嘌呤霉素敏感的氨肽酶对β-淀粉样蛋白诱导的细胞凋亡的影响

目的探讨嘌呤霉素敏感的氨肽酶（PSA）对p一淀粉样蛋白（A1325-35）诱导的SH—SY5Y细胞、PCI2细胞凋亡的影响。方法采用MTT法检测AB。3，对SH．SY5Y、PCI2细胞生长的影响；Hoechst染色检测A对SH．SY5Y、PCI2细胞核形态的影响；进一步采用脂质体转染法在SH．SY5Y细胞中瞬时转染PSA—siRNA，在PCI2细胞中瞬时转染PSA重组质粒，加入A125-35作用24h后收集细胞．进行流式细胞术检测细胞凋亡率；Westemblotting检测PSA、caspase一3蛋白的表达变化；酶标仪检测caspase．3活性。结果A[325。，抑制SH．SY5Y、PCI2细胞增殖，细胞核发生凋亡的形态学改变．流式检测细胞凋亡率增加；在SH．SY5Y细胞中，沉默PSA表达能使A132，诱导的细胞凋亡率升高，促进caspase-3酶原激活，caspase-3活性升高。反之，PCI2细胞中过表达的PSA能使A132；诱导的细胞凋亡率下降，抑制caspase-3酶原激活，caspase-3活性降低。结论A。能抑制神经细胞生长，引起神经细胞凋亡；PSA能抑制A，诱导的神经细胞凋亡，对神经元具有保护作用，其机制可能与抑制caspase-3通路的激活有关。

人血小板活化因子乙酰水解酶改善阿尔茨海默小鼠认知的初步研究

目的:观察重组人血小板活化因子乙酰水解酶(rPAF-AH)对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)小鼠认知功能的改善。方法:取昆明小鼠80只,分为正常对照组、模型对照组、rPAF-AH用药组和金纳多治疗组(每组20只),通过海马注射B.淀粉样蛋白(β-amyloid protein,AB)制备出AD小鼠模型,尾静脉注射rPAF-AH 7 d后观测AD小鼠水迷宫神经行为学的改变。采用Westem blotting研究小鼠大脑海马AB的表达及活性,同时与金纳多注射液及假手术对照组比较。结果:水迷宫试验显示,rPAF-AH处理组小鼠60s内跨越平台的次数和在目标象限的探索时间均明显增加(P<0.01)。western blotting结果显示,rPAF-AH处理可降低小鼠大脑海马AB的表达及活性水平(P<0.05)。结论:重组人PAF-AH处理对AD小鼠有一定的保护作用,这可能得益于其抑制了Aβ蛋白的高表达。

海马内注射LPS后诱导大鼠脑内BACE-1的表达变化

目的:探讨脑内注射内毒素脂多糖(lipoolysaccharide,LPS)诱导的大鼠慢性神经炎症脑内β-位点淀粉蛋白剪切酶-1(β-site amyloid precursor protein cleavage enzyme-1,BACE-1)的表达变化。方法:依赖立体定位技术,在成年SD雄性大鼠右侧海马内注入LPS,动物存活15 d。运用免疫组织化学方法检测大鼠脑内BACE-1,β-淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)以及β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)等阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)相关蛋白的表达变化;采用免疫荧光双重标记技术,观察BACE-1在大鼠脑内的表达情况和定位分布。结果:在正常哺乳动物的大脑内,BACE-1主要表达在海马苔藓纤维和嗅球的嗅小球层,脑皮质内则表现为弱而弥散的神经毡反应性。本研究结果显示:LPS注射对侧大脑半球中BACE-1表现出上述正常的表达模式。然而,与注射对侧相比,LPS处理的大鼠注射侧大脑的皮质和海马区域均有BACE-1的位点特异性的表达上调,尤其在注射的针道周围明显,同时伴有APP和Aβ的表达增加。免疫荧光双标结果显示:上调的BACE-1定位于失营养性轴突末梢。结论:LPS诱导的大鼠神经炎症脑内,BACE-1表达上调,且上调的BACE-1主要定位于轴突末梢,高表达的BACE-1可能对AD的发生具有促进作用。