细胞外组蛋白调控TLR4/NF-κB途径对膀胱癌细胞上皮间质转化和侵袭的影响

目的研究细胞外组蛋白调控Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)途径对膀胱癌细胞上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)和侵袭的影响。方法培养膀胱癌细胞株T24并分为对照组、不同浓度组蛋白H3(50、100、200μg/mL)组、溶剂对照(体积分数0.1%DMSO)组、组蛋白H3(200μg/mL)+溶剂对照(体积分数0.1%DMSO)组、组蛋白H3(200μg/mL)+NF-κB抑制剂Bay11-7082(10μmol/L)组。分组给药24 h后检测细胞侵袭数目及细胞中E-钙粘蛋白(E-cadherin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、TLR4、磷酸化P65 NF-κB(p-P65 NF-κB)的蛋白表达水平。结果不同浓度组蛋白H3组的细胞侵袭数目及N-cadherin、Vimentin、TLR4、p-P65 NF-κB的表达水平高于对照组,E-cadherin的蛋白表达水平低于对照组(P<0.05)且组蛋白H3浓度越高,细胞侵袭数目及蛋白表达水平的变化越显著;组蛋白H3+Bay11-7082组的细胞侵袭数目及N-cadherin、Vimentin、p-P65 NF-κB的表达水平低于组蛋白H3+溶剂对照组,E-cadherin的蛋白表达水平高于组蛋白H3+溶剂对照组(P<0.05)。结论细胞外组蛋白促进膀胱癌细胞EMT及侵袭,这一促进作用与激活TLR4/NF-κB途径有关。

附子理中丸通过NF-κB途径抗炎止泻的效应和机制

目的探讨附子理中丸通过伊立替康诱导的腹泻大鼠模型抗炎止泻的作用。方法将56只Wistar雄性大鼠按体质量随机分为对照组、模型组、小檗碱组、IKK-β抑制剂组、附子理中丸低剂量组、附子理中丸中剂量组、附子理中丸高剂量组(10 g/kg、20 g/kg、40 g/kg)。除对照组外,其余大鼠按照125 mg/kg体质量给予腹腔注射伊立替康溶液,对照组腹腔注射等容量生理盐水,连续5 d。造模成功后,每组灌胃相应的药物。运用HE染色,透射电子显微镜,酶联免疫吸附法(ELISA),实时荧光定量聚合酶链式反应法(qRT-PCR),蛋白免疫印迹法(Western Blot)实验检测相关指标。结果与正常组相比,模型组的结肠组织肠黏膜损伤严重;结肠组织中各种超微结构变化明显;炎症因子TNF-α与TGF-β1的含量升高(P<0.01),IL-4及IL-10的含量降低(P<0.01);p65、p50以及IKK-βmRNA的表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);p65、p50以及IKK-β蛋白表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01);与模型组相比,小檗碱组、IKK-β抑制剂组、附子理中丸各剂量组的实验结果与之相反。结论附子理中丸可以通过调节NF-κB途径改善伊立替康诱导的大鼠结肠炎症以及腹泻情况。

黑色素及谷胱甘肽通过抑制NF-κB途径的激活可有效抑制H_5N_1禽流感病毒感染

我国是H5N1高致病性禽流感频发区.为筛选天然药物用于H5N1禽流感的防治并研究其抗病毒感染的作用机制,本研究选取黑色素及谷胱甘肽(GSH)为候选药物,通过Hoechst33258荧光染色,观察了禽流感病毒(AIV)感染后的细胞形态变化;细胞凋亡流式细胞术定量分析表明,H5N1AIV感染可诱导宿主狗肾上皮细胞(MDCK)凋亡,而黑色素及GSH对其具有显著抑制作用(P<0.01);当20μg/ml黑色素及10mmol/LGSH共同作用时,抑制率高达89%(P<0.01);采用MTT法检测,黑色素及GSH可增强AIV感染后的宿主细胞存活率;病毒血凝素(Ha)基因的RT-PCR检测结果表明,黑色素及GSH可显著降低AIV在宿主细胞内的增殖(P<0.01);一氧化氮(NO)毛细管电泳(CE)激光诱导荧光检测显示,黑色素及GSH均可显著降低病毒感染诱导宿主细胞内的NO释放量(P<0.05);RT-PCR技术结合ELISA方法,分别分析了病毒感染后宿主细胞的诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、环氧化酶(cyclooxygenase-2,COX-2)及核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)在mRNA和蛋白水平表达的差异.结果表明,黑色素及GSH可抑制病毒感染诱导的iNOS与COX-2的基因及蛋白的表达(P<0.05),并进而抑制NF-κB途径的激活(P<0.01),从而可有效抑制HNAIV感染.

基于TLR4/NF-κB途径探讨二甲双胍对EAE小鼠Th17细胞反应及T细胞分化的作用机制

目的通过TLR4/NF-κB途径探讨二甲双胍对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠T辅助细胞17(T help 17cells,Th17)反应及T细胞分化的作用机制。方法通过皮下多点注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)肽35-55诱导EAE模型,将30只建模成功的小鼠分为EAE组和EAE+二甲双胍组(n=15),随机选择15只健康小鼠作为对照组。二甲双胍灌胃干预,剂量为200 mg/(kg·d^(-1))。比较各组小鼠EAE病情、髓鞘完整性、脊髓Th17细胞浸润和外周血中Th17细胞比例。小鼠CD4;幼稚T细胞分为NC组、MOG组和MOG+二甲双胍组。通过CCK-8和流式细胞术检测增殖和Th17分化情况。并检测各组细胞中TLR4/NF-κB转录和翻译水平。结果EAE组的Knoz评分、髓鞘损伤程度、Th17细胞浸润情况和外周血中Th17细胞比例显著高于对照组(P<0.05)。EAE+二甲双胍组的Knoz评分、髓鞘损伤程度、Th17细胞浸润情况和外周血中Th17细胞比例显著低于EAE组(P<0.05)。对于细胞实验,3组的各项指标比较差异显著(P<0.05)。MOG组的OD值、Th17细胞比例、TLR4和NF-κB mRNA及蛋白表达水平显著高于NC组(P<0.05)。MOG+二甲双胍组的OD值、Th17细胞比例、TLR4和NF-κB mRNA及蛋白表达水平显著低于MOG组(P<0.05)。结论二甲双胍可能通过抑制TLR4/NF-κB通路抑制CD4+幼稚T细胞向Th17细胞分化并减少中枢神经系统中Th17细胞的浸润,从而缓解EAE。

法舒地尔通过Nrf2/ARE和NF-κB途径对糖尿病周围神经病变大鼠的作用

目的探究法舒地尔对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠的作用及其可能的作用机制。方法将SPF级60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、阳性对照组、法舒地尔低剂量组、法舒地尔高剂量组,每组12只。高脂饲料联合链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。给药8周后,测定大鼠空腹血糖和体重;Eddy热板法检测热缩腿潜伏期(TWL);Von Frey实验检测压力-缩腿阈(PWT);Randall Selitto实验检测机械性痛觉超敏(MWT);双极针电极检测运动神经传导速度(MNCV)和感觉神经传导速度(SNCV);HE染色和甲苯胺蓝染色检测坐骨神经病理学变化;试剂盒检测MDA、GSH、SOD、IL-1β、IL-6和TNF-α含量变化;Western blot检测Nrf2、HO-1、p-p65和p65蛋白水平。结果与对照组相比,模型组大鼠体重、坐骨神经轴突数量、TWL、MWT、PWT、MNCV和SNCV显著降低(P<0.05),血糖、MDA、IL-1β、IL-6和TNF-α含量以及p-p65/p65蛋白水平显著升高(P<0.05),GSH、SOD含量以及Nrf2和HO-1蛋白水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,阳性对照组、法舒地尔低剂量组和法舒地尔高剂量组大鼠体重、血糖水平差异无统计学意义(均P>0.05),坐骨神经轴突数量、TWL、MWT、PWT、MNCV和SNCV显著升高(P<0.05),MDA、IL-1β、IL-6和TNF-α含量以及p-p65/p65蛋白表达显著降低(P<0.05),GSH、SOD含量以及Nrf2和HO-1蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论法舒地尔可能通过激活Nrf2/ARE途径和抑制NF-κB途径在DPN大鼠中发挥保护作用。

非诺贝特通过Sirt1-NF-κB途径调控肿瘤坏死因子α诱导的3T3-L1脂肪细胞炎症反应

目的探讨非诺贝特对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导3T3-L1成熟脂肪细胞中炎症相关蛋白CD40L/CD40表达的影响及其是否通过Sirt1-NF-κB途径调控TNF-α诱导的3T3-L1脂肪细胞炎症反应。方法 3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化成为成熟脂肪细胞后,免疫荧光检测Sirt1及CD40L/CD40的表达定位。TNF-α刺激细胞以及加入非诺贝特、Sirt1特异性激动剂和抑制剂和NF-κB信号通路阻断剂后,采用免疫印迹法检测细胞内Sirt1、CD40和NF-κB蛋白表达水平,采用RT-Q-PCR检测Sirt1和CD40 mRNA表达水平。结果油红O染色结果表明成功建立诱导分化体系。Sirt1在3T3-L1成熟脂肪中有表达且主要定位于细胞核。免疫荧光和逆转录PCR结果表明,3T3-L1成熟脂肪细胞表达CD40且主要定位于细胞膜上,但不表达CD40L。非诺贝特剂量依赖性下调TNF-α(10μg/L)诱导的成熟脂肪细胞中CD40蛋白和mRNA的表达,上调TNF-α诱导的成熟脂肪细胞中Sirt1蛋白和mRNA的表达。Sirt1特异性激动剂白藜芦醇增强非诺贝特对TNF-α诱导的成熟脂肪细胞中CD40蛋白和mRNA表达的抑制作用,组蛋白去乙酰化酶抑制剂尼克酰胺和Sirt1特异性抑制剂Sirtinol减弱非诺贝特的抑制作用。且当NF-κB信号通路阻断后,CD40蛋白和mRNA表达水平显著降低。结论非诺贝特抑制TNF-α诱导3T3-L1成熟脂肪细胞中CD40的表达,且其可能通过Sirt1-NF-κB途径调控TNF-α诱导的3T3-L1脂肪细胞炎症反应。

黄芪甲苷通过RNF10-NF-κB途径改善小鼠心梗后心室重构的机制研究

目的:研究黄芪甲苷(AS)对急性心肌梗死(AMI)小鼠心室重构的作用及机制。方法:手术构建AMI心室重构小鼠模型。根据饮食不同,将60只小鼠平分为对照组、模型组、AS低剂量组(40mg/kg)、AS高剂量组(80mg/kg)。记录各组小鼠2周内心脏破裂发生率及心脏重构相关超声指标。Real-time分析心脏重构相关基因[基质金属蛋白酶(MMP)-2,9,金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)]、炎症基因[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)]及环指蛋白10(RNF10)-P65关键信号基因的表达,并比较组间差异。结果:各组小鼠心脏破裂发生率无统计学差异(P>0.05)。心脏超声提示AS能减轻心脏扩大、改善室壁变薄、增加心肌收缩(P<0.05)。AS高剂量组在局部室壁形态上改善更为明显(P<0.05)。Real-time PCR结果提示模型组MMP-2、MMP-9表达上升(P<0.05),TIMP-2表达下降(P<0.05);心肌炎症基因(IL-6、TNF-α、VCAM-1)表达升高(P<0.01);关键信号基因RNF10明显下调(P<0.01),P65显著升高(P<0.01)。AS干预后所有基因表达均得到逆转(P<0.05),其中AS高剂量组逆转效果更好(P<0.05)。结论:AS能改善AMI心脏重构,可能与其能调控RNF10-NF-κB途径,影响心肌炎性因子释放及抑制MMP活性有关。

脊柱术后细菌感染过程中脂多糖通过TLR-4/NF-кB途径诱导降钙素原的机制

目的探究脊柱术后细菌感染过程中脂多糖通过TOLL样受体4(TLR-4)/核因子κB(NF-κB)途径诱导降钙素原(PCT)的机制。方法60只雌性C57BL/6小鼠(9周龄,18~22g)按照随机数字表法分为对照组、革兰阴性(G-)感染组和革兰阳性(G+)感染组,每组20只。通过体内生物发光测量小鼠细菌感染数量。通过蛋白印迹法分析小鼠组织脂多糖、TLR-4、NF-κB和PCT的蛋白表达。通过酶联免疫试剂盒检测小鼠血清炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)的浓度。通过蛋白印迹法分析Bax和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的蛋白表达。通过定量逆转录PCR(RT-qPCR)分析核因子KappaB抑制剂的激酶(IKK)α/β、IκB和p65的mRNA表达。结果术后第1天,各组小鼠细菌感染数量比较差异无统计学意义(P>0.05),第2天和3天,G-感染组和G+感染组的细菌数量较对照组升高,差异均有统计学意义(P<0.05);G-感染组与G+感染组细菌感染量比较差异无统计学意义(P>0.05)。G-感染组和G+感染组脂多糖、TLR-4、NF-κB和PCT的蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05),G-感染组与G+感染组比较差异无统计学意义(P>0.05)。G-感染组和G+感染组血清TNF-α、IL-6和IL-1β浓度较对照组升高,差异均有统计学意义(P<0.05),G-感染组与G+感染组比较差异无统计学意义(P>0.05)。G-感染组和G+感染组Bax蛋白表达较对照组升高,Bcl-2蛋白表较对照组降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。G-感染组和G+感染组IKKα/β、IκB和p65的mRNA表达较对照组升高,差异均有统计学意义(P<0.05),G-感染组与G+感染组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论脊柱术后G-/G+菌感染过程中,通过激活脂多糖、TLR-4、NF-κB、PCT途径,诱导促炎和细胞凋亡。TLR-4和PCT途径可能在未来成为治疗脊柱术后感染的潜在疗法。

低频率电刺激通过调控Rho/ROCK/NF-κB途径对癫痫大鼠作用的研究

目的探究低频率电刺激(LFS)对癫痫的作用及其可能的作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为对照组、癫痫模型组、假刺激组和LFS治疗组,每组15只。记录大鼠Racine评分和脑电图,Morris水迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力;HE染色和尼氏染色检测大鼠海马CA1区病理学变化;TUNEL染色检测大鼠海马神经元细胞凋亡;ELISA检测大鼠血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平;Western blotting检测大鼠海马RhoA、ROCK1、ROCK2、p65、p-p65和凋亡相关基因蛋白表达;RT-PCR检测大鼠海马RhoA、ROCK1和ROCK2 mRNA表达。结果癫痫模型组大鼠出现了连续性棘波。癫痫模型组大鼠的Racine评分;神经元细胞凋亡率;Bax、c-caspase3和p-p65/p65蛋白表达;RhoA、ROCK1和ROCK2 mRNA和蛋白表达;血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。癫痫模型组大鼠的空间学习记忆能力、神经元数量、尼氏体数量、Bcl-2蛋白表达较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。LFS治疗组大鼠波峰下降。LFS治疗组大鼠的Racine评分;神经元细胞凋亡率;Bax、c-caspase3和p-p65/p65蛋白表达;RhoA、ROCK1和ROCK2 mRNA和蛋白表达;血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平较假刺激组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。LFS治疗组大鼠的空间学习记忆能力、神经元数量、尼氏体数量和Bcl-2蛋白表达较假刺激组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LFS可能通过抑制Rho/ROCK/NF-κB途径来抑制炎症产生,从而发挥抗癫痫作用。

α-倒捻子素通过NF-κB途径抑制LPS/ATP诱导的小胶质细胞中NLRP3炎症小体的激活

目的探究α-倒捻子素(α-mangostin)在脊髓损伤后小胶质细胞炎症模型中作用及相关机制。方法体外培养小鼠小胶质细胞系BV-2细胞,利用脂多糖和三磷酸腺苷(LPS/ATP)联合诱导的方式建立BV-2炎症模型。CCK-8法检测不同浓度(0、10、20、40、80μmol/L)的α-mangostin对LPS/ATP刺激下的细胞增殖活力影响以筛选适宜的α-mangostin浓度范围;将BV-2细胞分为Ctrl组、LPS/ATP组、40μmol/Lα-mangostin组和不同浓度(10、20、40μmol/L)的α-mangostin干预组(分别记为LPS/ATP+10μmol/Lα-mangostin组、LPS/ATP+20μmol/Lα-mangostin组与LPS/ATP+40μmol/Lα-mangostin组)。ELISA实验检测各组BV-2细胞上清液中促炎因子白介素-6/1β/18(IL-6、IL-1β、IL-18)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量,Western blot检测各组细胞中NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体相关蛋白NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、裂解型半胱氨酸蛋白酶1(cleaved caspase-1)和白介素1β(IL-1β)表达及核因子κB(NF-κB)途径中p65的磷酸化水平(p-p65/p65)和BV-2细胞核中p65的表达。结果与Ctrl组相比,LPS/ATP组细胞增殖活力明显降低(P<0.05),但低浓度(10、20、40μmol/L)的α-mangostin可显著改善LPS/ATP对小胶质细胞增殖活力的抑制作用(P<0.05),但高浓度(80μmol/L)α-mangostin可促进LPS/ATP对小胶质细胞的损伤(P<0.05)。与Ctrl组相比,40μmol/Lα-mangostin组小胶质细胞上清液中炎症因子IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-α含量和细胞中NLRP3、ASC、cleaved caspase-1、IL-1β和p-p65/p65比值及细胞核中p65蛋白均无明显改变(P>0.05),而LPS/ATP组均显著增加(P<0.05);与LPS/ATP组相比,不同浓度α-mangostin干预组中IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-α含量和BV-2细胞中NLRP3、ASC、cleaved caspase-1、IL-1β和p-p65/p65比值及细胞核中p65蛋白表达随α-mangostin浓度的增加而依次降低,其中以LPS/ATP+40μmol/Lα-mangostin组的降低程度最为明显(P<0.01)。结论α-mangostin可通过NF-κB途径抑制BV-2细胞中NLRP3炎性小体活化所介导的神经炎症反应。

TNF-α调节NF-κB/PXR炎症途径对肺癌细胞生物行为的影响及作用机制

目的分析TNF-α调节NF-κB/PXR炎症途径对肺癌细胞生物行为的影响及作用机制。方法将A549细胞分为对照组和干预组,对照组正常培养不做任何干预处理,干预组使用人TNF-α以10 ng/ml浓度共培养12 h;检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡、细胞侵袭活性;并采用PCR及WB法检测细胞中NF-κB、PXR蛋白和mRNA表达水平。结果在TNF-α干预24 h、48 h和72 h时,干预组细胞检测的吸光度值明显高于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05);采用TNF-α干预24 h后干预组A549细胞的凋亡率明显低于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05);干预24 h后采用TNF-α处理的干预组细胞的S期比例明显高于对照组,而G_(2)+M期和G_(0)+G_(1)期细胞比例明显低于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05);干预24 h后采用TNF-α处理的干预组细胞侵袭数明显高于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05);干预24 h后采用TNF-α处理的干预组NF-κB、PXR蛋白表达水平均明显高于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05);干预24 h后采用TNF-α处理的干预组细胞NF-κB及PXR mRNA表达均明显高于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05)。结论TNF-α可通过调控NF-κB/PXR炎症途径实现对肺癌细胞增殖、凋亡和侵袭的调控。

淫羊藿总黄酮经由核因子-κB相关信号转导途径调控免疫衰老机制

目的探讨淫羊藿总黄酮(EF)经由核因子-κB(NF-κB)家族相关信号转导途径调控免疫衰老的有效机制。方法(1)采用流式细胞仪监测老龄大鼠脾淋巴细胞凋亡率。(2)采用NF-κB信号通路基因芯片(96个相关基因),分别检测各组大鼠NF-κB相关信号差异表达,并提取其中有显著意义的主要分子,加以分析。结果(1)老年对照组大鼠普遍存在淋巴细胞过度凋亡现象,但EF组及联合组均可显著抑制这种过度凋亡状态。(2)EF干预后的基因芯片检测结果中,不同程度上调的有73个基因(其中NF-κB/Rel/IB家族成员10个),这些基因群覆盖了NIK/IKK/IB/Rel/NF-κB信号转导途径成员、NF-κB调控靶基因、跨膜受体、转录因子及其相关的受体蛋白等。通过NF-κB阻断剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对NF-κB进行阻断,未发现NF-κB家族成员上调表达,其信号转导途径相关分子亦明显减少;而联合组NF-κB家族仍可不同程度活化相关转导途径。(3)EF和联合组对NF-κB家族的影响有明显的共同特点,即EF对于NF-κB1、NF-κB2、RelB、IBε的显著上调和对NIK/IKK/IB/Rel/NF-κB信号转导途径的激活。结论EF可抑制老年大鼠脾淋巴细胞过度凋亡、激活老年大鼠Rel/NF-κB/IB/IKK及其相关信号转导途径,最终经由IBε、IBα的调节,使NF-κB在适度范围上调,这可能是EF重建T淋巴细胞凋亡平衡免疫稳态、延缓免疫衰老的重要机制。

DEK表达下调通过抑制胃癌SGC-7901细胞中NF-κB信号途径诱导细胞凋亡

目的:研究DEK表达下调对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响,并分析其与NF-κB信号途径及凋亡相关蛋白表达的关系。方法:将DEK siRNA和对照siRNA转染胃癌SGC-7901细胞,并将SGC-7901细胞分为未处理组、对照siRNA组及DEK siRNA组。采用实时荧光定量PCR和Western blot检测3组胃癌SGC-7901细胞中DEK mRNA和蛋白的表达;流式细胞术检测3组SGC-7901细胞凋亡的变化;Caspase-Glo-3/9试剂盒检测3组SGC-7901细胞中caspase-3和caspase-9的活性;Western blot技术检测3组SGC-7901细胞中NF-κB信号途径关键调控蛋白p65及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果:与未处理组和对照siRNA组相比,DEK siRNA组SGC-7901细胞中DEK的mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.05)。DEK siRNA组SGC-7901细胞的早期凋亡率和总凋亡率均显著高于未处理组和对照siRNA组(P<0.05)。最为显著的是,DEK siRNA转染细胞后,p65和Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,并伴随caspase-3和caspase-9活性上升。结论:DEK表达下调介导的SGC-7901细胞凋亡可能与NF-κB信号途径密切相关。

双参通冠方对急性心肌缺血再灌注模型核因子-κB信号途径及细胞间隙连接通讯的影响

目的观察双参通冠方 (SSTG)对急性心肌缺血再灌注损伤动物模型心肌梗死面积及重量 ,心肌核因子 κB(nuclearfactor- kappaB ,NF-κB)信号途径及心肌细胞间隙连接蛋白Cx4 3的影响。方法用冠状动脉结扎 /放松法复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型 ,N-BT染色法测量心肌梗死范围 ;免疫组织化学法检测心肌组织NF-κBp6 5表达 ;双抗体夹心ABC-ELISA法测定各组血清肿瘤坏死因子 (TNF α)和细胞间黏附分子- 1(ICAM-1)含量 ;免疫组织化学法测定心肌细胞通讯间隙连接蛋白Cx4 3表达。结果模型组大鼠心肌梗死面积及梗死区重量、NF-κBp6 5表达、血清中TNF-α及ICAM-1含量明显升高 (P <0.0 5 ) ;心肌连接蛋白Cx4 3大量降解。SSTG处理后心肌梗死面积及重量减轻 ;血清中TNF α、ICAM 1水平下调 (P <0 0 5 ) ;NF κBp6 5表达及Cx4 3降解抑制。 结论缺血再灌注时 ,心肌梗死严重 ,NF κB信号途径可被激活 ,Cx4 3降解严重。SSTG能抑制NF-κB的活化 ,抑制血清中TNF-α、ICAM-1的过量分泌和抑制Cx4 3的降解 。

秦皮甲素通过调节TLR/NF-κB途径抑制脂多糖诱导的心肌损伤

目的研究秦皮甲素对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠心肌损伤及TLR/NF-κB途径的影响。方法构建LPS诱导心肌损伤模型,将大鼠分为对照组、LPS组、秦皮甲素低剂量组(20 mg·kg^(-1))、秦皮甲素中剂量组(40 mg·kg^(-1))、秦皮甲素高剂量组(80 mg·kg–1)和阳性对照组(地塞米松2 mg·kg^(-1))。心脏超声检测心脏功能,HE染色检测心脏组织损伤程度。ELISA检测血液中肌钙蛋白(cardiac troponin I,cTnI),肌酸激酶同工酶[creatine kinase(CK)-MB,CK-MB],肌红蛋白(myoglobin,Mb),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),白介素-6(interleukin-6,IL-6),IL-1β,丙二醛(malondialdehyde,MDA),超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和髓过氧物酶(myeloperoxidase,MPO)的含量。Western blotting检测Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2),TLR4,骨髓分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88),白介素1受体相关激酶(interleukin-1 receptor-associated kinases,IRAK1)和磷酸化核因子-κB(phosphorylatednuclear factor-κB,p-NF-κB)的蛋白相对表达量。结果与LPS组相比,在秦皮甲素治疗后,心率、左室壁相对厚度和左心室射血分数均显著升高(P<0.05),而左室收缩末容积显著降低(P<0.05)。心肌酶cTnI、CK-MB和Mb的表达量显著下调(P<0.05);促炎细胞因子IL-6、TNF-α和IL-1β的表达量下调(P<0.05);氧化应激标记物中SOD含量显著升高(P<0.05),而MDA和MPO含量均显著降低(P<0.05);TLR2、TLR4、MyD88、IRAK1和p-NF-κB蛋白表达水平均显著下调(P<0.05)。结论秦皮甲素对LPS诱导心肌损伤具有保护作用,并抑制TLR/NF-κB信号通路。

芝麻素通过PI3K/AKT途径对宫颈癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨芝麻素通过调控磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)途径对宫颈癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法体外培养人宫颈癌细胞株Hela,随机分为对照组、芝麻素低剂量(20μg/ml)组、芝麻素中剂量(40μg/ml)组、芝麻素高剂量(80μg/ml)组。CCK-8法检测芝麻素对Hela细胞增殖的影响;Transwell实验检测芝麻素对Hela细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡情况;蛋白质印迹法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和与其同源的促凋亡蛋白Bax、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9、PI3K、p-PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达情况。结果与对照组比较,芝麻素低、中、高剂量组OD490值、迁移细胞数、PCNA、MMP-9、Bcl-2、p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平依次降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达水平依次升高,且呈现剂量依赖性(均P<0.05)。结论芝麻素可抑制宫颈癌细胞增殖、迁移并促进凋亡,其机制可能与抑制PI3K/AKT途径有关。

心外膜脂肪细胞核因子-κB信号途径抑制在抗动脉粥样硬化中的作用

目的研究心外膜脂肪细胞核因子(NF)-κB信号途径抑制在抗动脉粥样硬化中的作用。方法建立泡沫细胞模型,分为空白组,转染试剂组,siRNA干扰组,高脂组,高脂+SRT1720组,高脂+SRT1720+siRNA干扰组。采用油红O染色判断模型的建立,采用Western印迹方法进行蛋白表达的分析。结果建立模型成功;与高脂组比较,高脂+SRT1720组SIRT1蛋白表达量升高显著,NF-κB及其下游靶分子肿瘤坏死因子(TNF)-α蛋白表达量下降显著(P<0.05)。与高脂+SRT1720组比较,高脂+SRT1720+siRNA干扰组SIRT 1蛋白表达量下降显著,NF-κB及其下游靶分子TNF-α蛋白表达量升高显著(均P<0.05)。结论泡沫细胞中SIRT1是NF-κB信号通路的上游,通过抑制心外膜脂肪组织NF-κB炎症信号途径,参与调节泡沫细胞从动脉粥样硬化斑块中移出,可为防治冠状动脉粥样硬化的治疗提供新的手段。

3型腺病毒对B淋巴细胞激活途径的研究

本实验利用新生普系小鼠24h内去胸腺的方法或用注射抗淋巴细胞血清的方法制成“B”小鼠模型,造成其体内缺乏成熟的T细胞,使它无法进行与T细胞有关的B细胞产生抗体的反应,来研究腺病毒对B淋巴细胞的激活途径,从而确定腺病毒抗原为胸腺依赖性抗原。

口腔癌组织中TRAF6的表达及其对细胞自噬、凋亡及NF-κB/c-jun信号途径的影响

目的:探讨口腔癌组织中肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF receptor-associated factor 6,TRAF6)的表达及其对细胞自噬、凋亡及NF-κB/c-jun信号途径的影响。方法:qRT-PCR和Western blot检测TRAF6在口腔癌组织和口腔癌细胞系中的表达;qRT-PCR和Western blot检测沉默TRAF6在SCC-25细胞中的表达;EdU实验检测SCC-25细胞的增殖能力;Western blot检测SCC-25细胞中LC3Ⅱ/LC3 I比例;细胞免疫荧光染色检测SCC-25细胞中自噬体数目;流式细胞术检测SCC-25细胞的凋亡率;Western blot检测SCC-25细胞中NF-κB和c-jun蛋白的表达。结果:TRAF6在口腔癌组织和口腔癌细胞系中高表达(P<0.001);沉默TRAF6使口腔癌细胞系中TRAF6的表达降低;沉默TRAF6使SCC-25细胞的增殖能力下降(P<0.01)、LC3Ⅱ/LC3 I比例下降(P<0.001)和自噬体数目减少(P<0.001);沉默TRAF6使SCC-25细胞的凋亡率升高(P<0.01),NF-κB和c-jun蛋白磷酸化程度降低(均P<0.001)。结论:TRAF6在口腔癌组织和口腔癌细胞中高表达,沉默TRAF6抑制SCC-25细胞自噬,增强SCC-25细胞的凋亡率及抑制NF-κB/c-jun信号途径的活性。

芝麻素对冠心病大鼠心肌细胞凋亡的影响及PKCα/NF-κB信号途径的作用研究

目的分析芝麻素对冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)大鼠心肌细胞凋亡及PKCα/NF-κB信号途径的影响。方法选取30只SPF级雄性SD大鼠分为对照组、模型组和观察组,每组各10只。模型组和观察组大鼠予以高脂饲料连续饲养16周,对照组给予基础饲料喂养。观察组造模完成后芝麻素灌胃治疗1/d,对照组和模型组使用等体积生理盐水进行干预。干预结束后禁食12 h检测三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平。以乙酰胆碱(ACH)和酸化亚硝酸钠刺激大鼠主动脉并记录血管张力变化。使用TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况。采用Westernblot法检测心肌组织中Caspase-3。结果观察组大鼠血中TC水平明显低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组大鼠经ACH刺激后血管最大舒张程度明显低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组心肌细胞凋亡率明显低于模型组,Caspase-3和Caspase-12蛋白表达水平明显低于模型组,且差异具有统计学意义(P<0.05);观察组心肌细胞p-PKCα、p-IκBα和NF-κB p65蛋白表达水平明显低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论芝麻素通过调控PKCα/NF-κB信号途径有效抑制冠心病大鼠的心肌细胞凋亡。