损伤,恢复气道功能,增强免疫功能,改善预后,与10万U/kg剂量相比,每次20万U/kg雾化吸入的效果更佳。

养阴活胃合剂对慢性萎缩性胃炎模型大鼠胃黏膜淋巴细胞瘤-2基因和三叶因子1表达的影响

目的探讨养阴活胃合剂对慢性萎缩性胃炎模型大鼠B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和三叶因子1(trefoil factor 1,TFF1)基因蛋白表达的影响及机制。方法将实验大鼠随机分为空白对照组、模型组、中药低、中、高剂量组及阳性药物对照组,每组16只。除空白对照组常规饲养、自由进食水外,均采用2 g水杨酸钠加入100 m L的30%乙醇溶液中给大鼠灌胃,每天1次,每次3 m L,配合隔日喂食不禁水法造成慢性萎缩性胃炎模型,模型复制成功后分别运用中药低、中、高剂量及维酶素治疗,采用免疫组化法检测大鼠胃黏膜Bcl-2及TFF1表达阳性细胞数,光镜观察胃黏膜病理组织学变化。结果采用单因素方差分析法,组间比较采用方差分析中的LSD法。与空白对照组(18.08%)比较,各组Bcl-2蛋白阳性表达率均明显升高(P<0.05);与模型组(43.41%)比较,应用养阴活胃合剂治疗后,中药高、中剂量组Bcl-2蛋白阳性表达率均明显降低(P<0.05)。与空白对照组(95.66%)比较,各组TFF1蛋白阳性表达率均明显降低(P<0.05),除中药高剂量组TFF1蛋白阳性表达率接近于空白对照组外(P>0.05);与模型组(84%)比较,中药高、中剂量组TFF1蛋白阳性表达率均明显升高(P<0.05)。结论养阴活胃合剂对CAG大鼠模型有良好的治疗作用,能够改善慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜病理形态,提示养阴活胃合剂可能通过下调Bcl-2的表达,上调TFF1表达起到治疗效果。

血清乳酸脱氢酶、β_(2)-微球蛋白及铁蛋白水平与侵袭性B细胞淋巴瘤患者预后的关系

目的探讨血清乳酸脱氢酶(LDH)、β_(2)-微球蛋白(β_(2)-MG)及铁蛋白水平与侵袭性B细胞淋巴瘤患者预后的关系。方法选取60例侵袭性B细胞淋巴瘤患者,均接受利妥昔单抗+环磷酰胺+表柔比星+长春新碱+泼尼松(R-CHOP)方案化疗,治疗4个疗程后评估临床疗效,检测治疗前后患者血清LDH、β_(2)-MG、铁蛋白水平。随访3年,比较不同预后侵袭性B细胞淋巴瘤患者治疗4个疗程后血清LDH、β_(2)-MG、铁蛋白水平,其与患者预后的相关性采用Spearman秩相关分析。结果60例侵袭性B细胞淋巴瘤患者化疗4个疗程后,完全缓解38例,部分缓解7例,疾病稳定4例,疾病进展11例,疾病控制率为81.67%(49/60)。治疗4个疗程后,侵袭性B细胞淋巴瘤患者血清LDH、β_(2)-MG、铁蛋白水平均明显低于治疗前,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。随访3年,所有患者均无失访,生存43例,死亡17例。生存患者治疗4个疗程后血清LDH、β_(2)-MG、铁蛋白水平均明显低于死亡患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Spearman秩相关分析结果显示,血清LDH、β_(2)-MG、铁蛋白水平与侵袭性B细胞淋巴瘤患者的预后生存均呈负相关(r=-0.718、-0.823、-0.753,P﹤0.05)。结论血清LDH、β_(2)-MG、铁蛋白水平与侵袭性B细胞淋巴瘤患者的预后生存均呈负相关,有助于临床对患者的预后进行客观评价。

B细胞淋巴瘤/白血病因子-2家族相关信号通路与重度抑郁症关系的研究进展

重度抑郁症（MDD）是一种严重行为异常、认知障碍、心境低落的心身疾病之一，对机体消化、免疫、循环和神经系统等均会产生影响并造成机体损伤，且MDD发病率高、复发率高、死亡率高。世界卫生组织（WTO）预测MDD在10年后将是仅次于心血管疾病的重要疾病之一。虽然国外和国内对MDD研究并未间断，但是MDD病因和发病机制还未完全清楚。

金黄色葡萄球菌肠毒素B对小鼠淋巴细胞产生肿瘤坏死因子-α的影响

目的 观察金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对淋巴细胞产生肿瘤坏死因子 (TNF)-α的影响。方法 密度梯度离心法获得鼠脾淋巴细胞 ,不同时间和浓度的SEB处理 ,流式细胞仪检测产生TNF -α的淋巴细胞阳性率。结果 TNF -α的产生在 5d和 10 0ng·ml-1时达到高峰。结论 SEB能有效刺激淋巴细胞产生TNF -α。

甲醛对小鼠机体毒性及其B淋巴细胞瘤-2基因表达的影响

目的探讨甲醛对小鼠机体的毒性及其对B淋巴细胞瘤-2基因表达的影响。方法将40只昆明种小鼠随机分为4组,10只/组。正常对照组小鼠不做任何处理,甲醛低剂量组(5 mg/m^3)、甲醛中剂量组(10 mg/m^3)、甲醛高剂量组(20 mg/m^3)小鼠分别放入染毒柜中吸入不同浓度的甲醛,连续9周,建立甲醛中毒的小鼠模型。结果甲醛可导致肝细胞核固缩及嗜酸样变,且呈现浓度依赖性,但对脑、肺、肾组织未见明显的影响。甲醛高剂量组与对照组比较,肝组织B淋巴细胞瘤-2表达升高(P<0.05)。结论甲醛可导致肝组织明显的病变,但对脑、肺、肾组织无明显的影响,机体可能通过上调肝脏的抗凋亡基因B淋巴细胞瘤-2而拮抗甲醛的毒性,进而保护肝脏。

青海地区乳腺癌患者B淋巴细胞瘤-2基因C(-938)A多态性与临床生物学指标关系研究

目的探讨青海地区乳腺癌(BC)患者B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)基因C(-938)A多态性(AA、AC、CC基因型)与临床生物学指标的关系。方法选取2014年1月—2015年12月青海大学附属医院乳腺甲状腺外科接受手术治疗的符合纳入标准的BC患者65例为研究对象。术中采集患者BC组织,采用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性分析(PCR-RFLP)法检测Bcl-2基因C(-938)A多态性(AA、AC、CC基因型);收集患者临床生物学指标,包括病理类型、肿瘤直径、临床分期、组织学分级、腋窝淋巴结转移数目、雌激素受体(ER)状态、孕激素受体(PR)状态、人表皮生长因子2(HER2)状态、分子分型。采用列联系数χ2检验分析Bcl-2基因C(-938)A多态性与临床生物学指标的关系。结果 65例患者中,AA、CA、CC基因型分别为6、30、29例。由于AA基因型例数少,无法独立分析,故将AA基因型和CC基因型合并分析。Bcl-2基因C(-938)A多态性与病理类型、肿瘤直径、临床分期、组织学分级、腋窝淋巴结转移数目、ER状态、PR状态、HER2状态、分子分型均不存在关联性(P>0.05)。结论青海地区BC患者Bcl-2基因C(-938)A多态性与临床生物学指标病理类型、肿瘤直径、临床分期、组织学分级、腋窝淋巴结转移数目、ER状态、PR状态、HER2状态、分子分型无关。

脑出血患者血清B淋巴细胞瘤-2水平与功能预后的相关性

目的探讨脑出血患者血清B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)水平与功能预后的相关性。方法选取2018年10月至2021年3月四川省广元市中心医院收治的脑出血患者216例,随访3个月,观察患者功能预后情况,根据改良版Rankin量表(mRS)评分分为预后良好组(mRS<2分)和预后不良组(mRS≥2分)。收集两组一般资料、实验室指标、血清Bcl-2水平等,采用多因素Logistic回归分析影响脑出血患者功能预后的相关因素,采用限制性立方条图拟合血清Bcl-2水平与脑出血患者功能预后间的非线性关系。结果截止2021年6月1日,预后不良组78例(36.11%),预后良好组138例(63.89%)。两组入院时收缩压、中线移位、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、超敏心肌肌钙蛋白(hs-cTn)、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)、Bcl-2水平对比差异具有统计学意义(t=2.048、12.282、5.971、6.120、5.183、4.837,P<0.05);多因素Logistic回归分析显示:中线移位、hs-cTn、NIHSS评分、hs-CRP、Bcl-2水平为脑出血患者功能预后的危险因素[OR(95%CI)=31.846(11.913~85.134)、1.149(1.038~1.270)、1.160(1.026~1.312)、1.156(1.028~1.299)、1.160(1.065~1.265),P<0.05];限制性立方条图显示,血清Bcl-2水平与脑出血患者功能预后风险呈显著非线性关系(χ^(2)=11.950,P<0.05)。结论血清Bcl-2水平与脑出血患者功能预后相关。

B淋巴细胞瘤-2结合抗凋亡基因1在人脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的探讨B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)结合抗凋亡基因1(Bcl-2-associated athanogene 1,BAG-1)在人脑胶质瘤中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化SP二步法,检测2009年9月至2021年9月年安徽医科大学第二附属医院的212例人脑胶质瘤标本以及10例正常脑组织标本中的BAG-1的表达,分析其与临床病理及预后的关系。结果检测到BAG-1总体的阳性表达率为61.3%,BAG-1在低级别胶质瘤(Ⅰ~Ⅱ级)和高级别胶质瘤(Ⅲ~Ⅳ级)阳性表达率分别为48.4%和71.1%(P=0.001)。BAG-1表达阴性和阳性的病人的中位生存时间分别为60个月和17个月(P<0.001)。BAG-1表达阴性和阳性的高级别胶质瘤病人中位生存时间分别为31个月和11个月(P<0.001)。BAG-1阴性和阳性表达的病人无进展中位生存时间分别为26个月和8个月(P=0.001)。结论BAG-1在人脑胶质瘤中高表达,与肿瘤的病理分级呈正相关,与病人生存时间呈负相关,BAG-1可能成为预测胶质瘤预后及化疗疗效的重要分子标志物。

B细胞淋巴瘤因子-3对乳腺癌雌激素受体α信号通路及细胞增殖的影响

目的探讨B细胞淋巴瘤因子-3(Bcl-3)对乳腺癌雌激素受体α(ERα)信号通路以及细胞增殖的影响。方法取对数生长期MCF-7细胞,随机分为siControl组和siBcl-3#1组,分别滴加ControlsiRNA和siBcl-3#1siRNA,应用细胞转染试剂Lipofectamine TM 2000转染5 h。取稳定转染48 h后的siControl组和siBcl-3#1组MCF-7细胞,应用实时荧光定量聚合酶链反应检测MCF-7细胞中Bcl-3、乳腺癌雌激素调控基因1(GREB1)、PDZ结构域蛋白1(PDZK1)和ERα靶基因三叶因子1(TFF1)mRNA的表达,Western blot法检测MCF-7细胞中Bcl-3、ERα蛋白表达,细胞计数试剂盒-8实验检测MCF-7细胞增殖能力。取HEK293T细胞,随机分为Input组(即阳性对照组)、IP组(即免疫共沉淀组)和IgG组(即阴性对照组),共转染Bcl-3和ERα质粒48 h后,用100μL免疫共沉淀(Co-IP)细胞裂解液冰上裂解细胞后,分离上清液;Input组取90μL上清液,加入30μL 4×Loading buffer;IP组取450μL上清液,加入40μL Protein A/G和绿色荧光蛋白抗体0.5μL;IgG组取450μL上清液,加入0.5μL IgG、30μL Protein A/G琼脂糖磁珠;采用Co-IP实验检测细胞中Bcl-3和ERα结合效果。取对数生长期的MCF-7细胞,采用免疫荧光共定位实验检测Bcl-3和ERα是否存在共定位现象。结果si-Bcl-3#1组MCF-7细胞中Bcl-3、GREB1、TFF1和PDZK1 mRNA相对表达量显著低于siControl组(P<0.05)。si-Bcl-3#1组MCF-7细胞中Bcl-3蛋白和ERα蛋白相对表达量显著低于siControl组(P<0.05)。培养0、24 h时,si-Bcl-3#1组与siControl组MCF-7细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05);培养48、72 h时,si-Bcl-3#1组MCF-7细胞增殖能力显著低于siControl组(P<0.05)。Co-IP实验结果显示,Bcl-3和ERα存在相互作用。免疫荧光共定位实验结果显示,Bcl-3和ERα存在共定位现象。结论Bcl-3在乳腺癌细胞中呈高表达,其能够提高乳腺癌ERα信号通路的转导活性,促进ERα阳性乳腺癌细胞增殖。

湿疹患者外周血白细胞介素-21和B细胞淋巴瘤因子-6 mRNA的表达和临床意义

目的:探讨滤泡性辅助性T细胞的主要效应因子白细胞介素(IL)-21和B细胞淋巴瘤因子(Bcl)-6在湿疹患者外周血中的表达及意义。方法:采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),检测60例湿疹患者和40例健康者外周血IL-21和Bcl-6 mRNA的表达量并进行临床分析。结果:湿疹患者外周血中IL-21和Bcl-6 mRNA的表达水平明显低于健康者(P<0.05),与湿疹面积及严重度指数(EASI)评分及嗜酸性粒细胞计数呈负相关(P<0.001),与患者年龄、白细胞计数无明显相关性(P>0.05)。不同性别的湿疹患者外周血中IL-21和Bcl-6 mRNA表达差异均无统计学意义(P>0.05)。不同分型湿疹患者外周血中IL-21和Bcl-6 mRNA的表达水平差异均有统计学意义,其中急性湿疹组低于亚急性湿疹组和慢性湿疹组,亚急性湿疹组低于慢性湿疹组(P<0.05)。经过综合治疗2周及4周后,湿疹患者外周血中IL-21和Bcl-6 mRNA的表达水平比治疗前及治疗后2周均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。湿疹患者外周血中IL-21和Bcl-6 m RNA的表达呈正相关(P=0.001)。结论:湿疹患者中存在IL-21和Bcl-6 mRNA的表达异常,提示这2个细胞因子可能参与了湿疹的发病过程。

CCCTC结合因子对翼状胬肉中B淋巴细胞瘤-2基因表达的调控及其机制

目的探讨转录因子CCCTC结合因子(CTCF)对翼状胬肉中B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)表达的调控及其分子机制。方法纳入2017年6月至2019年2月在长沙市第一医院眼科行翼状胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植术治疗的原发性翼状胬肉患者22例,术中收集翼状胬肉组织作为翼状胬肉组;同期纳入因结膜裂伤、眼球破裂伤或眼球穿通伤就诊的眼外伤患者20例,取眼外伤修复手术过程中切取的少量正常结膜组织作为正常结膜组。分别采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测各组样本中CTCF及Bcl-2的表达水平;采用亚硫酸氢盐处理后测序法(BSP)检测各组样本中Bcl-2启动子DNA甲基化水平。分离并培养翼状胬肉成纤维细胞,使用波形蛋白抗体进行免疫组织化学鉴定成纤维细胞。将分离培养的细胞分成2个组,CTCF干扰组转染CTCF干扰质粒,对照组转染对照质粒。采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测CTCF、Bcl-2表达水平;采用细胞计数试剂盒8检测各组培养12、24和48 h细胞增生活性;采用BSP检测各组样本中Bcl-2启动子DNA甲基化水平。比较各组各指标差异,采用Pearson线性相关分析探讨翼状胬肉组织中Bcl-2 mRNA与CTCF蛋白及Bcl-2基因启动子甲基化水平的相关性。结果翼状胬肉组CTCF mRNA及蛋白相对表达水平分别为7.23±3.34和0.92±0.21,明显高于正常结膜组的1.10±0.44和0.28±0.07,差异均有统计学意义(t=-8.136、-13.025,均P<0.01)。翼状胬肉组Bcl-2 mRNA及蛋白相对表达水平分别为10.27±4.64和0.95±0.27,高于正常结膜组的1.10±0.41和0.32±0.14,差异均有统计学意义(t=-8.789、-10.782,均P<0.01)。翼状胬肉组CTCF蛋白相对表达量与Bcl-2 mRNA相对表达量呈显著正相关(r=0.746,P<0.01)。翼状胬肉组Bcl-2启动子区DNA甲基化水平为0.65±0.09,低于正常结膜组的0.83±0.06,差异有统计学意义(t=7.408,P<0.01)。翼状胬肉组Bcl-2启动子DNA甲基化水平与Bcl-2 mRNA相对表达量呈显著负相关(r=-0.635,P<0.01)。CTCF干扰组CTCF及Bcl-2 mRNA相对表达水平为0.37±0.03和0.53±0.06,明显低于对照组的1.02±0.06和0.99±0.07,差异均有统计学意义(t=20.035、9.029,均P<0.01);CTCF干扰组CTCF及Bcl-2蛋白相对表达水平为0.23±0.06和0.56±0.07,低于对照组的0.52±0.05和0.92±0.12,差异均有统计学意义(t=6.914、4.719,均P<0.01)。CTCF干扰组转染后12、24和48 h细胞活力分别为0.10±0.01、0.17±0.01和0.38±0.04,低于对应时间点对照组的0.12±0.01、0.29±0.01和0.85±0.06,差异均有统计学意义(t=3.718、18.350、15.621,均P<0.01)。CTCF干扰组Bcl-2启动子DNA甲基化水平为0.75±0.04,明显高于对照组的0.61±0.03,差异有统计学意义(t=-4.472,P<0.05)。结论翼状胬肉中CTCF高表达,其可能通过下调启动子DNA甲基化水平介导Bcl-2异常表达。

卵巢子宫内膜异位囊肿组织B淋巴细胞瘤-2相关X、B淋巴细胞瘤-2蛋白的表达及其与超声引导下无水乙醇介入治疗术后复发的关系分析

目的检测卵巢子宫内膜异位囊肿组织B淋巴细胞瘤-2相关X(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达,并分析其与超声引导下无水乙醇介入治疗术后复发的关系。方法回顾性选取2016年1月至2017年6月于徐州市中心医院就诊的215例卵巢子宫内膜异位囊肿患者的临床资料纳入研究组,实施超声引导下无水乙醇介入治疗并于术中留取患者的卵巢子宫内膜异位囊肿组织;另选取同期同一医院就诊的206例子宫肌瘤患者的临床资料纳入对照组,均于行手术治疗时经活检穿刺术留取患者的子宫内膜组织。采用免疫组化法检测两组患者组织中Bax、Bcl-2蛋白的表达并进行比较;分析卵巢子宫内膜异位囊肿组织中Bax、Bcl-2蛋白表达与术后复发的关系。结果研究组增生期、分泌期Bax蛋白阳性表达率及总阳性表达率均低于对照组,Bcl-2蛋白阳性表达率及总阳性表达率均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);研究组术后复发率为22.33%,复发患者囊壁厚度≥0.3cm、入院时血清糖类抗原125(CA125)阳性、术中无水乙醇留置时间<15min、Bax蛋白阴性表达、Bcl-2蛋白阳性表达占比均高于未复发患者,差异具有统计学意义(P<0.05),且均为研究组复发的独立危险因素(P<0.05)。结论卵巢子宫内膜异位囊肿组织中Bax蛋白阳性表达率低,Bcl-2蛋白阳性表达率高,二者与患者行超声引导下无水乙醇介入治疗术后复发有关。

miR-218-5p靶向B细胞淋巴瘤因子3表达影响白血病K562细胞的增殖和凋亡

目的探讨微小RNA-218-5p(miR-218-5p)靶向B细胞淋巴瘤因子3(BCL3)基因对白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法反转录及荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Westernblotting)检测正常人骨髓细胞和白血病骨髓细胞中miR-218-5p和BCL3的表达水平。以白血病细胞K562为研究对象,分别构建过表达miR-218-5p或沉默BCL3的K562细胞株,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Westernblotting检测细胞增殖抗原(Ki67)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(CleavedCaspase-3)的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和Westernblotting验证miR-218-5p和BCL3的靶向调控关系。结果与正常人骨髓细胞相比,白血病骨髓细胞中miR-218-5p的表达水平(1.00±0.13)比(0.44±0.18)显著降低,BCL3的表达水平(1.04±0.32)比(4.76±1.38)、(0.26±0.05)比(0.78±0.13)显著升高。过表达miR-218-5p或沉默BCL3均可显著抑制K562细胞CyclinD1(0.69±0.08)比(0.34±0.05)、(0.65±0.07)比(0.18±0.04)和Ki67表达(0.68±0.07)比(0.23±0.04)、(0.54±0.06)比(0.24±0.04),促进Cleaved-Caspase-3表达(0.38±0.04)比(0.89±0.11)、(0.17±0.04)比(0.56±0.07),抑制细胞增殖[(98.72±12.38)%比(69.79±7.62)%]、[(97.48±11.49)%比(65.73±6.86)%],促进细胞凋亡[(7.26±0.85)%比(24.46±2.67)%]、[(6.63±0.85)%比(26.46±2.81)%]。BCL3是miR-218-5p的靶基因,miR-218-5p可负性调控BCL3的表达。过表达BCL3可部分逆转miR-218-5p对K562细胞增殖和凋亡的影响。结论miR-218-5p通过靶向BCL3抑制白血病细胞增殖,促进细胞凋亡。