B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护作用初步研究

目的:构建B群脑膜炎奈瑟菌pc DNA3.1(+)/NMB0315真核表达重组质粒,检测其诱导小鼠产生的特异性体液免疫和细胞免疫应答水平、免疫血清体外杀菌效果及免疫保护作用,初步探讨NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护效果,为研制一种新的预防B群流脑的核酸疫苗提供实验依据。方法:以B群脑膜炎奈瑟菌标准株MC58基因组DNA为模板设计引物,PCR扩增NMB0315基因,克隆至pc DNA3.1(+)真核表达载体中,经Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切及测序鉴定重组质粒。构建成功的pc DNA3.1(+)/NMB0315重组质粒转染COS-7细胞和RAW264.7细胞,免疫细胞化学染色法和Western blot法检测重组蛋白在真核细胞中的表达。大量提取重组质粒,肌注免疫BALB/c小鼠,检测小鼠体内抗NMB0315的特异性体液免疫和细胞免疫水平;测定免疫血清体外杀菌滴度,观察核酸疫苗对实验小鼠的免疫保护效果。结果:构建的核酸疫苗pc DNA3.1(+)/NMB0315能够在真核细胞中有效转录和表达;免疫小鼠后能诱导产生特异性体液免疫应答和细胞免疫应答。在疫苗免疫后的2、4、6周,pc DNA3.1(+)/NMB0315组和pc DNA3.1(+)/NMB0315+Cp G组血清总Ig G及Ig G1、Ig G2a、Ig G2b和Ig G3亚类抗体水平呈递增趋势,均明显高于PBS、pc DNA3.1(+)、Cp G对照组(P<0.001);小鼠血清Ig G2a/Ig G1比值均小于1;生殖道灌洗液中特异性s Ig A水平均明显高于PBS、pc DNA3.1(+)、Cp G对照组(P<0.01)。免疫第6周,脾淋巴细胞刺激指数(SI)均明显高于对照组(P<0.01,P<0.01,P<0.05)。pc DNA3.1(+)/NMB0315+Cp G、pc DNA3.1(+)/NMB0315疫苗组免疫血清补体介导的体外杀菌效价分别为1∶128和1∶64;在致死量B群脑膜炎奈瑟菌MC58攻击后72 h存活率分别为70%和65%,对照组[PBS,pc DNA3.1(+),Cp G]72 h存活率为0。结论:NMB0315核酸疫苗能够诱导小鼠产生较高水平的体液免疫(包括黏膜免疫)和细胞免疫应答;免疫血清补体介导的体外杀菌活性较高;NMB0315核酸疫苗对感染B群脑膜炎奈瑟菌小鼠具有较强的免疫保护作用。

从一例脑膜炎患者的脑脊液中检出B群脑膜炎球菌

目的查明建瓯市一例脑膜炎患者病原菌,为有效治疗提供实验依据。方法采用常规法分离鉴定脑脊液病原菌及血清分群并用PCR技术进行检测;用Etest法进行药敏试验。结果从该患者脑脊液检出B群脑膜炎球菌(编号为2007—26);PCR检测CrgA基因及SiaD(B)基因均呈阳性。2007—26菌株对头孢三嗪、头孢噻肟、利福平等7种抗菌药物敏感,但对磺胺甲基异嗯唑产生高度耐药。结论福建省流脑病原学监测已出现B群脑膜炎球菌,这在福建省近30年尚属首次发现。流脑病例治疗可首选头孢类、利福平等敏感抗菌药物,磺胺甲基异噁唑不适宜继续作为治疗和预防药物。

PCR结合酶切-序列比对法鉴定B群脑膜炎奈瑟菌菌株

目的用PCR结合酶切-序列比对法对B群脑膜炎奈瑟菌菌株进行鉴定。方法用玻片凝集法对不同来源的15株B群脑膜炎奈瑟菌菌株进行初步检定,再用PCR结合酶切-序列比对法对上述15株菌株进行进一步鉴定,即用PCR结合酶切法扩增菌株的唾液酸转移酶sia D基因并对PCR产物进行酶切后,用BLAST软件将PCR产物测序结果与Gene Bank中原始sia D序列比对。结果 15株菌株玻片凝集结果均为阳性;15株菌株的PCR产物片段大小均为460 bp;TaqⅠ酶切后,13株菌株的酶切产物片段大小仍为460 bp,其PCR产物测序比对结果与B群脑膜炎奈瑟菌原始sia D序列同源性均达到99%;其余2株酶切产物片段大小约200 bp,与C群脑膜炎奈瑟菌sia D原始基因序列同源性分别为98%和99%。结论 15株菌株经PCR结合酶切-序列比对法鉴定,13株为B群脑膜炎奈瑟菌菌株,2株为C群脑膜炎奈瑟菌菌株;该方法可准确鉴定B群脑膜炎奈瑟菌菌株。

B群脑膜炎球菌疫苗的研制策略

脑膜炎奈瑟菌主要引起儿童细菌性脑脊髓膜炎和败血症,有较高的发病率和病死率。现用疫苗能够控制A、C、W135和Y群脑膜炎球菌引起的感染,而由于B群荚膜多糖免疫原性弱,外膜蛋白变异性高等原因,仍无安全和具有广泛保护性的疫苗用于控制B群脑膜炎球菌的感染。目前,B群脑膜炎球菌大多已成为引起发达国家侵袭性脑膜炎疾病的主要病原体。随着研究的不断深入,B群脑膜炎球菌疫苗的研究已经取得了很大的进展,外膜囊(Out membrane vesicles,OMV)疫苗已经在控制特异性菌株爆发流行中取得了成功。然而,人们对具有广泛保护性的B群脑膜炎球菌疫苗的探索仍在继续。本文对近年来B群脑膜炎球菌基于不同型抗原疫苗的各种研制策略及其存在的问题进行了综述。

B群脑膜炎球菌菌苗研究进展

本文介绍了近年来B群脑膜炎球菌菌苗的研究进展,指出B群多糖抗原无免疫原性,蛋白抗原是有效免疫原,讨论了B群蛋白抗原的分型意义和B群脑膜炎球菌蛋白菌苗的研制、效果及存在问题等.

B群脑膜炎球菌外膜蛋白0315不同形式疫苗免疫效果比较

目的:初步探讨和评价NMB0315核酸疫苗、重组蛋白疫苗及核酸疫苗+重组蛋白疫苗联合免疫诱导小鼠产生的特异性体液/细胞免疫应答水平及其免疫保护效果,为进一步探索NMB0315疫苗有效的免疫方法和途径提供实验依据。方法:大量制备核酸疫苗[pc DNA3.1(+)/NMB0315]和重组蛋白疫苗(p ET-30a/NMB0315),采用核酸初免-蛋白加强的方法联合免疫或分别免疫雌性BALB/c小鼠,测定特异性体液/细胞免疫应答水平、免疫血清体外杀菌效价,观察疫苗对感染B群脑膜炎球菌小鼠的免疫保护效果。结果:NMB0315核酸疫苗组(p NMB0315-Cp G)、蛋白疫苗组(r NMB0315-FA)及联合免疫疫苗组(p NMB0315-Cp G+r NMB0315-FA)诱导的血清特异性Ig G、Ig G1、Ig G2a及生殖道灌洗液中特异性s Ig A水平在第八周达到峰值,A450值分别为(0.505±0.042、0.513±0.022、0.342±0.017、0.250±0.015)、(0.823±0.061、0.807±0.045、0.596±0.027、0.450±0.028)和(0.694±0.053、0.711±0.032、0.455±0.021、0.386±0.024),明显高于PBS对照组(P<0.01);其中,蛋白疫苗组的抗体水平明显高于联合免疫疫苗组和核酸疫苗组(P<0.05)。小鼠脾淋巴细胞刺激指数及IFN-γ水平,联合免疫疫苗组明显高于蛋白疫苗组和核酸疫苗组(P<0.05);核酸疫苗组、蛋白疫苗组和联合免疫疫苗组免疫血清在补体介导下的体外杀菌抗体效价分别为1∶64、1∶128和1∶128,对实验小鼠的免疫保护率分别为70%、95%和80%。免疫2、4、6、8周时,核酸疫苗组、重组蛋白疫苗组和联合免疫疫苗组Ig G2a/Ig G1比值均小于1。结论:NMB0315疫苗诱导的体液免疫(包括黏膜免疫)效果从高到低为:重组蛋白疫苗组、联合免疫疫苗组、核酸疫苗组;诱导细胞免疫的效果从高到低为:联合免疫疫苗组、核酸疫苗组、重组蛋白疫苗组;NMB0315疫苗对实验小鼠的免疫保护效果从高到低为:重组蛋白疫苗组、联合免疫疫苗组、核酸疫苗组。

WONCA研究论文摘要汇编——婴儿期血清B群脑膜炎球菌疫苗接种后杀菌抗体存留性及学龄前追加剂量的致免疫性

背景多组分血清B群脑膜炎球菌疫苗（4CMenB）最近在欧洲获准使用。目前还缺乏婴儿期使用此疫苗后产生杀菌抗体存留性的证据。此研究将对40～44个月，在2、4、6、12个月接种过4CMenB的儿童进行评估。方法参试者婴儿期均接受过4个剂量的4CMenB，并在40—44个月接受第5个剂量。首次接受4CMenB年龄匹配的参试者作为对照组。对人类完全血清杀菌力（hSBA）滴度进行基线及4CMenB每个剂量接种后1个月的评估。结果在追加剂量前，17名参试者中有41％-76％在婴儿期接种过4CMenB，对比4个参考菌株hSBA滴度≥4。对照组（n=40）接种前这些菌株比例相似4／76-SL（63％）及M10713（68％），但菌株NZ98／254（0）及5／99（3％）比例要低。与对照组相比，做4CMenB追加剂量参试者的hSBA滴度上升得要多。解释根据获准婴儿接种计划，即2、4、6、12个月接种疫苗，就像其他脑膜炎球菌疫苗，接种4CMenB后，杀菌抗体也会减少，但40～44个月追加剂量后出现了抗体增生反应。如果将4CMenB列入常规疫苗接种计划，对追加剂量的评估还需要下降滴度影响疫苗效力的相关数据。

B群脑膜炎球菌外膜囊菌苗的免疫反应

由B群脑膜炎球菌所致的侵袭性感染是许多国家发病和死亡的重要原因。控制脑膜炎球菌感染和疾病的重要挑战是研制预防B群脑膜炎球菌感染的菌苗。B群脑膜炎球菌多无免疫原性 ,故目前的研究试图主要针对该菌外膜蛋白或脂多糖产生的免疫反应。本文对B群脑膜炎球菌外膜囊菌苗在动物和人类的免疫反应进行了综述。

B群脑膜炎球菌外膜囊和脱毒的脂寡糖预防同源和异源脑膜炎球菌感染及脓毒性休克的效力

脑膜炎球菌是一种严重的细菌性病原体,可引起威胁生命的侵袭性细菌感染.为研究B群脑膜炎球菌外膜囊(OMV)和脱毒的脂寡糖(dLOS)的保护效力,研究者采用脱氧胆酸钠处理B群脑膜炎球菌N44/89和N603/95株获得OMV和dLOS,并将OMV和dLOS与参考疫苗(VA-MENGOC-BC(R),古巴)进行比较.

对B群脑膜炎球菌减毒活菌苗的探讨

目前预防B群脑膜炎球菌感染的研究主要针对该菌外膜蛋白或脂多糖诱生的免疫应答。本文提出一种新方法:使用脑膜炎球菌减毒活菌苗经粘膜接种以诱导局部和全身性免疫应答。

重组B群脑膜炎球菌疫苗大鼠安全性和免疫原性研究

目的 对大鼠重复给予重组B群脑膜炎球菌疫苗,考察该创新疫苗的非临床安全性和免疫原性,为临床设计人用剂量及临床毒副反应的监测提供参考依据。方法 使用SD大鼠,设计阴性对照组、佐剂对照组、疫苗低剂量组(每只1剂)和高剂量组(每只3剂)4个主试验组及3个卫星组。于第0、3、6、9、12周分别肌肉注射,进行临床观察和解剖观察,并对多种组织脏器进行病理学检查。检测体质量、食量、体温、血细胞计数、凝血功能、血液生化、眼科、T淋巴细胞亚群、细胞因子、血清特异性IgG抗体和杀菌抗体等指标。结果 低、高剂量重组B群脑膜炎球菌疫苗均能产生高水平的结合抗体,免疫血清具有较强活性的杀菌抗体。低、高剂量组疫苗可引起大鼠中性粒细胞、单核细胞及淋巴细胞显著升高,血红蛋白和红细胞比容显著降低。与给药相关的改变还表现为血清球蛋白升高,白蛋白降低,与之伴随的A/G值降低。4周恢复期后均可恢复正常。与佐剂和疫苗免疫相关的组织病理学改变为注射局部可见轻微至中度肉芽肿性炎症、急性炎症,坐骨神经外膜单个核细胞/混合细胞浸润、增生,淋巴结髓索浆细胞数目及粒细胞系增多等。结论 重组B群脑膜炎球菌疫苗对SD大鼠具有良好的免疫原性和安全性,未见免疫毒性反应,可见与铝佐剂和免疫反应相关的外周血液指标变化以及注射部位炎症。本试验剂量下,重组B群脑膜炎球菌疫苗未见不良反应剂量(no observed adverse effect level, NOAEL)为每只3剂。

湖南省B群脑膜炎奈瑟菌药物敏感性及分型

近年来,湖南省流行性脑脊髓膜炎（简称流脑）流行以C群脑膜炎奈瑟菌（Nm）为主〔1〕,2009年2月,首次从流脑患者身上分离出B群脑膜炎奈瑟菌,2010年在健康人群流脑咽拭子中,同时分离到4株B群脑膜炎奈瑟菌。为掌握湖南省B群脑膜炎奈瑟菌的分子生物学特征,为有效的预防和控制其流行提供依据,

北京发现ST4821克隆群B群脑膜炎奈瑟菌

目的对2013年1月北京市1例流行性脑脊髓膜炎(流脑)死亡病例标本进行脑膜炎奈瑟菌检测,了解感染病原及分离菌株的分子流行病学特征。方法对患者脑脊液标本进行细菌分离培养,通过常规细菌学试验对分离菌株进行脑膜炎奈瑟菌鉴定、实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative PCR)方法检测患者脑脊液和抗凝血中脑膜炎奈瑟菌核酸,同时对鉴定的菌株进行多位点序列分型(MLST)分析、外膜蛋白PorA分型和FetA分型,以及体外药物敏感试验。结果从患者脑脊液和抗凝血标本中均检测到脑膜炎奈瑟菌种特异基因ctrA和血清群B特异基因siaD。从患者脑脊液中分离到1株可疑阳性菌,经实验确诊为B群脑膜炎奈瑟菌。PorA为P1.20,23-9,FetA为F1-91;多位点序列分型分析显示基因型为ST10051,属于ST4821序列群。该菌株对复方新诺明为中等耐药,对环丙沙星和四环素耐药,对青霉素、头孢噻肟、头孢曲松、左氧氟沙星、美罗培南、氯霉素、利福平等药物均敏感。从密切接触者咽拭子中未分离到脑膜炎奈瑟菌。结论该菌株经鉴定为B:P1.20,23-9:F1-91:ST10051(ST4821序列群)。北京地区人群中已经存在高致病性ST4821克隆群B群脑膜炎奈瑟菌,并引发死亡病例,提示应全面掌握本地区脑膜炎奈瑟菌健康人群携带情况及病例菌株分子流行病学资料,为流脑的预防控制提供实验室数据支撑。

两株B群脑膜炎奈瑟氏菌脂寡糖减毒前后抗原性与毒性的检测

两株Ｂ群脑膜炎奈瑟氏菌脂寡糖减毒前后抗原性与毒性的检测孙银燕胡绪敬王君摘要脂寡糖（ＬＯＳ）是Ｂ群Ｎｍ的一种主要外膜抗原，用ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－３００ＨＲ或ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶层析方法从两株Ｂ群Ｎｍ（５４２８５２和３４０７）中提取获得了纯度较...

B群脑膜炎球菌外膜蛋白偶联A+C群脑膜炎球菌结合疫苗的免疫原性研究

目的了解B群脑膜炎球菌外膜蛋白(Group B Meningococcal Outer Membrane Protein,MenB-OMP)偶联A+C群脑膜炎球菌结合疫苗(Meningococcus Group A and Group C Conjugate Vaccine,MCVA+C)的免疫原性。方法按2:1比例随机双盲对照试验设计原则,观察3～5月龄、6～23月龄、2～6岁、7～24岁四个年龄组,检测免疫前、后A、B、C群血清杀菌抗体(Serum Bactericidal Antibody,SBA)。结果观察疫苗对不同年龄组免疫前、后A、B、C群SBA同时≥4倍增长率为97.65%～100%,SBA同时≥1:128的占88.89%～96.47%,几何平均滴度为1:194～1:420,与对照组相比差异有统计学意义。结论MenB-OMP偶联MCVA+C有良好的免疫原性。

脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315作为B群流脑疫苗候选抗原的免疫效果

目的研究原核重组表达的B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白0315(rNMB0315)在诱导小鼠产生特异性免疫应答中的作用、免疫血清抗体体外杀菌活性和重组蛋白的免疫保护效果,初步评价rNMB0315作为B群流脑疫苗候选抗原的潜力。方法将构建的原核表达载体p ET30a-NMB0315转化大肠杆菌BL21表达重组蛋白,纯化鉴定后的重组蛋白免疫雌性BALB/c小鼠,检测体液免疫和细胞免疫水平;测定血清抗体在补体介导下的体外杀菌活性,观察rNMB0315蛋白疫苗对实验小鼠的免疫保护效果。结果 rNMB0315具有良好的免疫原性,能诱导产生较高水平的体液免疫应答:包括血清特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgG3、IgG2b和生殖道黏膜特异性分泌型IgA(s IgA),免疫后第6周抗体效价分别为1∶150 000、1∶85 000、1∶60 000、1∶35 000、1∶30 000和1∶30 000;也能激发较高水平的细胞免疫应答,免疫小鼠脾淋巴细胞增殖反应的刺激指数(SI)值明显高于PBS、Freund佐剂对照组。在免疫的2、4、6周,血清IgG2a/IgG1比值均小于1,提示rNMB0315疫苗以诱导Th2细胞性体液免疫应答为主。rNMB0315疫苗免疫血清在补体介导下的体外杀菌抗体效价为1∶128;72 h内,对实验小鼠的免疫保护率为90%。结论原核表达的rNMB0315具有良好的免疫活性和免疫保护效果,NMB0315外膜蛋白具有作为预防B群流脑蛋白疫苗候选抗原的潜力。