环状RNA ACAP2调节微小RNA-421与B细胞易位基因2轴对心肌梗死大鼠心肌损伤的影响

目的探讨环状RNA ACAP2(circACAP2)调节微小RNA(miR)-421/B细胞易位基因2(BTG2)轴对心肌梗死(MI)大鼠心肌损伤的影响。方法构建MI大鼠模型和H9c2细胞模型,将80只大鼠分为假手术组、MI组、小干扰RNA-阴性对照(si-NC)组、si-circACAP2组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-circACAP2组、pcDNA3.1-circACAP2+模拟物(mimic)NC组、pcDNA3.1-circACAP2+miR-421 mimic组,每组各10只。将缺氧H9c2细胞置于24孔板中,瞬时转染细胞,分为缺氧组、缺氧+si-NC组、缺氧+si-circACAP2组、缺氧+pcDNA3.1组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2+mimic NC组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2+miR-421 mimic组,另取正常培养的H9c2细胞作为对照组。检测大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、心肌梗死情况、心肌组织病理变化、circACAP2、miR-421、BTG2 mRNA表达情况、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性、H9c2细胞活力和凋亡、心肌组织BTG2蛋白表达、H9c2细胞BTG2蛋白表达。结果MI组circACAP2、BTG2 mRNA表达高于假手术组(1.84±0.21 vs 1.00±0.10,1.68±0.17 vs 1.00±0.10),miR-421表达低于假手术组(0.49±0.05 vs 1.00±0.11,P<0.05);与假手术组比较,MI组梗死面积、CK-MB、LDH活性升高,LVFS、LVEF降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-circACAP2组心肌损伤减轻,LVFS、LVEF升高,梗死面积、CK-MB、LDH活性降低(P<0.05);与缺氧+si-NC组比较,缺氧+si-circACAP2组细胞活力升高,凋亡率、CK-MB和LDH活性降低(P<0.05)。与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-circACAP2组心肌损伤加重,LVFS、LVEF降低,梗死面积、CK-MB、LDH活性升高(P<0.05);与缺氧+pcDNA3.1组比较,缺氧+pcDNA3.1-circACAP2组细胞活力降低,凋亡率、CK-MB、LDH活性升高(P<0.05)。结论circACAP2在MI大鼠和H9c2细胞中表达上调,沉默circACAP2可能通过调节miR-421/BTG2轴改善心脏功能,减少心肌损伤,提高心肌细胞活力。

B细胞易位基因1在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其对卵巢癌细胞株增殖和凋亡的影响

目的探讨B细胞易位基因1(BTG1)在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其对卵巢癌细胞株SKOV3增殖和凋亡的影响。方法采用RT-PCR和组织芯片免疫组化技术检测卵巢上皮性癌组织、卵巢交界性上皮性肿瘤组织、卵巢良性上皮性肿瘤组织和正常卵巢组织中BTG1 mRNA和蛋白的表达。构建Lv-BTG1-EGFP表达载体和psiLv-U6-BTG1 RNA干扰载体,分别转染SKOV3细胞,利用MTT法观察BTG1的表达状态对SKOV3细胞增殖的影响,Hoechst染色法检测BTG1对SKOV3细胞凋亡的影响。结果 BTG1在卵巢上皮性癌组织、卵巢交界性上皮性肿瘤组织、卵巢良性上皮性肿瘤组织和正常卵巢组织中的mRNA和蛋白表达水平呈递增趋势。BTG1的表达状态与卵巢上皮性癌患者的肿瘤临床分期、淋巴结转移等重要的临床病理参数相关。体外实验显示,上调BTG1表达可以抑制SKOV3细胞的增殖,促进其凋亡。结论 BTG1的表达下调可能参与卵巢上皮性肿瘤的发生、发展。

微小RNA-3677靶向调控B细胞易位基因1表达及对肝细胞癌细胞侵袭迁移的影响

目的探讨微小RNA-3677(miR-3677)对B细胞易位基因1(BTG1)的靶向调控作用及肝细胞癌(HCC)细胞HepG2侵袭和迁移的影响。方法采用脂质体Lipofectamine 2000向HepG2细胞转染miR-3677抑制剂(Inhibitor组)和阴性对照序列(NC组)并以未行转染的细胞为对照组,采用实时定量PCR(QPCR)检测miR-3677水平,划痕实验和Transwell实验分别检测划痕宽度和穿膜细胞数目,双荧光素酶报告基因实验验证miR-3677与BTG1的靶向关系,QPCR检测BTG1、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和信号转导和转录激活因子3(STAT3)的mRNA水平,Western blotting检测BTG1、MMP-9、STAT3和磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)的蛋白水平。结果QPCR结果显示Inhibitor组的miR-3677水平为0.241±0.059,低于对照组的1.012±0.123和NC组的1.147±0.168(P<0.05);Inhibitor组的穿膜细胞数和划痕相对宽度分别为(96.5±9.2)个和(62.15±3.29)%,均优于对照组的(174.5±12.9)个和(37.45±2.16)%及NC组的(181.6±16.4)个和(39.47±2.82)%,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-3677模拟物抑制了BTG1野生型3′端非翻译区的荧光素酶活性,而对突变型的无影响。与其余两组相比,Inhibitor组的BTG1表达水平升高,而MMP9和p-STAT3的水平降低(P<0.05)。结论下调miR-3677水平可抑制HCC细胞的迁移侵袭,该miRNA发挥癌基因的作用,可能与通过靶向BTG1以激活JAK/STAT3信号传导有关,为HCC提供一个新的潜在治疗靶点。

B细胞易位基因1在非小细胞肺癌中的表达及与预后的关系

目的:探讨B细胞易位基因1(BTG1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况及与预后的相关性。方法:采用免疫组织化学法检测不同临床病理参数NSCLC病人BTG1蛋白表达水平,绘制生存曲线分析BTG1与病人5年生存率之间的关系。结果:NSCLC组织中BTG1蛋白的阳性表达率为38.4%,BTG1蛋白表达阳性组与阴性组淋巴结转移率、病理分期、组织学分级差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.01);BTG1表达阳性组5年生存率高于阴性组(P<0.05);BTG1阳性与阴性病人生存曲线的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:检测BTG1的表达情况对判断NSCLC的预后存在一定的参考价值,BTG1阳性病人预后较好。

B细胞易位基因1在BGC823胃癌细胞株中的表达及其对细胞周期、凋亡及迁移的影响

目的检测B细胞易位基因(B-cell translocation gene 1,BTG1)在BGC823胃癌细胞中的过表达对其周期、凋亡及迁移的影响。方法采用脂质体法将pc DNA3.1-BTG1重组质粒转染细胞,经过筛选得到稳定表达细胞株后,分为含BTG1质粒组、空载体组和空白对照组,采用Western-blot检测BTG1蛋白在BGC823细胞株中的表达,采用流式细胞术及划痕实验观察BTG1对BGC823细胞周期、凋亡及迁移的影响。结果与空载体组、空白对照组相比,BTG1组蛋白表达增高(P<0.05);流式细胞术显示,BTG1组G2/M期细胞数明显高于其他组(21.38%、18.47%vs 8.57%、8.74%,P<0.05),同时早期凋亡和总凋亡率显著增高(3.41%、3.05%vs 1.32%、0.87%和6.12%、8.30%vs 3.17%、2.34%,P<0.05)。结论 BTG1高表达,诱导G2/M阻滞,抑制细胞增殖,提高凋亡率。

急性髓细胞白血病模型小鼠B细胞易位基因1和Ikaros家族锌指转录因子1表达水平及相关性分析

目的:探讨急性髓细胞白血病(AML)模型小鼠B细胞易位基因1(BTG1)和Ikaros家族锌指转录因子1(IKZF1)表达水平,并进行相关性分析。方法:36只小鼠随机等分为模型A组、模型B组和对照组。模型A组和模型B组分别经尾静脉注射HL60细胞1×10^(7)/只、5×10^(6)/只,对照组注射等量0.9%氯化钠溶液。采用Western blot检测骨髓组织BTG1和IKZF1蛋白相对表达水平,并与体重、红细胞、血小板及白细胞CD33阳性率进行相关性分析。结果:模型A组和模型B组小鼠在接种第7、14、28天的体重、血小板低于对照组,红细胞高于对照组(均P<0.05),但模型A组与模型B组上述指标比较无统计学差异(均P>0.05)。模型A组和模型B组接种第28天白细胞CD33阳性率高于对照组,BTG1和IKZF1蛋白相对表达水平低于对照组(均P<0.05),但模型A组与模型B组上述指标比较无统计学差异(均P>0.05)。Pearson相关性分析显示,AML小鼠BTG1、IKZF1蛋白相对表达水平与白血病CD33阳性率、体重、红细胞、血小板均存在相关性(均P<0.05)。结论:BTG1、IKZF1蛋白在AML模型小鼠呈高表达,且表达水平与小鼠体重、外周血及肿瘤浸润程度存在相关性。

B细胞易位基因2在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨B细胞易位基因2(BTG2)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及临床意义。方法:分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中BTG2 mRNA在ESCC组织及癌旁组织中的表达,受试者工作特征(ROC)曲线分析BTG2 mRNA表达量在预测ESCC患者疾病状态和放疗敏感性中的诊断价值;免疫组织化学检测我院184例ESCC患者癌组织标本BTG2蛋白表达,其中包括55例行根治性放疗术的ESCC患者,50例正常黏膜组织作为对照。分析BTG2蛋白表达情况与ESCC临床特征的关系。结果:与对照组比较,BTG2 mRNA在ESCC组织中表达下降(5.08±1.06 vs 5.91±1.29,t=2.387,P=0.019),与放疗敏感组患者比较,BTG2 mRNA在放疗抵抗的ESCC患者癌组织中表达下降(3.82±0.97 vs 5.44±0.73,t=4.935,P<0.001),ROC结果显示BTG2 mRNA在鉴别放疗敏感与放疗抵抗患者时特异性为95.65%,敏感性为75%(AUC=0.902,P<0.001);免疫组织化学结果显示ESCC组织中BTG2阳性表达(103/184)低于正常黏膜组织(42/50),差异有统计学意义(χ^(2)=13.10,P<0.001);BTG2表达在放疗敏感和放疗抵抗组织中的阳性表达率分别为57.9%(22/38)和23.5%(4/17),差异有统计学意义(χ^(2)=5.565,P=0.018);ESCC患者BTG2蛋白表达差异在不同性别、年龄、T分期及M分期中无统计学差异(P>0.05),与N分期(χ^(2)=4.134,P=0.042)及临床分期(χ^(2)=5.303,P=0.021)相关;单因素分析结果显示,肿瘤分级(HR=0.500,95%CI:0.317~0.790,P=0.003)、N分期(HR=0.275,95%CI:0.157~0.479,P=0.000)、M分期(HR=0.317,95%CI:0.151~0.665,P=0.002)、临床分期(HR=0.269,95%CI:0.167~0.434,P=0.000)及BTG2表达(HR=1.956,95%CI:1.242~3.079,P=0.003)与ESCC患者总生存(OS)有关;多因素分析结果显示,肿瘤分级(HR=0.613,95%CI:0.381~0.987,P=0.044)、N分期(HR=0.507,95%CI:0.259~0.991,P=0.047)、临床分期(HR=0.504,95%CI:0.278~0.916,P=0.025)及BTG2表达(HR=1.608,95%CI:1.011~2.558,P=0.045)影响ESCC患者的OS。结论:BTG2具有作为预测ESCC进展及放疗敏感性生物标记物的潜在价值,并且是影响ESCC患者总生存率的独立预后因素。

微RNA18与B细胞易位基因2在肝癌细胞中差异表达相关性的研究

目的研究微RNA18（miR18）对肝癌细胞HepG2基因表达谱的影响，预测其靶基因，初步探讨miR-18与抗增殖基因B细胞易位基因2（BTG2）两者在肝癌发生过程中差异表达的相关性。方法利用基因表达谱芯片技术筛选HepG2的微RNA差异表达谱，应用生物信息学方法预测表达明显上调的miR-18的靶基因，初步筛选出直接调控的靶基因为抗增殖基因BTG2；应用RT-PCR和Northernblot法分析BTG2正常与肝癌组织中的表达情况。结果生物信息学分析结果显示miR-18分子调控的下游靶基因有609个，涉及细胞增殖、分化和凋亡、转录调节等众多生理和病理过程；抗增殖基因BTG2在肝癌组织和细胞中呈明显低表达。结论miR-18在肝癌细胞中表达明显上调，并可能负性调控抗增殖基因BTG2在肝癌细胞中的表达，两者共同在肝癌细胞增殖方面发挥着重要作用。

B细胞易位基因2的表达水平对肿瘤细胞放射敏感性的影响

目的研究B细胞易位基因2（BTG2）表达水平的改变对肿瘤细胞放射敏感性的影响。方法通过pcDNA3．BTG2脂质体转染的方法提高细胞的BTG2的表达水平，利用噻唑蓝和细胞克隆形成实验研究细胞放射敏感性的改变，应用Westernblot方法研究蛋白表达水平的变化。结果噻唑蓝和细胞克隆形成实验结果显示，在不同剂量的1射线照射后，提高BTG2的表达水平可明显提高乳腺癌MCF．7和MDA．MB．231细胞的放射敏感性。免疫共沉淀．Westernblot实验结果显示BTG2蛋白与DNA损伤修复和抗氧化蛋白乳腺癌易感基因1（BRCA1）相互作用，形成复合物。高表达的BRCAl明显地抑制了BTG2高表达对乳腺癌细胞放射敏感性的调节作用，而降低BRCA1的表达水平则提高了BTG2对乳腺癌细胞放射敏感性的调节作用。另外，肺癌细胞放射敏感性与其所含的BRCAl的表达水平成反比，而与BTG2的表达水平成正比。结论BTG2的高表达明显提高了肿瘤细胞的放射敏感性，其机制可能与其同BRCAl形成复合物有关。

B细胞易位基因2过表达增加人乳腺癌细胞T-47D的放射敏感性的研究

目的研究B细胞易位基因2(BTG2)对人乳腺癌细胞T-47D放射敏感性的影响。方法应用脂质体转染的方法提高BTG2基因在人乳腺癌细胞T-47D的表达水平,利用克隆形成实验研究转染后细胞的放射敏感性改变,采用流式细胞术对细胞周期变化进行分析,应用Western blot方法研究相关蛋白的变化。结果克隆形成细胞生存实验结果表明,BTG2稳定高表达的T-47D/BTG2细胞在不同剂量X射线照射后,其存活分数明显低于X射线照射后的未转染的T-47D/Parental(母)细胞以及"空质粒"转染的对照T-47D/Neo细胞的存活分数。细胞平均致死剂量(D_0)值在T-47D/Parental细胞、T-47D/Neo细胞和T-47D/BTG2细胞分别为1.84,1.86和1.57。流式细胞实验结果显示,与T-47D/母细胞和T-47D/Neo细胞相比,T-47D/BTG2细胞在受照射后出现明显的细胞凋亡sub-G1峰。另外,BTG2高表达上调了Bad和Bax促凋亡蛋白的表达水平和下调了协作性的致癌基因Cyclin D1的表达水平。结论增加BTG2基因的表达水平可以明显提高凋亡相关蛋白水平,增加放射治疗所诱导的细胞凋亡,从而提高人类乳腺癌细胞T-47D对电离辐射放射治疗的敏感性。BTG2可能是调节人类乳腺癌细胞放射治疗的有效靶点之一。

BTG1在非小细胞肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖、凋亡和侵袭转移的作用

目的探讨B细胞易位基因1(BTG1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其对NSCLC细胞生物学行为的影响。方法采用免疫组织化学染色和Western blotting分别检测82例NSCLC及38例癌旁正常组织中BTG1蛋白的表达。采用慢病毒转染建立BTG1过表达的NSCLC H1299细胞株。采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测BTG1转染后H1299细胞株中BTG1表达含量的变化。采用MTT法、流式细胞术及Transwell法检测BTG1过表达对NSCLC细胞增殖、凋亡及侵袭转移的影响。结果 BTG1蛋白在NSCLC及癌旁正常组织中的阳性表达率分别为37.8%(31/82)、84.2%(32/38),差异有统计学意义(P<0.05)。NSCLC组织中BTG1蛋白的相对表达量为0.331±0.035,明显低于癌旁正常组织的0.673±0.072,差异有统计学意义(P<0.05)。NSCLC组织中BTG1的表达与淋巴结转移、临床分期和组织学分级有关(P<0.05)。BTG1过表达的NSCLC细胞增殖能力明显减弱、细胞凋亡增加及侵袭转移能力降低,且Bcl-2、MMP-9表达量明显下调。结论 NSCLC组织中BTG1蛋白的表达明显降低;BTG1可能通过调控Bcl-2及MMP-9蛋白的表达影响NSCLC细胞的增殖、凋亡与转移。

BTG1在肾透明细胞癌组织中的表达及对786-O细胞株增殖和凋亡的影响

目的:探讨B细胞易位基因1(BTG1)在肾透明细胞癌组织中的表达及对肾透明细胞癌细胞株786-O增殖和凋亡的影响。方法:采用免疫组化法检测20例肾透明细胞癌及其癌旁组织中BTG1蛋白的表达。构建BTG1表达质粒及合成BTG1的干扰RNA分别转染786-O细胞,通过MTT法实验观察BTG1对786-O细胞体外增殖的影响,Hoechst染色观察BTG1对786-O细胞凋亡的影响。结果:20例肾透明细胞癌组织中,BTG1蛋白阳性表达5例,阳性率25%;对应的癌旁组织中,BTG1蛋白阳性表达17例,阳性率85%。MTT和Hoechst染色实验分别提示在786-O细胞中高表达BTG1能够抑制其增殖、促进凋亡,在786-O细胞中低表达BTG1能够促进其增殖、抑制凋亡(P<0.05)。结论:在肾透明细胞癌中,BTG1行使抑癌基因的功能,与肾透明细胞癌的发生、发展有关。

绵羊BTG1基因的半定量RT-PCR及生物信息学分析

B细胞易位基因1(BTG1基因)是BTG/TOB基因家族的成员之一,在动物细胞的增殖和分化中起重要的作用.利用牛BTG1基因的mRNA序列与绵羊的EST数据库进行Blast检索,并通过序列拼接和逆转录RT-PCR方法首次获得绵羊BTG1基因的部分cDNA序列(GenBank登录号FJ444829),其片段长度为1 358 bp,包括完整的开放阅读框516 bp,编码171个氨基酸.半定量PCR研究结果表明:BTG1基因在小尾寒羊和陶赛特羊的10种组织中均表达,并具有一致的表达趋势.同源分析结果表明,绵羊BTG1蛋白的氨基酸序列中存在BTG/TOB的保守结构域,并且该蛋白在不同物种间具有很高的保守性.通过生物信息学预测BTG1蛋白功能,发现绵羊BTG1蛋白存在1个跨膜结构域、8个磷酸化位点和1个特异性蛋白激酶磷酸化位点.蛋白质结构同源建模分析表明,绵羊BTG1蛋白具有BTG/TOB蛋白家族的典型空间结构.

过表达BTG2增强人肺腺癌细胞的辐射敏感性

在肺癌类型中,肺腺癌占大多数,其总体生存率差,BTG2是抗增殖基因家族的一员,属于BTG/TOB家族。许多研究表明,B细胞易位基因2(BTG2)多种类型的肿瘤中存在异常表达,但其在肺腺癌放疗敏感性中发挥的调控作用尚不明确。本研究通过肺腺癌组织样本及在线数据库,探究BTG2在肺腺癌患者中的表达水平及其表达与临床预后之间的相关性,结果提示在具有放疗抗性的肺腺癌患者中,BTG2的表达水平显著降低,且在肺腺癌细胞系中,BTG2能对放疗产生响应,其在肺腺癌患者中的低表达状态与不良的预后相关(P<0.05);在人肺腺癌A549和H1299细胞系中转染过表达BTG2(OE-BTG2)慢病毒,通过克隆形成检测过表达BTG2对肺腺癌细胞系的辐射敏感性的影响,实验证实过表达BTG2可显著增强A549和H1299细胞系的辐射敏感性(P<0.05);并进一步通过WB、免疫组化检测BTG2及凋亡相关蛋白BAX的表达水平,结果证实:过表达BTG2可显著增加A549和H1299细胞辐射后的凋亡水平。最后通过裸鼠成瘤试验检测BTG2在活体中对肺腺癌辐射敏感性的影响,结果提示:在动物实验中,过表达BTG2可显著增强肺腺癌的辐射敏感性(P<0.05)及增加辐射后BAX的表达水平。综上所述,BTG2在肺腺癌组织中处于低表达状态,并且与不良的临床预后紧密相关,过表达BTG2可促进凋亡过程,增加人肺腺癌细胞系的辐射敏感性,能为克服肺腺癌的辐射抗性提供新的靶点。

携带FLAG标签的人BTG2真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达

目的:构建人B细胞易位基因2(BTG2)真核表达载体,并在HeLa细胞中表达携带FLAG标签的BTG2蛋白,为阐明BTG2基因的功能提供实验工具。方法:利用PCR法获得全长BTG2片段,将扩增得到的片段插入真核细胞表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆位点;然后按照FLAG序列设计并合成寡核苷酸片段,插入pcDNA3.1(+)-BTG2载体,构建pcDNA3.1(+)-FLAG-BTG2载体;将以上重组质粒转染HeLa细胞,将细胞分为转染pcDNA3.1(+)空载体组、转染pcDNA3.1(+)-BTG2组和转染pcDNA3.1(+)-FLAG-BTG2组,采用抗FLAG抗体的Western blotting法,检测FLAG-BTG2融合蛋白在HeLa细胞中的表达水平。结果:将全长BTG2片段链接于pcDNA3.1(+)质粒,经限制性核酸内切酶BamHⅠ酶切分析及DNA测序证实载体序列准确;该载体转染HeLa细胞后用抗FLAG抗体进行Western blotting法检测,在空载体组和pcDNA3.1(+)-BTG2组HeLa细胞中检测不到FLAG融合蛋白的表达,而在转染pcDNA3.1(+)-FLAG-BTG2组中检测到FLAG-BTG2融合蛋白的表达。结论:成功构建了pcDNA3.1(+)-FLAG-BTG2真核表达载体,并能在HeLa细胞中有效表达携带FLAG标签的BTG2蛋白。

白藜芦醇上调BTG2表达抑制肝癌HepG2细胞增殖

目的:初步探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对肝癌HepG2细胞增殖及BTG2表达的影响。方法:不同浓度Res(终浓度分别为20、40、80 μmol/L)处理HepG2细胞,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞周期分布变化,RT-PCR、Western blot技术检测BTG2 mRNA和蛋白水平表达的变化。结果: Res可以显著抑制HepG2细胞的增殖,且呈浓度和时间依赖性( P <0.01),药物作用48 h后IC 50 为34.58 μmol/L。Res可使HepG2细胞周期阻滞在G 2/M期;随着Res作用浓度的升高,抗增殖基因BTG2 mRNA和蛋白的表达逐渐增加( P <0.01)。结论: Res能够抑制肝癌HepG2细胞的增殖,对细胞周期具有阻滞效应且有浓度依赖性,其机制可能与其上调抗增殖基因BTG2表达相关。

下调miR-372靶向调控BTG1表达对胶质瘤细胞分泌免疫抑制因子的影响

目的研究miR-372靶向调控B细胞易位基因(BTG)1的表达对胶质瘤细胞分泌免疫抑制因子的影响。方法Realtime PCR方法测定胶质瘤细胞和正常星形胶质细胞中miR-372表达变化。在胶质瘤细胞中转染miR-372抑制剂(inhibitor),Realtime PCR方法检测下调效果,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞培养液上清中转化生长因子(TGF)-β1、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素(IL)-8含量。利用生物信息学软件预测miR-372的靶基因可能为BTG1,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。Western印迹检测miR-372 inhibitor对胶质瘤细胞中BTG1蛋白表达影响。在胶质瘤细胞中共转染BTG1 siRNA和miR-372 inhibitor,检测细胞培养液上清中TGF-β1、VEGF、IL-8含量和细胞中BTG1蛋白水平。结果胶质瘤细胞中miR-372表达水平高于正常星形胶质细胞。转染miR-372 inhibitor后的胶质瘤细胞分泌的TGF-β1、VEGF、IL-8含量显著减少。miR-372靶向调控BTG1。转染miR-372 inhibitor后的胶质瘤细胞中BTG1蛋白水平显著升高。BTG1 siRNA可以逆转miR-372 inhibitor对胶质瘤细胞分泌TGF-β1、VEGF、IL-8的抑制作用和BTG1蛋白表达的促进作用。结论下调miR-372靶向调控BTG1的表达抑制胶质瘤细胞分泌免疫抑制因子TGF-β1、VEGF、IL-8。

肿瘤抑制因子BTG1和IKZF1在小鼠白血病发生过程中相互作用研究

目的探讨肿瘤抑制因子B细胞易位基因1(BTG1)与编码转录因子蛋白的基因1(KZF1)在小鼠白血病发生过程中的相互作用。方法将24只SPF级BALB/c裸鼠分为对照组和模型组,每组12只。模型组采用尾静脉注射白血病细胞系K562建立白血病模型,对照组注射等剂量生理盐水。试验后1周、3周与6周采用MTT法检测细胞生存率,酶联免疫法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)与白细胞介素6(IL-6)含量;试验后6周流式细胞仪法检测细胞凋亡,Western blot法检测BTG1、IKZF1蛋白表达水平;定量分析小鼠肝和肺中白细胞浸入情况。结果试验后1周、3周与6周,模型组的造血细胞生存率、血清TNF-α与IL-6含量显著高于对照组(P<0.05),模型组在组内对比差异也有统计学意义(P<0.05)。试验后6周,模型组的骨髓细胞凋亡指数显著高于对照组(P<0.05),骨髓BTG1、IKZF1蛋白相对表达水平显著低于对照组(P<0.05)。与对照组相比,模型组渗入小鼠肝和肺的白细胞百分比显著上升(P<0.05)。结论小鼠白血病发生过程伴随有BTG1和IKZF1的低表达,可促进炎症因子的释放,导致造血细胞增殖旺盛与骨髓细胞凋亡并使得小鼠肝和肺组织的白细胞百分比上升。

HPV16-E6、P53、BTG1在子宫颈疾病中的表达及意义

目的:探讨HPV16-E6、P53、BTG1在宫颈鳞癌、高度鳞状上皮内病变(HSIL)、慢性宫颈炎等子宫颈疾病中的表达及其临床意义。方法:收集宫颈鳞癌35例、HSIL 53例、慢性宫颈炎44例的病理组织,采用RQ-PCR检测HPV16-E6、P53、BTG1转录水平的表达,Western Blot检测HPV16-E6、P53、BTG1蛋白水平的表达,分析其表达与子宫颈病变的关系。结果:在宫颈鳞癌、HSIL、慢性宫颈炎组织中,BTG1、P53两者mRNA及蛋白的表达均随病理级别的降低而逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05);宫颈鳞癌、HSIL组织中HPV16-E6 mRNA及蛋白的表达均明显高于慢性宫颈炎,差异有统计学意义(P<0.01),而宫颈鳞癌与HSIL组织中HPV16-E6 mRNA及蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:HPV16-E6、P53、BTG1的表达可能与宫颈癌的发生、发展相关,并在宫颈癌发生的早期已经发生了变化,可能是宫颈癌诊断和治疗的新靶点。

circ0000781通过吸附miR-21-5p调控BTG2表达抑制骨肉瘤增殖和侵袭的机制

目的探讨circ0000781通过吸附miR-21-5p调控BTG2表达在骨肉瘤增殖中的作用及机制,为骨肉瘤提供新的治疗靶点。方法采用qRT-PCR检测骨肉瘤细胞中BTG2的表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞侵袭能力,生物学数据库和双荧光素酶报告基因法证实BTG2与miR-21-5p、miR-21-5p与circ0000781靶向结合。结果BTG2在骨肉瘤细胞中低表达,过表达BTG2可抑制骨肉瘤细胞的增殖活性及侵袭能力。miR-21-5p可靶向结合BTG2并负调控BTG2表达,circ0000781可靶向结合miR-21-5p并下调miR-21-5p的表达,过表达circ0000781可上调BTG2表达。结论BTG2在骨肉瘤中作为抑癌基因发挥作用,circ0000781通过吸附miR-21-5p上调BTG2表达抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭。