白藜芦醇对氧诱导鼠视网膜B细胞白血病蛋白2和血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨白藜芦醇对高氧诱导的早产儿视网膜病变新生鼠视网膜B细胞白血病蛋白2(B-cell leukemia/lymphoma-2,bcl-2)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法选取鼠龄为7d的Sprague-Dawley(SD)幼鼠60只,分A组(正常对照组)、B组(给氧组)和C(实验组1)、D(实验组2)、E(实验组3)三个实验组,每组12只。A组幼鼠生活在正常氧环境中,B组、C组、D组和E组幼鼠置于氧分压为(75±2)%的氧环境中连续生活5d,建立高氧诱导的早产儿视网膜病变动物模型。C、D、E三个实验组分别予白藜芦醇10mg/(kg·d)、30mg/(kg·d)、60mg/(kg·d)灌胃给药,每天一次,连续5d,所有幼鼠均于17d鼠龄处死。应用Western-blot免疫印迹法分析检测鼠视网膜bcl-2的表达,并以计算机图像分析仪进行分析;用ELISA方法检测鼠视网膜VEGF的表达。结果与A组(正常对照组)比较,B组(给氧组)视网膜bcl-2和VEGF的表达是A组的4倍,两组差异有统计学意义(P<0.01);与B组比较,C、D、E三个实验组视网膜bcl-2和VEGF的表达逐渐减弱,呈剂量依赖关系,不同浓度的白藜芦醇实验组之间存在显著性的差异(P<0.01),三种不同浓度(10mg/kg、30mg/kg、60mg/kg)的白藜芦醇均显著抑制视网膜bcl-2和VEGF的表达,其抑制率分别为11.09%、38.05%、69.76%和3.42%、23.04%、43.69%。结论白藜芦醇可显著抑制高氧诱导的早产儿视网膜病变新生鼠视网膜bcl-2和VEGF表达,可能对早产儿视网膜病变等视网膜新生血管疾病具有治疗作用。

中药联合窄谱中波紫外线对寻常型银屑病表皮中B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3及生存素的影响

目的探讨中药联合窄谱中波紫外线(NB-UVB)在调节寻常型银屑病皮损中角质形成细胞凋亡的可能作用。方法选择30例寻常型银屑病患者给予中药银屑病方联合NB-UVB治疗,疗程8周,取治疗前后标本,用免疫组化方法检测正常人(20名)及患者(30例)治疗前后皮损中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、生存素(survivin)的表达。结果寻常型银屑病患者皮损中Bcl-2(7.50±2.01)的表达明显低于正常组(12.65±2.83),Caspase-3(21.73±3.70)的表达明显高于正常组织(8.55±2.16),survivin(23.90±2.82)的表达明显高于正常组织(7.06±1.96,P<0.01);治疗后Bcl-2(13.63±2.14)表达上调,Caspase-3(11.70±2.44)、survivin(12.46±1.80)表达下调(P<0.01),三者均有向正常组织表达转化的趋势。银屑病面积和严重程度指数(PASI)评分由治疗前(14.24±3.42)下降至治疗后(3.52±1.07,P<0.01))。结论中药银屑病方联合NB-UVB可能通过调节Bcl-2、Caspase-3、survivin的表达而调节角质形成细胞的凋亡达到治疗目的。

CD5和B细胞淋巴瘤/白血病蛋白-2对老年弥漫大B细胞淋巴瘤患者预后的影响

目的探讨CD5和B细胞淋巴瘤/白血病蛋白-2(Bcl-2)对老年弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者预后的影响。方法回顾性分析2007年1月至2013年12月空军军医大学西京医院血液内科被诊断为DLBCL、年龄>60岁的患者35例,对入选患者进行2年随访。收集入选患者临床病理资料及治疗预后信息,免疫组织化学检测CD5、Bcl-2表达,并分别根据CD5、Bcl-2是否为阳性表达(以肿瘤细胞染色阳性>30%)、中枢神经累及与否以及肿瘤临床分期对患者进行分组,并比较各组患者间生存情况。采用SPSS 22.0统计软件对数进行分析。组间比较采用Fisher精确检验法。应用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,Log-Rank法进行曲线间单因素分析;多因素分析采用Cox回归模型。结果研究最终有3例失访,失访率8.6%。入选患者CD5阳性率为21.9%(7/32),Bcl-2阳性率为46.9%(15/32),CD5及Bcl-2共阳性15.6%(5/32)。21.9%(7/32)患者出现中枢累及。10例患者为肿瘤临床Ⅲ期,22例为临床Ⅳ期。患者中位总生存期(OS)为24个月,中位无进展生存期(PFS)为18个月。1年生存率为96.9%(31/32),2年生存率为71.9%(23/32)。单因素分析显示,与CD5-和Bcl-2^-患者比较,CD5^+和Bcl-2^+患者OS和PFS均较低(P<0.05);临床Ⅲ期及Ⅳ期患者PFS(P=0.055)及OS(P=0.076)比较差异均无统计学意义;与无中枢累及患者相比,中枢累及患者OS和PFS较低(均为P=0.004)。另外,CD5^+患者中枢累及率显著大于CD5-患者(57.1%vs 12.0%;P=0.026),Bcl-2^+患者中枢累及率显著大于Bcl-2^-患者(40.0%vs 5.9%;P=0.033),差异均有统计学意义。多因素Cox分析显示,CD5阳性为影响DLBCL患者OS的独立危险因素(OR=11.205,95%CI1.717~73.112;P=0.012)。结论 CD5阳性表达可作为影响老年DLBCL患者预后不良的独立危险因素,对预后判断和未来治疗策略的选择具有重要的临床价值。

多被银莲花总皂甙对ACC-M细胞内Bcl-2与Bax蛋白表达的影响

目的探讨多被银莲花总皂甙对人涎腺腺样囊性癌高肺转移细胞(ACC-M)内Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法将体外培养的ACC-M细胞随机分为实验组与对照组,分别加入50μg/m L多被银莲花总皂甙溶液2 m L、含同样浓度二甲基亚砜的RPMI1640培养液2 m L。分别于培养24、48、72 h用Western blotting法检测细胞内Bcl-2和Bax蛋白的表达量。结果对照组各时间点Bcl-2、Bax蛋白相对表达量及Bax/Bcl-2比较差异均无统计学意义(P均>0.05);实验组各时间点Bcl-2、Bax蛋白相对表达量及Bax/Bcl-2比较差异均有统计学意义(P均<0.05);两组间各时间点Bcl-2、Bax蛋白相对表达量及Bax/Bcl-2比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论多被银莲花总皂甙可上调ACC-M细胞内Bax蛋白表达,同时下调Bcl-2蛋白表达,导致Bax/Bcl-2升高。

Bcl-2高表达转基因小鼠脊髓损伤后差异表达蛋白的蛋白质组学分析

目的通过建立B细胞淋巴瘤／白血病-2（B—celllymphoma／leukemia-2，Bcl-2）高表达转基因小鼠与野生型小鼠急性脊髓损伤组织的双向电泳图谱，比较蛋白质组的变化和差异表达，初步探讨Bcl-2保护脊髓损伤的分子机制。方法转基因（A组）及同窝非转基因小鼠（B组）各15只，随机分为三组（1d、7d、14d），采用垂直打击（weightdropping，WD）方法，以2．5×3．0g·cm致伤力致伤小鼠脊髓。于术后1d、7d、14d处死，取脊髓标本进行检测：①采用双向凝胶电泳分离脊髓总蛋白，建立双向凝胶电泳图谱；②用ImageMaster软件分析图像，基质辅助激光解析电离飞行时间，质谱（MALDl2TOF2MS）分析获取肽质量指纹图谱（PMF）；③用Mascot软件系统和NCBIMS数据库检索确定蛋白质。结果鉴定出差异蛋白质33个，其中1d8个，7d12个，14d13个。与B组小鼠比较，A组小鼠表达上调的蛋白质有热休克蛋白、含缬酪肽蛋白、peroxiredoxin6等，下调的蛋白质为钙蛋白酶、泛素羧基末端水解酶-1等。多数差异蛋白质涉及到应激保护、抗氧自由基损伤、促进神经修复等过程，具有神经保护功能。结论除了抗凋亡作用，Bcl-2蛋白可能还具有抗氧自由基损伤、促进神经修复、加强应激等多方面的神经保护功能。

甘草甜素对HepG2细胞急性损伤后超微结构和相关蛋白表达的影响

目的 利用肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)和放线菌素D(actinomycinD ,ActD)造成HepG2细胞急性损伤 ,观察甘草甜素 (glycyrrhizin ,GL)对此过程中细胞超微结构和相关蛋白表达的影响。方法 给予不同终浓度的甘草甜素预保护 30min后 ,TNF和ActD共同作用HepG2细胞 12h ,电镜观察细胞超微结构的变化 ,Westernblot检测细胞内凋亡相关蛋白Caspase - 3及Bcl- 2、Bax的表达情况。结果 TNF -α和ActD共同作用 12h可造成HepG2细胞急性损伤 ,电镜下可见细胞缩小、核浓缩、微绒毛消失等凋亡细胞特征 ,而 10 0 μg/mLGL保护组未见 ;另外 ,Westernblot检测显示 ,给予不同浓度甘草甜素预保护后 ,损伤细胞内Caspase - 3的 32kD酶原表达逐渐增加 ,17kD活性成分表达逐渐减少 ,同时Bcl- 2表达逐渐增加 ,Bax表达逐渐减少。结论 TNF -α作用 12h后诱导的HepG2细胞急性损伤呈现凋亡细胞特有的超微结构改变 ,甘草甜素可通过调控凋亡相关蛋白的表达而抑制损伤的发生。

病理性瘢痕组织中Bcl-2、Fas蛋白的表达及意义

目的探讨病理性瘢痕组织中B细胞白血病2蛋白(Bcl-2)、自杀相关因子(Fas蛋白)的表达及意义。方法回顾性分析2015年6月~2017年6月间行瘢痕切除术患者96例临床资料,根据切除组织病理检查结果分为病理性瘢痕组(n=46)和非病理性瘢痕组(n=50),并取非病理性瘢痕组患者正常皮肤组织作为对照组。比较3组Bcl-2、Fas蛋白阳性率及平均阳性细胞率,利用pearson相关分析Bcl-2、Fas蛋白的相关性。结果 (1)Bcl-2阳性率和平均阳性细胞率病理性瘢痕组高于非病理性瘢痕组和对照组(P<0.05)、非病理性瘢痕组高于对照组(P<0.05),Fas阳性率和平均阳性细胞率病理性瘢痕组低于非病理性瘢痕组和对照组(P<0.05)、非病理性瘢痕组低于对照组(P<0.05);(2)pearson相关分析结果显示,Bcl-2和Fas呈负相关关系(P<0.05)。结论病理性瘢痕组织中Bcl-2高表达、Fas蛋白低表达,监测和调控两者表达水平有益于指导临床治疗。

宫颈鳞癌组织中HSP70和Bcl-2的表达及意义

目的探讨热休克蛋白(HSP)70和Bcl-2在宫颈鳞癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组化法检测HSP70、Bcl-2在60例宫颈鳞癌、18例宫颈上皮内瘤变(CIN)、7例正常宫颈组织中的表达。结果宫颈鳞癌组织中HSP70、Bcl-2阳性表达率显著高于CIN和正常宫颈组织(P均<0.05);宫颈鳞癌组织中HSP70的阳性表达与病理分级、临床分期、淋巴转移密切相关(P均<0.05);HSP70与Bcl-2在宫颈鳞癌组织中的表达密切相关(P<0.05)。结论HSP70、Bcl-2均在宫颈鳞癌发生和发展中起重要作用,两者具有协同作用;HSP70可作为判断宫颈癌预后的重要指标。

Bcl-2和FasL在子宫内膜异位症组织中的表达及意义

采用免疫组化法测定子宫内膜异位症(EMS)的在位内膜、异位内膜及正常子宫内膜中的Bcl-2、FasL。正常子宫内膜Bcl-2的表达增生期明显高于分泌期(P<0.05),FasL的表达增生期明显低于分泌期(P<0.05)。EMS在位内膜Bcl-2的表达有周期性,但都高于同期正常子宫内膜(P<0.05);在位内膜FasL的表达无周期性,但分泌期表达低于正常子宫内膜(P<0.05)。异位内膜Bcl-2呈持续高表达而无周期性,与在位内膜相似(P>0.05),但均高于正常子宫内膜(P<0.05);异位内膜FasL的表达较高而无周期性,但均高于正常子宫内膜的分泌期(P<0.05)。认为EMS异位内膜Bcl-2的持续高表达是阻止异位种植的内膜细胞凋亡从而继续生长形成异位灶的原因之一;异位内膜FasL的持续高表达可能会诱导浸润至局部的免疫活化细胞发生凋亡,为异位内膜逃脱机体免疫细胞的清除而继续存活生长创造了条件。

鼻咽癌组织中Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达及意义

目的探讨鼻咽癌组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-3)蛋白表达及其在鼻咽癌发生发展中的意义。方法采用免疫组化方法检测26例鼻咽癌活检组织和10例鼻咽炎组织中Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达情况。结果在鼻咽炎组织中Bcl-2在大多数基底层细胞表达,Bax则在黏膜各层均有表达,Caspase-3在鼻咽炎黏膜组织中有染色反应;鼻咽癌组织中Bcl-2的表达高于癌旁组织和鼻咽炎组织;Bax和Caspase-3的表达低于癌旁组织和鼻咽炎组织,有显著性差异(P<0.05)。结论Bcl-2、Bax和Caspase-3可能共同参与了鼻咽癌的细胞凋亡过程。

上皮性卵巢癌中Gal-3和Bcl-2的表达及临床意义

【目的】检测半乳糖凝集素-3(Gal-3)、B淋巴细胞瘤/白血病蛋白-2(Bcl-2)在上皮性卵巢癌组织中的表达,探究二者与相关临床病理特征及预后关系,检验它们作为预测预后标记物的可能性。【方法】采用免疫组织化学方法,检测98例上皮性卵巢癌组织、10例正常卵巢组织中Gal-3和Bcl-2的表达,分析二者与临床病理特征、预后的关系。【结果】98例上皮性卵巢癌中,Gal-3、Bcl-2均为胞浆表达,Gal-3阳性率为76.5%(75/98),Bcl-2阳性率为51.0%(50/98),正常卵巢上皮不表达Gal-3、Bcl-2蛋白。Gal-3与Bcl-2相关性无统计学意义。Gal-3表达与病理类型、铂敏感性相关(P=0.043,P=0.038),Bcl-2表达与FIGO分期相关(P=0.029)。Cox单因素分析显示上皮性卵巢癌Gal-3表达(P=0.008)、Bcl-2表达(P=0.021)、分期(P<0.001)、铂敏感性(P<0.001)是影响术后生存的因素,而Cox多因素分析中则只有Gal-3表达(P=0.014)、铂敏感性(P=0.021)、分期(P<0.001)才是独立预后因素。【结论】Gal-3、Bcl-2可能参与上皮性卵巢癌的发生发展。Gal-3表达与病理类型、铂敏感性、预后相关,可能成为上皮性卵巢癌预后的独立判定因子。

低频重复经颅磁刺激预处理对氯化锂-匹鲁卡品致痫大鼠痫性发作及B细胞淋巴瘤／白血病基因-2、自杀因子和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3蛋白表达的影响

目的探讨低频重复经颅磁刺激（rTMS）预处理的抗痫作用及其与抗海马细胞凋亡的相关性。方法将健康成年Wistar大鼠30只分为rTMS预处理组、假刺激组及空白对照组，每组10只。rTMS预处理组行低频rTMS（0．5Hz、75％阈强度、20次／串、5串／d）预处理，假刺激组予以相同次数、声音相似的“假性”刺激，连续7d后，制作氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫持续状态模型。观察各组大鼠痫性发作潜伏期及痫性发作程度，以免疫组织化学法观察各组大鼠海马CA1区B细胞淋巴瘤／白血病基因-2（Bcl-2）、自杀因子（Fas）及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白的平均阳性反应细胞数及阳性反应细胞平均光密度。结果rTMS预处理组与假刺激组相比，痫性发作潜伏期显著延长、发作程度减轻（P〈0．01），各时点Bcl-2蛋白表达增加，Fas及Caspase-3蛋白表达减少。结论低频rTMS预处理具有抗痫作用，其机制可能与其调节海马区Bcl-2、Fas及Caspase-3蛋白表达水平，从而保护神经元有关。

右美托咪定对痫性发作大鼠海马神经细胞B细胞淋巴瘤／白血病-2、B细胞淋巴瘤／白血病-2相关X蛋白、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3蛋白表达的影响

目的观察右美托咪定（DEX）对痫性发作大鼠海马神经细胞凋亡蛋白表达的影响。方法将36只sD大鼠随机分为3组（n=12）：对照组（Control组）、右美托咪定组（DEX组）及致痫组（EP组）。DEX组给予10μg／k剂量DEX灌胃，连续3d，至致痫当日；对照组、致痫组则分别给予等体积生理盐水灌胃。以氯化锂-匹罗卡品制作致痫模型，观察SD大鼠行为学变化；采用Westernblot检测B细胞淋巴瘤／白血病-2（bcl-2）、bcl-2相关x蛋白（bax）和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）表达水平。结果EP组大鼠均表现易激惹，DEX组反复自发性痫性发作（SRS）次数[（5．67±1．53）次]比EP组[（10．33±3．06）次]明显减少，且差异有统计学意义（P〈0．05）。bcl-2、bax、bcl-2／bax和Caspase-3表达水平结果，对照组分别为1．0557±0．0081、0．5712±0．0057、1，0870±0．0026、0；DEX组分另U为0．9654±0．0216、0．6920±0．0028、1．3951±0．0328、0．6765±0．9697；EP组分另0为0．8925±0．0063、0．7427±0．0010、1．2016±0．0082、0．8565±0．9626。EP组与对照组比较，大鼠海马、bax、活化的active—Caspase-3表达水平增加，bcl-2表达水平降低，差异有统计学意义（P〈0．05），bcl-2／bax比值升高，差异有统计学意义（P〈0．05）；DEX组与EP组比较，海马bcl-2表达水平、bcl-2／bax比值升高，bax、active—Caspase-3表达水平降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DEX可能作用抑制大鼠海马神经细胞Casepase-3和box基因表达，减少SRS次数，对海马神经元产生保护作用。

洛铂诱导胆管癌RBE细胞凋亡及其对B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白、B细胞淋巴瘤/白血病-2、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3/半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-8和细胞色素C凋亡相关因子影响

目的 观察洛铂对胆管癌RBE细胞抗肿瘤作用及B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白（bax）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、actived-半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-8和细胞色素C（Cyt-C）转录及表达的影响.方法 不同浓度洛铂干预胆管癌RBE细胞一定时间,噻唑蓝（MTT）比色法检测RBE细胞的生长抑制,流式细胞法检测细胞周期,膜联蛋白V（Annexin V）/碘化丙锭（PI）双染检测凋亡率,Western blot及实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测bax、bcl-2、actived-Caspase-3、Caspase-8、Cyt-C蛋白及mRNA表达的变化.结果 MTT结果显示随浓度升高及时间延长,药物对细胞增殖抑制作用增强（P＜0.05）,24 h的半数抑制剂量（IC50）值为11.82 mg/L.随药物浓度增加G0/G1期与G2/M期细胞增加,S期细胞比例减少（P＜0.05）.Annexin V-异硫氰酸荧光素（FITC）/PI检测显示洛铂能诱导RBE细胞凋亡,与对照组比较有更高的凋亡率（Pp＜0.05）.Western blot及Real-time PCR检测结果显示bax、actived-Caspase-3、Caspase-8和胞质内Cyt-C转录和表达升高,bcl-2转录水平降低.结论 洛铂对胆管癌RBE细胞的增殖具有明显的抑制作用,其可能通过增加bax、抑制bcl-2的转录和表达,释放Cyt-C激活Caspase-8、Caspase-3诱导RBE细胞凋亡.

前列腺癌组织中PTEN、Bcl-2的表达及意义

目的 探讨前列腺癌组织中磷酸酶基因(PTEN)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测45例前列腺癌组织标本和15例正常前列腺组织标本中PTEN和Bcl-2的表达,并分析其表达与前列腺癌病理分级和临床分期之间的关系。结果 前列腺癌组织中PIEN和Bcl-2的阳性表达率为42.2％、51.1％,分别低于和高于正常组织中的100.0％、20.0％,差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。PTEN的表达缺失与前列腺癌病理分级和临床分期呈正相关;Bcl-2的表达与前列腺癌的病理分级呈正相关,而与临床分期无明显相关性。结论 PTEN的低表达和Bcl-2的高表达可能参与前列腺癌的发生、发展及转移。PTEN、Bcl-2可作评估为前列腺癌恶性程度及预后的指标。

银杏叶提取物对大鼠脑缺血-再灌注损伤诱导型一氧化氮合酶和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白表达的影响

目的探讨银杏叶提取物(EGb761)对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的保护作用及其机制。方法将80只清洁级雄性SD大鼠制作大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注模型。随机分为两组:对照组(A组,给予生理盐水治疗,40只),银杏叶提取物干预组(B组,给予等量的银杏叶提取物,40只),每组再分4个亚组,即再灌注后1、3、6及24 h组,每个亚组10只。应用HE染色法观察大鼠脑组织形态学变化及免疫组化SABC法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在脑组织中的表达;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测凋亡基因对B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)表达的影响。所有数据采用SPSS 13.0软件进行统计学分析。结果 (1)HE染色:A组发现明显的梗死灶、神经细胞坏死、凋亡以及神经细胞外形难以辨认,大部分细胞结构消失。B组形态相对正常,损伤较A组轻。(2)iNOS免疫组化结果:缺血再灌注1 h后可见少量iNOS阳性表达细胞,3、6及24 h可见iNOS的阳性表达细胞明显增多,并且开始出现核移位现象,包括神经元、神经胶质细胞、血管内皮细胞等,各时间点(1、3、6及24 h)iNOS的阳性表达IOD值分别为1851.38±242.12,2005.41±290.52,2625.28±385.21,3142.5±425.72,A组分别为1950.25±298.26,2232.45±305.28,3251.22±425.26,3965.36±521.62,可见,3 h后同时间点B组表达量显著低于A组(P<0.05)。(3)RT-PCR检测显示Bax mRNA表达水平在各时间点B组(IOD值分别为0.26±0.02,0.30±0.02,0.42±0.03,0.53±0.05)显著低于A组(IOD值分别为0.33±0.02,0.45±0.04,0.59±0.05,0.73±0.05;P均<0.01)。结论 iNOS和Bax在大鼠脑缺血再灌注后均显著增高。银杏叶提取物可能通过抑制PAF和Bax的表达减轻脑缺血再灌注损伤,银杏叶提取物对大鼠缺血再灌注后的脑组织有显著的保护作用。

雷公藤甲素对人卵巢癌A2780细胞抑制作用的机制研究

目的观察雷公藤甲素作用于人卵巢癌A2780细胞后,细胞增殖和凋亡的变化,并探讨其作用前后的分子机制。方法配置不同浓度的雷公藤甲素溶液,将其作用于A2780细胞,采用MTT法检测不同浓度雷公藤甲素作用A2780细胞后,细胞生长的抑制情况,采用荧光定量聚合酶链反应及Western blot检测不同浓度雷公藤甲素作用A2780细胞前后磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)信使RNA(mRNA)及蛋白的表达情况。结果不同浓度雷公藤甲素分别作用于A2780细胞24、48、72 h后,MTT结果显示,随着雷公藤甲素浓度的升高,作用时间的延长,抑制A2780细胞生长作用逐渐增强。10 nmol/L组的Bcl-2 mRNA表达低于0 nmol/L组[(0.62±0.10)比(1.00±0.21)](P<0.05);20 nmol/L组的Bcl-2 mRNA表达低于0 nmol/L组[(0.37±0.10)比(1.00±0.21)](P<0.01),Bax mRNA表达高于0 nmol/L组[(1.48±0.33)比(1.00±0.13)](P<0.05);40 nmol/L组的PI3K、Akt、Bcl-2 mRNA表达均低于0 nmol/L组[(0.45±0.10)比(1.00±0.56),(0.49±0.41)比(1.00±0.11),(0.28±0.10)比(1.00±0.21)](P<0.05),Bax mRNA表达高于0 nmol/L组[(5.07±0.78)比(1.00±0.13)](P<0.01)。结论雷公藤甲素可抑制人卵巢癌A2780细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能与下调PI3K、Akt和Bcl-2 mRNA和蛋白,及上调Bax mRNA和蛋白的表达有关。

大鼠自发性乳腺肿瘤中Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达

通过130只(雌雄对半)Sprague-Dawley(SD)大鼠进行自发性乳腺肿瘤造模,并研究自发产生的乳腺肿瘤组织的病理变化及B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukmia-2,Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(B cell lymphoma/leukmia-2 associated X protein,Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)在乳腺肿瘤中的蛋白和m RNA表达变化。造模结果显示共有14只雌性大鼠发生乳腺肿瘤,对总体而言肿瘤的发病率为10.77%(14/130);由于雄性大鼠未见乳腺肿瘤,在雌性大鼠中肿瘤的发病率为21.54%(14/65)。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色病理切片观察确定肿瘤分型分别为乳腺纤维腺瘤7例,乳腺腺癌3例,乳腺乳头状癌2例,乳腺浸润性导管癌2例。免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)结果显示,对照组(n=5)Bax、Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达量分别为9.75±0.04、8.13±0.35和6.60±0.04,而这3个因子在良性病变组(n=7)的蛋白表达量分别为8.16±0.16、9.14±0.22和4.43±0.1。另外,其在恶性病变组(n=7)的蛋白表达量分别为6.49±0.32、9.24±0.81和3.03±0.10,与对照组相比,Bax和Caspase-3在病变组的表达极显著减少(P<0.01),而Bcl-2在病变组中的表达与对照组相比也显著增加(P<0.05),且正常对照组Bcl-2/Bax比值小于1,而在良性组和恶性组则均大于1。荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative PCR,RTFQ-PCR)结果通过相对定量计算显示,Bax、Bcl-2和Caspase-3在各组中的m RNA的表达量变化与蛋白表达一致,相比差异有高度统计学意义(P<0.01)。综上所述,自发性乳腺肿瘤在雌性大鼠中的发病率较高,且病变类型多样,而雄性发病率为0;且Bcl-2、Bax和Caspase-3与大鼠自发性乳腺肿瘤的发生有着密切的联系,从而为临床乳腺肿瘤的诊断、治疗和预后提供了新的思考方向。

微小RNA-184通过Janus激酶2/信号转导与转录激活因子3途径下调B细胞淋巴瘤/白血病-2样蛋白1介导骨肉瘤的化疗耐药的机制

目的探究微小RNA(miRNA,miR)-184通过Janus激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路影响B细胞淋巴瘤/白血病-2样蛋白1(BCL2L1)参与骨肉瘤细胞化疗耐药性的机制。方法选用骨肉瘤细胞株MG63,采用聚合酶链反应(PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)等方法检测其中miR-184表达水平以及JAK2/STAT3、BCL2L1蛋白表达;转染miR-184模拟物、抑制物序列,观察对MG63、顺铂培养下的MG63(DPP-MG63)的影响,另将JAK2/STAT3通路抑制剂AG490与细胞一起培养,观察细胞变化。采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析及组内两两比较LSD-t检验进行统计学分析。结果miR-184在骨肉瘤细胞中降低(t=9.074,P<0.05),在过表达miR-184后骨肉瘤细胞的增殖、侵袭能力减弱,凋亡率升高(F=13.810、57.090、59.660,P<0.05),且其中JAK2/STAT3通路的蛋白表达、BCL2L1蛋白(0.92±0.04)均被抑制,细胞耐药性降低(F=186.200、252.900、211.600、156.200、176.500,P<0.05),而抑制miR-184则反之。同样,在经AG490培养后,细胞的增殖、侵袭能力降低,耐药性降低,BCL2L1蛋白表达(0.84±0.05)则升高(F=11.270、38.300、77.130,P<0.05)。拯救实验显示,沉默miR-184后的细胞再与AG490进行培养,细胞生物学行为、耐药性与MG63、DPP-MG63细胞比较差异均无统计学意义(t=0.612、0.059、0.050、0.612,P>0.05)。结论miR-184通过激活JAK2/STAT3信号通路,抑制BCL2L1的表达,促进骨肉瘤细胞的生长,并降低耐药性。

c-Jun氨基末端激酶与B细胞淋巴瘤／白血病-2相关X蛋白在兔基底尖动脉动脉瘤的表达

目的观察兔基底尖动脉瘤形成过程中c-Jun氨基末端激酶（JNK）及B细胞淋巴瘤／白血病-2相关X蛋白（bax）的表达。方法新西兰大白兔40只，分为正常组5只，假手术组5只，手术组每组各10只（术后2、8、16周）。采用双侧颈总动脉结扎法造模，假手术组仅暴露双侧颈总动脉，于规定时间行基底动脉尖部磁共振成像（MRA）。所有实验动物处死行病理染色观察基底动脉尖形态、血管内膜及中弹力层变化，免疫组织化学染色。结果免疫组织化学染色结果，JNK在各组表达阳性率分别为对照组：（8．600±2．074）％与术后2周组[（18．900±4．458）％，t=13．405，P=0．000]、术后8周组[（25．800±3．615）％，t=22．570，P=0．000]，术后16周组[（38．4004-8．343）％，t=14．555，P=0．000]比较差异有统计学意义。bax的阳性表达率分别为：术后2周组的阳性率为（9．400±3．050）％，与术后2周组[（22．100±4．748）％，t=14．719，P=0．000]，术后8周组[（29．200±4．894）％，t=18．866，P=0．000]，术后16周组[（36．700±4．762）％，t=24．371，P=0．000]比较差异有统计学意义。影像学结果：对照组动脉瘤体积为（7．600±3．847）mm^3、与术后2周组[（24．746±27．813）mm^3，t=2．814，P=0．020]、术后8周组[（37．083±35．695）mm^3，t=3．285，P=0．009]、术后16周组[（105．751±97．094）mm^3，t=3．444，P=0．007]比较差异有统计学意义。结论JNK与bax参与了兔基底尖动脉瘤的形成过程。