环状RNA hsa_circ_0085576调控微小RNA-498/B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1轴对口腔鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探究环状RNA hsa_circ_0085576对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法检测OSCC细胞中hsa_circ_0085576、微小RNA-498(miR-498)以及B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1(BMI-1)的表达水平。使用CCK-8、划痕实验、Transwell实验以及qRT-PCR、蛋白印迹法分别检测SCC-15细胞增殖活力、迁移及侵袭能力以及相关基因和蛋白的相对表达量。结果OSCC细胞中hsa_circ_0085576与BMI-1表达上调,miR-498表达下调(P<0.05)。下调hsa_circ_0085576表达或过表达miR-498后SCC-15细胞的增殖活性、划痕愈合率、侵袭细胞数目以及细胞周期蛋白D1、波形蛋白表达水平下调,miR-498和E-钙黏蛋白表达水平上调(P<0.05);抑制miR-498表达可减弱下调hsa_circ_0085576表达对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用;上调BMI-1表达可减弱过表达miR-498对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论下调hsa_circ_0085576表达可通过激活miR-498/BMI-1轴抑制OSCC细胞增殖、迁移及侵袭。

B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1在头颈部鳞状细胞癌中的研究进展

在中国,头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)占全部恶性肿瘤的3%,严重影响患者的生命健康。多数研究显示,B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1(BMI1)基因在HNSCC中异常表达,其通过调节肿瘤细胞的干性促进肿瘤的发生发展,是一个具有巨大潜力的新型治疗靶点。本文回顾近年来的相关文献,从BMI1对肿瘤发生、增殖、迁移、免疫调节的作用及其抑制剂的应用进展等方面做一综述,为深入研究其作为治疗HNSCC的潜在靶点提供参考。

B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1的生物学功能及肿瘤相关性的研究进展

B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1(BMI1)是第一个被发现的多梳基因家族(PcG)成员,BMI1在乳腺癌、结直肠癌和食管鳞状细胞癌等多种人类恶性肿瘤中表达异常升高,参与细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的调控,与患者的临床特征、化疗耐药性和不良预后密切相关。BMI1基因与干细胞的自我更新和一系列恶性肿瘤的发生、发展及预后密切相关,可能是一个重要的肿瘤治疗靶点,因而日益被重视。本文就BMI1的结构、功能及其在肿瘤细胞中生物学作用的研究进展进行综述。

睫状神经营养因子及神经突起素上调莫洛尼小鼠白血病病毒前病毒插入位点1表达促进受损神经元样细胞突起再生

目的探讨莫洛尼小鼠白血病病毒前病毒插入位点1(Pim-1)基因在体外受损神经元中的表达变化,以及神经营养因子调节Pim-1表达进而促进受损神经元突起再生的相关分子基础。方法用反式视黄酸将Neuro-2a(N-2a)细胞诱导成为神经元样N-2a(N-2a-N)细胞,用去铁胺亚磺酸盐(DFO)抑制N-2a细胞增殖,用丙烯酰胺(ACR)损伤N-2a-N细胞突起。N-2a-N细胞分为正常对照组、损伤组、睫状神经营养因子(CNTF)及神经突起素(Nrn1)组,每组4个样本。免疫荧光细胞化学法检测N-2a-N细胞表型及Pim-1蛋白表达;用Real-time PCR和Western blotting检测Pim-1在各组的表达变化。用Western blotting检测调节Pim-1活性的相关分子,细胞存活、凋亡相关分子及轴突再生相关分子的表达变化。结果细胞免疫荧光显示,N-2a-N细胞表达神经元标志分子βⅢ-微管蛋白(β-Ⅲtubulin)和neurofilament-200,并表达Pim-1。50μmol DFO有效抑制N-2a细胞的增殖。应用1 mmol/L的ACR成功建立N-2a-N细胞突起损伤模型。N-2a-N细胞损伤后,Pim-1基因表达呈现先降低后升高,再降低的趋势。与损伤组相比,CNTF组和Nrn1组最长神经突起所占比例明显增加,细胞内信号转导分子细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化信号转导及转录激活因子3(p-STAT3)及Pim-1表达上调,凋亡相关分子cleaved Caspase-3及Bax表达下调,抗凋亡相关分子Bcl-2表达上调,神经突起生长相关分子生长相关蛋白43(GAP-43)表达上调。结论修复受损N-2a-N细胞需要过表达Pim-1基因。神经营养因子CNTF、Nrn1可激活受损N-2a-N细胞ERK1/2及STAT3信号通路,进而上调Pim-1及GAP-43表达,并促进细胞突起再生。

肺腺癌组织中B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点基因1表达与患者临床指标及预后的相关性

目的检测肺腺癌组织中B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点1（Bmil）表达，并分析其与肺腺癌患者的转移、疗效及预后的相关性。方法免疫组织化学方法检测肺腺癌组织Bmil表达。r检验分析Broil表达与临床病理指标的关系，以Kaplan—Meier生存曲线计算生存率，采用Cox分析评估各指标与患者生存之间的关系。结果126例肺腺癌组织中，72例可观察到Bmil阳性细胞，阳性率为57．1％。Broil表达与肺腺癌患者转移及化疗疗效密切相关（P=0．000或P=0．021），且与患者无病生存期和生存期呈明显负相关。多因素分析结果显示，转移、Bmil表达以及转移后化疗疗效均是影响生存时间的独立因素[β值分别为-6．212、1．015、0．867，95％置信区间分别为0．000～0．019、1．727～4．405、1．680～3．372，均P=0．000]。结论Bmil表达与肺腺癌患者的转移及化疗耐药相关，提示预后不良。

B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1促进炎症微环境中人结直肠癌细胞HT-29细胞上皮-间质转化及侵袭

目的 探讨原癌基因B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1(Bmi-1)对炎症微环境中人结直肠癌细胞HT-29细胞肿瘤迁移及上皮-间充质转化(EMT)的作用及机制。方法 实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot法,检测Bmi-1、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的基因水平及Bmi-1蛋白水平,酶联免疫吸附剂测定法检测上清TNF-α和IL-6水平。噻唑蓝比色法和Transwell侵袭试验分别检测细胞增殖和侵袭能力,Western blot法检测EMT相关标记及核因子-κB (NF-κB)通路关键蛋白。结果 HT-29细胞经人急性单核细胞白血病细胞条件培养基(THP-1-CM)刺激后,Bmi-1、TNF-α和IL-6的基因表达均增高(1.86±0.08比1.00±0.05,2.38±0.13比1.00±0.14,3.00±0.15比1.00±0.05,P<0.01),Bmi-1蛋白含量增高(1.68±0.08比1.00±0.05,P<0.01),上清TNF-α和IL-6水平也有不同程度增加[(73±4) pg/ml比(32±4) pg/ml、(140±9) pg/ml比(42±9) pg/ml,P<0.01]。沉默Bmi-1基因后,HT-29细胞分泌TNF-α和IL-6的水平下降[(31±3)、(56±8) pg/ml]。THP-1-CM刺激后,细胞侵袭性增加,但对细胞增殖无影响。进一步检测发现,EMT相关标记E-钙黏素表达下调,波形蛋白和N-钙黏附素水平及NF-κB通路关键蛋白NF-κB p65的磷酸化上调。沉默Bmi-1基因后,减弱细胞侵袭,上皮细胞-间充质转化受抑制,NF-κB通路活化受抑制。结论 Bmi-1可能参与调控THP-1-CM诱导的HT-29细胞炎性因子的产生,并通过上皮细胞-间充质转化影响侵袭,与NF-κB通路活性有关。

B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点-1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点-1(B-cell-specific Moloney murine leukemia virus integration site-1,Bmi-1)蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学法检测正常胃黏膜、慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、异型增生及胃癌组织中Bmi-1、c-myc和Zeste基因增强子同源物2(enhancer of Zeste homolog 2,EZH2)蛋白的表达。结果:Bmi-1蛋白在正常胃黏膜、慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、异型增生和胃癌组织中的阳性表达率分别为5.0%、16.7%、30.7%、58.1%和78.0%,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织中Bmi-1高表达率为45.0%,其表达水平与肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.05)。胃癌组织中Bmi-1的表达与c-myc、EZH2表达之间呈正相关(rs=0.567,P<0.001;rs=0.582,P<0.001)。结论:Bmi-1在胃癌组织中表达上调,其高表达与胃癌的分化程度、浸润深度和淋巴结转移有关。

晚期结直肠癌西妥昔单抗治疗前后循环肿瘤DNA、循环B细胞特异性莫洛尼白血病病毒插入位点1 mRNA和微小RNA-21水平变化

目的探讨晚期结直肠癌表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体治疗前后循环肿瘤DNA(ctDNA)、循环B细胞特异性莫洛尼白血病病毒插入位点1 mRNA(Bmi-1mRNA)、微小RNA-21(miR-21)变化及与治疗反应性的关联性。方法回顾性分析2019年3月至2021年3月烟台毓璜顶医院98例晚期结直肠癌患者的临床资料。西妥昔单抗治疗后完全缓解4例,部分缓解26例,疾病稳定39例,疾病进展29例。将完全缓解和部分缓解作为缓解组(30例),疾病稳定和疾病进展作为未缓解组(68例)。治疗前和治疗2个周期后采用高通量测序方法检测血浆ctDNA水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测Bmi-1mRNA和miR-21水平。采用Spearman相关性分析治疗2个周期后ctDNA、Bmi-1mRNA和miR-21与治疗反应性的关系;采用多因素Logistic回归分析影响治疗反应性的独立危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评估治疗2个周期后ctDNA、Bmi-1mRNA和miR-21预测缓解的价值。结果两组治疗前ctDNA、Bmi-1mRNA和miR-21比较差异无统计学意义(P>0.05);缓解组治疗2个周期后ctDNA、Bmi-1mRNA和miR-21明显低于未缓解组[(10.03±3.32)μg/L比(15.33±5.14)μg/L、0.13±0.04比0.19±0.05和0.81±0.26比1.08±0.24],差异有统计学意义(P<0.01)。Spearman相关性分析结果显示,ctDNA、Bmi-1mRNA和miR-21与治疗反应性呈负相关(r=-0.500、-0.506和-0.531,P<0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,控制远处转移器官数量和临床分期后,ctDNA、Bmi-1mRNA和miR-21仍是影响晚期结直肠癌患者治疗反应性的独立危险因素(OR=3.342、2.725和1.838,95%CI 3.116~3.584、2.647~2.805和1.768~1.911,P<0.01)。ROC曲线分析结果显示,治疗2个周期后ctDNA、Bmi-1mRNA联合miR-21预测治疗反应性的曲线下面积最大为0.922。结论晚期结直肠癌患者EGFR单克隆抗体治疗前后ctDNA、Bmi-1mRNA和miR-21变化与治疗反应性有关,联合检测有利于筛查EGFR靶向治疗的敏感患者,并能为寻找晚期结直肠癌分子干预新靶点提供参考。

RNA干扰沉默B细胞特异的莫洛尼白血病病毒插入位点1基因对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响

目的观察RNA干扰沉默B细胞特异性莫洛尼白血病病毒插入位点1（Bmi—1）基因对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。方法PC-3细胞随机分为3组，分别转染Bmi-1靶序列干扰RNA（Bmi．1-siRNA）、无义对照siRNA、空白脂质体。48h后收集细胞，逆转录-聚合酶链反应（RT．PCR）、Westernblot检测Bmi-1mRNA和蛋白表达水平。96孔板噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活力，流式细胞仪检测凋亡率。结果PC．3细胞经Bmi—l—siRNA干扰后Bmi-1mRNA和蛋白质表达水平下调（P〈0．05）。与对照组比较，实验组细胞增殖明显受到抑制（P〈0．05）。实验组细胞凋亡率为（23．77±2．23）％，与空白对照组[（7．05±0．88）％]和阴性对照组[（6．89±I．02）％]比较明显增高（P〈0．05）。结论Bmi．1．siRNA能通过沉默靶基因Bmi—l表达抑制前列腺癌PC-3细胞增殖并促进细胞凋亡。

B细胞特异性莫洛尼小鼠白血病病毒结合位点-1在结直肠癌组织的表达及其意义

目的探讨B细胞特异性莫洛尼小鼠白血病病毒结合位点-1（Bmi-1）在结直肠癌中的表达特征及临床意义。方法采用免疫组织化学染色法检测453例结直肠癌肿瘤组织及其配对的癌旁组织中Bmi-1蛋白的表达，并分析其与患者临床病理特征及预后的相关性。结果Bmi-1在结直肠癌组织中的中位H-score得分为87.5（0～270）分，在癌旁组织中为5（0～90）分，两者间差异有统计学意义（χ2＝17.275，P＝0.000）。Bmi-1在结直肠癌中的表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、病理分级、临床分期、淋巴结转移、远处转移等差异均无统计学意义（P〉0.05）。Bmi-1蛋白高表达者平均生存时间为51.0[95%可信区间（CI）：46.7～54.4]个月，低表达者平均生存时间为55.6（52.1～59.1）个月，两者间差异无统计学意义（χ2＝2.500，P＝0.114）。结论Bmi-1在结直肠癌组织中表达显著高于癌旁组织，提示Bmi-1可能与胃癌的发生发展有关。

癌基因B细胞特异的莫洛尼白血病病毒插入位点1基因和埃兹蛋白在大肠癌组织的表达及意义

目的观察癌基因B细胞特异的莫洛尼白血病病毒插入位点1基因（Bmi-1）和埃兹蛋白（Ezrin）在大肠癌组织中的表达，探讨Bmi-1和Ezrin与大肠癌的相关性。方法采用免疫组织化学法检测75例大肠癌患者手术切除的肿瘤组织和癌旁组织中Bmi-1和Ezrin表达水平。结果Bmi-1在癌旁组织中阳性表达率为22．67％（17／75），在大肠癌组织中阳性表达率为85．33％（64／75），两者差异有统计学意义（P〈0．01），Bmi-1表达水平与大肠癌浸润深度、TNM分期、淋巴结转移有关（P〈0．05）；Ezrin在癌旁组织中阳性表达率为13．33％（10／75），在大肠癌组织中阳性表达率为72．00％（54／75），两者差异有统计学意义（P〈0．01），Ezrin表达水平与大肠癌组织学分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关（P〈0．05）。结论检测Bmi-1和Ezrin有助于评估大肠癌患者的不良预后。

B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点-1、原癌基因和肝癌缺失基因-1在宫颈癌中的表达及其临床意义

目的研究B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点-1(BMI-1)、原癌基因(C-myc)和肝癌缺失基因-1(DLC-1)在宫颈癌中的表达及其意义。方法收集43例宫颈癌组织为A组,21例宫颈上皮内瘤变组织为B组,以及20例良性病变宫颈组织为C组。用免疫组化PV-9000二步法检测BMI-1、Cmyc和DLC-1蛋白的表达,用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测BMI-1、C-myc和DLC-1 mRNA的表达,并分析其与宫颈癌临床病理因素的关系和三者表达的相关性。结果 A组、B组和C组BMI-1 mRNA的表达量分别为0. 93±0. 09,0. 29±0. 06和0. 17±0. 03,C-myc mRNA的表达量分别为0. 96±0. 08,0. 29±0. 04和0. 16±0. 03,DLC-1 mRNA的表达量分别为0. 11±0. 01,0. 83±0. 11和0. 95±0. 16,两两比较,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。宫颈癌组织中BMI-1、C-myc和DLC-1的表达与患者的年龄、临床病理类型均无明显的相关性(均P> 0. 05),与患者的FIGO临床分期、淋巴结是否转移和分化程度均有明显的相关性(均P <0. 05)。DLC-1的蛋白表达水平与BMI-1、C-myc的蛋白表达水平均呈负相关(均P <0. 01)。结论在宫颈癌中,BMI-1和C-myc呈高表达,DLC-1呈低表达,其均与宫颈癌患者的FIGO分期、分化程度和淋巴结转移密切相关,联合检测BMI-1、C-myc和DLC-1可作为评价宫颈癌生物学行为和判断预后的参考指标。

B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点-1蛋白在口腔黏膜癌变过程中的表达

目的了解B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点-1(Bmi-1)在口腔黏膜癌变过程中的表达水平变化,探讨其在口腔鳞癌发生发展中的作用及意义。方法选取正常口腔黏膜10例、上皮异常增生31例、口腔鳞癌61例的石蜡包埋组织,采用免疫组化SP法检测相应组织中Bmi-1蛋白表达情况,分析Bmi-1蛋白表达在口腔黏膜癌变过程中的作用及意义。结果Bmi-1在正常口腔黏膜无表达,在上皮异常增生及口腔鳞癌中阳性率分别为29%(9/31)和62.3%(38/61),口腔鳞癌组Bmi-1阳性率高于正常上皮组及上皮异常增生组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Bmi-1阳性率随上皮异常增生程度增加及肿瘤分化程度降低而增加,两者间存在正相关关系(r=0.964,P<0.05),Bmi-1阳性表达与口腔鳞癌临床分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论Bmi-1过表达是口腔黏膜癌变过程中的早期事件并与口腔鳞癌发生发展进程有关,有可能作为临床评估口腔鳞癌侵润、转移和预后的参考指标之一。

siRNA干扰BMI-1基因对膀胱癌EJ细胞增殖的调控作用及其机制

目的:对比观察膀胱癌EJ细胞及人膀胱移行上皮细胞中BMI-1基因及下游p16INK4a、p14ARF基因的mRNA及蛋白表达水平,探讨siRNA干扰BMI-1基因后对EJ细胞增殖的影响及其调控机制。方法:细胞免疫荧光观察BMI-1、p16INK4a和p14ARF蛋白在EJ细胞中表达情况及定位。Real-time RT-PCR检测EJ细胞及膀胱正常移行上皮细胞中3种基因的表达水平,Western blotting检测蛋白水平。构建干扰BMI-1基因siRNA,通过脂质体转染导入EJ细胞中,设立空白对照和阴性干扰对照组,检测BMI-1及下游p16、p14基因表达水平及蛋白表达水平的变化;以CCK-8检测细胞生长观察siRNA干扰BMI-1表达对EJ细胞增殖的抑制作用;用流式细胞术分析细胞凋亡的改变。结果:BMI-1mRNA及蛋白水平在EJ细胞表达高于膀胱移行上皮细胞,而p16INK4a和p14ARFmRNA及蛋白在EJ细胞表达水平稍低于膀胱移行上皮细胞。siRNA干扰BMI-1后可以上调EJ细胞中其下游p16和p14 mRNA及蛋白水平,使EJ细胞增殖能力下降,细胞凋亡增多。结论:siRNA干扰BMI-1基因表达对EJ细胞的体外生长具有明显的抑制作用,其作用机制与上调其下游p16INK4a、p14ARF基因的表达有关。

Bmi-1基因过表达对人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响

目的:探讨原癌基因B淋巴瘤莫洛尼鼠白血病病毒插入区1(Bmi-1)过表达对人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响。方法:采用逆转录病毒介导转染方法将携带原癌基因Bmi-1的质粒或空质粒稳定转染GES-1细胞,通过real-time PCR及Western blotting在mRNA及蛋白水平鉴定转染效果。流式细胞术检测过表达Bmi-1对GES-1细胞周期的影响。应用CCK-8(Cell Counting Kit-8)试剂盒检测稳定转染Bmi-1对GES-1细胞增殖的影响。结果:Real-time PCR及Western blotting结果均表明成功建立稳定转染Bmi-1基因的GES-1细胞株。流式细胞术结果表明,过表达Bmi-1基因使GES-1细胞G0/G1期减少,G2/M期和S期细胞增多。生长曲线显示,过表达Bmi-1基因使GES-1细胞增殖速度明显提高。结论:过表达Bmi-1基因能调控GES-1细胞的细胞周期,促进GES-1细胞的增殖。

Bmi-1基因的过表达对人结肠癌细胞株SW480/CD133^+细胞增殖的影响

目的探讨Bmi-1基因过表达对人结肠癌细胞株SW480/CD133^+细胞增殖的影响。方法用携带Bmi-1基因的质粒(pMSCV-Bmi-1)感染人结肠癌SW480/CD133^+细胞,作为观察组(pMSCV-Bmi-1/CD133^+组);以空质粒(pMSCV)感染SW480/CD133+细胞,作为空质粒对照组(pMSCV/CD133^+组);空白对照组不作任何处理,常规培养。用实时荧光PCR和免疫印迹法分别检测细胞中Bmi-1 mRNA水平和蛋白表达的水平;平板克隆实验检测细胞增殖能力的变化。结果观察组Bmi-1 mRNA和蛋白表达的水平均较空质粒对照组和空白对照组显著增高(均P<0.01)。观察组、空质粒对照组和空白对照组的细胞克隆形成率分别为(88.45±5.79)%,(52.33±3.62)%和(54.66±4.03)%,观察组分别高于空质粒对照组和空白对照组(均P<0.01)。结论成功地将Bmi-1基因导入SW480/CD133^+细胞,并能使其在mRNA水平和蛋白水平稳定、持续地表达。Bmi-1过表达可以显著增强人结直肠癌SW480/CD133^+细胞的克隆形成能力,促进SW480/CD133^+细胞增殖。

LncRNA-PVT 1/miR-15 a/Bmi-1通路调控HGC-27胃癌细胞的体外增殖

【目的】探讨lncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1通路在胃癌细胞体外增殖中的调控作用。【方法】分别研究PVT1,miR-15a及Bmi-1在HGC-27胃癌细胞体外增殖中的作用。体外培养的人胃癌细胞株HGC-27分为如下组别:①空白对照组、si-PVT1(转染PVT1 siRNA)和si-PVT1 NC(转染PVT1 siRNAscramble阴性对照);②空白对照组、miR-15a(转染miR-15a模拟物)和miR-15a NC(转染miR-15a模拟物的阴性对照)。③空白对照组、si-Bmi-1(转染Bmi-1的siRNA)和si-Bmi-1 NC(转染Bmi-1的siRNAscramble阴性对照)。采用MTS法检测上述组别的细胞增殖情况。在抑制PVT1后检测不同组别PVT1、miR-15a和Bmi-1的表达情况。为验证miR-15a与Bmi-1之间的调节关系,将HGC-27胃癌细胞株分为3组:空白对照、miR-15a(转染miR-15a模拟物)和miR-15a NC(转染模拟物阴性对照),检测各组miR-15a和Bmi-1的表达情况。通过生物信息学网站预测PVT1与miR-15a以及miR-15a与Bmi-1的潜在结合位点。采用双荧光素酶报告基因技术验证PVT1与miR-15a以及miR-15a和Bmi-1之间的靶向调节关系。在前述基础上,逆向验证PVT1、miR-15a和Bmi-1三者之间的调控关系。【结果】抑制PVT1、Bmi-1或者过表达miR-15a后,HGC-27胃癌细胞的OD490值以及增殖率在0 h后的不同时间点均出现显著降低(P<0.01);抑制PVT1后,Bmi-1的表达出现降低,而miR-15a表达增高(P<0.01);转染miR-15a后,miR-15a表达升高,而Bmi-1表达出现降低(P<0.01)。与空白对照和miR-15a模拟物阴性对照组相比,PVT1以及Bmi-1野生型报告基因的萤光素酶活性在miR-15a模拟物组呈现显著降低,两者分别下降约56%和32%左右(P<0.01)。与空白对照组和si-PVT1 NC组相比,si-PVT1组PVT1和Bmi-1表达明显下降,miR-15a表达升高,在si-PVT1组加入miR-15a inhibitor之后,miR-15a表达下降,PVT1和Bmi-1的表达降低均出现了逆转;而si-PVT1组加入miR-15a后,miR-15a表达升高,在si-PVT1组加入miR-15a之后,miR-15a表达升高,PVT1和Bmi-1的表达出现进一步下降。【结论】LncRNA-PVT1能够通过靶向抑制miR-15a上调Bmi-1(lncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1通路),进而促进胃癌细胞的体外增殖。

siRNA沉默Bmi-1基因表达对宫颈癌细胞增殖的影响

目的探讨siRNA沉默B细胞特异的莫洛尼白血病病毒插入位点1基因(Bmi-1)表达对宫颈癌细胞增殖的影响研究。方法通过脂质体转染siRNA Bmi-1及阴性对照(control)到人宫颈癌Hela细胞,采用Realtime PCR及western blot法检测细胞中Bmi-1的表达。MTT法检测细胞活力,Annexin V-PI流式双染及Hoechst染色检测细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞周期,western blot法检测细胞中p16,p53,Cyclin D1及Rb的表达。结果与Control组比较,siRNA Bmi-1组细胞中Bmi-1蛋白及mRNA表达量皆显著降低(P<0.01),同时细胞活力下降,细胞凋亡率提高(P<0.01),细胞周期阻滞在G1期(P<0.01),细胞中p16表达量上调(P<0.01),p53及Cyclin D1表达量下调(P<0.01),Rb磷酸化水平降低(P<0.01)。结论 Bmi-1具有抑制宫颈癌Hela细胞增殖的作用,可能与调控细胞周期相关蛋白表达有关。

非小细胞肺癌组织DCLK1和Bmi-1蛋白表达及其与三维适形放疗效果的相关性研究

目的探讨非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)组织双肾上腺素样激酶1(dou-blecortin-like kinase 1,DCLK1)、B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点一(B cell specific moloney leukemia virus insert site-1,Bmi-1)蛋白表达及其与三维适形放疗效果的关系。方法选取2018年6月~2021年1月江南大学附属医院收治的102例拟行三维适形放疗的NSCLC患者和40例肺错构瘤患者,分别记为恶性组和良性组。采用免疫组织化学法检测二组病灶组织DCLK1和Bmi-1蛋白表达,并对比两组病灶组织及恶性组中不同临床病理特征患者癌组织DCLK1和Bmi-1蛋白阳性表达率。恶性组均予以三维适形放疗6周,并评价其放疗效果。对比恶性组三维适形放疗无效与放疗有效患者癌组织DCLK1和Bmi-1蛋白阳性表达率,采用Logistic多元回归分析探讨恶性组NSCLC组织DCLK1和Bmi-1蛋白阳性表达与三维适形放疗效果的关系。结果恶性组病灶组织DCLK1阳性表达率(60.78%)和Bmi-1蛋白阳性表达率(70.59%)均高于良性组(32.50%,35.00%),差异具有统计学意义(χ^(2)=9.224,15.241,均P<0.05);临床Ⅲ~Ⅳ期、未/低分化、淋巴结转移患者的DCLK1和Bmi-1蛋白阳性表达率分别高于临床Ⅰ~Ⅱ期、高/中分化、无淋巴结转移患者,差异均有统计学意义(χ^(2)=6.638,9.756,5.670;7.724,7.447,6.114,均P<0.05);三维适形放疗有效率为67.65%,无效率为32.35%;临床分期Ⅲ~Ⅳ期(OR=5.414,95%CI=4.027~6.663)、未/低分化(OR=4.773,95%CI=3.156~5.974)、淋巴结转移(OR=5.307,95%CI=3.768~6.626)、癌组织DCLK1(OR=5.496,95%CI=3.967~6.882)和Bmi-1蛋白(OR=5.624,95%CI=4.127~7.287)阳性表达均是恶性组三维适形放疗无效的危险因素(均P<0.05)。结论NSCLC组织DCLK1和Bmi-1蛋白阳性表达率高于肺良性肿瘤,且临床分期、分化程度、淋巴结转移、NSCLC组织DCLK1和Bmi-1蛋白阳性表达均可影响NSCLC患者三维适形放疗的效果。

高迁移率族蛋白B1过表达对子宫内膜癌细胞增殖、周期和凋亡的影响及机制研究

目的:探讨高迁移率族蛋白(HMG)B1过表达对子宫内膜癌细胞增殖、周期和凋亡的影响及机制。方法:将对数生长期的Ishikawa细胞分为三组:pcDNA3.0组、pcDNA3.0-HMGB1组与对照组。pcDNA3.0组、pcDNA3.0-HMGB1组分别转染pcDNA3.0载体与pcDNA3.0-HMGB1载体,对照组以等体积的磷酸盐缓冲液进行转染。采用MTT法检测细胞增殖指数、Transwell小室检测细胞侵袭与转移指数、流式细胞仪检测细胞凋亡与细胞周期、Western blot检测蛋白表达。结果:转染后36、72 h,pcDNA3.0-HMGB1组的细胞增殖指数高于pcDNA3.0组与对照组(均P<0.05),细胞凋亡指数低于pcDNA3.0组与对照组(均P<0.05)。转染后36、72 h,pcDNA3.0-HMGB1组的G_(0)/G_(1)期比例高于pcDNA3.0组与对照组(均P<0.05),S期和G_(2)/M期比例低于pcDNA3.0组与对照组(均P<0.05)。转染后36、72 h,pcDNA3.0-HMGB1组的细胞侵袭与转移指数高于pcDNA3.0组与对照组(均P<0.05)。转染后36、72 h,pcDNA3.0-HMGB1组的B细胞特异性小鼠白血病病毒插入位点1(Bmi-1)、HMGB1蛋白相对表达水平高于pcDNA3.0组与对照组(均P<0.05)。结论:HMGB1过表达能促进子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、转移及Bmi-1蛋白表达,抑制细胞凋亡,调节细胞周期。