百合主要有效成分对小鼠B-16细胞黑色素含量、酪氨酸酶活性的影响

目的观察百合多糖与百合皂苷对小鼠B-16细胞中细胞活力、酪氨酸酶活性及黑色素含量的影响。方法选用同一传代小鼠B-16细胞并随机分为空白细胞组、空白对照组、熊果苷组、百合多糖组、百合皂苷组,共5组。空白细胞组加入180μL RPMI1640培养液;空白对照组加入180μL RPMI1640培养液和20μL高密度聚乙烯;熊果苷组、百合多糖组、百合皂苷组分别加入不同浓度(0.2、0.4、0.6、0.8 mg/mL)的熊果苷、百合多糖、百合皂苷,作用3 d后,用CCK-8法检测B-16细胞活力,用酪氨酸酶-多巴速率氧化法检测B-16细胞中酪氨酸酶的活性,以MTT法检测小鼠B-16细胞的黑色素含量。结果与空白细胞组比较,0.8 mg/mL熊果苷组细胞活力明显升高(P<0.01),0.4、0.6、0.8 mg/mL百合皂苷组细胞活力均明显降低(P<0.05,P<0.01);各浓度熊果苷、百合多糖组和0.6、0.8 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显降低(P<0.01),0.2 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性明显升高(P<0.01)。与空白对照组比较,0.8 mg/mL熊果苷组细胞活力明显升高(P<0.01),0.6、0.8 mg/mL百合皂苷组细胞活力均明显降低(P<0.01);各浓度熊果苷、百合多糖组和0.6、0.8 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显降低(P<0.01),0.2、0.4 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显升高(P<0.01)。与0.2 mg/mL熊果苷组比较,0.8 mg/mL熊果苷组细胞活力、0.2 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显升高(P<0.01)。与0.4 mg/mL熊果苷组比较,0.8 mg/mL熊果苷组细胞活力、0.4 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显升高(P<0.01)。与0.6 mg/mL熊果苷组比较,0.6 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显升高(P<0.01)。与0.4 mg/mL百合皂苷组比较,0.6、0.8 mg/mL百合皂苷组细胞活力均明显降低(P<0.05,P<0.01)。与0.6 mg/mL百合皂苷组比较,0.8 mg/mL百合皂苷组细胞活力明显降低(P<0.01)。在0.2、0.4 mg/mL浓度下,百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显高于百合多糖组(P<0.01)。结论相较于百合皂苷、熊果苷,百合多糖能够在不影响小鼠B-16细胞活性的情况下,对B-16细胞内酪氨酸酶活性和黑色素含量起到抑制作用,推测百合多糖可能通过抑制细胞内酪氨酸酶的活性,进一步抑制黑色素的合成,达到美白的效果。

重组CCL2小鼠黑色素瘤B-16细胞的建立及生物学活性的鉴定

目的:在小鼠黑色素瘤B-16细胞中克隆表达趋化因子CCL2,以进一步研究趋化因子与肿瘤的关系。方法:从小鼠腹腔巨噬细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增CCL2 cDNA,将此片段重组于真核表达载体pcDNA3.0,脂质体FuGENE6转染鼠黑色素瘤B-16细胞,G-418筛选阳性克隆。结果:RT-PCR和免疫细胞化学鉴定转染B-16细胞中有较强CCL2的表达,体外趋化实验表明重组CCL2有生物学活性。结论:获得有趋化活性的重组CCL2的小鼠黑色素瘤B-16细胞。

三氧化二砷对黑色素瘤B-16细胞增殖与凋亡的影响

目的：观察三氧化二砷（As2O3）对体外培养黑色素瘤B—16细胞增殖和凋亡的影响。方法：应用Mrr比色法检测细胞增殖活力；采用流式细胞术测定细胞周期及凋亡率；倒置显微镜、激光共聚焦显微镜和透射电子显微镜观察细胞形态学变化和凋亡特征。结果：6．25～100μmol／LAs2O3作用细胞24、48小时后，细胞增殖活力明显下降，且具有时一效和量一效依赖关系；50μmol／LAs2O3作用细胞12小时后。细胞凋亡率增加。S期细胞百分率下降；倒置显微镜下可见细胞生长密度减小、形态变圆、体积缩小；hoechst33258核染色可见核染色质边集、浓集；电子显微镜下可见到典型的凋亡细胞。结论：三氧化二砷能抑制黑色素瘤B16细胞的增殖并可诱导其发生凋亡.

雷帕霉素对黑色素瘤B-16细胞增殖与凋亡的影响

目的观察雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)对体外培养的黑色素瘤B-16细胞增殖和凋亡的影响。方法应用MTT比色法检测细胞增殖活力;采用ELISA检测细胞凋亡;倒置显微镜观察细胞形态学变化。结果 0～40 nmol·L^(-1)RAPA能使B-16细胞增殖活力降低并使其发生凋亡,且具有时-效和量-效依赖关系;显微形态表现为细胞体积缩小,粘附性能减弱。结论 RAPA能抑制黑色素B-16细胞增殖并可诱导其发生凋亡。

湘西龙山百合对小鼠B-16黑色素瘤细胞黑色素含量、酪氨酸酶活性的影响

目的观察不同浓度湘西龙山百合提取液对小鼠B-16细胞细胞活力、黑色素含量、酪氨酸酶活性的影响。方法选用同一传代小鼠B-16黑色素瘤细胞并分组,分别加入不同浓度百合提取液、维生素C二种溶液作用3 d后,用MTT法测定B-16细胞活力;用Maeda等的方法测定B-16细胞酪氨酸酶活性;用Victoria等的方法测定B-16细胞黑色素含量。结果湘西龙山百合提取液对小鼠B-16细胞的酪氨酸酶活性、黑色素合成的抑制作用明显强于维生素C,组间差异有统计学意义(P<0.05),且其抑制作用随浓度的增加而增加;同时湘西龙山百合提取液其细胞毒性作用同样强于维生素C,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论百合提取液对B-16细胞的生长、酪氨酸酶活性和黑色素合成的抑制作用强于维生素C,其抑制作用与浓度呈正相关。

氢化可的松对B-16黑素瘤细胞酪氨酸酶及黑素生成影响研究

目的 探讨氢化可的松体外对酪氨酸酶活性影响 ,以及对小鼠B 16黑素瘤细胞株细胞增殖、黑素合成以及细胞内酪氨酸酶活性的作用。方法 利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定药物对细胞增殖的影响 ;采用酶学方法研究药物对酪氨酸酶活性的影响 ;用 5 70nm比色法测定黑素含量。结果 氢化可的松体外可激活酪氨酸酶活性 ,增强B16鼠黑素瘤细胞增殖 ,提高酪氨酸酶和黑色素合成能力。结论 氢化可的松可增强酪氨酸酶活性 ,进而促进黑素合成。

几种美白活性物质对酪氨酸酶活性的体外抑制作用及细胞毒性

目的比较熊果苷、VitC、VitC衍生物、氢醌和曲酸对小鼠恶性黑色素瘤细胞(B 16细胞)中的酪氨酸酶活性及酪氨酸酶对照品的抑制情况,并检测它们对细胞的毒性,以期为皮肤美白剂的开发提供有价值的参考。方法采用左旋多巴氧化法测定酪氨酸酶的活性,测定细胞上清液中乳酸脱氢酶的含量。结果细胞中酪氨酸酶的活性与药物浓度和药物作用时间成反比,有量效关系。结论在5种美白剂中。

4种皮肤美白剂对小鼠黑素瘤细胞的功效评价

[目的]探讨4种常用皮肤美白剂的美白效果。[方法]选用B-16小鼠黑素瘤细胞,分别加入熊果苷、曲酸衍生物、BL-99和氢醌酯等4种常用皮肤美白剂3d后,用台盼蓝排斥法计数活细胞数,参照HideyaAndo等的方法测定酪氨酸酶活性和黑素含量。[结果]4种美白剂均可明显抑制B-16小鼠黑素瘤细胞生长和黑素合成,改变细胞形态。氢醌酯对细胞生长数量的控制作用最大,熊果苷最弱。熊果苷对酪氨酸酶活性具有抑制作用;氢醌酯虽可导致B-16细胞的酪氨酸酶活性呈下降趋势,但与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);曲酸衍生物和BL-99均可致B-16细胞中酪氨酸酶活性呈波动性变化。[结论]4种皮肤美白剂均可抑制黑素细胞的生长和黑素合成,具有一定的美白效果,其机制可能不仅仅与酪氨酸酶活性有关。

Senkirkine对黑色素瘤细胞B-16的增殖及细胞内谷胱甘肽含量的影响

目的探讨吡咯里西啶生物碱Senkirkine对黑色素瘤细胞B-16生长的抑制作用及细胞内谷胱甘肽含量、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GPx)以及谷胱甘肽还原酶(Glutathione Reductase,GR)活性的影响。方法以黑色素瘤B-16细胞为实验模型,采用MTT法和DTNB法检测Senkirkine与B-16细胞孵育后对B-16细胞存活率的影响,对细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量,GSH/GSSG比率的影响,采用DTNB和NADPH分光光度法检测GPx以及GR的活性。结果Senkirkine可以显著抑制B-16细胞的增殖(P<0.001),同时明显降低了细胞内GSH的含量以及GSH/GSSG的比例,并呈时间、剂量依赖性(P<0.001);同时GPx活力与对照组相比显著提高(P<0.05)而GR活力没有显著性的改变。结论在本试验条件下,Senkirkine能够抑制B-16黑色素瘤细胞的增殖,同时降低了B-16细胞抗氧化应激损伤的能力。

天花粉蛋白诱导黑色素瘤凋亡机制的研究

目的:研究天花粉蛋白(TCS)对黑色素瘤B-16细胞的作用,探讨天花粉蛋白抗肿瘤的机制。方法:(1)应用单细胞电泳及Hoechst33258染核形态观察来研究TCS对黑色素瘤B-16细胞损伤作用。(2)应用激光共聚焦扫描显微术结合特异性荧光探针Fluo-3/AM、H2DCF-DA和DAF-FM diacetate观察在TCS作用下,单个瘤细胞内钙离子(Ca2+)、一氧化氮(NO)和活性氧(ROS)的信号动态变化,并探讨细胞内ROS和NO的增加与钙离子的关系。结果:(1)终浓度50mg/L TCS孵育3h、6h后,单细胞电泳、Hoechst33258染色的核形态观察未发现与对照组有明显区别;孵育12h后单细胞电泳可见DNA损伤的特征性现象-彗星尾巴;Hoechst33258染色的核形态观察发现有明显的核浓缩和边集现象,出现特征性凋亡小体。(2)终浓度50mg/L的TCS可引起细胞内Ca2+、NO和ROS的生成量明显高于对照组(P<0.01)。细胞内ROS和NO的增加与钙离子的增加密切相关。结论:天花粉蛋白对黑色素瘤B-16细胞DNA具有较强损伤作用,可诱导其发生凋亡;天花粉蛋白诱导凋亡可能与细胞内钙、ROS和NO的增加有关。

巯基丙酸修饰CdTe量子点光学性能及其生物相容性研究

目的:研究水相合成巯基丙酸(MPA)修饰的CdTe量子点(CdTeQDs)用于对细胞的标记,探讨其与活细胞的生物相容性。方法:水相中合成MPA CdTeQDs;透射电子显微镜、荧光分光光度计及紫外分光光度计表征MPA CdTeQDs;将MPACdTeQDs与亲和素连接、纯化、制备成MPACdTeQDs荧光探针;应用激光扫描共聚焦显微术观察MPACdTeQDs荧光探针标记小鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ)MHCⅡ抗原的表达;以黑色素瘤B-16细胞为靶细胞,应用细胞培养和MTT法观察MPA CdTeQDs的生物相容性。结果:水相中合成MPACdTe量子点粒径均匀,具备良好的光学性能,稳定性强;以量子点标记亲和素(QDs-Avidin)作为荧光探针标记小鼠腹腔巨噬细胞MHCⅡ抗原,在荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下可见标记细胞具有较强的荧光表达;MPA CdTeQDs在高浓度时有一定的细胞毒性,但是,在用于对细胞进行荧光标记成像的浓度范围内,量子点对细胞活性的影响很小。结论:MPA CdTeQDs大小比较均匀且具有较好的光学性能,不易漂白淬灭,稳定性好,是一种新的良好的荧光标记物;MPACdTeQDs具有较好的生物相容性。

几种皮肤美白剂的功效评价

为评价常用皮肤美白剂的美白效果 ,我们采用B -16黑色素瘤细胞株为受试细胞 ,对熊果苷、曲酸、甘草提取物和Vc衍生物等 4种常用皮肤美白剂的功效进行测定。结果显示 :4种美白剂 (10 μg/mL ,3 0 μg/mL ,5 0 μg/mL ,70 μg/mL ,10 0 μg/mL)可明显抑制细胞生长 (P <0 0 1) ,使黑色素细胞中黑色素含量明显降低 (P <0 0 1) ,改变细胞形态 ,但对细胞中酪氨酸酶活性抑制不明显 (P >0 0 5 )。提示 :4种皮肤美白剂均具有一定的美白效果 ,其机制可能与酪氨酸酶活性改变的关系不大。