酵母模型在Aurora-B激酶抑制剂筛选中的应用

目的以酵母细胞为模式菌高通量筛选微生物来源的Aurora-B激酶抑制剂。方法以野生型酵母菌Y300和ipl1-321温度敏感型突变株为模式菌,筛选微生物来源的Aurora-B激酶抑制剂;体外酶学实验验证候选化合物对Aurora-B激酶的抑制作用;Western Blotting分析候选化合物对肿瘤细胞中histone H3磷酸化的影响。结果Jadomycin B显示出对ipl1-321温度敏感型突变株的特异性抑制作用;体外酶学实验证实jadomycin B对重组纯化的人Aurora-B激酶具抑制作用;jadomycin B能抑制多种肿瘤细胞中histone H3的磷酸化并呈剂量依赖性。结论以Y300和ipl1-321酵母细胞为高通量筛选模型筛选到一个新的Aurora-B激酶抑制剂jadomycin B。

IκB激酶β在肿瘤中的作用及其抑制剂的研究进展

近年来,IκB激酶β(inhibitor kappa B kinaseβ,IKKβ)在肿瘤发生发展过程中的作用逐渐被发现。IKKβ通过作用多种分子通路参与肿瘤细胞增殖、存活等过程,抑制IKKβ已被确定为治疗癌症有希望的手段。研究人员开发一系列IKKβ抑制剂,发现它们能够有效抑制肿瘤的生长,但目前尚无IKKβ抑制剂投入到临床上治疗癌症。在这篇综述中,我们将介绍IKKβ介导肿瘤发生发展及主要IKKβ抑制剂的研究进展。

蛋白激酶抑制剂B对卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响

目的 探讨蛋白激酶抑制剂(PKI)B低表达对卵巢癌A2780细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 用PKIB shRNA慢病毒载体和shRNA control慢病毒载体分别转染A2780细胞构建PKIB低表达A2780细胞株(PKIB shRNA)及其对照细胞株(NC),用CCK-8细胞增殖实验研究低表达PKIB对A2780细胞增殖、侵袭的影响,细胞划痕实验检测细胞迁移能力.结果 PKIB低表达可显著加强细胞增殖,促进卵巢癌细胞侵袭和迁移能力(P<0.05).结论 卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力与PKIB表达相关,为卵巢癌治疗寻找新的基因靶位提供可靠理论依据.

IκB激酶抑制剂PS1145改善脓毒症小鼠血管功能研究

目的探讨IκB激酶抑制剂PS1145对脓毒症小鼠血管反应性的影响及机制。方法采用区组随机法将45只雄性BALB/c小鼠分为对照组(腹腔注射等量0.9%生理盐水,即Con组)、脓毒症组[腹腔注射脂多糖(LPS)10 mg/kg,即LPS组]和实验干预组(小鼠尾静脉注射IκB激酶特异性阻断剂PS114550 mg/kg,6 h后腹腔注射LPS 10 mg/kg,即PT组),每组15只。在模型建立后6 h时每组再分为3个亚组(n=5),分别监测小鼠基础收缩压、给予去甲肾上腺素(NE)(300 ng/kg静脉注射)后收缩压升高幅值、给予乙酰胆碱(Ach)(600 ng/kg静脉注射)后收缩压下降幅值。取3组中监测完基础收缩压亚组的小鼠,采用ELISA法检测血浆中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)及血管内皮多糖-蛋白复合物(GCX)脱落标志物Syndecan-1(SDC-1)的水平,Western blot印迹法检测小鼠肠系膜动脉诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达情况。另取15只小鼠分3组(即对照组、LPS组、PT组)建模后采用伊文思蓝染料(EBD)法测定建模6 h时各组小鼠心肌组织、肺脏组织和肠系膜组织的EBD值。结果建模6 h时,LPS组和PT组小鼠基础收缩压均低于对照组[分别为(85.8±1.1)、(89.2±1.3)和(112.6±1.5)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),均P<0.01];使用NE后LPS组收缩压升高值[(6.40±0.16)mmHg]低于对照组[(13.75±0.43)mmHg](P<0.01),PT组[(8.93±0.17)mmHg]高于LPS组(P<0.01);使用Ach后收缩压降低幅度LPS组低于对照组[(4.16±0.10)mmHg比(9.52±0.53)mmHg,P<0.01],PT组[(6.45±0.17)mmHg]高于LPS组(P<0.01)。建模6 h时LPS组小鼠血浆TNF-α、SDC-1、NO浓度均高于对照组(均P<0.01),PT组均低于脓毒症组(均P<0.05)。3组小鼠血浆TNF-α和SDC-1浓度呈正相关(r=0.99,P<0.05)。建模6 h时,LPS组小鼠肠系膜组织动脉内皮细胞上eNOS蛋白表达水平低于对照组(P<0.01),PT组高于脓毒症组(P<0.01)。建模6 h时,LPS组小鼠心脏组织、肺脏组织和肠系膜组织EBD含量均明显高于对照组(均P<0.01),PT组上述组织EBD含量低于LPS组(均P<0.01)。结论使用PS1145抑制核因子-κB信号通路可改善脓毒症小鼠模型的血管反应性,机制可能与其降低NO水平、抑制炎症反应、减轻血管内皮GCX损伤脱落从而保护血管内皮屏障功能有关。

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A/2B基因和妊娠糖尿病的关系

目的探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A/2B基因(CDKN2A/2B)和妊娠糖尿病(GDM)的相关性,为GDM的早期诊断和治疗提供依据。方法选取本院2014年12月-2015年12月收治的GDM患者56例(GDM组)进行研究,同时选取正常糖耐量孕妇108例(正常组)以及2型糖尿病患者98例(T2DM组)进行对比,所有受试者均进行清晨空腹采血后进行DNA的提取,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法,观察三组受试者CDKN2A/2B基因分布频率情况,并对CDKN2A/2B基因多态性与GDM的相关性进行分析。结果三组受试者中CDKN2A/2B基因rsl0811661位点均存在于TT、TC、CC三种基因型。TT基因分布频率,GDM和T2DM组显著高于正常孕妇组,差异有统计学意义;而GDM组和T2DM组相比,差异无统计学意义。正常组CC分布频率显著高于GDM组和T2DM组,差异有统计学意义;GDM组和T2DM组CC分布频率差异无统计学意义。三组TC分布频率相似,组间差异无统计学意义。正常组等位基因T的分布频率(34.3%)显著低于GDM组(58.9%)和T2DM组(60.2%),差异有统计学意义;但GDM组与T2DM组间的基因型和等位基因频率分布相近,组间差异无统计学意义。相关性分析发现,rs10811661危险等位基因T与GDM具有显著的相关性(r=4.227,P<0.05)。结论 CDKN2A/2B基因rs10811661位点存在基因多态性,其等位基因T可能为GDM的风险最高的等位基因,CDKN2A/2B基因可能是GDM的易感基因之一,可能为GDM和T2DM共同的易感基因。

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA1靶向微小RNA-339-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA1(lncRNA CDKN2B-AS1)对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及分子机制。方法 收集南阳市中心医院2017年1月2019年1月收治的37例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织。将MDA-MB-453细胞分为CDKN2B-AS1阴性对照(si-NC组)、CDKN2B-AS1小分子干扰RNA(si-CDKN2B-AS1组)、CDKN2B-AS1小分子干扰RNA+miR-339-5p阴性对照(si-CDKN2B-AS1+anti-miR-NC组)以及CDKN2B-AS1小分子干扰RNA+miR-339-5p特异性寡核苷酸抑制剂(si-CDKN2B-AS1+anti-miR-339-5p组)。采用RT-qPCR法对CDKN2B-AS1及微小RNA-339-5p(miR-339-5p)表达水平进行检测;细胞周期及增殖活性检测分别采用流式细胞术及MTT实验;采用Transwell小室技术对细胞迁移和侵袭进行检测;采用Western blotting法对增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67(Ki67)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达进行检测;荧光素酶报告实验检测CDKN2BAS1对miR-339-5p的靶向调控。结果 在乳腺癌组织中CDKN2B-AS1表达水平上调[(2.23±0.08)比(1.00±0.06)](P<0.05)。抑制CDKN2B-AS1可增加G0期细胞比例[(43.29±3.76)%比(30.25±3.01)%]、P21表达水平升高,S期细胞比例[(21.91±3.10)%比(34.19±3.32)%]、细胞存活率[(53.02±5.38)%比(100.00±7.12)%]、迁移、侵袭数以及Ki67、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.05)。CDKN2B-AS1靶向调控miR-339-5p,抑制miR-339-5p逆转抑制CDKN2B-AS1对MDA-MB-453细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结论 抑制CDKN2B-AS可抑制乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖、迁移、侵袭,且靶向调控miR-339-5p表达。

抑制IKK2/NF-κB信号通路在小鼠脉络膜新生血管形成中的作用

目的观察IκB激酶2(IKK2)抑制剂TPCA-1在激光诱导小鼠脉络膜新生血管(CNV)形成中的作用。方法成年C57BL/6J小鼠75只,雄性,体重20~30 g,按随机数字表法分为正常对照组、光凝模型组、光凝加TPCA-1抑制剂组(TPCA-1抑制剂组),每组25只。光凝模型组、TPCA-1抑制剂组小鼠均采用激光光凝诱导CNV成形。TPCA-1抑制剂组小鼠激光光凝后玻璃体腔注射TPCA-1。激光光凝后1周,眼底荧光血管造影(FFA)检查正常对照组、光凝模型组、TPCA-1抑制剂组小鼠眼底的CNV形成情况;激光光凝后1周、2周、3周、4周,采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)观察各组中血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白表达情况。激光光凝后2周,行视网膜色素上皮(RPE)/脉络膜组织铺片Isolectin B4荧光染色,定量计算CNV面积。结果 FFA结果显示,正常对照组视网膜各层动静脉管壁完整,未见荧光渗漏;激光光凝术后1周,光凝模型组激光部位强荧光,造影晚期荧光渗漏,边界模糊。TPCA-1抑制剂组激光部位强荧光。Western blotting结果显示,激光光凝后1周、2周、3周、4周,光凝模型组中VEGF(F=42.71)、TNF-α(F=33.0)蛋白表达均高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);在TPCA-1抑制剂组中VEGF(F=16.97)、TNF-α(F=19.18)蛋白表达均低于在光凝模型组中的表达(P<0.05)。激光光凝后2周,RPE/脉络膜组织铺片荧光染色定量计算显示,光凝模型组CNV面积(24 380±1 357.06μm^2)明显大于TPCA-1抑制剂组CNV面积(16 673±2 635.96μm^2),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 TPCA-1通过抑制IKK2,可能干扰IKK2/NF-κB信号通路,干预VEGF、TNF-α的表达,从而减少CNV形成。

核因子κB抑制物在糖尿病周围神经病变中的研究进展

对于糖尿病周围神经病变(DPN),目前只是对症治疗,还没有具体的预防或治疗措施。而炎症参与了DPN的发生、发展且涉及一个复杂的分子网络和过程。在DPN动物模型和临床试验中,抗炎药物的应用逐渐受到重视。且Toll样受体4、核因子κB(NF-κB)、NF-κB抑制剂蛋白和NF-κB抑制剂激酶等髓样分化蛋白88依赖型/非依赖型信号通路中的关键蛋白分子也参与了DPN的病程进展,其中NF-κB主要调控炎症反应。可见,使用NF-κB抑制物对于减缓DPN有重要作用,通过抑制NF-κB炎症信号通路来缓解糖尿病神经病理病变可能是未来治疗DPN的一个新方向。

PKIB抑制PKA活性调节细胞衰老

人cAMP依赖型蛋白激酶B抑制剂(PKIB)是一种新的耐热蛋白.实验证明,PKIB对PKA催化亚单位具有抑制作用.为研究PKIB在细胞衰老中的功能,以年轻和年老人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS细胞株)为实验对象,通过实时-PCR发现,在年老细胞中,PKIB表达高于年轻细胞;用PKA活化剂处理年轻和年老细胞,结果显示,在年老细胞中PKA活性变化较年轻细胞小.通过免疫共沉淀实验证实,在年老细胞中,PKIB与PKA催化亚单位结合较年轻细胞中多;进一步通过在年轻细胞中过表达PKIB,检测细胞PKA活性,发现PKA活性明显降低,进一步证实了在人胚肺二倍体成纤维细胞中PKIB对PKA活性的抑制作用;利用Western实验结果证实,PKA催化亚单位在年轻细胞中的表达高于年老细胞.以上结果证明,在2BS细胞中,PKA活性受PKIB的抑制;这种抑制作用与细胞的衰老有一定的关联作用.

PRMT5和CDKN2B在宫颈癌组织的表达及临床意义

目的研究蛋白精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B(CDKN2B)在宫颈癌中的表达及临床意义。方法收集2019年3月—2020年3月南京大学医学院附属鼓楼医院妇产科诊治宫颈癌患者88例。免疫组织化学法检测宫颈癌和癌旁组织中PRMT5、CDKN2B表达;采用Spearman相关分析PRMT5与CDKN2B表达的相关性;比较不同临床特征宫颈癌癌组织中PRMT5、CDKN2B表达的差异;Kaplan-Meier曲线评估PRMT5、CDKN2B表达对宫颈癌患者无进展生存预后的影响;多因素Cox回归分析宫颈癌患者无进展生存预后的影响因素。结果癌组织中PRMT5蛋白阳性率70.45%(62/88),高于癌旁组织6.82%(6/88)(χ^(2)=75.155,P<0.001)。宫颈癌组织中CDKN2B阳性率22.73%(20/88),低于癌旁组织79.55%(71/88)(χ^(2)=75.336,P<0.001)。宫颈癌中PRMT5与CDKN2B呈负相关(r=-0.734,P<0.001)。FIGOⅠB2~ⅡA期、有淋巴结转移宫颈癌组织中PRMT5阳性率高于FIGOⅠA~ⅠB1期、无淋巴结转移者,而CDKN2B阳性率则降低(χ^(2)/P=6.359/0.012、4.606/0.032、5.205/0.023、3.893/0.048)。PRMT5阳性组3年累积无进展生存率74.19%(46/62),低于PRMT5阴性组92.31%(24/26)(Log-Rankχ^(2)=4.386,P=0.017)。CDKN2B阴性组3年累积无进展生存率75.00%(51/68),低于CDKN2B阳性组95.00%(19/20)(Log-Rankχ^(2)=4.423,P=0.012)。FIGO分期ⅠB2~ⅡA期、合并淋巴结转移、PRMT5阳性、CDKN2B阴性是影响宫颈癌患者无进展生存预后的独立危险因素[OR(95%CI)=1.407(1.159~1.696),1.464(1.201~1.784),1.614(1.189~2.192),1.595(1.191~2.136)]。结论宫颈癌组织中PRMT5表达升高,CDKN2B表达降低,两者与宫颈癌患者的不良临床病理特征有关,是评估宫颈癌预后的标志物。

IKBKE沉默对食管鳞癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨核因子(NF)κB激酶亚单位ε抑制剂(IKBKE)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达及其沉默对KYSE-30细胞生物学行为的影响。方法:收集自2020年6月至2023年6月开展ESCC根治术的30例患者的癌组织以及癌旁组织,并分为ESCC组(n=30)与对照组(n=30)。运用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白质印迹法(WB)检测ESCC组及对照组中的IKBKE mRNA与蛋白水平,并分析ESCC组中的IKBKE mRNA以及蛋白水平与ESCC患者临床病理特征(性别、年龄与肿瘤的TNM分期、分化、浸润深度及是否转移)的关系。将培养的ESCC细胞系KYSE-30细胞随机分为空白对照组(无任何处理)、NC-IKBKE组(转染NC-siRNA)、si-IKBKE组(转染IKBKE-siRNA)。CCK-8法检测KYSE-30细胞增殖能力;流式细胞术检测KYSE-30细胞凋亡率;划痕法检测KYSE-30细胞迁移能力;Transwell法检测KYSE-30细胞侵袭能力;采用qRT-PCR及WB检测KYSE-30细胞中IKBKE mRNA及蛋白水平;采用WB检测KYSE-30细胞中NF-κB通路关键蛋白NF-κB p65、磷酸化核因子κB抑制蛋白α(p-IκBα)表达水平。结果:ESCC组IKBKE的mRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组(t=9.769、12.960,均P=0.000);IKBKE在ESCC组的mRNA及蛋白水平与ESCC的肿瘤的分化程度、TNM分期及转移有关(t=2.070~2.829,均P<0.05),而其与性别、年龄、浸润深度无关(均P>0.05);与NC-IKBKE组相比,si-IKBKE组KYSE-30细胞中的IKBKE的mRNA以及蛋白水平均显著降低(F=77.244、78.436,均P=0.000);成功沉默IKBKE表达的KYSE-30细胞系后,与NC-IKBKE组相比,si-IKBKE组细胞的48、72 h细胞增殖能力及24、48 h细胞迁移率均显著下降(F=12.355~44.755,均P<0.05),与NC-IKBKE组比较,si-IKBKE组48 h细胞侵袭抑制率、细胞凋亡率均明显增加(F=155.436、46.360,均P=0.000);si-IKBKE组的NF-κB p65、p-IκBα的蛋白表达水平均显著低于NC-IKBKE组(F=139.206、55.551,均P=0.000)。结论:ESCC组织中的IKBKE表达水平显著高于癌旁组织,且与肿瘤的分化程度、TNM分期及转移有关,沉默IKBKE可显著抑制ESCC细胞的增殖、迁移以及侵袭能力,促进细胞凋亡,其机制可能与IKBKE调控NF-κB通路有关。

大黄素通过抑制核转录因子-κB信号途径对脂多糖诱导的ARDS小鼠发挥肺保护作用

目的探讨大黄素对脂多糖(LPS)诱导的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠肺保护作用的可能机制.方法选择72只健康雄性C57BL/6小鼠,按随机数字表法分为对照组、模型组和大黄素高、中、低剂量组及p65信号通路上游分子核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂激酶β(IKKβ)活化抑制剂BAY65-1942(BAY)组,每组12只.采用经气道雾化吸入LPS 40μL的方法复制ARDS小鼠模型;对照组雾化吸入等量磷酸盐缓冲液(PBS).大黄素低、中、高剂量组于制模前1 h通过腹腔注射5、10、20 mg/kg大黄素预处理;BAY组腹腔注射BAY 5 mg/kg预处理;对照组与模型组给予等量生理盐水.制模后48 h处死动物,取支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织,光镜下观察各组小鼠肺组织病理学改变,用蛋白质免疫印迹试验检测肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-8、IL-1β)、p65及p65/磷酸化p65(p-p65)、IKKβ、磷酸化IKKβ(p-IKKβ)的蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中髓过氧化物酶(MPO)水平及NF-κBp65与DNA的结合力,流式细胞术检测BALF中表面分子CD11b+Gr-1+中性粒细胞(PMN)的比例.结果与对照组比较,模型组肺泡结构破坏明显、肺泡间隔明显增宽、炎症细胞浸润明显增多;肺损伤评分明显升高;BALF中MPO水平、CD11b+Gr-1+PMN比例均明显升高;同时组肺组织IL-8、TNF-α、IL-1β、p65、p-p65、IKKβ以及p-IKKβ的蛋白表达水平均明显增加,NF-κBp65与DNA的结合力也明显增强.与模型组比较,不同剂量大黄素组小鼠肺泡结构破坏减少,肺泡间隔增宽程度减轻,肺组织炎症细胞浸润减少,肺损伤评分明显下降;BALF中MPO水平、CD11b+Gr-1+PMN比例明显降低,NF-κBp65与DNA的结合力也明显减弱;肺组织TNF-α、IL-8、IL-1β、p65、p-p65、IKKβ与p-IKKβ的蛋白表达水平下降,且以大黄素高剂量组的作用比低、中剂量组更明显〔肺损伤评分(分):2.10±0.48比3.03±0.49、2.83±0.53,MPO(ng/L):486.04±35.74比683.07±79.12、585.06±87.35,CD11b+Gr-1+PMN百分比:(6.61±1.52)%比(20.68±4.17)%、(11.54±2.39)%,NF-κB p65与DNA的结合力(A值):1.64±0.23比2.41±0.16、2.10±0.12,TNF-α/GAPDH:0.81±0.09比1.07±0.11、0.83±0.16,IL-8/GAPDH:0.64±0.05比1.17±0.03、0.98±0.02,IL-1β/GAPDH:0.73±0.06比1.07±0.09、0.89±0.08,p65/GAPDH:0.82±0.11比0.97±0.06、0.86±0.05,p-p65/GAPDH:0.50±0.06比0.61±0.03、0.53±0.04,IKKβ/GAPDH:0.69±0.10比0.95±0.05、0.76±0.06,p-IKKβ/GAPDH:0.63±0.07比1.00±0.03、0.77±0.08;均P<0.05〕.BAY组的作用与大黄素高剂量组相当.结论大黄素能剂量依赖性抑制LPS诱导的ARDS小鼠肺组织炎症,减轻肺损伤,该作用机制可能与抑制NF-κB的信号通路活化有关.

OPN、IKK-β、NF-κB p65和MMP-9在胃癌细胞中的表达及意义

目的:检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、IκB激酶抑制剂-β(inhibitor of IκB kinase-beta,IKK-β)、核因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)在具有转移潜能和低分化的胃癌细胞系及永生化胃上皮细胞中的表达,为进一步研究OPN在胃癌侵袭转移中的可能作用机制及其临床应用提供实验基础。方法:免疫细胞化学SP法和Western blot检测OPN、IKK-β、NF-κB p65和MMP-9在具有转移潜能和低分化的胃癌细胞系MKN45、GC9811-C11、803、AGS、GC7901及永生化胃上皮细胞293中的表达。结果:(1)免疫细胞化学结果显示:胃癌细胞胞浆及胞周可见OPN和MMP-9弱阳性染色,尤以803明显。而在293细胞中,未见OPN和MMP-9阳性染色。IKK-β和NF-κB p65在胃癌细胞胞浆中均成阳性染色,胞核中还可见NF-κB p65弱阳性染色,而293细胞中IKK-β和NF-κB p65未见阳性染色。(2)Western blot结果显示:OPN、IKK-β和MMP-9在胃癌细胞MKN45、GC9811-C11、803、AGS、GC7901与293细胞中的表达有差异,细胞核中NF-κB p65的表达也有差异。结论:OPN、IKK-β、NF-κB p65和MMP-9与胃癌的侵袭转移密切相关,OPN参与胃癌侵袭转移的分子机制及其能否作为胃癌侵袭转移的生物学指标还需进一步的实验研究。

IKBKE、YAP1和TEAD2在结直肠癌中的表达及临床意义

目的探讨核因子κb激酶亚基ε的抑制剂(IKBKE)、Yes相关蛋白1(YAP1)和转录增强结构域转录因子2(TEAD2)在结直肠癌(CRC)组织中的表达及其临床意义。方法收集2016年1月至2017年12月在蚌埠医科大学第一附属医院手术切除的142例CRC组织及对应癌旁组织,采用免疫组化法检测标本中IKBKE、YAP1和TEAD2的表达情况。分析3种蛋白在CRC组织中表达的相关性,分析蛋白阳性率与患者临床病理参数及预后的关系;绘制Kaplan-Meier生存曲线,比较这些蛋白不同表达情况患者的生存差异。采用Cox回归分析影响患者预后的危险因素。结果CRC组织中IKBKE、YAP1和TEAD2的阳性率均显著高于癌旁组织(65.5%比9.9%,73.9%比14.1%,66.9%比8.5%,均P<0.05)。IKBKE的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、肿瘤-淋巴结-远处转移(TNM)分期有关,YAP1和TEAD2的表达均与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期有关。Spearman秩相关分析显示CRC组织中IKBKE与YAP1、TEAD2表达均呈正相关(均P<0.01)。Kaplan-Meier生存分析显示IKBKE、YAP1和TEAD2阳性表达组的总生存率降低。Cox回归分析显示IKBKE、YAP1和TEAD2阳性、肿瘤分化程度高、TNM分期高是CRC患者预后的独立危险因素。结论CRC中IKBKE、YAP1和TEAD2阳性表达与肿瘤的分化程度、TNM分期、转移等因素有关,可能成为CRC治疗的潜在靶点;检测这3个蛋白的表达有助于评估预后。

脊髓损伤炎症中的NF-кB信号通路

脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是脊柱损伤最严重的并发症,致残率极高,不仅导致患者损伤节段以下肢体严重的功能障碍,同时也给整个社会造成巨大的经济负担。SCI后,中性粒细胞、巨噬细胞和T细胞等共同介导炎症反应,而核因子κB(NF-κB)通路是介导脊髓损伤后炎症反应的核心。NF-κB最早于1986年发现,其能与免疫球蛋白κ轻链基因增强子特异性结合。后续研究发现,其能与多种基因启动子部位的κB点发生特异性结合促进转录,是一类核因子DNA结合蛋白质的总称。NF-κB能够和许多基因启动子区域的固定核苷酸序列结合而启动基因转录。在机体的免疫应答、炎症反应及细胞的生长调控等方面发挥重要作用。大量研究证实,与SCI炎症密切相关的炎症细胞因子(IL-1、TNF-α、IL-6、IL-10等)、黏附分子(ICAM-1、VCAM-1、E选择素等)及趋化因子(CCL2、CCL3、CXCL8等)的基因启动部位均含有κB位点。SCI后,NF-κB信号通路被异常激活,大量炎症、趋化、黏附因子释放,加重SCI继发性炎症反应。因此,NF-κB在SCI病程中发挥的作用受到广泛重视。本文主要综述NF-кB的特性和其在脊髓损伤炎症中的研究进展和治疗前景,为后续SCI的炎症靶向治疗提供理论依据。

IKKε及TBK1在肥胖、糖尿病及NAFLD中的作用机制研究进展

核因子κB激酶抑制剂ε(IKKε)及TANK结合激酶1(TBK1)是IKK家族中的新成员,是核因子κB(NF-κB)信号转导通路中的重要调节因子,在代谢性疾病中具有重要作用,不仅可降低肥胖小鼠脂肪细胞中的β肾上腺素受体对儿茶酚胺的敏感性及细胞内第二信使cAMP的水平,而且可调节胰腺β细胞的再生。阻断IKKε及TBK1信号通路可促进脂肪组织的能量消耗,减少脂肪细胞中慢性炎性因子的表达,增强胰岛素敏感性,减少胰岛素抵抗,减轻体重,防止高脂饮食引起的肥胖。该文综述了IKKε及TBK1的结构和功能,以及IKKε和TBK1在肥胖、2型糖尿病(T2DM)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中调节代谢的分子机制,并讨论了氨来占诺作为TBK1及IKKε抑制剂治疗代谢性疾病的潜力。

B-Raf激酶抑制剂及其耐药机制的研究进展

Raf-MEK-ERK信号转导通路是调控细胞生长、分化和增殖最重要的通路之一。在该通路中,Raf的突变会导致肿瘤的发生,尤其是B-Raf,其在肿瘤中的突变率较高,是目前抗肿瘤药物研究的重要靶标之一。综述多种常见的B-Raf激酶抑制剂及其相关耐药机制的研究进展。

RNA干扰INK4位点反义非编码RNA抑制人肺癌细胞系生长的分子机制

目的探讨INK4位点反义非编码RNA(ANRIL)下调对CDKN2B-CDKN2A-ARF基因簇的调控及对人肺癌细胞生长的影响。方法通过RNA干扰下调人肺鳞状细胞癌细胞系H520中ANRIL的表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测RNA干扰前后细胞中ANRIL mRNA的表达变化,绘制细胞生长曲线;实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测RNA干扰前后细胞中细胞同期蛋白依赖性激酶抑制剂2B(CDKN2B)、CDKN2A、ARF mRNA和蛋白的表达变化。结果 RNA干扰可显著下调ANRIL mRNA的表达(P<0.05),ANRIL下调能抑制人肺鳞状细胞癌细胞系H520的生长(P<0.05),引起CDKN2B、CDKN2A、ARF mRNA和蛋白的表达升高(P<0.05)。结论 RNA干扰AN-RIL能抑制人肺鳞状细胞癌细胞的生长,ANRIL可能通过调控CDKN2B-CDKN2A-ARF基因簇起作用。

PKIB表达对胰腺癌细胞增殖与侵袭影响的实验研究

目的:人cAMP依赖型蛋白激酶B抑制剂(cAMP-dependent protein kinase inhibitor-β,PKIB)表达对胰腺癌细胞增殖与侵袭的影响。方法:利用Lipofectamine TM 2000转染PKIB过表达和沉默基因至PANC-1胰腺癌细胞,应用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法与蛋白质印迹法(Western blot)检测转染细胞中PKIB mRNA与蛋白的表达。应用噻唑蓝(MTT)比色法和结晶紫实验检测胰腺癌细胞活力和增殖能力,应用Transwell实验测定胰腺癌细胞的侵袭能力。结果:胰腺癌细胞的PKIB表达高于正常胰腺导管上皮细胞(P<0.05)。PKIB过表达增强细胞活力(P<0.05),促进细胞增殖,使胰腺癌细胞侵袭能力增强(P<0.05),而沉默PKIB表达对胰腺癌细胞的生物学效应恰好相反(P<0.05)。结论:PKIB的表达程度可影响胰腺癌细胞的增殖和侵袭,为进一步探讨胰腺癌发病机制及治疗提供有力证据。

新型环丙烷类B-Raf激酶抑制剂的设计合成及抗肿瘤活性研究

目的设计合成一系列环丙烷类B-Raf激酶抑制剂并测定其对人肝癌Hep G2细胞增殖的影响。方法以索拉非尼(sorafenib)为先导化合物,通过结构优化设计新型环丙烷类B-Raf激酶抑制剂,并以对羟基苯甲醛为起始原料经过苄基保护、缩合、酯化、环丙化、水解、酰胺化、脱苄、亲核取代等反应合成目标化合物。以索拉非尼为阳性对照物,采用MTT法测定目标化合物对人肝癌HepG2细胞增殖的影响。结果与结论合成了16个未见文献报道的新化合物,其结构经核磁共振氢谱鉴定。初步的体外活性评价结果表明,其中9个化合物表现出良好的肿瘤细胞抑制活性,优于阳性对照药索拉非尼,具有进一步研究的价值。