槲皮素通过生长抑制特异性基因5调节微小RNA-23a-3p和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路抑制垂体神经内分泌肿瘤的增殖机制

目的:探讨槲皮素对垂体神经内分泌肿瘤(PitNETs)生长的抑制作用及其可能机制。方法:通过Starbase工具预测生长抑制特异性基因5(GAS5)与微小RNA-23a-3p(miR-23a-3p)结合情况,双荧光素酶报告实验和RNA免疫沉淀测定GAS5和miR-23a-3p之间的结合关系。体外培养人垂体瘤细胞系RC-4B/C,分为对照组(Control)、槲皮素组(Quercetin)、GAS5抑制组(Si-GAS5)和槲皮素+si-GAS5组(Quercetin+si-GAS5),对比分析槲皮素对GAS5、miR-23a-3p及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响,以及人垂体瘤复苏细胞(RC-4B/C)生长和侵袭能力的影响。结果:Starbase工具预测GAS5与miR-23a-3p结合,双荧光素酶报告实验和RNA免疫沉淀测定揭示了GAS5和miR-23a-3p之间的直接结合。槲皮素促进GAS5的表达,抑制miR-23a-3p和PI3K/AKT的表达,抑制RC-4B/C细胞的增殖和侵袭(均P<0.05);下调GAS5、miR-23a-3p表达增多,促进RC-4B/C细胞的增殖和侵袭(均P<0.05);槲皮素可以逆转GAS5下调引起的miR-23a-3p、PI3K/AKT表达增加,抑制RC-4B/C细胞的增殖和侵袭(均P<0.05)。结论:槲皮素可能通过促进GAS5表达竞争性抑制miR-23a-3p,降低了PI3K/AKT,抑制垂体神经内分泌肿瘤的生长。

B细胞特异性激活蛋白与CD20在淋巴组织增生性疾病中的表达

目的 探讨B细胞特异性激活蛋白 (Bcell specificactivatorprotein ,BSAP)在淋巴组织增生性疾病中表达情况及在淋巴瘤鉴别诊断中的意义。方法 观察 6 3例淋巴组织增生性疾病的组织病理学形态 ,按WHO新分类方案进行淋巴瘤分型 ,采用免疫组织化学S P法同步检测比较BSAP和CD2 0的表达。结果 9例淋巴结反应性增生的B淋巴细胞 ,34例B细胞性淋巴瘤的瘤细胞均表达BSAP和CD2 0 ,但BSAP的中等到强阳性表达率 (6 9 8% )高于CD2 0 (5 3 5 % ) ,二者差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;6例霍奇金淋巴瘤H/RS瘤细胞表达阳性率为 83 2 % ;14例T细胞淋巴瘤的肿瘤细胞均不表达BSAP。结论 BSAP表达定位于B淋巴细胞的核内 ,清晰易见 ,在B细胞性淋巴瘤表达多呈强阳性 ,可用于淋巴瘤的分型与鉴别诊断 。

B细胞特异性激活蛋白研究进展

B细胞特异性激活蛋白（BSAP）是近年来新发现的B细胞核反式作用因子，属转录因子的pax基因家族成员，其蛋白结构已经清楚。在淋巴系统内，仅B细胞可产生这一因子，其功能是在B细胞发育早期，调节B细胞多种特异性基因表达；B细胞被激活后、促进B细胞的增殖及同型转换。但BSAP对免疫球蛋白的基因转录起抑制作用，因此，在B细胞分化晚期，BSAP水平下降时，可使免疫球蛋白分泌增加。

血清miR-340-5p、Bmi-1与老年急性脑梗死后血管性认知障碍的相关性研究

目的探讨血清微小RNA-340-5p(miR-340-5p)、B细胞特异性Moloney小鼠白血病病毒整合位点1(Bmi-1)与老年急性脑梗死后血管性认知障碍(VCI)的相关性。方法选取2021年3月至2023年2月就诊的103例老年急性脑梗死患者作为研究对象,根据MoCA评分将患者分为VCI组(n=60)和无VCI组(n=43)。比较2组患者的一般资料;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组血清中miR-340-5p、Bmi-1的表达情况;ENCORI预测miR-340-5p与Bmi-1的靶向关系;Pearson法分析VCI患者血清miR-340-5p与Bmi-1表达水平相关性;Spearman相关分析血清miR-340-5p、Bmi-1水平与MoCA评分的相关性;Logistic回归分析老年急性脑梗死患者发生VCI的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-340-5p、Bmi-1水平对老年急性脑梗死患者发生VCI的诊断价值。结果VCI组患者吸烟史、既往脑梗病史占比显著高于无VCI组(P<0.05),MoCA评分显著低于无VCI组,差异有统计学意义(P<0.05);与无VCI组相比,VCI组miR-340-5p表达水平均明显降低(P<0.05),Bmi-1表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);ENCORI网站预测结果显示,miR-340-5p与Bmi-1可能存在靶向关系;且VCI组患者血清miR-340-5p表达水平与Bmi-1呈负相关,血清miR-340-5p表达与MoCA评分呈正相关,Bmi-1表达与MoCA评分呈负相关(P<0.05);Logistics回归分析结果显示,MoCA评分、miR-340-5p是影响老年急性脑梗死患者发生VCI的保护因素(P<0.05),吸烟史、既往脑梗死病史、Bmi-1是影响老年急性脑梗死患者发生VCI的危险因素(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,血清miR-340-5p、Bmi-1表达水平(AUC=0.851、0.886)对老年急性脑梗死后VCI有良好的诊断效果,且二者联合诊断效果更佳(AUC=0.947,Z二者联合-miR-340-5p=3.018、P=0.003,Z二者联合-Bmi-1=2.636,P=0.008)。结论老年急性脑梗死后VCI患者血清,miR-340-5p表达下调,Bmi-1表达上调,二者表达水平与老年急性脑梗死患者发生VCI过程密切相关。

B细胞特异性激活蛋白在神经内分泌肿瘤中的表达

目的:观察B细胞特异性激活蛋白(PAX5)在神经内分泌肿瘤(NEN)中的表达。方法:经证实为NEN病例标本56例,用免疫组化SP法检测其石蜡包埋肿瘤组织中PAX5和Ki67表达,比较PAX5在不同肿瘤大小(肿块直径≤2 cm或>2 cm)、Ki67表达率(Ki67≤20%或>20%)及TNM分期(早期或晚期)中的表达情况。结果:PAX5在Ki67>20%病例中的阳性表达率(59.52%)高于Ki67≤20%病例(21.43%),在晚期病例(62.16%)高于早期病例(26.32%),差异有统计学意义(P<0.05);在不同肿块直径病例中的阳性率比较,差异无统计学意义(P=0.78)。结论:PAX5在NEN中有一定表达,表达与肿瘤增殖活性(Ki67表达率)及TNM分期有关。

糖尿病大鼠血蛋白激酶C和骨骼肌Bax/B细胞淋巴瘤-2、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3变化及其意义

目的:探讨糖尿病大鼠血蛋白激酶C(PKC)和骨骼肌Bax/Bcl-2、Caspase3变化及意义。方法:建立糖尿病大鼠模型,16只SD大鼠随机分成正常对照组和糖尿病组,采用ELISA法测定血PKC值,取后肢腓肠肌HE染色后行组织学观察,并用免疫组化方法测定Bax、Bcl2和Caspase3值。结果:糖尿病组大鼠骨骼肌普遍萎缩,肌纤维萎缩变细,纤维变性、水肿,部分区域坏死,纤维断裂,肌丝走行紊乱,核固缩,横纹模糊消失,间质脂肪组织略增生。糖尿病组和正常对照组大鼠的血PKC值分别为110.60±5.94ng·mL-1和74.72±7.19ng·mL-1,骨骼肌Bax值分别为26311±3698.30μm2和16764±6116.10μm2,Bcl2值分别为18573±8529.90μm2和35533±485.52μm2,Caspase3值为32419±3201.50μm2和12123±1919.60μm2。糖尿病大鼠血中PKC值较正常对照组显著升高,糖尿病组肌肉中Caspase3及Bax值显著升高,而Bcl2值明显下降,Bax/Bcl2值升高,两组间比较均有显著差异。结论:氧化应激中的PKC途径及细胞凋亡通路共同参与了糖尿病骨骼肌病变的发生,可能是糖尿病骨骼肌病变的重要发病机制之一。

六味地黄丸对骨质疏松性椎体骨折患者血清骨特异性碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b及骨密度的影响

目的探讨骨质疏松性椎体骨折患者采用六味地黄丸治疗的效果。方法选取2021年2月至2022年2月衡阳市中医医院收治的80例骨质疏松性椎体骨折患者作为研究对象,采用随机数字表法将其分为对照组(40例)和观察组(40例)。对照组采用手术联合西药治疗,观察组加用六味地黄丸治疗。比较两组的骨密度、血清骨碱性磷酸酶(BALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)、Oswestry功能障碍指数(ODI)评分。结果观察组治疗后的骨密度水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗前的血清BALP、TRACP-5b水平的比较,差异无统计学意义(P>0.05),观察组治疗后血清BALP、TRACP-5b水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),两组治疗前ODI评分比较,差异无统计学意义(P>0.05),观察组治疗后的ODI评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论六味地黄丸治疗骨质疏松性椎体骨折的效果明显,患者骨密度明显升高,其机体血清指标下降,患者功能障碍改善明显,临床上可借鉴及推广。

LncRNA XIST调节miR-574-5p/TLR4轴对呼吸道合胞病毒感染的支气管上皮细胞凋亡的影响

目的探讨长链非编码(long non-coding,Lnc)核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)X-非活性特异性转录本(X-inactive specific transcript,XIST)调节微小RNA(microRNA,miR)-574-5p/Toll样受体(Toll-like receptor 4,TLR4)轴对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染的支气管上皮细胞凋亡的影响。方法将人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial,16HBE)分为阴性对照(negative control,NC)组、RSV感染(RSV infection,RSV)组、小干扰RNA阴性对照(small interfering RNA negative control,si-NC)组、XIST小干扰RNA(XIST small interfering RNA,si-XIST)组、siXIST+抑制剂阴性对照(inhibitor negative control,inhibitor-NC)组、si-XIST+miR-574-5p抑制剂(miR-574-5p inhibitor)组,实时荧光定量聚合酶链反应检测LncRNA XIST、miR-574-5p表达;5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)染色、流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡;酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β的分泌;双荧光素酶报告基因实验验证miR-574-5p与LncRNA XIST和TLR4的关系;蛋白质印迹检测TLR4、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(B lymphoblastoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved cysteine aspartate proteolytic enzyme 3,Cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果相较于NC组,RSV组、si-NC组LncRNA XIST、凋亡率、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、TLR4、Bax、Cleaved Caspase-3表达升高,EdU阳性率、miR-574-5p、PCNA、Bcl-2表达降低(P均<0.05);相较于si-NC组,si-XIST组LncRNA XIST表达、凋亡率、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、TLR4、Bax、Cleaved Caspase-3表达降低,EdU阳性率、miR-574-5p、PCNA、Bcl-2表达升高(P均<0.05);下调miR-574-5p可逆转敲低LncRNA XIST对RSV感染的16HBE细胞凋亡和炎症反应的抑制(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-574-5p与LncRNA XIST、miR-574-5p与TLR4存在靶向调控关系(P<0.05)。结论LncRNA XIST在RSV感染的16HBE细胞中上调表达,敲低LncRNA XIST可能通过上调miR-574-5p来下调TLR4表达,抑制RSV感染后的16HBE细胞凋亡。

赖氨酸特异性脱甲基酶2B及B细胞淋巴瘤-2蛋白、Hrk蛋白在卵巢癌组织中的表达情况及其临床意义

目的 分析赖氨酸特异性脱甲基酶2B(KDM2B)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白、Hrk蛋白在卵巢癌中的表达情况及其临床意义。方法 收集20例正常卵巢组织、30例良性卵巢肿瘤组织以及50例恶性卵巢肿瘤组织。采用免疫组织化学法检测3种组织KDM2B、Bcl-2蛋白、Hrk蛋白的表达情况。比较不同临床病理特征的恶性卵巢肿瘤患者间3种蛋白表达的情况,并分析恶性卵巢肿瘤组织中3种蛋白表达的相关性。结果 恶性卵巢肿瘤组织的KDM2B、Bcl-2蛋白阳性表达率高于良性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织(均P<0.05),恶性卵巢肿瘤组织、良性卵巢肿瘤组织、正常卵巢组织的Hrk阳性表达率依次升高(均P<0.05)。低分化、国际妇产科联合会(FIGO)分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移病例的KDM2B及Bcl-2蛋白阳性表达率均分别高于中-高分化、FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移病例(均P<0.05),而Hrk蛋白阳性表达率均分别低于中-高分化、FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移病例(均P<0.05)。不同年龄段病例的3种蛋白阳性表达率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。在卵巢恶性肿瘤组织中,KDM2B、Bcl-2蛋白与Hrk蛋白的阳性表达率均呈负相关(均P<0.05)。结论 卵巢癌中KDM2B与Bcl-2蛋白的表达上调,Hrk蛋白的表达下调,三者可能通过不同的方式参与卵巢癌的发生发展。

中药联合窄谱中波紫外线对寻常型银屑病表皮中B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3及生存素的影响

目的探讨中药联合窄谱中波紫外线(NB-UVB)在调节寻常型银屑病皮损中角质形成细胞凋亡的可能作用。方法选择30例寻常型银屑病患者给予中药银屑病方联合NB-UVB治疗,疗程8周,取治疗前后标本,用免疫组化方法检测正常人(20名)及患者(30例)治疗前后皮损中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、生存素(survivin)的表达。结果寻常型银屑病患者皮损中Bcl-2(7.50±2.01)的表达明显低于正常组(12.65±2.83),Caspase-3(21.73±3.70)的表达明显高于正常组织(8.55±2.16),survivin(23.90±2.82)的表达明显高于正常组织(7.06±1.96,P<0.01);治疗后Bcl-2(13.63±2.14)表达上调,Caspase-3(11.70±2.44)、survivin(12.46±1.80)表达下调(P<0.01),三者均有向正常组织表达转化的趋势。银屑病面积和严重程度指数(PASI)评分由治疗前(14.24±3.42)下降至治疗后(3.52±1.07,P<0.01))。结论中药银屑病方联合NB-UVB可能通过调节Bcl-2、Caspase-3、survivin的表达而调节角质形成细胞的凋亡达到治疗目的。

微RNA-145-5p对胃腺癌细胞增殖和细胞周期的影响及机制

目的探讨微RNA(miR)-145-5p对胃腺癌细胞增殖、细胞周期的影响及可能的调控机制。方法从癌症基因组图谱数据库中下载在胃腺癌中差异表达miRNA数据,对其进行差异分析并结合文献确定要研究的目标miRNA。利用TargetScan和Starbase数据库对miR-145-5p的下游信使RNA(mRNA)进行靶向预测并进行相关性分析。将对数生长期人胃腺癌细胞分为mimic NC组(转染mimic NC)、miR-145-5p mimic组(转染miR-145-5p mimic)、Inhibitor NC组(转染Inhibitor NC)、miR-145-5p Inhibitor组(转染miR-145-5p Inhibitor)、mimic NC+oe-NC组(同时转染mimic NC和oe-NC)、miR-145-5p mimic+oe-NC组(同时转染miR-145-5p mimic和oe-NC)、miR-145-5p mimic+oe-淋巴特异性解旋酶(HELLS)组(同时转染miR-145-5p mimic和oe-HELLS)。采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应检测人胃黏膜细胞和人胃腺癌细胞中miR-145-5p和HELLS mRNA的表达水平;细胞计数试剂盒-8和克隆形成实验检测胃癌细胞SGC-7901、BGC-823的增殖能力;流式细胞术检测胃癌细胞SGC-7901、BGC-823的周期分布情况;双荧光素酶报告实验验证miR-145-5p与HELLS的靶向关系;Western blot法检测HELLS蛋白的表达水平。结果生物信息学分析结果显示,胃腺癌组织中miR-145-5p的表达量显著低于正常胃组织,HELLS的表达量显著高于正常胃组织(P<0.05);HELLS与miR-145-5p呈显著负相关(r=-0.470,P<0.05)。人胃腺癌细胞中miR-145-5p的相对表达量显著低于人胃黏膜细胞,HELLS mRNA相对表达量显著高于人胃黏膜细胞(P<0.05)。转染后0、24 h时,mimic NC组与miR-145-5p mimic组SGC-7901细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05);转染后48、72、96 h时,miR-145-5p mimic组SGC-7901细胞增殖能力显著低于mimic NC组(P<0.05)。转染后0、24 h时,Inhibitor NC组与miR-145-5p Inhibitor组BGC-823细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05);转染后48、72、96 h时,miR-145-5p Inhibitor组BGC-823细胞增殖能力显著高于Inhibitor NC组(P<0.05)。miR-145-5p mimic组细胞克隆数显著少于mimic NC组(P<0.05),miR-145-5p Inhibitor组细胞克隆数显著多于Inhibitor NC组(P<0.05)。mimic NC+oe-NC组、miR-145-5p mimic+oe-HELLS组SGC-7901细胞克隆数显著多于miR-145-5p mimic+oe-NC组(P<0.05)。miR-145-5p mimic组G_(0)+G_(1)期SGC-7901细胞所占比例显著高于mimic NC组,S期和G_(2)+M期细胞所占比例显著低于mimic NC组(P<0.05)。miR-145-5p Inhibitor组G_(0)+G_(1)期BGC-823细胞所占比例显著低于Inhibitor NC组,S期和G_(2)+M期细胞所占比例显著高于Inhibitor NC组(P<0.05)。miR-145-5p mimic+oe-NC组G_(0)+G_(1)期SGC-7901细胞所占比例显著高于mimic NC+oe-NC组,S期和G_(2)+M期细胞所占比例显著低于mimic NC+oe-NC组(P<0.05)。miR-145-5p mimic+oe-HELLS组G_(0)+G_(1)期SGC-7901细胞所占比例显著低于miR-145-5p mimic+oe-NC组,S期和G_(2)+M期细胞所占比例显著高于miR-145-5p mimic+oe-NC组(P<0.05)。WT-HELLS+miR-145-5p mimic组细胞的荧光素酶活性显著低于WT-HELLS+mimic NC组(P<0.05),MUT-HELLS+miR-145-5p mimic组与MUT-HELLS+mimic NC组细胞中荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。miR-145-5p mimic组细胞中HELLS蛋白相对表达量显著低于mimic NC组(P<0.05)。mimic NC+oe-NC组、miR-145-5p mimic+oe-HELLS组细胞中HELLS蛋白相对表达量显著高于miR-145-5p mimic+oe-NC组(P<0.05)。结论miR-145-5p在胃腺癌中呈显著低表达。过表达miR-145-5p能够抑制胃腺癌细胞的增殖,同时将胃腺癌细胞阻滞在G_(0)和G_(1)期。miR-145-5p可能是通过靶向HELLS mRNA来抑制HELLS蛋白的表达和胃腺癌细胞的增殖。

颅脑超声联合血清神经元特异性烯醇化酶、S100B及白细胞介素-6检测对早产儿脑白质损伤的诊断价值

目的探讨颅脑超声联合血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S100B及白细胞介素-6(IL-6)检测对早产儿脑白质损伤的诊断价值。方法选择2016年8月至2017年7月郑州市妇幼保健院新生儿科收治的经颅脑磁共振成像(MRI)检查诊断为脑白质损伤的早产儿39例为观察组,另选同期经颅脑MRI检查诊断脑白质无损伤的早产儿30例为对照组,分别于出生后1、3、7 d采用全自动时间分辨荧光免疫分析系统检测血清NSE水平,双抗体夹心酶联免疫吸附试验测定血清S100B、IL-6水平,并采用颅脑超声观测脑室周围脑白质回声的变化,分析颅脑超声与NSE、S100B、IL-6联合对诊断早产儿脑白质损伤的灵敏度、特异度和准确性。结果在出生后1、3、7 d,对照组患儿颅脑超声检查脑白质损伤检出率分别为6.45%(2/31)、3.23%(1/31)和0.00%(0/31),观察组患儿脑白质损伤检出率分别为92.31%(36/39)、87.18%(34/39)和84.62%(33/39);观察组患儿出生后1、3、7 d脑白质损伤的检出率均显著高于对照组(χ~2=51.30、48.69、49.63,P<0.05)。对照组、观察组患儿出生后1、3、7 d脑白质的超声灰度值组内比较差异均无统计学意义(P>0.05),但观察组患儿脑白质的灰度值与对照组比较均显著增高(P<0.05)。对照组患儿出生后1、3、7 d血清S100B、IL-6水平比较差异无统计学意义(F=0.319、0.307,P>0.05),血清NSE水平比较差异有统计学意义(F=3.298,P<0.05),其中出生后3、7 d血清NSE水平显著低于出生后1 d(P<0.05),出生后7 d血清NSE水平显著低于出生后3 d(P<0.05)。观察组患儿出生后1、3、7 d血清NSE、S100B、IL-6水平均呈现下降趋势(F=3.323、3.517、3.706,P<0.05),其中出生后3、7 d,观察组患儿血清NSE、S100B、IL-6水平与出生后1 d比较显著下降(P<0.05),出生后7 d观察组患儿血清NSE、S100B、IL-6水平与出生后3 d比较差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,观察组患儿出生后1、3、7 d血清NSE、S100B、IL-6水平均显著增高(P<0.05)。观察组患儿出生后1 d颅脑超声脑白质灰度值与血清NSE、S100B和IL-6水平均呈显著正相关(r=3.137、3.358、3.056,P<0.05);出生后3 d脑白质灰度值与血清S100B、NSE水平呈显著正相关(r=2.872、2.347,P<0.05),出生后7 d脑白质灰度值与S100B呈显著正相关(r=2.791,P<0.05)。颅脑超声+NSE+S100B联合检测诊断脑白质损伤具有较高的灵敏度(100.00%)、特异度(93.54%)和准确性(97.14%)。结论颅脑超声、NSE、S100B联合检测可显著提高早期诊断脑白质损伤的准确性。

生长停滞特异性转录本5在乳腺癌中低表达并抑制上皮细胞-间充质转化

目的探讨生长停滞特异性转录本5(lncRNA-GAS5)在乳腺癌中发展和上皮细胞-间充质转化(EMT)过程中的影响。方法采用实时定量聚合酶链反应法检测乳腺癌组织和癌旁组织(n=36)、乳腺癌MCF-7亲本和耐药细胞中lncRNA-GAS5的表达,并分析GAS5表达与乳腺癌临床分期和淋巴结转移相关性;qRT-PCR法、Western blot和免疫组化法检测细胞周期和EMT相关蛋白的表达;迁移、趋化和黏附分离实验检测细胞生物学活性;通过光学显微镜观察细胞的形态学变化;以耐药细胞株构建裸鼠乳腺癌模型,体内探讨过表达GAS5对紫杉醇抗乳腺癌作用的影响。结果 LncRNA GAS5转录本水平相对于癌旁组织是显著降低的(P<0.05),GAS5低表达与乳腺癌TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05);耐药细胞株中GAS5表达下调(P<0.05),GAS5与P21表达正相关,而与CDK6表达呈负相关;体外干扰GAS5促进乳腺癌亲本细胞株发生EMT表型改变和侵袭能力增加,而过表达lncRNA GAS5可抑制乳腺癌耐药细胞株EMT表型和侵袭能力(P<0.05),并提高紫杉醇的药物敏感性。体内实验发现,过表达GAS5通过逆转EMT标志蛋白,提高紫杉醇抑制肿瘤生长和肺转移的作用。结论 LncRNA GAS5低表达可能通过诱导EMT促进乳腺癌的肺转移,可能是乳腺癌的一个潜在治疗靶点。

B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1在头颈部鳞状细胞癌中的研究进展

在中国,头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)占全部恶性肿瘤的3%,严重影响患者的生命健康。多数研究显示,B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1(BMI1)基因在HNSCC中异常表达,其通过调节肿瘤细胞的干性促进肿瘤的发生发展,是一个具有巨大潜力的新型治疗靶点。本文回顾近年来的相关文献,从BMI1对肿瘤发生、增殖、迁移、免疫调节的作用及其抑制剂的应用进展等方面做一综述,为深入研究其作为治疗HNSCC的潜在靶点提供参考。

大鼠三叉神经节神经元5-羟色胺激活电流及其特征

采用全细胞膜片钳技术观察大鼠三叉神经节神经元5-羟色胺激活电流(I5-HT)及其特征。在大多数受检细胞(64／87,73.6％)特别是中、小型细胞,外加5-HT可引起一快去敏感的内向电流,此内向电流可被5-HT3受体特异性激动剂2-甲基-5-羟色胺所模拟,被5-HT3受体拮抗剂ICS 250-930可逆性阻断。I5-HT浓度-反应曲线的阈浓度为3×10-7mol／L,饱和浓度约为3×10-3mol／L,EC50为21.4+2.2μmol／L,Hill系数为0.96。I5-HT的翻转电位在-2.5 mV左右。胞内透析GDP-β-S证明I5-HT不依赖于G蛋白而存在。本研究结果为了解5-HT3受体介导电流及其特征提供了有关的资料。

P53-P21蛋白通路对5-氮杂胞苷诱导的大鼠骨髓间充质干细胞 增殖和凋亡的影响

背景:5-氮杂胞苷是诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的有效化学试剂。目的:观察 P53 特异性抑制剂 PFT-α阻断 P53-P21 蛋白通路对 5-氮杂胞苷诱导的大鼠骨髓间充质干细胞增殖和凋亡的影响。方法:分离 SD 大鼠骨髓间充质干细胞,取第 3 代细胞分为 4 组,即正常对照组、5-氮杂胞苷组、PFT-α组、PFT-α+5-氮杂胞苷组。观察骨髓间充质干细胞培养传代过程中细胞形态变化,应用流式细胞仪鉴定骨髓间充质干细胞表面抗原,MTT 法测定诱导后各组骨髓间充质干细胞增殖能力,以流式细胞仪检测诱导后各组细胞凋亡率,采用 Western blot 法测定诱导后P53、P21 蛋白表达情况。结果与结论:原代培养的骨髓间充质干细胞 2 周形成集落,传代细胞体积变大,呈长梭形,排列趋一致。骨髓间充质干细胞表面抗原 CD44,CD45 阳性表达率分别为(89.98±1.29)%,(2.14±0.22)%。MTT 结果显示,当 PFT-α浓度≤20 μmol/L 时,对骨髓间充质干细胞的增殖有一定促进作用;而当其浓度达到 40 μmol/L 时,PFT-α则可明显抑制骨髓间充质干细胞的增殖。培养第 5,7 天时,与其他 3 组比较,5-氮杂胞苷组对骨髓间充质干细胞增殖表现出明显抑制(P<0.01)。流式细胞仪结果显示,5-氮杂胞苷组骨髓间充质干细胞凋亡率显著高于其他 3 组(P<0.01)。Western blot 结果显示,各组均有 P53、P21 蛋白的表达,以 5-氮杂胞苷组表达量明显增多。提示通过 P53 特异性抑制剂 PFT-α阻断 P53-P21 蛋白通路,能显著减少 5-氮杂胞苷诱导的骨髓间充质干细胞的凋亡,促进 5-氮杂胞苷诱导的骨髓间充质干细胞增殖。

三氧化二砷对恶性黑素瘤A_(375)细胞NF-κB、C-IAP2及caspase-3表达的影响

目的：探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）在诱导人黑素瘤A375细胞凋亡中,对核因子-κB（NF-κB）、细胞凋亡抑制蛋白2（C-IAP2）以及半胱氨酸-天冬氨酸特异性蛋白酶-3（caspase-3）表达的影响。方法：Western blot法检测A375细胞中NF-κB p65核蛋白的表达和caspase-3蛋白的活化,半定量RT-PCR法检测C-IAP2mRNA的表达。结果：2.5、5.0、10.0μmol/LAs2O3作用于A375细胞24h,NF-κB p65核蛋白表达比值分别为（39.60±7.76）%、（10.17±0.90）%和（4.43±0.91）%;caspase-3蛋白比值分别为（10.03±2.06）%、（23.43±3.28）%和（35.70±4.61）%;C-IAP2mRNA表达的比值为（66.78±15.46）%、（30.16±5.52）%和（6.46±4.54）%,上述各指标与相应对照组比较及组内两两比较差异均有统计学意义（P〈0.05~P〈0.01）,随着As2O3作用浓度的增加,caspase-3激活型蛋白增多,NF-κB p65核蛋白和C-IAP2mRNA表达下降。结论：As2O3能抑制NF-κB、C-IAP2基因的表达,活化caspase-3蛋白表达。推测NF-κB-C-IAP2-caspase-3通路可能是As2O3诱导A375细胞凋亡的途径之一。

LncRNA-PVT 1/miR-15 a/Bmi-1通路调控HGC-27胃癌细胞的体外增殖

【目的】探讨lncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1通路在胃癌细胞体外增殖中的调控作用。【方法】分别研究PVT1,miR-15a及Bmi-1在HGC-27胃癌细胞体外增殖中的作用。体外培养的人胃癌细胞株HGC-27分为如下组别:①空白对照组、si-PVT1(转染PVT1 siRNA)和si-PVT1 NC(转染PVT1 siRNAscramble阴性对照);②空白对照组、miR-15a(转染miR-15a模拟物)和miR-15a NC(转染miR-15a模拟物的阴性对照)。③空白对照组、si-Bmi-1(转染Bmi-1的siRNA)和si-Bmi-1 NC(转染Bmi-1的siRNAscramble阴性对照)。采用MTS法检测上述组别的细胞增殖情况。在抑制PVT1后检测不同组别PVT1、miR-15a和Bmi-1的表达情况。为验证miR-15a与Bmi-1之间的调节关系,将HGC-27胃癌细胞株分为3组:空白对照、miR-15a(转染miR-15a模拟物)和miR-15a NC(转染模拟物阴性对照),检测各组miR-15a和Bmi-1的表达情况。通过生物信息学网站预测PVT1与miR-15a以及miR-15a与Bmi-1的潜在结合位点。采用双荧光素酶报告基因技术验证PVT1与miR-15a以及miR-15a和Bmi-1之间的靶向调节关系。在前述基础上,逆向验证PVT1、miR-15a和Bmi-1三者之间的调控关系。【结果】抑制PVT1、Bmi-1或者过表达miR-15a后,HGC-27胃癌细胞的OD490值以及增殖率在0 h后的不同时间点均出现显著降低(P<0.01);抑制PVT1后,Bmi-1的表达出现降低,而miR-15a表达增高(P<0.01);转染miR-15a后,miR-15a表达升高,而Bmi-1表达出现降低(P<0.01)。与空白对照和miR-15a模拟物阴性对照组相比,PVT1以及Bmi-1野生型报告基因的萤光素酶活性在miR-15a模拟物组呈现显著降低,两者分别下降约56%和32%左右(P<0.01)。与空白对照组和si-PVT1 NC组相比,si-PVT1组PVT1和Bmi-1表达明显下降,miR-15a表达升高,在si-PVT1组加入miR-15a inhibitor之后,miR-15a表达下降,PVT1和Bmi-1的表达降低均出现了逆转;而si-PVT1组加入miR-15a后,miR-15a表达升高,在si-PVT1组加入miR-15a之后,miR-15a表达升高,PVT1和Bmi-1的表达出现进一步下降。【结论】LncRNA-PVT1能够通过靶向抑制miR-15a上调Bmi-1(lncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1通路),进而促进胃癌细胞的体外增殖。

5-氮杂胞苷抑制乳腺癌细胞Bcap-37增殖及逆转RASSF1A基因甲基化作用

背景与目的探讨5-氮杂胞苷对人乳腺癌细胞Bcap-37细胞增殖的抑制作用及作用机制。材料与方法不同浓度的5-氮杂胞苷与Bcap-37细胞共培养后,应用细胞计数法检测Bcap-37细胞生长的情况;应用甲基化特异性PCR法(MethylationspecialPCR,MSP)检测5-氮杂胞苷作用前后RASSF1A基因甲基化、非甲基化状态的改变;采用逆转录PCR检测RASSF1A基因的mRNA表达。结果当5-氮杂胞苷大于5.00μmol/L剂量时对细胞生长呈浓度依赖抑制作用(P<0.01);5-氮杂胞苷作用4d后对Bcap-37细胞RASSF1A基因有去甲基化作用;细胞Bcap-37mRNA表达明显增强。结论特异性甲基转移酶抑制剂5-氮杂胞苷能较好地逆转Bcap-37细胞RASSF1A基因异常甲基化,诱导RASSF1A基因的表达,从而抑制肿瘤细胞生长。

B细胞系特异性单克隆抗体ZCH－4－2E8的制备鉴定及其初步应用

本文报告一种识别Ｂ细胞系白血病相关抗原的鼠单克隆抗体ＺＣＨ－４２Ｅ８（ＩｇＧ１），免疫印迹试验示其所识别的抗原分子量为２４５ｋｄ。经多种细胞系、正常外周血细胞成分、骨髓单个核细胞、胚胎肝、脾、胸腺和１３８例急、慢性白血病细胞的鉴定结果表明，２Ｅ８为Ｂ细胞系特异性单抗，其反应谱与ＣＤ１９类似，但其尚能识别早至１８周龄的胚胎脾（Ｂ）细胞，阳性率为３１．９％（ＣＤ１９为０％）。作者认为：２Ｅ８是一种能用于分化早期Ｂ细胞系急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）的诊断和急性未分化型白血病（ＡＵＬ）鉴别诊断的Ｂ细胞系特异性单抗。