基于Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达探讨大蒜素对膀胱癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的作用

目的 探讨大蒜素对膀胱癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的作用及其机制。方法 以膀胱癌细胞BIU-87为研究对象,以不同浓度(50、75、100 mg/L)大蒜素作用于细胞,测定细胞的增殖能力、凋亡能力、迁移能力及侵袭能力;测定细胞内B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、裂解的半胱天冬酶(Cleaved-Caspase)-3蛋白表达水平。结果 不同浓度大蒜素对细胞增殖均有抑制作用,且随着时间和浓度的增长而显著增长(P<0.05)。与空白组相比,不同浓度大蒜素组细胞凋亡率明显较高,且随着浓度的增高而明显增高;侵袭细胞数量明显较低,且随着浓度的增高而明显降低;细胞迁移能力明显较弱,且随着浓度的增高而明显减弱;Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达明显较高,且随着浓度的升高而明显升高(均P<0.05)。结论 大蒜素可以抑制膀胱癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭,其机制可能有调控Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达有关。

绿原酸通过Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨绿原酸(CGA)对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡及对Bcl-2相关X蛋白(Bax)/B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)/胱天蛋白酶-3(Caspase-3)信号通路的影响。方法:分别用含有0、250、500、750和1 000μmol/L的CGA培养液处理喉癌Hep-2细胞24、48 h,寻找出最适宜CGA的浓度和处理时间;将喉癌Hep-2细胞分为对照组(正常培养的喉癌Hep-2细胞)、CGA低浓度组(750μmol/L CGA培养液)、CGA高浓度组(1 000μmol/L CGA培养液)和CGA高浓度+通路抑制剂组(1 000μmol/L CGA培养液+50μmol/L Bax/Bcl-2/Caspase-3通路抑制剂Bax inhibitor peptide V5)。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定喉癌Hep-2细胞增殖抑制率,通过流式细胞仪检测喉癌Hep-2细胞凋亡率,采用蛋白质印迹法检测喉癌Hep-2细胞中增殖相关蛋白(ki-67)、凋亡相关蛋白(p53)及Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路相关蛋白的表达情况。结果:与对照组相比,CGA低、高浓度组喉癌Hep-2细胞增殖抑制率、细胞凋亡率,p53、Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著升高,ki-67、Bcl-2蛋白表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);且CGA高浓度组喉癌Hep-2细胞增殖抑制率、细胞凋亡率,p53、Bax和Caspase-3蛋白表达水平高于CGA低浓度组,ki-67、Bcl-2蛋白表达水平低于CGA低浓度组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与CGA高浓度组相比,CGA高浓度+通路抑制剂组喉癌Hep-2细胞增殖抑制率、细胞凋亡率,p53、Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著降低,ki-67、Bcl-2蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:CGA可显著抑制喉癌Hep-2细胞的增殖,并促进其凋亡,可能与Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路激活有关。

贝伐珠单抗对复发性卵巢癌Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况及临床治疗效果的影响

目的观察贝伐珠单抗治疗复发性卵巢癌效果及B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达情况。方法选取2014年2月至2017年10月148例复发性卵巢癌患者,按照奇偶法,将纳入患者分为观察组和对照组(每组74例)。观察组采用贝伐珠单抗联合常规化疗方法、对照组采用常规化疗方法。观察和比较两组患者治疗前后实体瘤大小、血清糖类癌胚抗原125(CA125)、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和不良事件及分级。结果按照实体瘤标准,观察组治疗完全缓解率13.51%、总有效率70.27%,均高于对照组的5.41%、52.70%,差异具有统计学意义(P<0.05)。按照CA125标准,观察组治疗完全缓解率17.57%、总有效率85.14%,均高于对照组的9.46%、68.92%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组Bcl-2表达(0.25±0.08)低于对照组的(0.56±0.12),Bax(1.08±0.04)、Caspase-3蛋白表达(1.59±0.10)均高于对照组的(分别为0.58±0.06、1.00±0.07),差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组不良反应构成比64.86%,与对照组的62.16%比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论贝伐珠单抗治疗复发性卵巢癌疗效显著、安全可靠,且能有效调节Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达抑制肿瘤发生与发展,丰富了复发性卵巢癌发生与发展机制学说,为临床治疗提供了一定参考依据。

基于P53、Bax、Caspase-3基因表达探讨竹节参水提取物对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响

目的基于P53、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3基因表达探讨竹节参水提取物对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响。方法以宫颈癌HeLa细胞为研究对象,给予不同浓度竹节参水提取物(0、50、100、150μg/ml)进行培养(分别为A、B、C、D组),MTT法检测HeLa细胞增殖抑制情况;TUNEL法对比HeLa细胞凋亡率;流式术观察HeLa细胞周期;苏木素-伊红(HE)染色观察细胞形态;RT-PCR法测定P53、Bax、Caspase-3 mRNA表达水平。结果与A组相比,B组宫颈癌细胞增殖活力明显减弱(P<0.05);与B组相比,C组宫颈癌细胞增殖活力明显减弱(P<0.05);与C组相比,D组宫颈癌细胞增殖活力减弱。与A组相比,B组宫颈癌细胞凋亡率明显增加(P<0.05);与B组相比,C组宫颈癌细胞凋亡率明显增加(P<0.05);与C组相比,D组宫颈癌细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。HeLa细胞周期在竹节参水提取物的作用下G0/G1期上升,S期下降。A组未添加竹节参水提取物,HeLa细胞细胞核形态为卵圆状,染色也较为均匀;B组添加竹节参水提取物后,部分HeLa细胞细胞核形态改变,出现缩小和浓缩现象,荧光现象也增强;C、D组细胞因提取物浓度增加,细胞核形态改变加剧,荧光亮度攀升,细胞核边缘破碎。宫颈癌Hela细胞中P53、Bax、Caspase-3 mRNA表达随竹节参水提取物浓度的增加而增加。结论竹节参水提取物可以降低体外宫颈癌细胞的增殖活力,并诱导其自噬和凋亡,这可能是通过竹节参水提取物调控P53、Bax、Caspase-3基因表达来实现的。

基于Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路探究参红通络方对心肌缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响

目的:探讨参红通络方加减对心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)大鼠细胞凋亡的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、参红通络方剂低、中、高剂量组和辛伐他汀组。除空白组外,采用线栓结扎冠状动脉左前降支方式制备心肌缺血再灌注损伤大鼠模型(MI/RI模型),造模成功后第1天起,空白组(生理盐水1.0 mL·kg^(-1))、模型组(生理盐水1.0 mL·kg^(-1))、参红通络方剂低、中、高剂量组(1.031、2.063、4.126 g·kg^(-1)参红通络方标准浓缩液)和辛伐他汀组(辛伐他汀0.71 mg·kg^(-1)),定时灌胃给药,每日1次,连续2周。苏木素-伊红(HE)染色法观察心肌细胞病理形态学变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色法检测大鼠心肌细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平。结果:与空白组比较,模型组HE染色可见心肌细胞排列紊乱,纤维不完整,心肌细胞小灶性坏死,并伴有炎性细胞浸润;血清CK-MB、IL-6和TNF-α水平明显上升(P<0.05);心肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05),Bax、Caspase-3蛋白表达水平则明显升高,Bcl-2明显下降(P<0.05);与模型组比较,参红通络方剂加减低、中、高剂量组可明显降低CK-MB、IL-6和TNF-α水平(P<0.05);明显下调心肌细胞凋亡率(P<0.05);Bax、Caspase-3蛋白显著降低,Bcl-2表达水平明显增加(P<0.05)。参红通络方剂加减组中Bax、Caspase-3蛋白随参红通络方给药剂量的增加而明显降低,Bcl-2表达水平随参红通络方给药剂量的增加而明显升高(P<0.05)。结论:参红通络方加减可通过减轻心肌组织病理损伤并降低心肌细胞凋亡,可能与抑制Caspase-3、Bax表达、促进Bcl-2水平表达有关。

补肾活血汤对乳腺癌骨转移模型裸鼠Bax/Bcl-2及cleaved Caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察补肾活血汤对乳腺癌骨转移模型裸鼠细胞凋亡及B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)/Bcl-2及切割型胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达的影响,探讨其抑制骨质破坏的作用机制。方法:将30只BALB/c雌性裸鼠随机分成空白组6只、造模组24只。将乳腺癌细胞株4T1经裸鼠右下肢胫骨注射构建乳腺癌骨转移模型,将成膜裸鼠随机分为模型组、补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组,每组6只。补肾活血汤组予以补肾活血汤中药灌胃36.67 g·kg^(-1),每日1次,唑来膦酸组予以皮下注射100μg·kg^(-1),每周2次,联合用药组给予相同剂量补肾活血汤组灌胃联合唑来膦酸皮下注射,正常组和模型组予以等体积蒸馏水灌胃,连续14 d,次日脊柱脱臼法处死,观察裸鼠一般情况及体质量变化,截取每组裸鼠右下肢,称重,X射线扫描及苏木素-伊红(HE)染色观察裸鼠骨组织形态学变化、原位末端标记法(TUNEL)检测裸鼠骨组织凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测裸鼠骨组织中Bax/Bcl-2及cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果:与空白组比较,模型组第5~15天裸鼠体质量显著减轻(P<0.01),右下肢组织质量显著增加(P<0.01),与模型组比较,补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组第10~15天裸鼠体质量显著增加(P<0.01),右下肢组织质量显著降低(P<0.01)。HE染色显示与空白组比较,模型组、补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组裸鼠肿瘤细胞异型性明显,核染色深,骨转移明确。X射线扫描示与空白组比较,模型组裸鼠右下肢出现明显溶骨性破坏,胫骨近段、膝关节完整结构基本丧失,与模型组比较,补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组右下肢溶骨性病变明显减少,部分结构完整,对骨质破坏具有抑制作用。TUNEL染色显示与空白组比较,模型组骨转移瘤细胞凋亡率降低,与模型组比较,补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组裸鼠骨转移瘤中细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。Western blot显示,与空白组比较,模型组骨转移瘤中Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.01),与模型组比较,补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组骨转移瘤Bax蛋白含量明显升高(P<0.01),cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论:补肾活血汤组对乳腺癌骨转移模型裸鼠具有抑制骨质破坏作用,其机制可能和上调Bax,下调Bcl-2,激活cleaved Caspase-3诱导细胞凋亡相关。

针刀干预对颈椎病兔颈后伸肌B淋巴细胞瘤-2及其相关的x基因、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3 mRNA表达的影响

目的:观察针刀干预对颈椎病兔颈后伸肌B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关的x基因(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达的影响,探讨针刀松解法对劳损颈肌细胞凋亡影响的可能作用机制。方法:新西兰兔随机分为空白组、模型组、电针组及针刀组,每组6只,采用长期低头位方法建立颈椎病动物模型。造模成功后针刀组选取斜方肌起点及胸锁乳突肌附着点等部位进行针刀治疗,每周治疗1次,共治疗3次;电针组电针"天柱""颈百劳""大杼"穴,每次20min,每周治疗3次,共治疗3周。实时荧光定量PCR法检测颈后伸肌Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA表达水平。结果:各组间颈后伸肌Bcl-2mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组颈后伸肌Bax mRNA表达较空白组明显升高(P<0.01),针刀组较模型组明显降低(P<0.01)。模型组颈后伸肌Bcl-2/Bax mRNA比值较空白组明显降低(P<0.01),针刀组较模型组明显升高(P<0.01),针刀组较电针组明显升高(P<0.05)。模型组颈后伸肌Caspase-3mRNA较空白组升高(P<0.05),针刀组较模型组及电针组均明显降低(P<0.05)。结论:针刀干预可调节Bax、Bcl-2/Bax Caspase-3mRNA表达,减缓颈后伸肌细胞凋亡进程,从而修复劳损颈肌,可能是针刀治疗颈椎病作用机制之一。

右美托咪定对痫性发作大鼠海马神经细胞B细胞淋巴瘤／白血病-2、B细胞淋巴瘤／白血病-2相关X蛋白、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3蛋白表达的影响

目的观察右美托咪定（DEX）对痫性发作大鼠海马神经细胞凋亡蛋白表达的影响。方法将36只sD大鼠随机分为3组（n=12）：对照组（Control组）、右美托咪定组（DEX组）及致痫组（EP组）。DEX组给予10μg／k剂量DEX灌胃，连续3d，至致痫当日；对照组、致痫组则分别给予等体积生理盐水灌胃。以氯化锂-匹罗卡品制作致痫模型，观察SD大鼠行为学变化；采用Westernblot检测B细胞淋巴瘤／白血病-2（bcl-2）、bcl-2相关x蛋白（bax）和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）表达水平。结果EP组大鼠均表现易激惹，DEX组反复自发性痫性发作（SRS）次数[（5．67±1．53）次]比EP组[（10．33±3．06）次]明显减少，且差异有统计学意义（P〈0．05）。bcl-2、bax、bcl-2／bax和Caspase-3表达水平结果，对照组分别为1．0557±0．0081、0．5712±0．0057、1，0870±0．0026、0；DEX组分另U为0．9654±0．0216、0．6920±0．0028、1．3951±0．0328、0．6765±0．9697；EP组分另0为0．8925±0．0063、0．7427±0．0010、1．2016±0．0082、0．8565±0．9626。EP组与对照组比较，大鼠海马、bax、活化的active—Caspase-3表达水平增加，bcl-2表达水平降低，差异有统计学意义（P〈0．05），bcl-2／bax比值升高，差异有统计学意义（P〈0．05）；DEX组与EP组比较，海马bcl-2表达水平、bcl-2／bax比值升高，bax、active—Caspase-3表达水平降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DEX可能作用抑制大鼠海马神经细胞Casepase-3和box基因表达，减少SRS次数，对海马神经元产生保护作用。

丹酚酸F调控Bax/Caspase-3/GSDME信号通路改善肾小管上皮细胞焦亡作用机制

目的:基于B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)/胱天蛋白酶-3(Caspase-3)/消皮素E(GSDME)通路探讨丹酚酸F改善高糖诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的机制。方法:细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测不同浓度(2.5、5、10、20μmol·L^(-1))丹酚酸F对高糖诱导的HK-2细胞相对活力的影响及给予丹酚酸F不同干预时间条件下HK-2细胞的相对活力;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒和酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒分别检测细胞培养基上清中LDH和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;流式细胞术结合异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)和Hoechst 33342/PI染色检测丹酚酸F对高糖诱导的HK-2细胞PI阳性率的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)评价丹酚酸F对高糖诱导的HK-2细胞中Bax、Bcl-2、细胞色素C(Cyt C)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、Caspase-3、GSDME蛋白表达及激活情况的影响。2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法(DCFH-DA)及线粒体膜电位(JC-1)考察丹酚酸F对高糖诱导的HK-2细胞中活性氧(ROS)产生及线粒体膜电位的影响。结果:与空白组比较,模型组细胞活力显著降低(P<0.01),乳酸脱氢酶、炎症因子IL-1β、PI阳性细胞比例均显著升高(P<0.01);Bax、Cyt C、Caspase-9、Caspase-3、GSDME蛋白表达显著升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.01),HK-2细胞线粒体膜电位的降低,ROS产生过量蓄积。与模型组比较,丹酚酸F组有效改善高糖诱导所致HK-2细胞的损伤(P<0.05),明显降低细胞培养基上清中LDH及IL-1β含量(P<0.05,P<0.01),显著减少PI阳性细胞的比例(P<0.01);丹酚酸F组降低Bax、Cyt C、Caspase-9、Caspase-3、GSDME蛋白表达,明显升高Bcl-2蛋白表达(P<0.05,P<0.01),HK-2细胞线粒体膜电位的升高,ROS的过量蓄积减少。结论:丹酚酸F通过减少ROS的产生,改善线粒体膜电位失衡,抑制Bax/Caspase-3/GSDME信号通路介导的细胞焦亡发挥改善高糖诱导所致HK-2细胞损伤的作用。

对叶百部总生物碱对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及Bcl-2,Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达的影响

目的:研究对叶百部总生物碱对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax和切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达的影响。方法:选择人肝癌SMMC-7721细胞,常规培养及传代,对叶百部总生物碱设置添加干预的质量浓度为50,75,112,167,250 mg·L^(-1),另设置仅添加10%胎牛血清作为空白组。采用噻唑蓝(MTT)比色法和细胞克隆实验观察细胞增殖的作用,Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测3种凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax和cleaved Caspase-3的表达。结果:对叶百部总生物碱可抑制SMMC-7721细胞增殖,与空白组比较,细胞增殖抑制率显著升高(P<0.01),作用24,48,72 h的50%细胞抑制浓度(IC_(50))分别为(173.36±8.75),(112.14±16.50),(96.41±2.60)mg·L^(-1),细胞集落形成抑制率显著升高(P<0.01),存在浓度依赖性。与空白组比较,对叶百部总生物碱可促进细胞凋亡,SMMC-7721细胞凋亡数目和凋亡率显著增加(P<0.01),在荧光正置显微镜下可观察到典型细胞凋亡形态,如亮蓝色细胞核染色,细胞质浓缩和细胞核固缩等。与空白组比较,抑凋亡蛋白Bcl-2表达显著下调(P<0.01);与空白组比较,对叶百部总生物碱75,112,167,250 mg·L^(-1)促凋亡蛋白Bax,cleaved Caspase-3蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论:对叶百部总生物碱有很好的抑制SMMC-7721细胞增殖和促进凋亡的作用,其机制可能与抑制Bcl-2蛋白表达和促进Bax,cleaved Caspase-3蛋白表达有关。

姜黄素对脑胶质瘤细胞U87的作用及其对半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3、-9、B细胞淋巴瘤/白血病-2和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白的影响

目的观察姜黄素对脑胶质瘤细胞U87的作用及对半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和bcl-2相关X蛋白(bax)的影响。方法姜黄素溶液干预脑胶质瘤细胞U87,使用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖率,使用流式细胞仪检测细胞凋亡率,使用酶联免疫吸附法检测细胞培养液中的Caspase-3和Caspase-8水平,使用Western blot检测细胞中bcl-2和bax蛋白表达水平。结果姜黄素低剂量组24、48 h细胞的增殖率[(8.48±1.19)%、(11.89±1.39)%]和高剂量组24、48 h细胞的增殖率[(16.04±1.58)%、(25.63±1.66)%]均低于空白对照组24、48 h细胞的增殖率[(1.47±0.10)%、(1.39±0.19)%,P<0.05],姜黄素高剂量组24、48 h细胞的增殖率均低于姜黄素低剂量组(P<0.05),姜黄素高剂量组和姜黄素低剂量组48 h细胞的增殖率均低于同组24 h(P<0.05);姜黄素低剂量组细胞凋亡率[(9.53±1.21)%]和姜黄素高剂量组细胞凋亡率[(20.52±2.35)%]均显著高于空白对照组细胞凋亡率[(2.22±0.14)%,P<0.05],姜黄素高剂量组细胞凋亡率显著高于姜黄素低剂量组(P<0.05);姜黄素低剂量组细胞培养上清液中Caspase-3和Casepase-8水平[(156.35±29.63)、(158.35±25.36)) ng/ml]和姜黄素高剂量组细胞培养上清液中Caspase-3和Casepase-8水平[(252.52±35.21)、(225.61±30.66) ng/ml]均显著高于空白对照组细胞培养上清液中Caspase-3和Casepase-8水平[(50.63±10.36)、(78.23±11.35) ng/ml,P<0.05],姜黄素高剂量组细胞培养上清液中Caspase-3和Casepase-8水平显著高于姜黄素低剂量组(P<0.05);姜黄素低剂量组细胞U87中bcl-2蛋白表达水平(0.61±0.10、0.67±0.09)和姜黄素高剂量组细胞U87中bcl-2蛋白表达水平(0.42±0.08、0.88±0.11)显著低于空白对照组细胞U87中bcl-2蛋白表达水平(0.88±0.16、0.33±0.04),bax蛋白表达水平显著高于空白对照组(P<0.05),姜黄素高剂量组细胞U87中bcl-2蛋白表达水平显著高于姜黄素低剂量组,bax蛋白表达水平显著高于空白对照组(P<0.05)。结论 姜黄素对脑胶质瘤细胞U87的增殖具有抑制作用,凋亡具有促进作用,作用机制可能为促进细胞中的Caspase-3和Caspase-8的表达,并同时改变细胞中bcl-2和bax的表达水平。

健脾消癌方及其拆方对肠癌模型裸鼠体质量、瘤体、转移率及Caspase-3,Bcl-xL,Bax蛋白表达的影响

目的：观察健脾消癌方及其拆方对肠癌模型裸鼠体质量、瘤体、转移率及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）,抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-x L（B-cell lymphoma/leukemia-x L,Bcl-x L）和Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）表达的影响。方法：建立裸鼠肠癌原位瘤模型,分为模型组,健脾益气组（15 g·kg-1）,化瘀解毒组（15 g·kg-1）,健脾消癌方组（全方组,15 g·kg-1）,5-氟尿嘧啶组（5-Fu,20 mg·kg-1）,共5组。分别予以相应药物干预4周,观察裸鼠体重、瘤体抑制率、转移率,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Caspase-3,Bcl-x L,Bax蛋白表达。结果：健脾益气组、全方组体重下降低于模型组（P〈0.05）,化瘀解毒组体重下降高于模型组（P〈0.05）;健脾益气组对瘤体的抑制与模型组比较无统计学差异,与空白组比较,化瘀解毒组、全方组对瘤体均有较好抑制作用（P〈0.05）;各组均出现不同程度地转移,其中模型组、健脾益气组总体转移率达90%,化瘀解毒组、全方组转移率分别为70%,60%,低于模型组（P〈0.05）;与模型组比较,化瘀解毒组及全方组能够上调Bax蛋白表达,下调Caspase-3,Bcl-x L蛋白表达（P〈0.01）。结论：健脾消癌方中健脾益气组优势在于稳定体重,化瘀解毒组优势在于抑制肿瘤,抑制转移;全方组能够稳定体质量,抑制肿瘤,抑制转移,全方配伍疗效最优,其抗肿瘤机制可能是上调凋亡相关蛋白Bax及下调Caspase-3,Bcl-x L,诱导肿瘤细胞凋亡。

氢气通过Bax/Caspase3凋亡通路减轻大鼠创伤性脑损伤的研究

目的 探讨氢气通过B淋巴细胞瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)凋亡通路对大鼠创伤性脑损伤的改善作用。方法 56只SD大鼠分为对照组、模型组、氢气+通路激活组、氢气组,每组14只,制作创伤性脑损伤大鼠模型,造模结束后,氢气组每天吸入1 h氢气(42% H_(2)-21% O_(2)-37%N),氢气+通路激活组应用氢气+5μg Bax/Caspase3激活剂干预。干预7 d后,比较4组神经损伤严重程度评分(NSS)、脑含水率、脑组织病理形态变化、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及Bax/Caspase3通路蛋白表达量变化。结果 氢气组脑组织病理变化较模型组明显减轻,病灶区和水肿区缩小,变性坏死、出血坏死及炎性浸润减少;氢气+通路激活组对脑组织病理的改善作用较氢气组有所减弱。模型组NSS、脑含水率、TNF-α、IL-1β、MDA及Bax、Caspase3蛋白表达量高于对照组,SOD水平低于对照组(P<0.05);氢气组NSS、脑含水率、TNF-α、IL-1β、MDA及Bax、Caspase3蛋白表达量低于模型组和氢气+通路激活组,SOD水平高于模型组和氢气+通路激活组(P<0.05)。结论 氢气对大鼠创伤性脑损伤具有一定改善作用,能够降低大鼠炎症和氧化应激水平,减轻脑组织病理损伤,其机制可能与氢气抗Bax/Caspase3凋亡通路有关。

高压氧预处理对减压病大鼠脑组织B细胞淋巴瘤/白血病基因-2蛋白及相关X蛋白表达的影响

目的 探讨高压氧（hyperbaric oxygen,HBO）预处理对减压病大鼠脑组织B细胞淋巴瘤/白血病基因-2蛋白（B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2）及相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3蛋白（cysteine aspartic acid specific protease-3,Caspase-3）表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠72只,采用数字表法随机分为正常对照组（对照组）、高压氧预处理组（HBO组）、减压病组（DCS组）,每组分别设置4个观察时间点（1、5、7、10 d）,每个时间点（亚组）6只.建立大鼠减压病模型,HE染色观察减压病后脑组织病理变化,免疫组织化学染色观察各组脑组织Bcl-2、Bax、Caspase-3 的表达.结果 （1） HBO组与DCS组脑组织皮层病情分级为轻度～中度（1～3级）.（2）HE染色发现,DCS组大鼠大脑皮层区出现大片疏松区,皮层与海马神经元细胞呈三角形变性坏死,细胞萎缩、体积缩小变性,染色质浓缩甚至碎裂,HBO组神经元变性坏死明显减轻.（3）1、5、7d时,DCS组脑组织皮层Bcl-2阳性细胞数分别为（89.5±15.60）、（176.4±10.22）、（265.52±15.74）个,与对照组（408.67 ±29.57）个相比明显减少,差异均有统计学意义（P＜0.01）;HBO组[脑组织皮层阳性细胞数分别为（179.64±12.21）、（253.91±14.00）、（341.15±13.52）个],较DCS组明显增加,差异均有统计学意义（P＜0.05）.1、5、7d时,DCS组脑组织皮层Bax阳性细胞数分别为（389.56±18.62）、（337.04±14.85）、（176.41±20.75）个,Caspase-3阳性细胞数分别为（495.64 ±21.03）、（283.04±13.12）、（352.41 ±21.34）个,较对照组1d时[脑组织皮层Bax和Caspase-3分别为（98.64±14.25）、（106.20±14.64）个]明显增加.HBO组Bax阳性细胞数分别为（313.54±21.02）、（253.05±13.60）、（129.03±12.85）个,Caspase-3分别为（429.43±14.08）、（228.05 ±13.60）、（301.02±15.79）个,较DCS组明显减少,差异均有统计学意义（P＜0.05）.DCS组Bcl-2/Bax值较对照组明显降低,HBO组Bcl-2/Bax值较DCS组明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 DCS组大鼠大脑皮层区神经元凋亡1d时最严重,海马区10 d时最明显;HBO预处理可以减轻减压对大鼠脑组织的病理损伤,减轻神经细胞的变性坏死,抑制线粒体途径的细胞凋亡.

红芪多糖对高糖培养下雪旺细胞Bcl-2/Caspase-3信号通路的影响

目的:通过观察红芪多糖(HPS)对高糖培养下雪旺细胞(SCs)B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)信号通路的影响,探讨HPS在治疗糖尿病周围神经病变(DPN)过程中可能的作用机制。方法:选取出生5~7 d的SD乳鼠4只,随机分为正常组、高糖组、HPS+高糖组、α-硫辛酸(α-LA)+高糖组,从坐骨神经部位提取SCs,放入37℃,5%CO_(2)培养箱中培养,待细胞达整瓶的80%后,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法筛适宜高糖,HPS及α-LA干预的实验浓度,蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白与mRNA的表达情况,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)法流式细胞术检测各组SCs的凋亡率。结果:Western blot,Real-time PCR检测结果显示,与正常组比较,高糖组Bcl-2蛋白及mRNA表达水平降低,Bax、Caspase-3蛋白及mRNA表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.01);与高糖组比较,HPS+高糖组、α-LA+高糖组的Bcl-2蛋白及mRNA表达水平明显升高,Bax、Caspase-3蛋白及mRNA表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。Annexin V/PI法流式细胞术检测结果显示,与正常组比较,高糖组SCs凋亡率明显增加;与高糖组比较,HPS+高糖组和α-LA+高糖组SCs凋亡率显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:HPS可以减轻SCs凋亡反应状态,其作用机制可能与抑制Bcl-2/Caspase-3信号通路激活有关。

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的观察中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)对大鼠缺血再灌注肾损伤的保护作用及机制。方法通过切除一侧肾脏,夹闭对侧肾蒂45min建立大鼠缺血再灌注损伤模型,将30只成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和缺血再灌注给药组,每组10只。将50μg重组大鼠NGAL溶于2mL灭菌蒸馏水中,分别于缺血前30min、缺血中、缺血后30和60min经缺血再灌注给药组大鼠尾静脉注射0.5mL,假手术组及缺血再灌注组于相同时间点给予相同剂量的0.9%氯化钠注射液。取再灌注24h后大鼠的下腔静脉血检测血清肌酐(sCr)和血尿素氮(BUN)水平;采用苏木精-伊红(H-E)染色观察肾脏的形态学变化;免疫组织化学染色检测B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)及活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达;末端转移酶标记技术(TUNEL)染色观察肾小管上皮细胞的凋亡情况。结果再灌注24h后,缺血再灌注组的sCr和BUN水平显著高于假手术组及缺血再灌注给药组(P值均<0.05)。光学显微镜下见缺血再灌注给药组的肾脏损伤情况较缺血再灌注组显著减轻。假手术组Bax和Caspase-3的蛋白阳性表达率分别为(3.72±0.48)%、(0.61±0.15)%,缺血再灌注给药组分别为(7.44±1.64)%、(3.17±0.32)%,均显著低于缺血再灌注组的(15.46±1.96)%、(7.29±1.06)%(P值均<0.05)。TUNEL染色见假手术组及缺血再灌注给药组的凋亡细胞数分别为(1.80±0.84)及(7.80±1.92)个/高倍视野,均显著少于缺血再灌注组的(15.40±3.05)个/高倍视野(P值均<0.05)。结论给予外源性NGAL可抑制Caspase-3激活,减少Bax表达,减轻组织损伤,从而发挥肾脏保护作用,为急性肾损伤的治疗提供新的靶点。

PBNA-413对心肌缺血/再灌注损伤大鼠凋亡相关蛋白及基因表达的影响

目的：探讨拳参正丁醇提取物-413（Bistortae Rhizoma n-butyl alcohol extract,PBNA-413）对大鼠心肌缺血/再灌注损伤（myocardial ischemia/reperfusion,MI/R）细胞凋亡的影响。方法：将30只SD雄性大鼠随机分为5组,假手术组,MI/R模型组,PBNA-413低剂量组（0.1 mg·kg（-1））,PBNA-413中剂量组（0.3 mg·kg（-1））,PBNA-413高剂量组（1.0 mg·kg（-1））。采用结扎左冠状动脉前降支40 min,恢复血流60 min,复制MI/R模型,记录肢体Ⅱ导联心电图。采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠心肌组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）,Caspase-9 mRNA及蛋白表达。结果：大鼠心肌缺血后,模型组大鼠心电图ST段及T波较假手术组明显升高（P〈0.05,P〈0.01）,PBNA-413处理后ST段及T波降低（P〈0.01）,以中剂量和高剂量的效果好。与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织Bax,Caspase-3及Caspase-9蛋白表达升高（P〈0.05,P〈0.01）,Bcl-2蛋白表达降低（P〈0.01）;与模型组比较,PBNA-413中剂量组Bax及Caspase-3和Caspase-9蛋白表达降低（P〈0.05,P〈0.01）,Bcl-2蛋白表达升高（P〈0.01）。除Caspase-9外,Bax,Bcl-2和Caspase-3的基因水平出现与蛋白类似变化。结论：PBNA-413可能通过抑制细胞凋亡从而有效保护MI/R心肌。

水蛭素对高同型半胱氨酸大鼠血管平滑肌细胞的影响

目的:观察水蛭素对高同型半胱氨酸(Hcy)大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)的作用机制。方法:50只SD大鼠,采用随机数字表法分为正常组、模型组和水蛭素3个不同剂量组(25、50、100 AT-U/mL),每组10只。正常组予以普通饲料喂养,模型组及水蛭素组大鼠予以普通饲料及DL-蛋氨酸灌胃,造模21周,测血脂4项、血清Hcy,水蛭素组皮下注射水蛭素,2周后测血脂和Hcy,取胸主动脉组织。采用苏木精-伊红(HE)染色和免疫组织化学染色观察胸主动脉组织病理变化及B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶3(Caspase3)表达;实时荧光定量(RT-qPCR)检测Bcl-2、Bax和Caspase3的mRNA表达。结果:水蛭素各剂量组三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量显著降低(P<0.01),水蛭素高剂量组血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量显著升高(P<0.01);水蛭素各剂量组主动脉内膜增厚、VSMC增生减轻;水蛭素高、中剂量组胸主动脉组织Caspase3、Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白的表达减少,水蛭素各剂量组Caspase3、Bax的mRNA不同程度降低,Bcl-2的mRNA表达显著降低(P<0.01),水蛭素高剂量组对胸主动脉组织Caspase3、Bcl-2、Bax的mRNA的调控最佳。结论:水蛭素可能通过调节脂质、促进Hcy诱导下异常增殖的VSMC凋亡,延缓动脉粥样硬化进展,而且可以通过Caspase3/Bax/Bcl-2凋亡信号通路有效促进高Hcy诱导的异常增殖的VSMC凋亡,为动脉粥样硬化的早期防治提供了新方向。

蛴螬提取物对兔光损伤视网膜变性Caspase 8、Bax、Bid及Caspase 3表达的影响

目的探讨蛴螬提取物对兔光损伤视网膜变性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8(Caspase 8)、B细胞淋巴瘤-2相关的x蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2同源区域3凋亡诱导蛋白(Bid)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3)表达的影响。方法将30只实验性兔随机分成空白组、模型组、蛴螬低剂量组、蛴螬中剂量组及蛴螬高剂量组。每组6只兔(12只眼)。除空白组外,其余四组均建立光损伤视网膜变性模型,在光照架的6个面分别放置1根40瓦的白色荧光灯管,调节光照强度,并用ZDS-10型数字式照度计测定兔活动水平。多点照度平均为(2000±200)Lx,在12 h明及12 h暗环境下循环光环境适应7 d,自由摄食饮水。7 d后光照前先暗适应24 h,然后光照12 h,再进行暗适应12 h,连续3个循环,光照时间总计为36 h。成模后,给予空白组、模型组生理盐水5 ml/kg灌胃,蛴螬低剂量组以0.45 g/kg(中剂量组以0.9 g/kg、高剂量组以1.8 g/kg)蛴螬提取物配成5 ml蛴螬提取物混悬液灌胃。在给药14 d处死全部兔后取材做苏木精-伊红染色,观察视网膜细胞结构及免疫组化检测Caspase 8、Bax、Bid及Caspase 3的表达。Caspase 8、Bax、Bid及Caspase 3表达的积分光密度值,以均数±标准差表示。采用单因素方差分析比较不同组别Caspase 8、Bax、Bid及Caspase 3表达水平的差异,当差异有统计学意义时,进一步采用SNK法两两比较。结果视网膜显微形态学观察结果显示,空白组兔视网膜结构层次分明,各层细胞排列整齐规则,细胞染色均匀且形态规整;模型组兔视网膜层次结构模糊,分界不清,出现不规则淡染,细胞排列紊乱,细胞数目减少;蛴螬低剂量组兔视网膜外核层胞核排列较疏松;蛴螬中剂量组兔视网膜外核层增厚,视网膜外核层胞核排列较整齐密集;蛴螬高剂量组兔视网膜外核层胞核排列较整齐,厚度有所增加。空白组视网膜外核层细胞浆中Caspase 8、Bax、Bid及Caspase 3阳性物质分布稀疏,含量较少;模型组视网膜外核层细胞浆中Caspase 8、Bax、Bid及Caspase 3阳性物质弥漫分布,含量较多。空白组和模型组的Caspase 8、Bax、Bid及Caspase 3表达与蛴螬各组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。蛴螬中剂量组Caspase 8、Caspase 3表达与蛴螬低剂量组相比,差异有统计学意义(F=7.30,5.43;P<0.05);蛴螬中剂量组Bid、Bax表达与蛴螬低剂量组相比,差异无统计学意义(F=2.47,5.79;P>0.05)。蛴螬高剂量组Caspase 8、Bax、Bid及Caspase 3表达与蛴螬低剂量组相比,差异均无统计学意义(F=0.11,0.11,0.95,0.01;P>0.05)。蛴螬中剂量组Caspase 8表达与蛴螬高剂量组相比,差异有统计学意义(F=6.14,P<0.05);蛴螬中剂量组Bax、Bid及Caspase 3表达与蛴螬高剂量组相比,差异均无统计学意义(F=0.11,0.79,1.71;P>0.05)。结论蛴螬提取物能够抑制Caspase 8、Bax、Bid及Caspase 3的表达,不同剂量效果有差异,蛴螬中剂量组效果较好。

山药多糖抗神经细胞缺氧性凋亡机制研究

目的探讨山药多糖抗神经细胞缺氧性凋亡作用机制。方法运用SD胎鼠大脑皮层神经细胞建立缺氧性神经细胞损伤体外模型,再使用不同质量浓度山药多糖处理,Rh-123染色检测线粒体损伤,RT-PCR及免疫细胞化学测定Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白表达。结果山药多糖抑制缺氧的神经细胞线粒体损伤,下调Caspase-3蛋白及mRNA的表达,下调Bax mRNA及蛋白的表达,上调Bcl-2 mRNA及蛋白的表达,提高Bcl-2/Bax mRNA及蛋白的比例(P<0.05)。结论山药多糖在一定发范围内能有效地抑制神经细胞缺氧性凋亡,其机理是降低凋亡基因及蛋白产生,上调抗凋亡基因及蛋白产生。