高糖高脂微环境中NFKB1基因缺失突变调控线粒体分裂增加内皮细胞凋亡

目的探讨B细胞κ轻肽基因增强子核因子1(NFKB1)基因启动子区-94位点ATTG插入/缺失突变对高糖高脂微环境诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的影响及其潜在机制。方法建立NFKB1不同基因型原代HUVEC细胞的高糖高脂模型,采用Annexin-V-FLUOS染色检测细胞凋亡,Mito Tracker染色后通过激光共聚焦显微镜观察线粒体形态,Western blot检测核因子κB(NF-κB)信号通路中p50、p65蛋白,线粒体分裂相关蛋白Drp1、Drp1-s637、Drp1-s616和Fis1,线粒体融合相关蛋白Mfn1、Mfn2和Opa1,以及凋亡相关蛋白细胞色素C(CytC)。结果高糖高脂诱导原代HUVEC凋亡显著增加,与Ⅱ型细胞相比,DD型细胞凋亡指数更高;线粒体过度分裂成碎片状;DD型细胞中NF-κB通路中关键蛋白p50表达明显降低,线粒体融合相关蛋白Mfn2表达降低,线粒体分裂动力相关蛋白Drp1-s616磷酸化增加,CytC表达增加。结论NFKB1基因缺失突变可能是DD型HUVEC更容易受到高糖高脂微环境损伤的重要原因,其潜在的机制可能与线粒体过度分裂相关。

IKBKB基因敲除对胃癌细胞NLRC5、NF-κB表达以及生物学功能的影响

目的:探究IKBKB基因在胃癌细胞中的表达水平与NLRC5、NF-κB的作用关系,明确其对胃癌细胞生物学功能影响。方法:采用pLenti-IKBKB-sgRNA基因敲除质粒直接对人胃癌SGC-7901细胞系进行转染,应用免疫印迹试验(western blot,WB)检测单克隆细胞株中IKBKB基因敲除的效果,以及NLRC5、NF-κB的表达水平。划痕实验和Transwell迁移实验检测单克隆细胞的迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。成瘤实验观察单克隆细胞对瘤体生长的影响。在临床胃癌组织和癌旁组织中采用免疫组化染色评估NLRC5、NF-κB、IKBKB的表达状态。明确IKBKB与NLRC5、NF-κB的相关性以及临床诊断价值。结果:敲除IKBKB基因后人胃癌SGC-7901细胞中NLRC5、NF-κB的表达水平显著降低,细胞迁移和侵袭能力减弱。细胞发生G1期阻滞,降低了SGC-79013细胞增殖能力,细胞总凋亡率显著上升。IKBKB敲除后NLRC5、NF-κB表达水平下调影响瘤体的生长发育。NLRC5、NF-κB、IKBKB在胃癌组织中表达水平高于癌旁组织,NLRC5、NF-κB与IKBKB的表达水平呈正相关。IKBKB、NLRC5、NF-κB三者联合诊断胃癌AUC为0.921(0.876~0.967)。结论:IKBKB在胃癌细胞与NLRC5、NF-κB存在相关作用关系,协同促进胃癌的发生和发展。