氢化可的松对B-16黑素瘤细胞酪氨酸酶及黑素生成影响研究

目的 探讨氢化可的松体外对酪氨酸酶活性影响 ,以及对小鼠B 16黑素瘤细胞株细胞增殖、黑素合成以及细胞内酪氨酸酶活性的作用。方法 利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定药物对细胞增殖的影响 ;采用酶学方法研究药物对酪氨酸酶活性的影响 ;用 5 70nm比色法测定黑素含量。结果 氢化可的松体外可激活酪氨酸酶活性 ,增强B16鼠黑素瘤细胞增殖 ,提高酪氨酸酶和黑色素合成能力。结论 氢化可的松可增强酪氨酸酶活性 ,进而促进黑素合成。

墨旱莲乙醇提取物动物致色素作用和对小鼠B16黑素瘤细胞黑素生成的影响

目的选择离体实验中对黑色素合成的关键酶—酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)有激活作用的墨旱莲(旱莲草),研究其动物致色素作用和对小鼠B16黑素瘤细胞黑素生成及相关基因犤TYR、TYR相关蛋白(TRP-1/2)mRNA犦表达的影响。方法以棕色豚鼠为动物模型,用Schmorl法染色,计数含黑素的细胞;用多巴(DOPA)-氧化酶染色,计算每100个基底细胞中DOPA阳性细胞数。培养的小鼠B16黑素瘤细胞以四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法、氢氧化钠(NaOH)法和体外氧化DOPA反应方法分别测定细胞的增殖活性、黑素生成量及TYR活性;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定TYR及其TRP-1/2基因的表达。结果墨旱莲乙醇提取物可使豚鼠表皮基底层中含黑素颗粒细胞增多,使豚鼠表皮内DOPA阳性细胞增多(P<0.05);具有促进小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成及TYR活性作用(P<0.05),对细胞TYR基因有上调作用,而对TRP-1/2mRNA的表达无明显作用。结论墨旱莲乙醇提取物具有促进黑素合成及上调酪氨酸酶基因表达的作用,对白癜风色素恢复有较好应用和开发的前景。

茶叶提取物EGCG对B16小鼠黑素瘤细胞的影响

采用倒置显微镜观察茶叶中提取物EGCG对B16小鼠黑素瘤细胞形态的影响,亚甲基蓝染色法测定EGCG对B16细胞增殖率的影响,L-多巴氧化法测定EGCG对B16细胞酪氨酸酶活力的影响,氢氧化钠裂解法测定EGCG对B16细胞黑色素生成量的影响.结果表明:EGCG作用24h,高浓度组(>60μmol)细胞胞膜融合现象明显;作用72h,高浓度组大部分细胞死亡.EGCG对B16细胞增殖率、酪氨酸酶活性、黑色素生成量均有显著抑制,呈明显的剂量效应关系,且EGCG抑制B16细胞增殖,IC50为33.99μmol.

复方倍他米松注射液对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素生成的影响

白癜风是一种常见的色素脱失性皮肤病,发病率约为4%,致病因素可能与下列因素有关：黑素细胞自毁、氧化应激、自由基、免疫发病学说、细胞因子、微量元素等。研究表明,8-MOP对B16细胞有一定的增殖作用,糖皮质激素是治疗白癜风的有效药物之一，酪氨酸酶是黑素合成限速酶，其活性与黑素合成呈正相关。

纳米氧化锌对小鼠B16黑素瘤细胞生长和分化的影响

为评价纳米氧化锌(Zn O NPs)在皮肤病治疗和化妆品应用方面的生理毒性,以小鼠B16黑素瘤细胞为细胞模型,研究15、30、90 nm下Zn O NPs对B16细胞的体外生长和分化的影响及其作用机制。以不加纳米氧化锌和加体相氧化锌的处理分别作阴性、阳性对照。结果表明,15、30 nm,体相Zn O NPs处理与B16细胞共培养作用3 d,当Zn O NPs为4μg/m L以下时,Zn O NPs并未明显抑制细胞生长,引起细胞死亡;当Zn O NPs浓度大于8μg/m L时,明显抑制细胞生长。随着Zn O NPs浓度增加,细胞体积变小,细胞间隙变大,黏附性降低,细胞变圆,从培养瓶底脱落死亡。Zn O NPs诱导细胞中酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TYRP-1)、酪氨酸相关酶相关蛋白2(TYRP-2)的mRNA表达量升高,导致细胞内酪氨酸酶活性和黑色素生成水平增高,促进了B16黑素瘤细胞的分化。相同Zn O NPs浓度下,15 nm Zn O NPs比30、90 nm Zn O NPs作用明显。

复色1号方对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响

目的探讨复色1号方对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响。方法采用MTT法测定不同浓度的复色1号方对小鼠B16黑素瘤细胞增殖的影响,多巴速率氧化法测定对酪氨酸酶活性的影响,对其结果进行统计分析。结果复色1号方浓度在0.001～0.01g/l,范围内对小鼠B16黑素瘤细胞的增殖与对照组相比无统计学意义(P>0.05),0.05～0.1g/l浓度范围内对小鼠B16黑素瘤细胞的增殖与对照组相比有显著意义(P<0.05),呈现一定的抑制作用;复色1号方在0.001～0.1g/l浓度范围内对小鼠B16黑素瘤细胞中酪氨酸酶活性的影响与对照组相比,各浓度含药培养基组的A值均有显著性差异(P<0.05),呈剂量依赖性激活作用。在0.001～0.01g/l浓度范围内,复色1号方的最佳激活浓度为0.01g/l。结论复色1号方没有促进小鼠B16黑素瘤细胞增殖的作用;在一定浓度范围内(0.001～0.1g/l),对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶的活性呈剂量依赖型激活作用。

4种皮肤美白剂对小鼠黑素瘤细胞的功效评价

[目的]探讨4种常用皮肤美白剂的美白效果。[方法]选用B-16小鼠黑素瘤细胞,分别加入熊果苷、曲酸衍生物、BL-99和氢醌酯等4种常用皮肤美白剂3d后,用台盼蓝排斥法计数活细胞数,参照HideyaAndo等的方法测定酪氨酸酶活性和黑素含量。[结果]4种美白剂均可明显抑制B-16小鼠黑素瘤细胞生长和黑素合成,改变细胞形态。氢醌酯对细胞生长数量的控制作用最大,熊果苷最弱。熊果苷对酪氨酸酶活性具有抑制作用;氢醌酯虽可导致B-16细胞的酪氨酸酶活性呈下降趋势,但与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);曲酸衍生物和BL-99均可致B-16细胞中酪氨酸酶活性呈波动性变化。[结论]4种皮肤美白剂均可抑制黑素细胞的生长和黑素合成,具有一定的美白效果,其机制可能不仅仅与酪氨酸酶活性有关。

曲酸寡肽对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响

目的探讨曲酸寡肽对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响。方法以小鼠B16黑素瘤细胞为受试对象,分别用曲酸寡肽和曲酸对其进行干预,测定细胞增殖率,细胞的酪氨酸酶活性及细胞的黑色素含量。结果曲酸寡肽对细胞形态及数量无显著影响;曲酸寡肽能够有效抑制酪氨酸酶活性,抑制率高于曲酸,但二者之间差异无统计学意义(P>0.05)。曲酸寡肽能够有效抑制黑色素合成,低浓度时抑制率高于曲酸,高浓度时抑制率低于曲酸,二者之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论曲酸寡肽对小鼠B16黑素瘤细胞的形态及数量无明显影响,与曲酸相比,细胞毒性低。低浓度(≤0.01g/L)曲酸寡肽既能有效抑制酪氨酸酶活性,又能有效抑制黑色素的合成,优于曲酸,具有潜在的应用价值。

重组CCL2小鼠黑色素瘤B-16细胞的建立及生物学活性的鉴定

目的:在小鼠黑色素瘤B-16细胞中克隆表达趋化因子CCL2,以进一步研究趋化因子与肿瘤的关系。方法:从小鼠腹腔巨噬细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增CCL2 cDNA,将此片段重组于真核表达载体pcDNA3.0,脂质体FuGENE6转染鼠黑色素瘤B-16细胞,G-418筛选阳性克隆。结果:RT-PCR和免疫细胞化学鉴定转染B-16细胞中有较强CCL2的表达,体外趋化实验表明重组CCL2有生物学活性。结论:获得有趋化活性的重组CCL2的小鼠黑色素瘤B-16细胞。

三种黑素瘤动物模型的建立

目的:建立黑素瘤动物模型,用于抗黑素瘤药物的疗效评价。方法:分别通过皮下、静脉和腹腔注射方式,将B16F10黑素瘤细胞接种于小鼠体内,建立3种黑素瘤及其肺转移小鼠模型,并以达卡巴嗪作为试药,考察其对这3种模型小鼠的作用。结果:成功建立了小鼠皮下、肺转移及腹腔黑素瘤模型。达卡巴嗪对3种模型均有明显的治疗作用。结论:这3种黑素瘤动物模型可综合用于新药的临床前评价。

重组腺病毒介导金黄色葡萄球菌肠毒素A基因在小鼠B16黑素瘤细胞中的表达

目的研究金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因通过重组腺病毒介导转染入B16黑素瘤细胞中的表达情况。方法用RT-PCR和流式细胞仪检测SEA基因在B16黑素瘤细胞中的表达。结果在转染SEA基因的B16黑素瘤细胞中检测到SEA基因的转录,并于转染后24h开始有SEA蛋白的表达,到72h表达量达最高值87.22,之后减弱,直到168h仍有少许表达。结论SEA基因可以在B16黑素瘤细胞中表达,为下一步黑素瘤的基因治疗奠定基础。

他克莫司对HaCaT细胞干细胞因子mRNA及小鼠B16黑素瘤细胞c-kitmRNA表达的影响

目的探讨他克莫司对角质形成细胞干细胞因子（SCF）mRNA及黑素细胞c-kitmRNA表达水平的影响。方法分别培养人永生化角质形成细胞（HacaT）和小鼠B16黑素瘤细胞，经他克莫司作用48h后，采用实时荧光定量PCR法检测SCFmRNA及c-kitmRNA的表达。结果他克莫司作用后，HaCaT细胞SCFmRNA、B16黑素瘤细胞c-kitmRNA的相对表达量均升高，与空白对照组比较，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论他克莫司可以上调HaCaT细胞SCFmRNA及B16黑素瘤细胞c-kitmRNA的表达量。

抗白灵霜在黑素合成中对TYR和MITF的调节作用

目的:明确抗白灵霜(KBL)在黑素合成中对TYR和MITF的调节作用。方法:体外培养小鼠B16黑素瘤细胞,分为空白对照组和不同浓度KBL(5 mg/mL,10 mg/mL和15 mg/mL)用NaOH溶解法检测黑素合成量,Real time-PCR检测TYR和MITF基因mRNA表达,Western Blot检测KBL组TYR和MITF蛋白的表达。结果:各浓度KBL组黑素合成量及TYR和MITF基因的mRNA和蛋白表达的水平均高于空白对照组,且呈浓度依赖性。结论:KBL可能通过上调MITF基因的表达,激活参与黑素合成的TYR以促黑素合成。

水解珍珠美白机理探讨

研究了水解珍珠对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用及对小鼠B16黑素瘤细胞内酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响,探讨水解珍珠的美白机理。结果表明:水解珍珠对蘑菇酪氨酸酶活性具有明显抑制作用;此外,水解珍珠对B16细胞酪氨酸酶活性及黑色素生成量均有显著抑制效果,并随其浓度水平的提高,效果越明显,呈剂量依赖性抑制作用,可为水解珍珠应用于美白护肤品提供科学依据。