用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与克山病的关系──（黑龙江省急型克山病）

为探讨柯萨奇Ｂ组病毒感染与黑龙江省急型克山病的关系。本文用缺口平移法制备生物标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与１３例急型克山病尸检心肌组织及脑外伤、ＣＯ中毒等意外死亡的正常成人心肌组织１０例，非病区７～８个月引产胎儿心肌组织１０例的石腊切片进行原位杂交。结果１３例急型克山病中有８例出现阳性杂交信号，即有柯萨奇Ｂ组病毒的ＲＮＡ存在，阳性率达６１．５％。对照组均为阴性，提示黑龙江省急型克山病有柯萨奇Ｂ组病毒感染，可能是急型克山病发病因素之一。

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与云南慢型克山病的关系

为了探讨柯萨奇 B 组病毒感染与云南慢型克山病的关系,本文用缺口平移法制备生物素标记的柯萨奇 B_3病毒的 cDNA 探针与云南慢型克山病尸检心肌组织15例及脑外伤等非正常死亡的尸检心肌组织10例石腊切片及引产胎儿心肌组织10例的石腊切片进行原位杂交。结果云南慢克16例中有11例出现阳性杂交信号,即有柯萨奇 B 组病毒(CVB)RNA 存在,阳性率达73.3%。脑外伤等非正常死亡的心肌及胎心均为阴性。提示云南慢型克山病与 CVB 的感染高度相关。

柯萨奇B组病毒感染与儿童胰岛素依赖型糖尿病的相关性研究

采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)及逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测 35例儿童胰岛素依赖型糖尿病 (Insulindependentdiabetesmellitus ,IDDM)血清中柯萨奇B组病毒 (CoxsackievirusgroupB ,CBV)抗体IgM(CBV IgM) ,外周血中CBV RNA ,并选择 2 2例健康儿童做对照组以探讨CBV感染与儿童IDDM之间的关系。结果显示病例组 35例患儿血中CBV IgM阳性率 37 14% ,外周血CBV RNA阳性率 42 85 % ,对照组 2 2例阳性率分别为 4 5 4% ,9 0 9% ,两组比较差别显著 (P <0 0 5 )。从而提示儿童胰岛素依赖型糖尿病与柯萨奇B组病毒感染相关。

用原位核酸杂交法探讨慢型克山病与柯萨奇B组病毒的关系

为探讨山东慢型克山病与柯萨奇 B 组病毒的关系,用缺口平移法制备生物素标记 CoxB_3病毒的 cDNA 探针与慢型克山病14例尸检心肌组织及10例脑外伤,CO 中毒等意外死亡的正常成人心肌组织及10例非病区7～8个月引产胎儿的心肌组织切片进行原位杂交,14例慢克中有9例检测到柯萨奇 B 组病毒的 RNA,阳性率达64%,而对照组均为阴性。提示柯萨奇 B 组病毒感染可能是山东慢型克山病发病因素之一。

青蒿素抗柯萨奇B组病毒感染的实验观察

目的探讨青蒿素体外抗柯萨奇B组3型病毒(CVB3)的作用。方法以CVB3感染HeLa细胞为实验模型,采用微量细胞病变抑制法、半定量RT鄄PCR实验和间接免疫荧光实验的方法,观察分析青蒿素对CVB3的直接灭活、阻断吸附和抑制复制的作用,以及青蒿素对CVB3在感染细胞内核酸复制和蛋白表达的影响。结果青蒿素不同程度地阻断病毒吸附和抑制病毒复制,明显抑制CVB3核酸复制与蛋白表达,未发现有直接灭活病毒的作用。结论青蒿素类药物具有体外抗CVB3的作用,其抗病毒机制是通过阻断病毒吸附和抑制病毒复制来完成的。

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与黑龙江慢型克山病的关系

克山病是原因未明的地方性心肌病,慢型克山病有关病毒病因的研究未见有关报道,作者用生物素标记的柯萨奇 B_3病毒的 cDNA 探针与黑龙江病区慢型克山病尸检心肌组织及非正常死亡成人心肌组织和非病区7～8个月引产胎儿心肌组织进行了原位杂交,以检测柯萨奇 B 组病毒 RNA。结果13例慢型克山病中有9例呈现阳性杂交信号,阳性率达69.2%,两对照组均为阴性。表明黑龙江慢型克山病心肌组织中有柯萨奇 B 组病毒 RNA 的存在,提示黑龙江病区慢型克山病与柯萨奇 B 组病毒的感染呈现高度相关。

柯萨奇B组病毒3型VPI基因疫苗免疫效果的研究

目的为研制防治病毒性心肌炎的基因疫苗打下基础。方法以带有CVB。P1、P2区核酸序列的pGEM质粒为模板，用PCR方法克隆CVB3VP1基因cDNA，插入真核表达载体pcDNA3中的HindⅢ和XbaⅠ位点之间，构建成重组质粒。经大量扩增纯化后，肌肉注射免疫BALB／c小鼠3次，用CVB3毒株攻击小鼠，取血及脾细胞检测其免疫效果。结果小鼠经3次免疫后，虽未测出明显免疫应答指标，但诱导了T、B细胞的免疫记忆反应，免疫组鼠在CVB3毒株攻击后，迅速诱导产生了强烈的二次免疫应答。结论CVB3VP1基因疫苗对CVB3毒株的攻击有一定程度的保护作用。

柯萨奇B组病毒3种检测方法的比较

目的探讨限制性内切酶分析法检测柯萨奇B组病毒的特异性和重现性。方法收集500例疑似病毒性心肌炎的患者血清,分别采用限制性内切酶分析法、ELISA法、RT-PCR法3种检测方法进行检测,每种方法在相同条件下连续重复3次,然后将其结果进行比较。结果ELISA法的3次检测的结果差别较大,阳性率分别为55.4%、58.4%、60.6%;RT-PCR法的3次检测的结果差别相对较小,阳性率分别为51.1%、51.6%、52.8%;限制性内切酶分析法的3次检测结果完全一致。结论限制性内切酶分析法是一种特异性强、重现性好,明显优于ELISA法和RT-PCR法的新的病毒检测方法。

天花粉热提取物抗柯萨奇B组病毒感染的研究

目的从体内、体外两方面对中药天花粉热提取物的毒性及抗病毒作用进行研究。 方法采取HeLa细胞系 ,在 96孔培养板上直接观察细胞病变 ;建立病毒性心肌炎小鼠模型 ,模型鼠经腹腔给予药物 ,记录小鼠的死亡情况 ,并从心肌中分离病毒 ,观察药物对病毒的清除作用 ;利用3 H -UR标记CVB3m,对其作用机理作初步探讨。结果天花粉热提取物在高浓度时具有一定细胞毒性 ,在较低浓度时具有明显的抑制病毒致细胞病变效应的作用 ;天花粉热提取物对Balb/c鼠具有一定毒副作用 ,但小鼠耐受良好 ,并对病毒感染小鼠具有一定保护作用 ;天花粉热提取物可作用于病毒的吸附和穿入过程。 结论天花粉热提取物具有抗病毒的临床应用潜力。

长春地区儿童感染柯萨奇B组病毒的流行病学调查分析

目的:了解长春地区1995～2004年间儿童病毒性心肌炎患者柯萨奇B组病毒感染的状况。方法:应用ELISA法检测临床拟诊断为病毒性心肌炎的患者血清中的柯萨奇B组病毒抗体IgM。结果:儿童病毒性心肌炎患者中柯萨奇B组病毒的感染率为67·3%,健康对照组的感染率为13·6%;成人病毒性心肌炎患者中柯萨奇B组病毒的感染率为59·51%,健康对照组的感染率为12·54%。结论:不论是病毒性心肌炎组还是对照组,儿童的感染率明显高于成年人,说明儿童较成人易于感染病毒。

哮喘儿柯萨奇B组病毒感染对IgE的影响

目的 :探讨哮喘儿柯萨奇B组病毒 (CVB)感染对IgE的影响。方法 :4 0例哮喘儿 ,年龄 3～ 12岁 ;肺炎儿4 9例作为对照组 ,年龄 2～ 12岁。以ELISA法检测CVB ,以比浊法测定血清IgE。结果 :CVB感染率 :哮喘感染率为 6 2 .5 0 % (2 5 / 4 0 ) ,肺炎感染率 4 0 .82 % (2 0 / 4 9) ,哮喘儿的CVB感染率高于同期住院肺炎儿 (P <0 .0 5 ) ;哮喘儿的IgE水平明显高于肺炎组 (P <0 .0 5 ) ;有CVB感染的哮喘儿 2 5例 ,IgE水平 (6 4 9.0 6 4±394 .5 5 0 )IU/ml;无CVB感染的哮喘儿 15例 ,IgE水平 (35 3.80 0± 2 5 5 .94 2 )IU/ml,两者比较有明显的差异 (P<0 .0 5 )。有CVB感染的肺炎 10例 ,IgE水平 (30 0 .818± 2 91.12 8)IU/ml;无CVB感染的哮喘儿 13例 ,IgE水平 (2 0 9.84 5± 2 2 1.84 9)IU/ml,两者比较无差异 (P >0 .0 5 )。但CVB的阳性效价与IgE水平无线性相关关系。结论 :在小儿哮喘中有高的CVB感染率 ,并与哮喘儿的IgE变化有明显的关联。在哮喘病儿要重视预防CVB感染。

病毒性心肌炎时柯萨奇B组病毒抗体、T细胞亚群及红细胞免疫检测结果观察

本文对79例急性期病毒性心肌炎患儿检测COXB-IgM,其中37例检测T细胞亚群CD3、CD4、CD8、CD4/CD8,18例测红细胞免疫E-C3_b,RBC-IC,结果显示:79例心肌炎患儿中49例COXB-IgM阳性,与对照组相比有极显著性差异。心肌炎患儿CD8增高明显,CD4/CD8显著降低,T细胞亚群的改变与病毒感染有关。红细胞C3_b受体阳性率明显提高,存在细胞免疫功能异常及免疫调节功能紊乱。

柯萨奇B组病毒的RACE扩增与序列分析

目的探讨3'RACE(rapidamplificationofcDNAends)技术检测柯萨奇B组病毒(CVB)的可行性,并建立相应的实验检测方法。方法首先自行设计柯萨奇B组病毒6个型别病毒基因组的一条通用引物sp1;然后从柯萨奇病毒(CVB1￣CVB6)感染的Hela细胞,提取总RNA,用引物sp1结合OligodT进行3'RACE扩增,将产物克隆到pGEM-T载体上,挑取阳性菌落进行序列测定,与标准株进行同源性比对。结果获得了柯萨奇B组病毒6个型别的3'末端扩增产物及其核苷酸序列,同源性分析的结果显示扩增毒株与标准株之间的核苷酸同源性在95%￣99%之间,氨基酸同源性在98%￣100%之间。结论设计的引物“sp1”是柯萨奇B组病毒6个型别病毒基因组的一条通用引物;该引物结合OligodT进行的3'RACE扩增可用于柯萨奇B组病毒的检测。

小儿病毒性心肌炎与柯萨奇B组病毒抗体的关系探讨

目的探讨柯萨奇 Ｂ组病毒抗体ＩｇＭ测定在心肌炎病原学诊断和临床诊断中的意义。方法１９９６～１９９８年儿科住院病人７０例，分为心肌炎组２０例，疑似心肌炎组２５例，对照组２５例。用间接酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）测定柯萨奇Ｂ组病毒抗体ＩｇＭ和ＩｇＧ。结果柯萨奇Ｂ组病毒抗体ＩｇＭ阳性心肌炎组１１例（５５％），疑似心肌炎组１１例（４４％），对照组１１例（４４％），经统计学处理，其差别无显著性意义。结论用ＥＬＩＳＡ法测定柯萨奇Ｂ组病毒抗体ＩｇＭ，阳性提示有柯萨奇Ｂ组病毒感染，对心肌炎患儿可以作出病因和病原学诊断，但不能以此作为临床诊断心肌炎的依据。

2型糖尿病与柯萨奇B组病毒感染及IL-6、TNF-α的相关性

目的探讨2型糖尿病(T2DM)与柯萨奇B组病毒感染关系,分析T2DM并柯萨奇B(CoxB)组病毒感染患者血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素6(IL-6)的水平意义。方法随机收集40例T2DM及38例健康对照组,检测CoxBIgM、CoxB中和抗体,测定IL-6、TNF-α、空腹胰岛素(FINS)、血糖(BG),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),比较上述指标在糖尿病患者与正常人群之间、T2DM并柯萨奇B组病毒感染与无柯萨奇B组病毒感染的T2DM的差异,分析TNF-α、IL-6与胰岛素抵抗的关系。结果T2DM患者中CoxBIgM、CoxB中和抗体明显高于对照组;T2DM并CoxB感染患者BG、HOMA-IR、TNF-α、IL-6明显高于无CoxB感染的T2DM。结论CoxB感染在T2DM的发生发展有一定作用,可能与TNF-α、IL-6作用相关。

儿童呼吸道柯萨奇B组病毒感染94例

对161例住院的呼吸道感染患儿同时检测CVB－Ag和CVB－IgM，结果发现阳性者94例，其中CVB－Ag阳性率30.43％（49/161），CVB-IgM阳性率45．96％（74/161），29例两者均阳性。3组平均发病天数分别为4．2±2.5、15.7±8．2和8.1±3．2，前组分别与后2组相比有显著差异（P＜0.01和P＜0．05）。结果表明，CVB是儿童呼吸道感染的常见病原体；将CVB－Ag和CVB－IgM联合检测，可提高CVB感染的检出率。

柯萨奇B组病毒感染与扩张型心肌病发病关系的研究

为探讨柯萨奇B组病毒 (CoxsackievirusgroupB ,CBV)与扩张型心肌病 (dilatedcardiomyopathy ,DCM )发病的关系 ,应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)及酶联免疫吸附试验(ELISA)检查 39例扩张型心肌病患者 (DCM组 )外周血中CBV RNA、血清中CBV IgM。结果表明 ,DCM组外周血CBV RNA ,血清中CBV IgM阳性率分别为 41 0 2 %、30 76 % ,对照组分别为 7 6 % ,2 5 6 % ,两组比较差别有显著性意义 (P <0 0 5 )。结果提示 ,柯萨奇B组病毒感染和 (或 )持续感染是引起扩张型心肌病的重要原因。

柯萨奇B组病毒所致神经系统病变临床探讨

目的柯萨奇B组病毒（CoxsackieBvirusesCBV）所致神经系统病变目前报道较少，其实并非少见。主要因其感染后多系统损害症状复杂，很难使人们确诊为神经系统病变，如不早期确诊及时治疗，个别病人可导致失明或致残。方法所有可疑本病患者均经CBV抗体IgM、IgGI－Ⅳ型测定，采用酶联免疫吸附试验（ELISA），用（CBVI－Ⅳ）抗原分别检查患者血清中的抗体（包括IgM和IgG）IgMI：100·IgG1；800或1：1600视为阳性。结果9例病人IgM1：100、IgG1：1600阳性，5例IgM（－）、IgG1：1600阳性确诊为柯萨奇B组病毒感染。结论以上病人均给抗病毒和脑细胞活化剂治疗一个月，临床体征消失，头颅CT扫描转正常。临床实践证明病原学血清诊断是唯一先决条件，病毒特异性抗体检测已是公认的一种可靠快速可取的诊断方法。

潜、慢型克山病患者柯萨奇B组病毒特异性IgM、IgG的检测

目的 了解柯萨奇B组病毒 (CoxB)感染与克山病的相关关系。方法 采用间接酶联免疫吸附法对四川省克山病病区 30例潜、慢型克山病患者血清中CoxB1～ 6 IgM和CoxB1～ 6 IgG进行检测 ,同时选取非病区 10名健康者作对照。结果 ①潜、慢型克山病组血清CoxB1～ 6 IgM抗体阳性率 (33.3 % )明显高于非病区健康对照组 (P <0 .0 5 )。②潜、慢型克山病组血清CoxB1～ 6 IgG抗体阳性率与非病区健康对照组差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 病区潜、慢型克山病患者有CoxB感染存在。