环状RNA ACAP2调节微小RNA-421与B细胞易位基因2轴对心肌梗死大鼠心肌损伤的影响

目的探讨环状RNA ACAP2(circACAP2)调节微小RNA(miR)-421/B细胞易位基因2(BTG2)轴对心肌梗死(MI)大鼠心肌损伤的影响。方法构建MI大鼠模型和H9c2细胞模型,将80只大鼠分为假手术组、MI组、小干扰RNA-阴性对照(si-NC)组、si-circACAP2组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-circACAP2组、pcDNA3.1-circACAP2+模拟物(mimic)NC组、pcDNA3.1-circACAP2+miR-421 mimic组,每组各10只。将缺氧H9c2细胞置于24孔板中,瞬时转染细胞,分为缺氧组、缺氧+si-NC组、缺氧+si-circACAP2组、缺氧+pcDNA3.1组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2+mimic NC组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2+miR-421 mimic组,另取正常培养的H9c2细胞作为对照组。检测大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、心肌梗死情况、心肌组织病理变化、circACAP2、miR-421、BTG2 mRNA表达情况、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性、H9c2细胞活力和凋亡、心肌组织BTG2蛋白表达、H9c2细胞BTG2蛋白表达。结果MI组circACAP2、BTG2 mRNA表达高于假手术组(1.84±0.21 vs 1.00±0.10,1.68±0.17 vs 1.00±0.10),miR-421表达低于假手术组(0.49±0.05 vs 1.00±0.11,P<0.05);与假手术组比较,MI组梗死面积、CK-MB、LDH活性升高,LVFS、LVEF降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-circACAP2组心肌损伤减轻,LVFS、LVEF升高,梗死面积、CK-MB、LDH活性降低(P<0.05);与缺氧+si-NC组比较,缺氧+si-circACAP2组细胞活力升高,凋亡率、CK-MB和LDH活性降低(P<0.05)。与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-circACAP2组心肌损伤加重,LVFS、LVEF降低,梗死面积、CK-MB、LDH活性升高(P<0.05);与缺氧+pcDNA3.1组比较,缺氧+pcDNA3.1-circACAP2组细胞活力降低,凋亡率、CK-MB、LDH活性升高(P<0.05)。结论circACAP2在MI大鼠和H9c2细胞中表达上调,沉默circACAP2可能通过调节miR-421/BTG2轴改善心脏功能,减少心肌损伤,提高心肌细胞活力。

B细胞易位基因2在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨B细胞易位基因2(BTG2)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及临床意义。方法:分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中BTG2 mRNA在ESCC组织及癌旁组织中的表达,受试者工作特征(ROC)曲线分析BTG2 mRNA表达量在预测ESCC患者疾病状态和放疗敏感性中的诊断价值;免疫组织化学检测我院184例ESCC患者癌组织标本BTG2蛋白表达,其中包括55例行根治性放疗术的ESCC患者,50例正常黏膜组织作为对照。分析BTG2蛋白表达情况与ESCC临床特征的关系。结果:与对照组比较,BTG2 mRNA在ESCC组织中表达下降(5.08±1.06 vs 5.91±1.29,t=2.387,P=0.019),与放疗敏感组患者比较,BTG2 mRNA在放疗抵抗的ESCC患者癌组织中表达下降(3.82±0.97 vs 5.44±0.73,t=4.935,P<0.001),ROC结果显示BTG2 mRNA在鉴别放疗敏感与放疗抵抗患者时特异性为95.65%,敏感性为75%(AUC=0.902,P<0.001);免疫组织化学结果显示ESCC组织中BTG2阳性表达(103/184)低于正常黏膜组织(42/50),差异有统计学意义(χ^(2)=13.10,P<0.001);BTG2表达在放疗敏感和放疗抵抗组织中的阳性表达率分别为57.9%(22/38)和23.5%(4/17),差异有统计学意义(χ^(2)=5.565,P=0.018);ESCC患者BTG2蛋白表达差异在不同性别、年龄、T分期及M分期中无统计学差异(P>0.05),与N分期(χ^(2)=4.134,P=0.042)及临床分期(χ^(2)=5.303,P=0.021)相关;单因素分析结果显示,肿瘤分级(HR=0.500,95%CI:0.317~0.790,P=0.003)、N分期(HR=0.275,95%CI:0.157~0.479,P=0.000)、M分期(HR=0.317,95%CI:0.151~0.665,P=0.002)、临床分期(HR=0.269,95%CI:0.167~0.434,P=0.000)及BTG2表达(HR=1.956,95%CI:1.242~3.079,P=0.003)与ESCC患者总生存(OS)有关;多因素分析结果显示,肿瘤分级(HR=0.613,95%CI:0.381~0.987,P=0.044)、N分期(HR=0.507,95%CI:0.259~0.991,P=0.047)、临床分期(HR=0.504,95%CI:0.278~0.916,P=0.025)及BTG2表达(HR=1.608,95%CI:1.011~2.558,P=0.045)影响ESCC患者的OS。结论:BTG2具有作为预测ESCC进展及放疗敏感性生物标记物的潜在价值,并且是影响ESCC患者总生存率的独立预后因素。

微RNA18与B细胞易位基因2在肝癌细胞中差异表达相关性的研究

目的研究微RNA18（miR18）对肝癌细胞HepG2基因表达谱的影响，预测其靶基因，初步探讨miR-18与抗增殖基因B细胞易位基因2（BTG2）两者在肝癌发生过程中差异表达的相关性。方法利用基因表达谱芯片技术筛选HepG2的微RNA差异表达谱，应用生物信息学方法预测表达明显上调的miR-18的靶基因，初步筛选出直接调控的靶基因为抗增殖基因BTG2；应用RT-PCR和Northernblot法分析BTG2正常与肝癌组织中的表达情况。结果生物信息学分析结果显示miR-18分子调控的下游靶基因有609个，涉及细胞增殖、分化和凋亡、转录调节等众多生理和病理过程；抗增殖基因BTG2在肝癌组织和细胞中呈明显低表达。结论miR-18在肝癌细胞中表达明显上调，并可能负性调控抗增殖基因BTG2在肝癌细胞中的表达，两者共同在肝癌细胞增殖方面发挥着重要作用。

B细胞易位基因2的表达水平对肿瘤细胞放射敏感性的影响

目的研究B细胞易位基因2（BTG2）表达水平的改变对肿瘤细胞放射敏感性的影响。方法通过pcDNA3．BTG2脂质体转染的方法提高细胞的BTG2的表达水平，利用噻唑蓝和细胞克隆形成实验研究细胞放射敏感性的改变，应用Westernblot方法研究蛋白表达水平的变化。结果噻唑蓝和细胞克隆形成实验结果显示，在不同剂量的1射线照射后，提高BTG2的表达水平可明显提高乳腺癌MCF．7和MDA．MB．231细胞的放射敏感性。免疫共沉淀．Westernblot实验结果显示BTG2蛋白与DNA损伤修复和抗氧化蛋白乳腺癌易感基因1（BRCA1）相互作用，形成复合物。高表达的BRCAl明显地抑制了BTG2高表达对乳腺癌细胞放射敏感性的调节作用，而降低BRCA1的表达水平则提高了BTG2对乳腺癌细胞放射敏感性的调节作用。另外，肺癌细胞放射敏感性与其所含的BRCAl的表达水平成反比，而与BTG2的表达水平成正比。结论BTG2的高表达明显提高了肿瘤细胞的放射敏感性，其机制可能与其同BRCAl形成复合物有关。

B细胞易位基因2过表达增加人乳腺癌细胞T-47D的放射敏感性的研究

目的研究B细胞易位基因2(BTG2)对人乳腺癌细胞T-47D放射敏感性的影响。方法应用脂质体转染的方法提高BTG2基因在人乳腺癌细胞T-47D的表达水平,利用克隆形成实验研究转染后细胞的放射敏感性改变,采用流式细胞术对细胞周期变化进行分析,应用Western blot方法研究相关蛋白的变化。结果克隆形成细胞生存实验结果表明,BTG2稳定高表达的T-47D/BTG2细胞在不同剂量X射线照射后,其存活分数明显低于X射线照射后的未转染的T-47D/Parental(母)细胞以及"空质粒"转染的对照T-47D/Neo细胞的存活分数。细胞平均致死剂量(D_0)值在T-47D/Parental细胞、T-47D/Neo细胞和T-47D/BTG2细胞分别为1.84,1.86和1.57。流式细胞实验结果显示,与T-47D/母细胞和T-47D/Neo细胞相比,T-47D/BTG2细胞在受照射后出现明显的细胞凋亡sub-G1峰。另外,BTG2高表达上调了Bad和Bax促凋亡蛋白的表达水平和下调了协作性的致癌基因Cyclin D1的表达水平。结论增加BTG2基因的表达水平可以明显提高凋亡相关蛋白水平,增加放射治疗所诱导的细胞凋亡,从而提高人类乳腺癌细胞T-47D对电离辐射放射治疗的敏感性。BTG2可能是调节人类乳腺癌细胞放射治疗的有效靶点之一。

过表达BTG2增强人肺腺癌细胞的辐射敏感性

在肺癌类型中,肺腺癌占大多数,其总体生存率差,BTG2是抗增殖基因家族的一员,属于BTG/TOB家族。许多研究表明,B细胞易位基因2(BTG2)多种类型的肿瘤中存在异常表达,但其在肺腺癌放疗敏感性中发挥的调控作用尚不明确。本研究通过肺腺癌组织样本及在线数据库,探究BTG2在肺腺癌患者中的表达水平及其表达与临床预后之间的相关性,结果提示在具有放疗抗性的肺腺癌患者中,BTG2的表达水平显著降低,且在肺腺癌细胞系中,BTG2能对放疗产生响应,其在肺腺癌患者中的低表达状态与不良的预后相关(P<0.05);在人肺腺癌A549和H1299细胞系中转染过表达BTG2(OE-BTG2)慢病毒,通过克隆形成检测过表达BTG2对肺腺癌细胞系的辐射敏感性的影响,实验证实过表达BTG2可显著增强A549和H1299细胞系的辐射敏感性(P<0.05);并进一步通过WB、免疫组化检测BTG2及凋亡相关蛋白BAX的表达水平,结果证实:过表达BTG2可显著增加A549和H1299细胞辐射后的凋亡水平。最后通过裸鼠成瘤试验检测BTG2在活体中对肺腺癌辐射敏感性的影响,结果提示:在动物实验中,过表达BTG2可显著增强肺腺癌的辐射敏感性(P<0.05)及增加辐射后BAX的表达水平。综上所述,BTG2在肺腺癌组织中处于低表达状态,并且与不良的临床预后紧密相关,过表达BTG2可促进凋亡过程,增加人肺腺癌细胞系的辐射敏感性,能为克服肺腺癌的辐射抗性提供新的靶点。

白藜芦醇上调BTG2表达抑制肝癌HepG2细胞增殖

目的:初步探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对肝癌HepG2细胞增殖及BTG2表达的影响。方法:不同浓度Res(终浓度分别为20、40、80 μmol/L)处理HepG2细胞,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞周期分布变化,RT-PCR、Western blot技术检测BTG2 mRNA和蛋白水平表达的变化。结果: Res可以显著抑制HepG2细胞的增殖,且呈浓度和时间依赖性( P <0.01),药物作用48 h后IC 50 为34.58 μmol/L。Res可使HepG2细胞周期阻滞在G 2/M期;随着Res作用浓度的升高,抗增殖基因BTG2 mRNA和蛋白的表达逐渐增加( P <0.01)。结论: Res能够抑制肝癌HepG2细胞的增殖,对细胞周期具有阻滞效应且有浓度依赖性,其机制可能与其上调抗增殖基因BTG2表达相关。

circ0000781通过吸附miR-21-5p调控BTG2表达抑制骨肉瘤增殖和侵袭的机制

目的探讨circ0000781通过吸附miR-21-5p调控BTG2表达在骨肉瘤增殖中的作用及机制,为骨肉瘤提供新的治疗靶点。方法采用qRT-PCR检测骨肉瘤细胞中BTG2的表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞侵袭能力,生物学数据库和双荧光素酶报告基因法证实BTG2与miR-21-5p、miR-21-5p与circ0000781靶向结合。结果BTG2在骨肉瘤细胞中低表达,过表达BTG2可抑制骨肉瘤细胞的增殖活性及侵袭能力。miR-21-5p可靶向结合BTG2并负调控BTG2表达,circ0000781可靶向结合miR-21-5p并下调miR-21-5p的表达,过表达circ0000781可上调BTG2表达。结论BTG2在骨肉瘤中作为抑癌基因发挥作用,circ0000781通过吸附miR-21-5p上调BTG2表达抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭。

BTG2作为一种新的电离辐射诱导基因的研究

目的 研究γ射线照射对肿瘤细胞的B细胞易位基因2（BTG2）表达水平的影响.方法 应用RT-PCR方法研究电离辐射对肿瘤细胞BTG2 mRNA水平的影响;应用Western blot方法测定电离辐射对肿瘤细胞BTG2蛋白表达水平的影响.结果 与未照射对照细胞相比,3 Gyγ射线单次剂量照射明显提高了人乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231和人宫颈癌细胞系C33A、HeLa中的BTG2蛋白的表达水平.γ射线照射人乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231导致了照射剂量和时间依赖性的BTG2表达水平的升高,而且这种改变既表现在BTG2 mRNA水平上,也反映在BTG2蛋白水平上.结论 BTG2是一种新的辐射诱导DNA损伤的反应基因,进一步研究将为BTG2作为肿瘤放射治疗的疗效和预后评价指标提供实验基础和依据.