B淋巴细胞瘤-2结合抗凋亡基因1在人脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的探讨B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)结合抗凋亡基因1(Bcl-2-associated athanogene 1,BAG-1)在人脑胶质瘤中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化SP二步法,检测2009年9月至2021年9月年安徽医科大学第二附属医院的212例人脑胶质瘤标本以及10例正常脑组织标本中的BAG-1的表达,分析其与临床病理及预后的关系。结果检测到BAG-1总体的阳性表达率为61.3%,BAG-1在低级别胶质瘤(Ⅰ~Ⅱ级)和高级别胶质瘤(Ⅲ~Ⅳ级)阳性表达率分别为48.4%和71.1%(P=0.001)。BAG-1表达阴性和阳性的病人的中位生存时间分别为60个月和17个月(P<0.001)。BAG-1表达阴性和阳性的高级别胶质瘤病人中位生存时间分别为31个月和11个月(P<0.001)。BAG-1阴性和阳性表达的病人无进展中位生存时间分别为26个月和8个月(P=0.001)。结论BAG-1在人脑胶质瘤中高表达,与肿瘤的病理分级呈正相关,与病人生存时间呈负相关,BAG-1可能成为预测胶质瘤预后及化疗疗效的重要分子标志物。

中医药基于B细胞淋巴瘤-2/Bax基因表达对白血病细胞凋亡调控影响的研究进展

细胞凋亡调控异常是白血病发生及病情进展的重要原因之一,其中,抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)/白血病蛋白和促凋亡蛋白Bax对于白血病细胞凋亡的调控起着关键作用。相对于经典的化学药物治疗,中医药治疗白血病具有不可替代的优越性,许多单味中药、中药有效成分和中药复方都有很强的抗肿瘤活性,近年来中医药对于白血病Bcl-2和Bax基因表达影响机制的探究成为了医学领域的研究热点。

TGFβ_1,Bcl-2与妊娠期高血压疾病胎盘细胞凋亡的关系

目的:研究妊娠期高血压疾病患者胎盘组织的细胞凋亡以及TGFβ1和Bcl-2与细胞凋亡的关系,进一步探讨妊娠期高血压疾病发病机制。方法:收集妊娠期高血压疾病患者胎盘组织45例(15例妊娠期高血压,15例子痫前期轻度,15例子痫前期重度)和正常孕妇对照组45例。应用免疫组织化学染色法(SP法)检测胎盘绒毛滋养层TGFβ1和Bcl-2蛋白的表达;应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL法)检测胎盘绒毛组织中滋养层细胞凋亡情况,并测定凋亡率。结果:妊娠期高血压疾病组较对照组胎盘绒毛组织中滋养层细胞凋亡率及TGFβ1表达明显增高,而Bcl-2表达明显减低(均P<0.01)。随病情加重,妊娠期高血压组、子痫前期轻度组、子痫前期重度组细胞凋亡率及TGFβ1表达呈上升趋势,Bcl-2表达呈下降趋势(均P<0.01)。子痫前期重度组、子痫前期轻度组胎盘绒毛细胞凋亡发生率与TGFβ1呈正相关;与Bcl-2表达呈负相关(均P<0.05)。子痫前期重度组、子痫前期轻度组TGFβ1与Bcl-2表达呈负相关(均P<0.05)。结论:妊娠期高血压疾病胎盘细胞凋亡率明显增高,TGFβ1在滋养层细胞表达增高,Bcl-2在滋养层细胞表达降低,TGFβ1和Bcl-2平衡失调可能导致妊娠期高血压疾病的发生。

凋亡相关基因Bcl-2和细胞因子bFGF在豚鼠透镜诱导近视眼中的研究

目的:探讨B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(B-cell lymphoma/leukemia 2,Bcl-2)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)在透镜诱导豚鼠近视眼后极部巩膜细胞中的表达,以及二者对巩膜细胞凋亡的影响。方法:选健康4周龄豚鼠45只,随机分成3组,Ⅰ组(右眼配戴-20D)、Ⅱ组(右眼配戴-10D)Ⅲ组(不作任何干预)。实验前后用睫状肌麻痹下验光、A超动态观察豚鼠眼屈光度和眼轴长度,并取后极部巩膜组织,用电镜、终末脱氧核糖核苷酸转移酶介导原位缺口末端标记法(TUNEL)和流式细胞术检测巩膜的凋亡细胞,应用免疫组织化学染色和蛋白印迹(Western-blot)法检测bFGF和bcl-2蛋白。结果:实验后诱导眼形成近视,且伴有眼轴延长。并在诱导眼巩膜细胞中检测到凋亡细胞,凋亡率高于对照组(P<0.05),透镜诱导的豚鼠近视眼后极部巩膜组织中bFGF和bcl-2的含量降低(P<0.05)。结论:bFGF与bcl-2在透镜诱导豚鼠近视眼后极部巩膜细胞中表达阳性,并可通过抑制细胞凋亡参与透镜诱导豚鼠近视的形成。

乙醇对心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响

目的研究乙醇对心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl鄄2和Bax表达的影响。方法将雄性昆明种小鼠随机分为4组,每组6只,分别给予10%,20%,30%的乙醇和生理盐水腹腔注射,每日1次,连续30d,通过心肌细胞的核固红鄄结晶紫和免疫组织化学染色,分析细胞凋亡及凋亡相关基因——B细胞淋巴瘤/白血病鄄2基因(B鄄celllymphoma/leukemia鄄2,Bcl鄄2)和Bcl相关蛋白(Bcl鄄associatedxprotein熏Bax)的表达。结果实验组部分心肌细胞核染色质凝集,染为蓝紫色;定量分析显示,实验组异常的心肌细胞核明显多于对照组(P<0.01)。实验组心肌细胞中Bcl鄄2的表达弱于对照组(P<0.01),且分布不均;而实验组心肌细胞中Bax的表达明显增强(P<0.01),可见棕色粗大颗粒。结论心肌细胞凋亡在乙醇对心肌影响的发生机制上发挥一定的作用;随着乙醇浓度的增加,心肌细胞的凋亡征象愈加明显;乙醇引起的心肌细胞凋亡与凋亡相关基因Bcl鄄2和Bax的异常表达有关。

B细胞淋巴瘤/白血病-2和半胱氨酸蛋白-3在神经元损伤后的变化

B细胞淋巴瘤／白血病-2（B-cell lymphoma／leukemia2，Bcl-2）和半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-3是调控细胞凋亡的关键因素。Bcl-2可以对抗细胞凋亡，Caspase-3是细胞凋亡的主要诱导者，在凋亡执行中起到核心作用，二者在细胞凋亡过程中既相互联系又相互制约。脑缺血再灌注损伤后，Bcl-2的过度表达可以使活化的Caspase-3阻断，保护脑组织，缺血早期二者均呈上调趋势，Bcl-2的表达随缺血时间的延长进一步减少。

miR-210介导的Bcl-2下调促进动脉粥样硬化内皮细胞凋亡的机制

目的:探讨miR-210介导的Bcl-2下调促进动脉粥样硬化内皮细胞凋亡的机制。方法:将常规培养的人主动脉内皮细胞HAECs用100 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对细胞进行处理24 h后,分为对照组(Control组)、动脉粥样硬化内皮细胞模型组(ox-LDL组)、miR-210模拟物及抑制剂组;采用CCK-8实验检测细胞活力,细胞凋亡实验检测细胞凋亡水平,qRT-PCR实验检测细胞miR-210的表达,Western blot实验检测细胞Bcl-2蛋白含量,生物信息学算法确定Bcl-2是否为miR-210的潜在靶点,荧光素酶报告基因检测将Bcl-23′-UTR报告质粒(pRL-Bcl-2)转染进修饰过miR-210的HAECs细胞后的荧光素酶活性。结果:经ox-LDL处理过的HAECs细胞的活力低于Control组,凋亡水平高于Control组,miR-210的表达高于Control组,Bcl-2表达低于Control组(P<0.05);miR-210模拟物能抑制Bcl-23′-UTR报告基因的荧光素酶活性(P<0.05),miR-210抑制剂能提高Bcl-23′-UTR报告基因的荧光素酶活性,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-210介导的Bcl-2下调促进了动脉粥样硬化内皮细胞的凋亡。

2型糖尿病大鼠辛伐他汀灌胃治疗后胸主动脉壁细胞凋亡情况及细胞凋亡相关基因、活性氧簇表达观察

目的观察2型糖尿病(T2DM)大鼠辛伐他汀灌胃治疗后胸主动脉壁细胞凋亡情况及细胞凋亡相关基因、活性氧簇(ROS)表达情况。方法随机选取40只大鼠,予高脂饲料喂养,8周后采用尾静脉注射STZ(30mg/kg)诱导方法制备T2DM模型;将最终造模成功的34只大鼠按体质量、血糖分层随机分为辛伐他汀组、模型组各17只。另选取20只大鼠作为正常对照组,给予标准饲料喂养。根据人鼠等效剂量,辛伐他汀组每日以1. 05mg/(kg·d)辛伐他汀溶液灌胃1次,模型组和正常对照组每日以等量无菌饮用水灌胃1次,灌胃16周,后处死取大鼠胸主动脉。电镜下观察胸主动脉内皮细胞病理变化;实时荧光定量PCR方法检测胸主动脉内皮细胞细胞凋亡活化因子-1(Apaf-1)、细胞凋亡诱导因子(AIF)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl-2、Bax mRNA,酶联免疫吸附法检测ROS。结果电镜下可见,正常对照组内皮细胞细胞核清晰,形态完整,有条索样连接紧密、连续;模型组内皮细胞可见明显细胞核固缩、线粒体肿胀,及内皮细胞碎片;辛伐他汀组较模型组病理损伤较轻,内皮细胞相对连续,完整,有轻度肿胀。PCR结果显示,与正常对照组比较,模型组Apaf-1、AIF、Caspase-3、Bax mRNA及ROS表达升高,Bcl-2 mRNA表达降低(P均<0. 05);与模型组比较,辛伐他汀组模型组Apaf-1、AIF、Caspase-3、Bax mRNA及ROS表达降低,Bcl-2 mRNA表达升高(P均<0. 05)。结论 T2DM大鼠辛伐他汀灌胃治疗后,可明显减轻内皮细胞核固缩,线粒体肿胀,机制可能为下调Apaf-1、AIF、Caspase-3、Bax mRNA及ROS表达,上调Bcl-2 mRNA表达。

MicroRNA-25表达下调对神经胶质瘤U87细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨micro RNA-25(mi R-25)表达下调对神经胶质瘤U87细胞增殖与凋亡的影响,以及mi R-25与B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)在胶质瘤细胞增殖与凋亡过程中的调节作用。方法通过慢病毒介导反义mi R-25寡聚核苷酸转染U87细胞;分为3组,实验组(转染anti-mi R-25)、对照组(转染negative control)和空白组(空白PBS);实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测mi R-25和Bcl-2的m RNA表达水平;CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果实验组mi R-25和Bcl-2的m RNA表达量与空白组和对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05),实验组降低;实验组相对于空白组和对照组,细胞增殖活性降低,细胞周期延缓,细胞凋亡率升高。结论在胶质瘤U87细胞,mi R-25表达下调通过作用于Bcl-2靶基因,延缓细胞周期,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。

MicroRNA-29a对大鼠心肌细胞Bcl-2和Mcl-1表达的调控作用及其机制

目的:探讨microRNA-29a(miR-29a)对大鼠心肌细胞(CM细胞)B细胞白血病/淋巴瘤-2(Bcl-2)和髓样细胞白血病-1(Mcl-1)表达的调控机制。方法:体外培养新生Sprague-Dawley大鼠CM细胞和人胚肾细胞株293T。合成大鼠miR-29a的拟似物(mimic)和抑制剂(inhibitor)。用脂质体Lipofectamine RNAiMAX转染miR-29a mimic进入CM细胞,转染48 h后分别用实时荧光定量PCR和Western blotting检测Bcl-2和Mcl-1mRNA和蛋白的表达变化。构建Bcl-2和Mcl-1的萤光素酶报告基因载体(DNA质粒),转染293T细胞(DNA质粒和miRNA共转染)和CM细胞(miRNA和DNA质粒先后转染),双萤光素酶报告基因系统检测萤光素酶的表达变化。结果:CM细胞转染miR-29a mimic 48 h后,Bcl-2和Mcl-1 mRNA和蛋白的水平均下调(P<0.05)。双萤光素酶报告基因系统显示,在293T细胞中,miR-29a可特异抑制带有bcl-2和mcl-1 3’UTR上野生型识别元件的报告基因表达(P<0.05),在CM细胞中,抑制内源性的miR-29a水平能促进bcl-2和mcl-1 3’UTR上野生型识别元件的报告基因表达。结论:抗凋亡基因bcl-2和mcl-1是miR-29a的靶基因。miR-29a可能通过作用于Bcl-2和Mcl-1实现对心肌细胞凋亡的调控作用,具体效应仍待进一步阐明。

慢性氟中毒鼠神经元与细胞凋亡相关基因的研究

目的 研究慢性氟中毒对神经细胞损伤的作用机理及与细胞凋亡的关系。方法 利用RT PCR方法观察细胞凋亡相关基因B细胞淋巴瘤 /白血病 x(Bcl x)和白细胞介素 1β转换酶 (ICE)在慢性氟中毒鼠脑组织中的表达水平。结果 慢性氟中毒时脑组织中的Bcl x表达未受明显影响 ;ICE则明显高于正常对照组。结论 慢性氟中毒所致的神经细胞凋亡可能与激活G蛋白或氧化应激有关。当发生慢性氟中毒时 ,无明显证据表明Bcl x参与了此过程 ,但也不除外Bcl x在参与慢性氟中毒对神经细胞的损害过程中发挥作用并调节其表达水平达到平衡的可能性 ;ICE则可能参与了神经细胞发生凋亡的过程 。

可溶性CD40配体对白血病THP-1细胞的影响及机制

目的分析可溶性CD40配体(sCD40L)对人白血病急性单核细胞白血病细胞(THP)-1细胞凋亡、周期的作用及B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2、半胱天冬酶(caspase)-3表达的影响。方法流式细胞术(FCM)检测白血病HL-60细胞凋亡、周期,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹检测sCD40L处理THP-1细胞后Bcl-2及caspase-3 mRNA和蛋白表达。结果sCD40L处理THP-1细胞48 h后,Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著降低,caspase-3 mRNA和蛋白表达显著增高(P<0.05)。诱导细胞的凋亡,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 sCD40L在体外能够诱导细胞凋亡,阻滞THP-1细胞在G0/G1期,其可能机制是通过下调Bcl-2及激活caspase-3而实现。

B细胞淋巴瘤/白血病-2/腺病毒E1B 19000相互作用蛋白3在肿瘤细胞凋亡与自噬中作用的研究进展

B细胞淋巴瘤/白血病-2/腺病毒E1B 19000相互作用蛋白3（BNIP3）是一种能和腺病毒E1B 19000蛋白相互作用的线粒体促凋亡蛋白.随着对BNIP3基因靶向治疗研究的深入,近年还发现其诱导细胞自噬的作用.BNIP3相关的凋亡与自噬可能导致肿瘤细胞截然不同的结果.现对两者的机制及相互关系做一综述.

B细胞淋巴瘤／白血病-2基因表达增高对神经酰胺诱导的膀胱癌细胞凋亡和凋亡诱导因子细胞内易位的影响

有研究结果显示，应用具有细胞膜通透性的神经酰胺可以直接诱导膀胱癌细胞凋亡。我们建立了稳定高表达B细胞淋巴瘤／白血病-2（bel-2）基因的膀胱癌细胞株，观察其对神经酰胺诱导的膀胱癌细胞凋亡的影响。

胰岛素样生长因子-1对大鼠胰岛功能及细胞凋亡的影响

目的研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在高糖条件下对大鼠胰岛功能及胰岛细胞凋亡的影响。方法体外培养SD大鼠胰岛48 h,按培养液不同分为3组:对照组(葡萄糖5.6 mmol/L)、高糖组(葡萄糖15.6mmol/L)、IGF-1组(葡萄糖15.6 mmol/L+IGF-1 10 ng/mL),检测项目(1)胰岛细胞分泌功能:放射免疫法、免疫组织化学法;(2)胰岛细胞凋亡:Hoechst33342染色免疫荧光法、DNA断裂的原位末端标记法(TUNEL法)、免疫组织化学法、透射电镜。结果与对照组比较,高糖组胰岛素分泌量、细胞内胰岛素表达率明显减少(P<0.05);凋亡细胞明显增多,人B细胞淋巴瘤/白血病因子-2(Bcl-2)表达率明显减少(P<0.05);细胞核碎裂固缩多,核仁消失核膜变形分泌颗粒减少可见淀粉样物质沉积。与对照组及高糖组比较,IGF-1组胰岛素分泌量、胰岛素表达率均明显升高(P<0.05);胰岛细胞凋亡率低于高糖组但高于对照组(P<0.05)、Bcl-2表达率高于高糖组但低于对照组(P<0.05);核碎裂、核固缩少,细胞核形态结构正常及分泌颗粒数量相对增加。结论 IGF-1可以直接作用于胰岛,有促进胰岛素分泌及抗细胞凋亡作用,这种功能可能与诱导抗凋亡因子Bcl-2高表达有关。

川楝子醇提物抑制急性淋巴细胞白血病细胞增殖的作用机制研究

目的:探究川楝子醇提物抑制急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞增殖的作用机制。方法:选取人急性淋巴白血病细胞T淋巴细胞(CCRF-CEM)细胞株及无特定病原体(SPF)级6周SD品种的雌性大鼠12只,以不同浓度梯度川楝子醇提物作用24 h、48 h、72 h,观察其对CCRF-CEM细胞的抑制及凋亡的影响。结果:16 mg/L、80 mg/L、400 mg/L川楝子醇提物作用ALL细胞的不同时间具有明显的抗增殖作用。相较于对照组,于同一时间点,不同质量川楝子醇提物的吸光度值明显不同,且随着质量的增加吸光度值逐渐降低(P<0.05)。与对照组比较,16 mg/L、80 mg/L、400 mg/L川楝子醇提物作用外周血淋巴细胞同一时间段的给药吸光度值比较差异无统计学意义(P>0.05)。提示不同质量浓度对外周血淋巴细胞无明显的不良反应。于同一时间点,与对照组比较,不同质量浓度川楝子提取物的B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)基因、Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因、P53基因表达明显不同(P<0.05);Bax基因随质量浓度的增加而增加,Bcl-2基因表达随质量浓度的增加而降低,24 h 400 mg/L川楝子醇提物的P53基因表达达到最高,而作用于ALL细胞48 h后,基因表达呈上升趋势(P<0.05)。结论:川楝子醇提物可通过线粒体介导抑制白血病CCRF-CEM细胞增殖,并且呈浓度及时间的依赖性。

颗粒酶B与B细胞淋巴瘤／白血病-2基因、Bid在细胞凋亡中的研究进展

颗粒酶B是细胞毒性T细胞发挥免疫杀伤作用的重要效应因子，能快速诱导靶细胞凋亡。细胞凋亡发生的原因和途径是复杂多样的，许多基因参与细胞凋亡的基因调控，其中B细胞淋巴瘤／白血病-2基因家族成员在细胞凋亡的过程中起着重要的作用。本文主要对颗粒酶B与B细胞淋巴瘤／白血病-2基因、BH3交叉域死亡受体激动剂在细胞凋亡中相关性进行综述。

磁刺激对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡、B细胞淋巴瘤/白血病基因-2及caspase-3基因表达的影响

目的 观察磁刺激治疗对急性脊髓损伤（SCI）大鼠神经细胞凋亡、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（Bcl-2）、半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）基因表达的影响.方法 将60只大鼠随机分成磁刺激组、模型组及假手术组.采用脊髓离断法将磁刺激组、模型组大鼠制成急性SCI模型,假手术组大鼠手术过程中未离断脊髓.磁刺激组大鼠于SCI后第6,12,24及72小时时给予磁刺激治疗,模型组及假手术组大鼠则于相同时间点予假磁刺激.各组分别于上述时间点磁刺激（或假磁刺激）治疗结束后2 h各取5只大鼠处死,取受损脊髓组织制成切片,采用TUNEL法检测神经细胞凋亡情况,选用免疫组化技术检测标本中Bcl-2及caspase-3基因表达.结果 假手术组大鼠受损脊髓中有散在凋亡细胞分布,模型组大鼠可见大量凋亡细胞,磁刺激组大鼠凋亡细胞数量显著少于模型组,组间差异具有统计学意义（P＜0.05）;模型组及磁刺激组在各观察时间点其Bcl-2及caspase-3表达均明显高于假手术组水平（P＜0.05）;磁刺激组大鼠Bcl-2表达显著高于模型组,caspase-3表达显著低于模型组,组间差异均具有统计学意义（P＜0.05）.结论 SCI后早期介入磁刺激治疗,能显著上调受损脊髓部位Bcl-2表达,下调caspase-3表达,从而尽可能抑制神经细胞凋亡,促进受损脊髓功能恢复.

Piscidinol A对人肝癌HepG-2细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨匹西狄醇A(Piscidinol A)对人肝癌Hep G-2细胞增殖及凋亡的影响。方法取对数生长期经胰酶消化后的Hep G-2细胞,培养24 h后分为药物组及对照组,药物组加入不同浓度Piscidinol A(6.25、12.5、25、50、100 mg/L),对照组加入等体积的含10%胎牛血清RPMI1640培养液,12、24、48 h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率,计算Piscidinol A的半数抑制浓度(IC_(50))值;于荧光显微镜下通过Hoechst 33258染色观察凋亡细胞形态,采用AnnexinⅤ-FITC/PI双标记法及流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blotting法检测B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x(Bax)蛋白表达。结果药物组Piscidinol A作用后Hep G-2细胞增殖受到抑制且呈量效和时效关系,24 h时IC_(50)值为24.90 mg/L;细胞凋亡染色显示,药物组有典型的细胞凋亡形态出现。药物组6.25、12.5、25、50、100 mg/L的Piscidinol A作用Hep G-2细胞24 h后,细胞凋亡率分别为11.83%、17.49%、21.72%、34.17%、48.51%,对照组为7.23%,随着药物浓度增大,药物组细胞凋亡率相应升高,与对照组相比,P均<0.05。药物组6.25、12.5、25、50、100 mg/L的Piscidinol A作用Hep G-2细胞24 h后,细胞凋亡相关蛋白Bax表达量分别为0.29、0.33、0.35、0.39、0.43μg/μL,对照组为0.24μg/μL,药物组随着Piscidinol A浓度升高,Bax蛋白表达增加,与对照组相比,P均<0.05。结论 Piscidinol A能抑制人肝癌Hep G-2细胞增殖并诱导细胞凋亡。