人B细胞激活因子受体-TACI基因表达水平的定量测定

目的:建立实时荧光定量PCR(RFQPCR)检测人B细胞激活因子受体TACImRNA含量的方法,初步探讨健康献血员外周血单个核细胞(PBMC)中TACImRNA表达水平。方法:在TACI基因高保守区设计特异性的引物和荧光探针,PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立的标准曲线,由软件自动计算出待测样本中TACImRNA准确含量,并以TACImRNA和β2MmRNA含量的比值作为评价TACI表达水平的指标。结果:本法检测TACImRNA含量的线性范围为109～101pg/ml,批内和批间重复性测定的CV分别为2.97%～9.32%和5.86%～10.29%。40例健康献血员样本的PBMC中35例(87.5%)检出有TACImRNA表达,范围为0.02～2.11。结论:成功建立RFQPCR检测TACImRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性,为进一步探讨TACImRNA表达水平与自身免疫性疾病发病机制之间的关系奠定了基础。

人B细胞激活因子受体-TACI基因表达水平定量标准品的构建

目的建立一种简便快速TACI基因表达水平定量标准品的制备方法。方法PCR扩增目的片段,与T载体连接,转化感受态大肠杆菌DH5α,阳性克隆进行测序证实,质粒用核酸分析仪准确定量,进行10倍系列稀释,作为标准品。结果:标准品建立的标准曲线有较大的线性范围,批内和批间重复性也较好,且可长期稳定保存。结论:使用质粒标准品对样本中TACI基因表达水平测定是一种可行的办法。

B细胞激活因子受体家族基因表达与原发性胆汁性肝硬化相关性研究

目的探讨 B 细胞激活因子(BAFF)受体家族基因表达水平与原发性胆汁性肝硬化(PBC)的相关性。方法以18S rRNA 为内参基因,通过靶基因与内参基因循环阈值之差,建立实时荧光逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)相对定量方法,检测30例正常人和30例 PBC 患者外周血单个核细胞 B 细胞成熟抗原(BCMA),穿膜蛋白活化物(TACI)及 B 细胞激活因子受体(BAFF-R)基因的相对表达量,并分析其与免疫球蛋白 IgM、碱性磷酸酶(ALP)及γ-谷氨酰转肽酶(GGT)的相关性。结果 PBC 患者外周血单个核细胞 BCMA mRNA 是正常对照组的8.6倍,差异有统计学意义(P<0.05);TACI mRNA 显著低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而 BAFF-R mRNA 比正常对照组稍降低,差异无统计学意义(P>0.05)。BCMA 的△Ct 值与 IgM、GGT 和 ALP 有相关性(P<0.01);TACI 的△Ct 值与 IgM 有相关性(P<0.05),与 GGT、ALP 无相关性(均 P>0.05);BAFF-R 与IgM、GGT 和 ALP 均无相关性(均 P>0.05)。结论 PBC 患者外周血单个核细胞 BCMA mRNA 表达水平显著升高,TACI 基因表达明显降低,提示 PBC 发病机制与体液免疫增强、免疫耐受打破有关,且BCMA 可能与 PBC 的疾病进程有关。

B细胞激活因子在免疫调节中的作用

B细胞激活因子(BAFF)是调节B淋巴细胞存活和成熟的细胞因子,属于TNF家族成员。BAFF有三个受体,分别为BCMA,TACI和BAFF-R。近几年来的研究表明,BAFF及其受体在抗体类型转换、生发中心维持、T细胞共刺激等方面发挥着重要的免疫调节作用,对自身免疫疾病、淋巴瘤和B细胞免疫缺陷的治疗具有潜在的应用前景。本文就BAFF的结构与表达,BAFF受体,生物学功能及其临床应用作一综述。

破骨细胞活化因子与骨髓瘤骨病的关系

目的:探讨破骨细胞活化因子与骨髓瘤骨病的关系,研究其与骨损程度的关系。方法:采用实时荧光定量RT-PCR检测多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓及骨髓瘤细胞株U266中细胞核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)、护骨蛋白(OPG)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)的mRNA转录情况,进而探讨其在MM骨病中的作用。结果:U266及MBD患者中,RANKL、MIP-1α及大部分NSEmRNA的转录水平显著高于对照组,且与骨损害程度基本呈正相关,MM中OPG的分泌较对照组明显减少。结论:骨髓瘤骨病是一个多因子、多系统参与的复杂的、综合作用导致的结果。

雌、孕激素对人早孕蜕膜基质细胞中B淋巴细胞激活因子受体(BAFFR)表达的影响

目的:初步探讨B淋巴细胞激活因子受体(Bcells-activating factor receptor,BAFFR)在胚胎植入调控中的作用。方法:选取正常早孕妇女人工流产蜕膜组织,分离、提纯早孕蜕膜基质细胞(decidual stromal cells,DSC),培养于含10%去激素胎牛血清培养基内,分为雌二醇(E2)组、孕酮(P4)组、E2+P4组和空白对照(C)组,培养96h。MTT检测细胞的增殖能力;Real-time PCR检测BAFFR mRNA;流式细胞仪检测BAFFR蛋白表达。结果:与C组比较,各实验组DSC增殖能力及BAFFR mRNA水平均无明显变化(P>0.05);BAFFR蛋白定位于DSC胞内,且E2+P4可显著上调其表达(P<0.05)。结论:正常人早孕DSC表达高水平的BAFFR,雌、孕激素联合对其有显著的上调作用,提示BAFFR可能参与胚胎植入的调控及早孕期母-胎界面的免疫调节。

B细胞激活因子在干燥综合征患者唇腺中的表达及其意义

目的探讨B细胞激活因子(BAFF)及其受体(BAFF-R)在干燥综合征(SS)患者唇腺组织中的表达及与唇腺组织中淋巴细胞浸润的关系。方法用免疫组化法检测唇腺组织中BAFF及BAFF-R的表达,以HE染色的方法来检测唇腺组织中淋巴细胞浸润情况,分析SS患者唇腺标本中BAFF的表达与淋巴细胞浸润情况的关系。结果 SS患者唇腺组织中BAFF及BAFF-R的表达均高于对照组(BAFF表达阳性率:90%vs.10%;BAFF-R表达阳性率60%vs.20%;P均<0.05)。相关性分析结果提示BAFF及BAFF-R的表达与唇腺组织中淋巴细胞浸润呈正相关(分别为:r=0.457,P<0.05;r=0.389,P<0.05)。结论 SS患者BAFF的表达升高且与淋巴细胞浸润程度相关,提示BAFF可能在SS唇腺组织的破坏及SS发病过程中具有重要作用。

miR-26a在血管钙化中的作用机制

目的探讨血管钙化过程中miR-26a表达差异及其作用机制。方法通过体内和体外实验构建血管钙化模型,利用分子生物学、病理生物学及细胞生物学检测方法,验证血管钙化过程中miR-26a表达差异及可能作用机制。结果与模型组和mimic NC组相比较,miR-26a mimic组碱性磷酸酶活性显著降低(P<0.05)。而inhibitor NC组和miR-26a inhibitor组碱性磷酸酶无显著变化(P>0.05)。与mimic NC组比较,miR-26a mimic组miR-26a、骨保护素(OPG)表达水平显著升高(P<0.05),而骨桥蛋白(OPN)、骨形态发生蛋白(BMP)-2和胶原蛋白(Collagen)Ⅱ表达水平显著降低(P<0.05)。与inhibitor NC组比较,miR-26a inhibitor组miR-26a、OPG、OPN、BMP-2和CollagenⅡ表达水平无显著差异(P>0.05)。结论miR-26a在血管钙化中的作用机制可能与OPG/核因子κB受体激活剂(RANK)/细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)信号通路有关。

BAFF/BAFF-R单核苷酸多态性与移植肾功能的相关性

为探讨人B细胞激活因子(B cell activating factor belonging to the TNF family,BAFF)及BAFF受体(BAFF-receptor,BAFF-R)单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)与肾移植的相关性,随机选取肾移植受者310例和健康体检对照者51例,采集抗凝外周血和血清。选取5个BAFF/BAFF-R SNP,以Taqman qRT-PCR进行基因分型。Hardy-Weinberg平衡检验结果提示基因型分布具有群体代表性。以估算的肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate, eGFR)90 mL/(min·1.73 m^(2))为临界值,将肾移植受者分为eGFR正常组和异常组。Logistic回归分析显示,在杂合遗传模型下BAFF rs9514828 CT基因型携带者移植肾功能异常概率比其他基因型携带者显著升高(OR=1.597, 95%CI 1.012~2.519,P<0.05),与血清可溶性BAFF(soluble BAFF, sBAFF)水平和群体反应性抗体(panel reactive antibody, PRA)阳性率无显著相关性。其余4个SNP基因型在组间的差异无统计学意义。Haploview 4.0软件分析显示,BAFF rs16972194、rs9514828、rs16972197间存在强连锁不平衡。单倍体分析显示,单倍体“GCG”携带者移植肾功能正常概率显著升高(OR=0.381, 95%CI 0.156~0.931,P<0.05)。该研究提示,对肾移植受者来说,BAFF rs9514828 CT基因型可能是移植肾功能异常的风险因素,单倍体GCG可能是移植肾功能正常的保护因素。