增加B细胞异位基因2蛋白表达抑制结肠癌细胞的增殖与转移

目的通过增加B细胞异位基因2（BTG2）蛋白表达水平的方法，抑制结肠癌细胞的增殖和转移。方法采用Western blot法检测正常人肠上皮细胞HIEC和结肠癌细胞SW620、HT-29、LS174T中BTG2蛋白的表达水平。采用免疫组织化学方法检测40例正常结肠上皮、40例结肠腺瘤和40例结肠癌组织中BTG2蛋白的表达情况。将含BTG2基因全长序列的质粒转染结肠癌SW620细胞，采用四甲基偶氮唑蓝（MTr）法绘制细胞生长曲线，免疫荧光方法检测Ki-67蛋白表达，划痕实验和Transwell双室培养体系检测结肠癌SW620细胞的迁移能力，鼠尾胶Matrigel 3D培养体系检测SW620细胞伪足生长情况。结果Western blot检测结果显示，正常人肠上皮细胞HIEC、结肠癌细胞SW620、HT-29和LS174T中BTG2蛋白相对表达水平分别为0．83±0．12、0．18±0．04、0．20±0．05和0．36±0．07。免疫组织化学方法检测结果显示，BTG2蛋白在正常结肠组织、结肠腺瘤组织和结肠癌组织中的阳性表达率分别为82．5％（33／40）、77．5％（31／40）和17．5％（7／40），组间差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫荧光方法检测结果显示，对照组、空载质粒组和BTG2转染组中Ki-67阳性率分别为（76．2±8．0）％、（81．4±9．7）％和（50．1±7．1）％，组间差异有统计学意义（P〈0．05）。划痕实验显示，对照组、空载质粒组和BTG2转染组SW620细胞两侧间的距离分别为（79．27±11．24）μm、（80．65±12．17）μm和（124．77±19．63）μm，组间差异有统计学意义（P〈0．05）。Transwell实验结果显示，对照组、空载质粒组和BTG2转染组SW620细胞的迁移率分别为（78．5±13．1）％、（73．2±12．9）％和（47．4±9．1）％，组间差异有统计学意义（P〈0．05）。经BTG2基因转染的SW620细胞克隆球伪足数量减少，延展性较差。结论BTG2基因参与结肠癌细胞的增殖和转移，有效恢复BTG2蛋白功能，有望成为结肠癌基因治疗的方法选择之一。

重组细胞因子基因衍生蛋白与干扰素α-2b分别联合恩替卡韦治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者疗效研究

目的观察比较应用重组细胞因子基因衍生蛋白或干扰素α-2b分别联合恩替卡韦治疗血清HBeAg阳性的慢性乙型肝炎(CHB)患者的疗效.方法2019年3月~2021年3月我院诊治的65例血清HBeAg阳性的CHB患者被分成两组,分别给予干扰素α-2b联合恩替卡韦治疗或重组细胞因子基因衍生蛋白联合恩替卡韦治疗48 w.常规检测血清生化学、血清学和病毒学指标.结果在治疗12 w末,恩替卡韦联合重组细胞因子基因衍生蛋白治疗组血清HBeAg转阴率和HBeAg血清转换率分别为34.4%和25.0%,均显著高于恩替卡韦联合干扰素α-2b治疗组的9.1%和6.1%,差异有统计学意义(P<0.05);在治疗48 w末,恩替卡韦联合重组细胞因子基因衍生蛋白治疗组血清ALT复常率、血清HBeAg转阴率和HBeAg血清转换率分别为87.5%、62.5%和40.6%,均显著高于恩替卡韦联合干扰素α-2b治疗组的78.8%、30.3%和18.2%,差异有统计学意义(P<0.05);在治疗期间,联合干扰素治疗组乏力和发热头痛发生率分别为21.2%和84.9%,显著高于联合衍生蛋白治疗组的3.1%和3.1%(P<0.05),而两组中性粒细胞减少、血小板减少、食欲下降和低钙血症等不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论相比于干扰素α-2b联合恩替卡韦,应用重组细胞因子基因衍生蛋白联合恩替卡韦治疗血清HBeAg阳性的CHB患者能够获得更好的血清学转换率和较小的不良反应,值得进一步观察研究.

骨形态发生蛋白4诱导下骨骼肌内异位骨化的细胞来源

背景:骨骼肌异位骨化是临床上严重的并发症。对于骨骼肌异位骨化而言,其参与成骨过程中的细胞仍不明确。目的:观察肌细胞及筋膜细胞以及内皮细胞在骨肌中异位骨化过程中的参与情况,观察骨形态发生蛋白4诱导下骨骼肌内异位骨化的细胞来源。方法:培养C2C12细胞和诱导培养基数天下C 2 C 12细胞形成的肌管,将质量浓度500 ng/mL骨形态发生蛋白4分别加入培养基后,显微镜下观察处理10 d内C2C12细胞和肌管是否继续增殖;按不同比例共培养大鼠肌细胞(L6)和人成纤维源性细胞(fibroblast-derived cells,FDC),通过番红O染色和阿尔新蓝染色研究上述细胞在质量浓度500 ng/mL的骨形态发生蛋白4和质量浓度10 ng/mL的转化生长因子β3处理下21 d内成骨和成软骨分化潜力。使用转基因动物FVB/N-TgN(TIE2-LacZ)182Sato小鼠,通过在基因鼠大腿肌间隙植入含有15μL的腺相关病毒-骨形态发生蛋白4(5×1010 PFU/mL)10 d及14 d,再通过X-gal染色来观察异化骨中有无新血管内皮生成。结果与结论:①骨形态发生蛋白4导致肌束退化并增加C2C12细胞增殖。与其他组相比,FDC组具有较高的阿尔新蓝和番红O染色面积(P<0.05)和较低碱性磷酸酶染色面积(P<0.05);而L6组和其他组相比具有更大的碱性磷酸酶染色面积(P<0.05),但阿尔新蓝和番红O染色面积较小(P<0.05)。②将腺相关病毒-骨形态发生蛋白4吸附的明胶海绵移植到FVB/N-TgN(TIE2-LacZ)182Sato小鼠中会导致异位骨化。③X-gal染色结果显示,在软骨细胞及异化骨中无明显染色,提示Tie2+内皮细胞不参与异位骨化的形成。④结果证实,在腺相关病毒-骨形态发生蛋白4诱导的骨骼肌异位软骨化过程中,成纤维细胞是软骨细胞的主要细胞来源,而肌源性细胞是成骨细胞的主要来源。Tie2+内皮细胞可能不是软骨和骨的细胞来源。

miR-10b介导NKG2D调节脑胶质瘤细胞免疫效应的实验研究

目的:观察微小核糖核酸-10b(miR-10b)对脑胶质瘤细胞免疫效应的调节作用并探讨其作用机制。方法:取人脑胶质瘤细胞U251进行培养和传代,获得处于对数生长期的细胞。按照1.0×105个/ml浓度制备细胞悬液,并设置对照组、过表达组、低表达组、空白组,每组6个复孔。对照组、过表达组、低表达组分别采用脂质体转染法转染阴性对照、miR-10b模拟物、miR-10b抑制剂,空白组予以等量无菌生理盐水。分离和培养1例健康志愿者外周血自然杀伤(NK)细胞。MTT法检测不同效靶比时NK细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测各组NK细胞表面NK细胞激活受体(NKG2D)表达,并检测各组人脑胶质瘤细胞U251表面主要组织相容性复合物Ⅰ链相关基因A(MICA)、UL16结合蛋白2(ULBP2)、UL16结合蛋白3(ULBP3)表达。结果:对照组、过表达组、低表达组转染效率分别为(93.55±2.05)%、(95.67±3.14)%、(94.18±3.26)%;与对照组和空白组相比,过表达组miR-10b表达升高,低表达组miR-10b表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组和空白组miR-10b表达差异无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均降低、NKG2D表达降低,低表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均增高、NKG2D表达增高,差异均有统计学意义(P<0.05),各组NK细胞杀伤活性均随效靶比增加而增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组相比,相同效靶比NK细胞杀伤活性、NKG2D表达差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均降低,低表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:抑制miR-10b表达能够增加NK细胞表面NKG2D和人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达,增强NK细胞对人脑胶质瘤细胞U251的杀伤活性。

严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)刺突蛋白的B细胞及T细胞抗原表位的生物信息学分析

目的使用生物信息学方法预测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)刺突蛋白(S蛋白)的结构特点,并预测可能的B细胞和T细胞表位。方法从NCBI数据库中获取SARS-CoV-2的S蛋白氨基酸序列,通过蛋白质基本性质分析工具ProtParam分析S蛋白的理化性质;利用综合性序列工具软件Lasergene和蛋白质二级结构分析软件SOMPA分析S蛋白二级结构;蛋白质同源物/类似物Y识别引擎Phyre2和分子图像观察软件Rasmol构建并分析S蛋白三级结构;B细胞表位预测工具ABCpred、BepiPred和BcePred预测S蛋白的B细胞抗原表位;利用免疫表位数据库IEDB预测S蛋白的T细胞抗原表位。结果S蛋白由1273个氨基酸组成,理论等电点为6.24,原子组成为C_(6336)H_(9770)N_(1656)O_(1894)S_(54),属于稳定亲水性蛋白。Lasergene软件的Gramier-Robson方法预测显示:α螺旋占23.5%、β折叠占53.7%、转角区域占14.9%、无规则卷曲占8.33%;Lasergene软件的Chou-Fasman方法预测显示:α螺旋占20.9%,β折叠占35.5%,β转角占35.2%。同时,使用SOPMA在线服务工具分析S蛋白二级结构,其中α螺旋占28.59%,延长链占23.25%,β转角占3.38%,无规则卷曲占44.78%。ABCpred、BepiPred和BcePred分别预测S蛋白的潜在B细胞抗原表位数量为5个、11个、6个。IEDB预测的CD8^(+)T细胞表位和CD4^(+)T细胞表位结果中分别选择各人类白细胞抗原(HLA)基因型亲和力最好的5个表位。结论采用生物信息学方法预测SARS-CoV-2的S蛋白具有多个B细胞及T细胞抗原表位。

Pre－S_（2）蛋白B细胞表位的精细特异性

采用我室建立的短肽点免疫结合试验确定Ｐｒｅ－Ｓ＿（２）蛋白Ｂ细胞表位的精细特异性。结果发现Ｐｒｅ－Ｓ＿（２）蛋白的Ｂ细胞识别部位（１４～２４）可进一步区分为两个部分交叠的表位：１４～２１和１８～２４，从而绘出了Ｐｒｅ－Ｓ＿（２）蛋白Ｂ细胞表位图谱。这对设计新一代疫苗及诊断试剂有指导意义。

大肠癌中B细胞异位基因-2的异常表达及其抑癌机制

目的研究B细胞异位基因-2(BTG2)在结肠癌中的表达特点及其抑癌机制。方法采用免疫组织化学方法检测BTG2在100例大肠癌、40例大肠腺瘤标本和40例正常大肠组织标本中的表达水平;分析BTG2的表达与肿瘤临床病理特征间的关系;Western blot方法检测结肠癌组织中BTG2、P21、c-Myc、细胞周期素D1(cyclin D1)、细胞周期素E(cyclin E)、P53、细胞周期依赖蛋白激酶-2(CDK2)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的表达水平,分析BTG2潜在的抑癌机制,并对患者进行随访。结果 BTG2在大肠癌中的表达率为43%,显著低于正常大肠组织和大肠腺瘤中的表达率,且与肿瘤分化程度、浸润深度、Dukes分期、淋巴转移有关,与患者的性别、年龄、大肠癌的部位、肿瘤组织类型无关。Western blot结果显示BTG2、c-Myc、cyclin D1、cyclin E、CDK2、MMP-2、MMP-9、P53和P21在不同肿瘤分化程度、浸润深度及有无淋巴结转移组间差异有统计学意义,且BTG2蛋白表达水平与c-Myc、cyclin D1、cyclin E、CDK2、MMP-2、MMP-9呈显著负相关,与P53和P21呈正相关。随访结果显示BTG2表达水平与患者预后密切相关。结论 BTG2表达减少或缺失在大肠癌发生及演进过程中起重要作用,其分子机制可能与一些关键细胞周期因子和某些抑癌基因作用失调有关。

鸡传染性支气管炎病毒陕西分离株M蛋白基因的变异及其B细胞表位稳定性

以陕西8株鸡传染性支气管炎病毒（AIBV）分离株M蛋白的基因序列为基础，应用DNAStar软件中的MegAlign模块对其进行了同源性分析；用Kyte-Doolittle方法、Jameson—Wolf方法、Karplus—Schulz方法、Plot—Emini方法和Garnier-Robson方法综合预测了其中4株代表毒株的M蛋白B细胞抗原表位和二级结构。结果，8株AIBV的M蛋白主要在10～40aa和90～175aa处存在无规律的点突变，与参考毒株H52、M41、SAIB20、LX和Gray的M蛋白的核苷酸序列和预测的氨基酸序列的同源性分别介于87．4％～99．5％和96．3％～99．5％；分离株间的核苷酸序列和预测的氨基酸序列同源性分别介于91．8％～99．8％和95．4％～100％。4株代表株的M蛋白B细胞优势抗原表位都在159～164aa和181～193aa肽段区（这2个区域都包含了无规则卷曲和β-转角结构）或其附近。结果表明，AIBV分离株的M蛋白基因相对保守，只存在无规律的点突变，该变异对AIBVM蛋白B细胞表位的稳定性无影响。

猪圆环病毒2型去除NLS的cap蛋白基因的克隆与B细胞抗原表位的预测

本试验克隆了猪圆环病毒2型去除核定位信号的ORF2基因,并对其B细胞抗原表位进行预测。根据新分离毒株PCV2-871[1]的已知序列设计一对引物,PCR扩增其去掉核定位信号的ORF2基因,命名为pcv-581,利用引入的双酶切位点BamHⅠ/HindⅢ将其连接到表达载体pQE-32中,命名为pQE-pcv581转化大肠杆菌M15中,同时采用DNAStar软件对去除NLS的ORF2基因进行B细胞抗原表位的预测,为单克隆抗体的制备和抗原表位的鉴定奠定基础。

大鼠马钱子碱中毒心肌细胞B-淋巴细胞／白血病2基因和半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶的表达

目的：研究马钱子碱中毒后不同时间段内心肌细胞B-淋巴细胞/白血病2基因（Bcl-2）和半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶（Caspase-3）表达的病理变化.方法：用20只Wistar大鼠为正常对照组,40只Wistar大鼠复制马钱子碱中毒模型,用免疫组织化学技术检测中毒后大鼠心肌细胞Bcl-2与Caspase-3蛋白的表达,并用图像分析对检测结果进行分析.结果：大鼠在马钱子碱中毒低、中剂量后的1～7d不同时间段内,心肌细胞Bcl-2与Caspase-3蛋白表达均高于正常对照组,差异有统计学意义.结论：Bcl-2和Caspase-3参与了马钱子碱中毒的病理生理过程.

卵巢子宫内膜异位囊肿组织B淋巴细胞瘤-2相关X、B淋巴细胞瘤-2蛋白的表达及其与超声引导下无水乙醇介入治疗术后复发的关系分析

目的检测卵巢子宫内膜异位囊肿组织B淋巴细胞瘤-2相关X(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达,并分析其与超声引导下无水乙醇介入治疗术后复发的关系。方法回顾性选取2016年1月至2017年6月于徐州市中心医院就诊的215例卵巢子宫内膜异位囊肿患者的临床资料纳入研究组,实施超声引导下无水乙醇介入治疗并于术中留取患者的卵巢子宫内膜异位囊肿组织;另选取同期同一医院就诊的206例子宫肌瘤患者的临床资料纳入对照组,均于行手术治疗时经活检穿刺术留取患者的子宫内膜组织。采用免疫组化法检测两组患者组织中Bax、Bcl-2蛋白的表达并进行比较;分析卵巢子宫内膜异位囊肿组织中Bax、Bcl-2蛋白表达与术后复发的关系。结果研究组增生期、分泌期Bax蛋白阳性表达率及总阳性表达率均低于对照组,Bcl-2蛋白阳性表达率及总阳性表达率均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);研究组术后复发率为22.33%,复发患者囊壁厚度≥0.3cm、入院时血清糖类抗原125(CA125)阳性、术中无水乙醇留置时间<15min、Bax蛋白阴性表达、Bcl-2蛋白阳性表达占比均高于未复发患者,差异具有统计学意义(P<0.05),且均为研究组复发的独立危险因素(P<0.05)。结论卵巢子宫内膜异位囊肿组织中Bax蛋白阳性表达率低,Bcl-2蛋白阳性表达率高,二者与患者行超声引导下无水乙醇介入治疗术后复发有关。

B细胞异位基因2在子宫内膜癌中的表达及意义

目的观察子宫内膜癌组织中B细胞异位基因2(Bcelltranslocation gene 2,BTG2)的表达变化,分析其表达变化与子宫内膜癌的临床病理联系。方法采用qRT-PCR方法检测40对子宫内膜癌(癌组)和癌旁组织(癌旁组)中的mBTG2的表达水平,比较2组之间的差异。应用Western-blot方法检测BTG2的蛋白表达水平,比较2组之间的差异。用免疫组化方法分别检测98例子宫内膜癌患者(试验组)和80例子宫内膜良性病变患者组织(对照组)中BTG2蛋白表达水平,比较2组之间的差异。根据BTG2蛋白表达水平将试验组98例分为2组:低表达组[弱表达(+)和中表达(++)]和高表达组[强表达(+++)],分析BTG2蛋白表达水平与临床病理的关系。结果癌组和癌旁组mBTG2的相对表达水平分别为(0.24±0.13)、(0.51±0.22),癌组的表达水平明显低于癌旁组,差异有统计学意义(P<0.01)。癌组及癌旁组BTG2的蛋白相对表达水平分别为(0.99±0.08)、(2.16±0.12),癌组的相对表达量明显低于癌旁组,差异有统计学意义(P<0.01)。免疫组织化学实验结果中试验组:低表达78例(79.6%),高表达20例(20.4%);对照组:低表达24例(30.0%),高表达56例(70.0%),2组比较差异有统计学意义(P<0.01)。在98例癌组织中,BTG2蛋白表达水平与临床分期、组织分级、淋巴血管浸润、淋巴转移相关,与年龄、肌层浸润深度、组织类型无关。结论BTG2在子宫内膜癌组织中呈低表达,并与部分临床病理指标相关,BTG2可能参与了子宫内膜癌的疾病进展,有可能作为子宫内膜癌的疾病监测生物学指标及生物治疗的靶点。

慢性阻塞性肺疾病患者血清HMGB1、TLR4、sST2及细胞因子水平与病情严重程度和肺功能的关系

目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)患者血清高迁移率族蛋白(HMG)B1、Toll样受体(TLR)4、可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)及细胞因子水平与病情严重程度和肺功能的关系。方法 选择慢阻肺患者100例,依据病情严重程度分为急性加重组(57例)与稳定组(43例);另选择健康体检者48例作为对照组。运用酶联免疫吸附试验测定血清HMGB1、TLR4、sST2水平及血清白细胞介素(IL)-6、IL-33和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;运用肺功能仪测定第1秒用力呼气容积/用力肺活量(FEV1/FVC)和FEV1占预计值百分比(FEV1%)。比较3组血清HMGB1、TLR4、sST2水平,细胞因子水平和肺功能变化;采用Pearson分析血清HMGB1、TLR4、sST2和细胞因子与病情严重程度相关性;采用Pearson分析血清HMGB1、TLR4、sST2和细胞因子与肺功能相关性;采用多因素Logistic回归分析血清HMGB1、TLR4、sST2和细胞因子与慢阻肺关系。结果 急性加重组和稳定组血清HMGB1、TLR4、sST2水平显著高于对照组(P<0.05);且急性加重组显著高于稳定组(P<0.05)。急性加重组和稳定组血清IL-6、IL-33和TNF-α水平显著高于对照组(P<0.05);且急性加重组显著高于稳定组(P<0.05)。急性加重组和稳定组FEV1/FVC和FEV1%显著低于对照组(P<0.05);且急性加重组显著低于稳定组(P<0.001);经Pearson分析,血清HMGB1、TLR4、sST2、IL-6、IL-33和TNF-α与病情严重程度呈线性正相关(P<0.001);血清HMGB1、TLR4、sST2、IL-6、IL-33和TNF-α与FEV1/FVC和FEV1%呈线性负相关(P<0.05)。经多因素Logistic回归分析,HMGB1、TLR4、sST2、IL-6、IL-33和TNF-α为慢阻肺影响因素。结论 慢阻肺患者血清HMGB1、TLR4、sST2水平升高,细胞因子IL-6、IL-33和TNF-α水平升高,且血清HMGB1、TLR4、sST2和细胞因子与病情严重程度呈正相关而与肺功能呈负相关。

BTG2、ARL2在非小细胞肺癌中的表达及其病理分型的相关性

目的探讨ADP核糖基化样因子2(ARL2)、B细胞异位基因2(BTG2)蛋白在非小细胞肺癌组织中表达水平及其病理分型相关性分析。方法选择2021年5月—2022年5月本院收治的60例非小细胞肺癌患者作为研究对象,共收集非小细胞肺癌的癌组织和癌旁正常组织标本60对,其中非小细胞肺癌的癌组织作为实验组,癌旁正常组织作为对照组。应用免疫组化方法分别检测非小细胞肺癌患者的癌组织和癌旁组织中ARL2蛋白和BTG2蛋白的表达水平。分析ARL2蛋白和BTG2蛋白的表达水平与非小细胞肺癌的临床病理分型相关性。结果实验组中ARL2蛋白表达阳性率为66.7%,,明显高于对照组的25.4%(P<0.05);实验组中BTG2蛋白表达阳性率为20.6%,明显低于对照组的71.4%(P<0.05)。ARL2、BTG2蛋白表达与患者年龄、性别无相关性,差异无统计学意义(P>0.05);而与肿瘤TNM分期、淋巴结转移、肿瘤最大直径、复发率、病理学分级、复发相关性密切,差异具有统计学意义(P<0.05)。统计患者的1年生存率为47.6%(29/60),其中ARL2阳性生存率为31.0%(6/20),ARL2阴性生存率为81.0%(30/40);BTG2阳性生存率为96.1%(25/26),BTG2阴性生存率为35.0%(11/34);ARL2阴性、BTG2阳性非小细胞肺癌患者生存率显著增高(P<0.001)。结论非小细胞肺癌患者的ARL2蛋白表达明显升高,BTG2蛋白表达水平明显降低,证实了ARL2水平的高表达和BTG2的低表达,对非小细胞肺癌患者的ARL2阳性蛋白、BTG2阴性表达与病理分型有着十分密切的相关性,值得未来在预后方面进一步研究探讨。

B细胞异位基因2在喉癌组织中的表达及临床意义

目的探讨喉癌组织中B细胞异位基因2(B cell translocation gene 2,BTG2)的表达与患者临床病理特征和预后的关系。方法收集川北医学院附属医院2015年1月~2018年8月手术切除的喉癌组织及癌旁组织各76例,采用免疫组化SP法检测喉癌组织及癌旁组织中BTG2的表达情况,并分析BTG2与喉癌临床病理因素及预后的关系。结果BTG2在喉癌组织及对应癌旁组织中均为弥漫性胞浆表达。喉癌组织中BTG2的阳性率为38.16%(29/76),低于癌旁组织中BTG2的阳性率90.79%(69/76),差异有统计学意义(χ2=45.957,P<0.001);BTG2表达与年龄(χ2=4.112,P=0.043)、分化程度(χ2=5.824,P=0.043)、颈部淋巴结转移(χ2=4.786,P=0.029)和复发(χ2=4.461,P=0.035)密切相关。Kaplan-Meier生存曲线显示BTG2阳性表达组生存率明显高于阴性表达组,单因素Log-rank检验分析显示临床分期、颈部淋巴结转移和BTG2表达与患者预后相关,进一步行多因素Cox风险比例回归模型分析发现颈部淋巴结转移和BTG2表达水平是影响喉癌预后的独立因素。结论BTG2在喉癌组织中的表达显著低于癌旁组织,且其表达与喉癌患者的年龄、分化程度、颈部淋巴结转移、复发及预后密切相关。BTG2在喉癌的发生发展中可能发挥重要作用,该蛋白有望成为评估喉癌预后的潜在指标。

BCG HSP65-人HER-2/neuT细胞表位融合蛋白基因的扩增及序列分析

目的 :获得卡介苗热休克蛋白 6 5 (BCGHSP6 5 )与人HER 2 /neuT细胞表位 (GP2 )构成的融合蛋白 (BCGHSP6 5 GP2 )基因 ,并对其进行测序。方法 :从卡介苗结核杆菌中提取其基因组DNA ,设计一对寡核苷酸引物 ,采用聚合酶链反应 (PCR)获得BCGHSP6 5基因 ,再设计一对寡核苷酸引物 ,再次PCR ,获得BCGHSP6 5 GP2 基因 ,DNA序列分析BCGHSP6 5 GP2 基因。结果 :本实验采用两轮PCR方法获得的基因片段长度为 170 0bp ,DNA序列分析确证为编码BCGHSP6 5 GP2 融合蛋白的序列。结论 :采用PCR获得BCGHSP6 5 GP2 基因序列是正确的 。

中蜂囊状幼虫病毒LN-QY株VP_2结构蛋白的基因分析及B细胞抗原表位预测

目的预测中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)LN-QY株VP2蛋白的空间结构及其B细胞抗原表位。方法将已感染CSBV LN-QY株的RNA作为模板,进行RT-PCR扩增该毒株结构蛋白VP2基因,再与pMD18-T载体连接,之后转化大肠杆菌DH5α感受态,对经EcoRⅠ和BamH I双酶切鉴定为阳性的重组质粒进行测序,通过序列比对,获得LN-QY株VP2的核苷酸序列和推导的氨基酸序列,建立VP2结构蛋白的3D模型,在此基础上,应用DNAStar软件中的Protean模块综合分析结构蛋白的柔性区域、亲水性、表面可能性以及抗原指数等参数。结果 VP2结构蛋白的空间构象比较规则,其可能的B细胞抗原表位区域位于178-184,144-199,211-217氨基酸区段。结论本研究为CSBV LN-QY株VP2蛋白表位疫苗的设计以及血清诊断试剂盒的研制奠定了理论基础。

RECK、MMP-2、bcl-2蛋白在牙龈瘤患儿牙龈组织中的表达分析

目的 探讨RECK、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)蛋白在牙龈瘤患儿牙龈组织中的表达情况。方法 选取80例牙龈瘤患儿作为研究对象,所有患儿均行手术治疗,采集肿瘤组织及肿瘤旁健康牙龈组织,采用免疫组化SP法检测样本内RECK、MMP-2、bcl-2蛋白表达情况,比较肿瘤组织及健康牙龈组织中上述表达情况;并随访1年,分析RECK、MMP-2、bcl-2蛋白表达与其复发的关系。结果 肿瘤组织中RECK阳性率为36.25%,低于健康牙龈组织的77.50%,MMP-2阳性率、bcl-2蛋白阳性率分别为73.75%、67.50%,高于对照组的18.75%、22.50%,差异有统计学意义(P<0.05);80例患儿术后随访1年,共出现33例复发,复发率为41.25%(33/80);复发组RECK阳性率为15.15%,低于未复发组的51.06%,MMP-2阳性率、bcl-2蛋白阳性率为90.91%、93.94%,高于未复发组的61.70%、48.94%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RECK、MMP-2、bcl-2蛋白在牙龈瘤患儿牙龈组织内存在不同表达,RECK阳性表达率低,MMP-2、bcl-2蛋白表达偏高,其表达与复发存在密切关系,可为完善早期治疗工作提供一定指导。

SARS病毒基因组所编码的E蛋白的二级结构和B细胞表位预测

目的 预测SARS病毒E蛋白的B细胞表位和二级结构。方法 以SARS病毒基因组序列为基础 ,采用Gar nier Robson方法、Chou Fasman方法和Karplus Schultz方法预测E蛋白质的二级结构 ;用Kyte Doolittle方案预测蛋白质的亲水性 ;用Emini方案预测蛋白质的表面可能性 ;用Jameson Wolf方案预测氨基酸的抗原性指数。综合评判 ,预测SARS病毒E蛋白的B细胞表位。结果 在SARS病毒E蛋白N 端的第 1～ 6、13～ 19、39～ 4 3、4 7～ 6 4区段和第 73～ 76区段有 β 折叠中心 ;第 6～ 12区段和第 6 7～ 6 9区段可能形成转角或无规则卷曲 ,是柔性区域。E蛋白N端第 2～ 13区段和第 6 1～ 74区段为B细胞优势表位区域。结论 用多参数预测SARS病毒E蛋白的二级结构和B细胞表位 。

口蹄疫OA／58病毒株VP2蛋白结构模拟与B细胞抗原表位的分析

以口蹄疫病毒株0A／58RNA为模板，反转录并扩增目的eDNA，然后与pMD18-T载体连接并转化JM109菌株，提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和BarnHI，HindIII双酶切法鉴定。运用同源模建得到0A／58VP2蛋白三维空间结构，并结合理化性质、亲水性、可塑性和免疫原性进行分析，找出OA／58VP2蛋白的B细胞抗原表位。结果表明，0A／58VP2蛋白存在多个潜在的抗原表位，可能的蛋白质抗原表位区域：1～23，40～63，71～78，82～91，102～106，113～119，131～138，148～154，166～177，189～196，212～218。应用同源模建得到的OA／58VP2蛋白三维空间结构来预测其B细胞表位，为进一步研究0A／58vP2蛋白在引起易感宿主体液免疫应答方面提供了一种可视化的技术平台，并且为选择表达其他口蹄疫病毒株的VP2蛋白分子提供有参考价值的信息。