番泻苷B通过Wnt/β-catenin通路抑制视网膜母细胞瘤HXO-Rb44细胞增殖、凋亡和侵袭

目的探究番泻苷B对视网膜母细胞瘤HXO-Rb44细胞增殖、凋亡、侵袭及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法通过采用不同剂量(0、5、10、20μmol/L)番泻苷B处理HXO-Rb44细胞,将细胞随机分为4组:Control组,番泻苷B 5、10、20μmol/L组。MTT法检测细胞活力;克隆形成实验检测克隆形成率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Transwell检测侵袭细胞数;细胞成球实验检测细胞成球直径和细胞成球数目;蛋白质印迹检测cleaved caspase-3、caspase-3、MMP-2、MMP-9、SOX2、OCT4、CD44、Wnt1、β-catenin蛋白表达。结果与Control组比较,番泻苷B 10、20μmol/L组细胞活力、克隆形成率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率和cleaved caspase-3/caspase-3表达显著升高(P<0.05),侵袭细胞数和MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低(P<0.05),细胞成球直径、细胞成球数目和SOX2、OCT4、CD44蛋白表达显著降低(P<0.05),Wnt1、β-catenin蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论番泻苷B可抑制视网膜母细胞瘤HXO-Rb44细胞增殖、侵袭和干细胞样特性,诱导细胞凋亡,抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化。

急性髓系白血病靶向治疗药物的研究进展

急性髓系白血病(AML)是最具侵袭性的成人白血病,大量的临床前和临床研究推动了美国食品药品监督管理局逐步批准了数种适用于AML的靶向药物。然而,大多数患者的预后仍然不佳,而且常因耐药突变克隆导致疾病复发。因此,临床上仍需要进一步研究新的靶向药物,或提出创新性的、更为合理的用药方案。本文综述了包括B淋巴细胞瘤-2基因抑制剂、异柠檬酸脱氢酶抑制剂、FMS样酪氨酸激酶3抑制剂和TP53抑制剂药物的临床研究进展,并简述这些药物在AML治疗中的地位及作用,为未来治疗方案制订的精准化、个体化提供思路。

BTG2、ARL2在非小细胞肺癌中的表达及其病理分型的相关性

目的探讨ADP核糖基化样因子2(ARL2)、B细胞异位基因2(BTG2)蛋白在非小细胞肺癌组织中表达水平及其病理分型相关性分析。方法选择2021年5月—2022年5月本院收治的60例非小细胞肺癌患者作为研究对象,共收集非小细胞肺癌的癌组织和癌旁正常组织标本60对,其中非小细胞肺癌的癌组织作为实验组,癌旁正常组织作为对照组。应用免疫组化方法分别检测非小细胞肺癌患者的癌组织和癌旁组织中ARL2蛋白和BTG2蛋白的表达水平。分析ARL2蛋白和BTG2蛋白的表达水平与非小细胞肺癌的临床病理分型相关性。结果实验组中ARL2蛋白表达阳性率为66.7%,,明显高于对照组的25.4%(P<0.05);实验组中BTG2蛋白表达阳性率为20.6%,明显低于对照组的71.4%(P<0.05)。ARL2、BTG2蛋白表达与患者年龄、性别无相关性,差异无统计学意义(P>0.05);而与肿瘤TNM分期、淋巴结转移、肿瘤最大直径、复发率、病理学分级、复发相关性密切,差异具有统计学意义(P<0.05)。统计患者的1年生存率为47.6%(29/60),其中ARL2阳性生存率为31.0%(6/20),ARL2阴性生存率为81.0%(30/40);BTG2阳性生存率为96.1%(25/26),BTG2阴性生存率为35.0%(11/34);ARL2阴性、BTG2阳性非小细胞肺癌患者生存率显著增高(P<0.001)。结论非小细胞肺癌患者的ARL2蛋白表达明显升高,BTG2蛋白表达水平明显降低,证实了ARL2水平的高表达和BTG2的低表达,对非小细胞肺癌患者的ARL2阳性蛋白、BTG2阴性表达与病理分型有着十分密切的相关性,值得未来在预后方面进一步研究探讨。

血清Bcl-2、IGF-1、CA19-9水平联合检测对食管癌的诊断价值

目的:分析血清B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、糖类抗原19-9(CA19-9)水平联合检测对食管癌的诊断价值。方法:回顾性分析2020年1月至2023年8月该院收治的126例疑似食管癌患者的临床资料。所有患者均接受血清学检测和内镜下病理活检,比较良恶性患者及不同病理特征食管癌患者的血清Bcl-2、IGF-1、CA19-9水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Bcl-2、IGF-1、CA19-9水平单项及联合检测对食管癌的诊断价值。结果:126例疑似食管癌患者中,病理学检出恶性肿瘤(食管癌)70例,其中鳞癌54例,腺癌16例;良性病变56例,其中不典型增生37例,平滑肌瘤19例。恶性患者血清Bcl-2、IGF-1、CA19-9水平均高于良性患者,高分期、低分化、有淋巴结转移的食管癌患者血清Bcl-2、IGF-1、CA19-9水平高于低分期、中高分化、无淋巴结转移的患者,差异均有统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,血清Bcl-2、IGF-1、CA19-9水平单项及联合检测诊断食管癌的曲线下面积分别为0.802、0.836、0.767、0.918,联合检测的诊断价值高于单一指标检测。结论:血清Bcl-2、IGF-1、CA19-9水平联合检测诊断食管癌的价值高于单一指标检测。

过敏性鼻炎和哮喘患者外周血及致敏小鼠血液或肺组织B细胞中TLR9的表达研究

目的探究过敏性鼻炎(allergy rhinitis,AR)、过敏性哮喘(allergy asthma,AA)、AR合并AA(AR combined with AA,ARA)患者外周血和致敏小鼠血液或肺组织B淋巴细胞(B细胞)中Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)的表达及过敏原对其表达的影响。方法招募来自锦州医科大学附属第一医院门诊和发作急性期住院的100例志愿者,包括点刺实验阴性的19例健康对照(health control,HC)志愿者、点刺实验阳性的40例AR患者、26例AA患者、15例ARA患者。流式分析仪检测经屋尘螨过敏原提取物(home dust mite allergen extract,HDME)、大籽蒿过敏原提取物(Artemisia sieversiana wild allergen extract,ASWE)、梧桐过敏原提取物(Platanus pollen allergen extract,PPE)刺激前后患者外周血B细胞中TLR9的表达;并采用野生(WT)小鼠和FcεRI基因敲除(FcεRI-KO)小鼠建立AR和AA致敏模型,检测过敏原以及FcεRI对B细胞中TLR9表达的影响。结果AR、AA、ARA患者外周血B细胞中TLR9的表达和平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)均较HC组有所增高;过敏原激发后,AR、AA患者血液B细胞中TLR9的表达和MFI升高(P<0.05)。WT小鼠和FcεRI-KO小鼠与NS对照组相比,过敏原激发后,AR、AA小鼠外周血B细胞TLR9^(+)高表达,但差异无统计学意义,而几乎每组MFI均升高;与NS对照组相比,过敏原激发后FcεRI基因敲除的AA小鼠肺组织中TLR9^(+)B细胞表达差异无统计学意义,但其MFI升高。FcεRI-KO小鼠与WT小鼠相比,过敏原激发后B细胞中TLR9^(+)MFI较低。结论B细胞中TLR9可能参与AR、AA的发生,检测B细胞中TLR9的表达可能成为诊断AR、AA的新方向。

Obg样ATP酶1促进人B细胞淋巴瘤Romas细胞生长的机制研究

目的:探讨Obg样ATP酶1(Obg-like ATPase 1,OLA1)基因在人B细胞淋巴瘤Romas细胞发生发展过程中的作用机制。方法:利用基因表达谱数据交互分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)数据库,对弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)组织中OLA1基因的差异表达进行分析,并考察GSE181063数据库中OLA1的表达对患者生存期的影响。采用感染逆转录病毒的方法,在Romas细胞中构建OLA1基因稳定敲减(OLA1-sh)和阴性对照细胞系。为判定敲减OLA1对Romas细胞生长机制的影响,采用细胞计数法、CCK-8法、小鼠皮下成瘤实验以及Ki67免疫组化染色检测细胞活力和增殖,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,TUNEL荧光染色检测细胞凋亡。通过TCGA数据库中48例DLBCL患者的差异基因,分析OLA1基因与细胞周期和凋亡相关基因的关联。RT-qPCR法检测细胞周期及凋亡相关基因,Western blot检测细胞周期及凋亡相关蛋白。结果:OLA1基因在DLBCL中呈高表达(P<0.05),敲减OLA1能显著抑制Romas细胞的增殖,阻滞细胞周期并诱导其凋亡(P<0.05或P<0.01)。此外,敲减OLA1还能促进Bax的mRNA及蛋白表达,抑制细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶6(cyclin-dependent kinase 6,CDK6)、细胞周期蛋白E1(cyclin E1)和BCL2的mRNA及蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论:敲减OLA1基因能够显著抑制人B细胞淋巴瘤Romas细胞的生长,其作用机制可能涉及细胞周期的阻滞及细胞凋亡的诱导。

TLR4/9介导牙周炎宿主CD25+B细胞表达IL-10、IL-35及TGF-β的效应及机制

目的分析牙周炎宿主CD25^(+)B细胞中IL-10、IL-35及TGF-β的表达特点,评价TLR4/9的表达活化对上述过程的影响。方法SD大鼠随机分为健康组、早期牙周炎组、晚期牙周炎组,采用结扎法建立牙周炎模型。检测各组动物牙龈及外周血CD25^(+)B细胞内IL-10、IL-35和TGF-βmRNA的表达水平,牙龈CD25^(+)B细胞内TLR 2/4/7/9、MyD88、TRAF6的表达活化水平。建立细胞培养体系,分析TLRs/MyD88信号对CD25^(+)B细胞表达分泌IL-10、IL-35和TGF-β的影响。结果早期牙周炎组牙龈CD25^(+)B细胞内IL-10、TGF-βmRNA表达水平高于健康组(P<0.05)。晚期牙周炎组牙龈CD25^(+)B细胞内IL-10、IL-35及TGF-βmRNA表达水平高于健康组(P<0.05),外周血CD25^(+)B细胞内IL-10 mRNA高于健康组(P<0.05),余差异无统计学意义(P>0.05)。相比健康组,晚期牙周炎组牙龈CD25^(+)B细胞内TLR4/9及MyD88的表达磷酸化水平均升高(P<0.01)。细胞实验结果显示,TLR4激动剂上调IL-10、IL-35、TGF-βmRNA表达及IL-10的浓度(P<0.05),TLR9激动剂上调IL-10、TGF-βmRNA表达及IL-10的浓度(P<0.05),TLR4/TLR9激动剂联合应用上调所有检测指标的表达及浓度(P<0.05),MyD88拮抗抑制上述过程(P<0.05)。结论牙周炎晚期,牙龈CD25^(+)B细胞表达IL-10、IL-35和TGF-β水平升高,这一过程可能受TLR4/9-MyD88信号调控。

川崎病患儿治疗前后抗体分泌细胞和免疫球蛋白样受体水平的变化

目的:探讨川崎病(KD)患儿B细胞亚群特异性抗体分泌细胞(ASC)、免疫球蛋白样受体(LILR)表达特征。方法:选取我院2018年1月至2021年3月收治的急性期KD患儿32例为观察组及体检健康儿童19例为对照组。其中11例KD患儿(类固醇组)Egami评分>3分,预测可能存在静脉注射免疫球蛋白(IVIG)无反应,采用类固醇药物治疗,其余21例患儿(IVIG组)均给予IVIG治疗,比较对照组与观察组治疗前后CD19^(+)B细胞群中ASC、白细胞LILR表达情况。结果:观察组KD患儿外周血单核细胞(PBMC)水平、B细胞亚群中ASC水平高于对照组(P<0.05)。IVIG组及类固醇组患儿治疗后PBMC水平、PBMC中CD4^(+) T细胞、CD8^(+)T细胞水平均高于治疗前(P<0.05),ASC水平低于治疗前(P<0.05),且类固醇组ASC占比低于IVIG组(P<0.05)。流式细胞术检查显示,4种抑制性LILR亚型在单核细胞上表达,LILRB1在每个B细胞亚群上表达,而LILRB2或LILRB3在B细胞亚群上的表达在急性期和治疗后均较少;LILRB4在ASC上呈现唯一表达,其急性期水平低于单核细胞;观察组ASC的LILRB1、LILRB4水平高于对照组,且治疗后低于治疗前(P<0.05)。结论:KD患儿急性期ASC呈升高趋势且富含LILRB4表达,治疗结果不受类固醇给药影响。ASC可能在KD发生发展过程中发挥着重要作用。

^(18)F-FDG PET/CT Deauville评分及ΔSUV_(max)评估弥漫性大B细胞淋巴瘤化疗中期预后的价值

目的探讨18氟-氟代脱氧葡萄糖正电子发射体层摄影技术/计算机体层摄影技术(^(18)F-FDG PET/CT)显像Deauville评分和最大标准化摄取值的变化(ΔSUV_(max))在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)化疗中期预后评估中的价值。方法回顾性分析78例DLBCL患者化疗中期^(18)F-FDG PET/CT图像资料。对ΔSUV_(max)、ΔSUV_(max)%进行受试者工作特征(ROC)曲线分析,分别采用ΔSUV_(max)及ΔSUV_(max)%的最佳临界值、Deauville评分分组,并按免疫组化结果分为生发中心(GCB)型和非GCB型。进行Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归分析,分析Deauville评分法和ΔSUV_(max)法的预后评估能力。结果78例患者分为进展组24例和未进展组54例;进展组ΔSUV_(max)均值为(3.42±9.90),低于未进展组的(8.76±5.58),差异有统计学意义(P<0.05);进展组中位数ΔSUV_(max)%为34.88%,低于未进展组的78.16%,差异有统计学意义(P<0.01)。ΔSUV_(max)及ΔSUV_(max)%的曲线下面积(AUC)分别为0.667、0.882(P<0.01),分别以临界值7.95、67.34%分组,Kaplan-Meier分析显示2年无进展生存期(PFS)的差异有统计学意义(44.4%与82.4%,33.3%与95.6%,P<0.01)。Deauville<4分(PET阴性)组的2年PFS为91.9%,高于Deauville≥4分(PET阳性)组的48.8%,差异有统计学意义(P<0.01)。GCB型2年PFS为90.3%,高于非GCB型的55.3%,差异有统计学意义(P<0.01)。Cox多因素分析显示ΔSUV_(max)%及免疫组化分型为独立预测因素(P<0.01)。结论Deauville评分法和ΔSUV_(max)法在DLBCL化疗中期预后评估中均有较高的价值,ΔSUV_(max)%及免疫组化分型为PFS的独立预测因素。

外周血TLR2、PRF及GrzB在儿童嗜血细胞综合征中的表达及其与预后的关系

目的:探讨外周血Toll样受体2(TLR2)、NK细胞表面穿孔素(PRF)及颗粒酶B(GrzB)在儿童嗜血细胞综合征中的表达及与预后关系。方法:选取2019年1月至2021年1月昆明市儿童医院收治的79例嗜血细胞综合征儿童作为观察组,另纳入79例同龄体检健康儿童作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法测定外周血TLR2基因表达量,流式细胞仪测定NK细胞表面PRF、GrzB阳性细胞率。受试者工作特征曲线(ROC)分析TLR2、PRF及GrzB的诊断效能,观察组接受为期6个月的随访,比较死亡组与存活组外周血TLR2水平及NK细胞表面PRF、GrzB阳性细胞率,Logistic回归法分析TLR2、PRF及GrzB三者交互作用对儿童嗜血细胞综合征预后的影响。结果:观察组外周血TLR2表达水平高于对照组,NK细胞表面PRF、GrzB阳性细胞率低于对照组(P<0.05);外周血TLR2表达水平及NK细胞表面PRF、GrzB联合诊断儿童嗜血细胞综合征价值明显优于单一诊断;死亡组外周血TLR2表达水平高于存活组,NK细胞表面PRF、GrzB阳性细胞率低于存活组(P<0.05);低TLR2与高NK细胞表面PRF、GrzB存在交互作用(P<0.05)。结论:外周血TLR2表达及NK细胞表面PRF、GrzB阳性细胞率联合检测有助于提高儿童嗜血细胞综合征的诊断效能,且与患儿预后存在交互作用,有助于早期发现和治疗。

原发性癫痫患者血清BAFF、HMGB1、TLR4的表达水平及其临床意义

目的 检测原发性癫痫患者血清B细胞活化因子(BAFF)、高迁移率蛋白1 (HMGB1)、TOLL样受体4(TLR4)的表达水平,并探讨其临床意义。方法 选择2018年3月至2021年3月西安市第三医院神经内科收治的90例原发性癫痫患者进行研究(观察组),并选择同期于我院体检的90例健康人员作为对照组。比较两组受检者血清BAFF、HMGB1和TLR4的表达水平及简易精神状态检查量表(MMSE)评分、简明精神病评定量表(BPRS)评分,并比较不同发作类型患者的血清BAFF、HMGB1、TLR4水平及MMSE、BPRS评分,采用Pearson相关分析法分析血清BAFF、HMGB1、TLR4水平与MMSE、BPRS评分的相关性。结果 观察组患者的血清BAFF、HMGB1、TLR4水平及BPRS评分分别为(10.51±1.27) ng/mL、(370.68±75.20) pg/mL、(48.49±9.01) ng/mL、(35.18±4.26)分,明显高于对照组的(4.45±0.60) ng/mL、(282.02±36.24) pg/mL、(33.15±4.70) ng/mL、(16.87±1.15)分,MMSE评分为(13.28±1.63)分,明显低于对照组的(27.45±2.29)分,差异均有统计学意义(P<0.05);全身强直阵挛发作患者的血清BAFF、HMGB1、TLR4水平及BPRS评分水平分别为(20.25±4.20) ng/mL、(442.45±97.61) pg/mL、(53.09±10.25) ng/mL、(37.02±3.11)分,明显高于部分性发作患者的(12.82±2.93) ng/mL、(385.50±80.02) pg/mL、(46.37±7.12) ng/mL、(33.80±3.40)分,MMSE评分为(12.30±2.49)分,明显低于部分性发作患者的(14.28±3.24)分,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关分析结果显示,血清BAFF、HMGB1、TLR4水平与MMSE评分均呈负相关(r=-0.510、-0.212、-0.306,P<0.05),与BPRS评分均呈正相关(r=0.391、0.370、0.235,P<0.05)。结论 原发性癫痫患者的血清BAFF、HMGB1、TLR4水平呈高表达,影响患者的精神状态与病情的发展,对临床评估病情及治疗具有指导意义。

脐带间充质干细胞外泌体对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺部炎症的作用机制探讨

目的探讨人脐带间充质干细胞外泌体对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺部炎症的作用及机制。方法将18只SD雄性大鼠随机分为Control组、COPD组、COPD+Exo组,每组6只;COPD组、COPD+Exo组大鼠采用香烟烟熏+脂多糖(LPS)雾化吸入的方法建立COPD大鼠模型,COPD+Exo组经尾静脉注射100μL人脐带间充质干细胞外泌体稀释液(含2×107个外泌体),Control组和COPD组注射等量的磷酸盐缓冲液。干预后1周处死大鼠,收集外周血、肺泡灌洗液(BALF)和肺组织。HE染色观察大鼠肺组织病理改变,全自动血细胞分析仪计数外周血炎性细胞数目,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF和血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,qRTPCR检测肺组织中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达,Western blot检测肺组织中Toll样受体4(TLR4)、磷酸化核因子κB(p-NF-κB p65)和核因子抑制蛋白(IκBα)的表达。结果Control组大鼠肺泡结构完整、形态规则;COPD组大鼠肺泡结构紊乱,部分肺泡不规则扩张、融合成肺大疱甚至破裂,肺泡间隔增宽且可见较多炎性细胞浸润。与COPD组比较,COPD+Exo组大鼠肺泡结构较完整,肺泡间隔炎性细胞浸润减少,外周血中炎性细胞减少,BALF、血清及肺组织中IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平降低(P<0.05);肺组织TLR4、IκBα蛋白表达水平升高,p-NF-κB p65表达水平降低(P<0.05)。结论人脐带间充质干细胞外泌体通过调控TLR4/核因子κB(NF-κB)信号通路减轻COPD大鼠的肺部炎症,从而发挥肺保护作用。

外周血单个核细胞Toll样受体4和B淋巴细胞刺激因子表达水平与IgA肾病患者临床指标的关系

目的 探讨外周血单个核细胞Toll样受体4(TLR4)和B淋巴细胞刺激因子(BLyS)表达水平与免疫球蛋白(Ig)A肾病患者临床指标的关系。方法 回顾性分析122例IgA肾病患者的临床资料,比较不同外周血单个核细胞TLR4和BLyS表达水平患者临床指标,并分析外周血单个核细胞TLR4和BLyS表达水平与临床指标的相关性。结果 低TLR4水平组和高TLR4水平组间、低BLyS水平组和高BLyS水平组间性别、收缩压、高血压史、低密度脂蛋白(LDL)、血尿酸、血肌酐和尿素氮差异均有统计学意义;Pearson相关性分析结果显示,IgA肾病患者外周血单个核细胞TLR4、BLyS表达水平与收缩压、LDL、血尿酸和血肌酐水平均呈正相关(均P<0.05)。结论 外周血单个核细胞TLR4和BLyS表达水平与IgA肾病患者收缩压、LDL、血尿酸和血肌酐水平均呈正相关。

血清BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平与癫痫患者预后的相关性及其预测价值

目的:分析血清B细胞活化因子(BAFF)、新饱食分子蛋白1(Nesfatin-1)、NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NLRP3)水平与癫痫患者预后的相关性及其预测价值。方法:选取2019年6月至2021年6月该院收治的149例癫痫患者进行前瞻性研究。治疗后随访1年,根据1年后预后情况将患者分为预后不良组(n=43)和预后良好组(n=106)。比较两组治疗前及治疗3、6个月后血清BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平,采用Spearman相关性分析BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平与癫痫患者预后的相关性,并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平单项及联合检测预测癫痫患者预后的价值。结果:治疗3、6个月后,预后不良组血清BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平均高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平与癫痫患者预后均呈正相关(r>0,P<0.05);治疗6个月后,血清BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平单项及联合预测癫痫患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.730、0.756、0.737、0.906,均具有一定预测价值,其中联合检测预测价值最高。结论:血清BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平与癫痫患者预后均呈正相关,且三者联合检测预测癫痫患者的价值高于各单项检测。

LILRB2过表达慢病毒载体以及THP-1-LILRB2稳转细胞株的构建

目的采用慢病毒载体(lentivirus,LV)感染并探究其在人髓系白血病单核细胞(human myeloid leukemia mononuclear cells,THP-1)中的最佳感染条件,之后病毒包装白细胞免疫球蛋白样受体B2(leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 2,LILRB2)的过表达病毒载体并感染THP-1细胞,最终嘌呤霉素筛选出经mRNA和蛋白水平均成功验证LILRB2过表达效果的THP-1稳定转染细胞株,为研究LILRB2在单核细胞中的作用提供前提条件。方法LILRB2过表达慢病毒载体以pLV-SFFV-MCS-EF1-ZsGreen1-T2A-Puro为慢病毒骨架载体,通过Xba I与BamH I位点插入经聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增的LILRB2基因片段构建而成。待筛选阳性克隆与测序鉴定后,病毒感染预实验确定感染复数(multiplicity of infection,MOI);以293T细胞包装病毒,浓缩后获得的原液进行病毒滴度检测。设置过表达(LV-OE-LILRB2)组和对照(LV-OE-NC)组,用荧光显微镜观察各组病毒感染THP-1的绿色荧光情况;嘌呤霉素筛选出稳定表达LILRB2的THP-1细胞株。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和免疫印迹(Western blotting,WB)的方法分别检测THP-1细胞中LILRB2的mRNA和蛋白表达水平。结果载体中的碱基序列经PCR及测序鉴定正确,确认LILRB2过表达慢病毒载体构建完成。病毒感染预实验确定按MOI=5,感染72 h的条件感染单核细胞系THP-1。病毒滴度测定得出,LV-OE-LILRB2组的滴度为1×108 TU/mL,LV-OE-NC组的滴度为3.3×108 TU/mL。用浓度为2μg/mL嘌呤霉素筛选出的稳转细胞株经qPCR检测结果表明LV-OE-LILRB2组中LILRB2的mRNA表达水平较LV-OE-NC组显著上调(P<0.001);且WB检测表明LV-OE-LILRB2组中LILRB2的蛋白表达水平较LV-OE-NC组明显提高(P<0.05)。结论过表达LILRB2慢病毒载体成功构建并在THP-1细胞株中稳定表达,为研究LILRB2在单核细胞中的作用机制提供了细胞模型。

R-CHOP和CHOP方案治疗两种亚型弥漫大B细胞淋巴瘤患者的近期疗效

背景与目的:根据肿瘤细胞起源不同,可将弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuselarge B-cell lymphoma,DLBCL)分为生发中心来源(germinal center B-cell like,GCB)及非生发中心来源(non-GCB)两种亚型。在以CHOP方案为标准的化疗基础上,前者预后优于后者。本研究通过比较R-CHOP(Rituximab联合CHOP)和CHOP方案治疗不同亚型DLBCL患者的近期疗效,寻找初诊DLBCL患者最佳一线治疗方案。方法:将2006年11月至2008年2月中山大学肿瘤防治中心内科收治的83例初治DLBCL患者分为GCB和non-GCB两组。按照修订版淋巴瘤疗效评价标准,比较接受R-CHOP或CHOP方案治疗患者的近期疗效;观察Bcl-2在两种亚型中的表达情况,并分析其与近期疗效的关系。结果:83例DLBCL患者中GCB组35例(42.2%),non-GCB组48例(57.8%)。GCB组一线化疗近期总缓解率74.3%,non-GCB组60.4%,两组相比差异有显著性(P=0.006)。Bcl-2在GCB和non-GCB两亚组的表达差异没有显著性;Bcl-2阳性患者采用R-CHOP方案治疗的近期缓解率(75.6%)明显高于用CHOP方案治疗者(47.8%),两组相比差异有显著性(P=0.031);采用不同方案化疗的Bcl-2阴性患者的近期缓解率则差异无显著性(P>0.05)。结论:GCB组患者接受标准R-CHOP或CHOP方案治疗近期缓解率高于non-GCB组,提示预后良好。加用Rituximab可提高Bcl-2阳性患者的近期缓解率。

体外诱导小鼠胎肝间充质干细胞向胰岛B样细胞分化的研究

目的:体外分离和定向诱导小鼠胎肝间充质干细胞向胰岛B样细胞分化。方法:无菌条件下从正常C57BL／6J胎鼠肝中分离出间充质干细胞,体外培养传3代后用高浓度葡萄糖培养基以及碱性纤维生长因子(basic fihroblast growth factor,bFGF)和尼克酰胺诱导分化,观察胎肝间充质干细胞诱导前后形态变化;用RT-PCR检测细胞诱导前后胰十二指肠同源异型基因盒1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1)、胰岛素原1(proinsulin-1,INS-1)、葡萄糖转运子2(glucose transporter-2,GLUT-2)表达情况;胰岛素免疫细胞化学染色鉴定诱导后细胞胰岛素的表达;在形成胰岛样细胞簇后,用双硫腙做胰岛B细胞特异性染色。结果:RT-PCR显示诱导5 d后PDX-1、INS-1、GLUT-2均有表达,而诱导前的细胞则没有检测到表达;胰岛素免疫细胞化学表明细胞簇内的细胞胰岛素染色强阳性;细胞簇双硫腙染色阳性(每个T-25培养瓶有80-120个)。结论:从胎肝中分离出的间充质干细胞在体外可以定向诱导分化为胰岛B样细胞。

类RCHOP方案治疗弥漫大B细胞淋巴瘤后乙型肝炎病毒的激活情况:一项多中心回顾性研究

目的:评价弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)患者接受类RCHOP方案(利妥昔单抗+CHOP方案)治疗后,乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)阳性和HBsAg阴性的患者乙型肝炎病毒(hepatitisB virus,HBV)激活的发生率、转归及预防性抗病毒治疗的价值。方法:回顾性调查上海市6所三级甲等医院接受类RCHOP方案治疗的DLBCL患者的临床资料,分析患者的临床特征以及与HBV激活的相关性。结果:234例患者符合入选标准,其中29例HBsAg阳性,205例HBsAg阴性。11例接受预防性抗病毒治疗的HBsAg阳性患者中,无一例发生HBV激活;18例未接受预防性抗病毒治疗的HBsAg阳性患者中,7例(38.9%)发生HBV激活,其中3例(16.7%)死于肝功能衰竭。未接受预防性抗病毒治疗的患者中,HBV激活的发生率明显高于接受预防性抗病毒治疗者(P=0.026)。205例HBsAg阴性患者中,只有1例同时伴有乙型肝炎核心抗体(hepatitis B core antibody,HBcAb)阳性的患者发生HBV激活,其发生率明显低于HBsAg阳性患者(P=0.000)。结论:HBsAg阳性患者接受类RCHOP方案化疗后,HBV激活率较高且危害严重,给予预防性抗病毒治疗可以有效降低HBV激活风险。以往感染过HBV的HBsAg阴性患者在接受免疫化疗后发生HBV激活的可能性较低,今后尚需进一步研究预防性抗病毒治疗的价值。

Toll样受体2介导的Th17细胞活化在HBV感染中的作用

目的探讨乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中Toll样受体2(TLR2)与Th17细胞的相关性,为阐述HBV感染诱导炎症应答机制提供理论和实验依据。方法选取2012年7月-2013年7月唐都医院感染科门诊和住院的34例乙型肝炎初治患者,其中24例慢性乙型肝炎和10例急性乙型肝炎;另外选取健康对照者10例,分离PBMC,利用HBV C基因型Envelope区肽段(特异性)或佛波酯联合伊屋诺霉素(非特异性)刺激,流式细胞术检测TLR2表达及Th17细胞百分比。进一步用TLR2的激动剂刺激PBMC,检测Th17细胞变化情况。组间比较采用Kruskal-Wallis H检验。结果在非特异性刺激条件下,Th17细胞在慢性乙型肝炎患者体内的百分比(4.08±1.78)%显著高于急性乙型肝炎患者(1.85±1.28)%及健康对照者(2.09±0.53)%(P=0.000 9、0.000 4),而TLR2+及IL-17A+TLR2+的表达在急、慢性乙型肝炎患者与健康人外周血中差异均无统计学意义(P均>0.05)。在特异性刺激条件下Th17及TLR2的表达在慢性乙型肝炎患者体内的表达显著高于急性乙型肝炎组[(5.45±1.61)%vs(3.20±1.13)%;(5.19±3.18)%vs(1.88±1.30)%],差异具有统计学意义(P=0.000 6、0.000 6)。加入TLR2激动剂后急、慢性乙型肝炎患者体内Th17细胞的比例均显著升高,但在急性乙型肝炎患者中,刺激前后差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TLR2可以直接影响Th17细胞的应答,从而促进乙型肝炎中炎症应答反应。

Bruton酪氨酸激酶Btk的生物学特性研究进展

酪氨酸激酶Btk是非受体酪氨酸家族的成员,它由PH结构域、TH结构域、SH3结构域、SH2结构域和催化结构域5部分组成.Btk参与多种信号通路,对细胞的增殖、分化和凋亡起着重要的调控作用.Btk的突变可导致X连锁无丙种球蛋白血症,一直以来都是研究热点.笔者将围绕Btk的结构、功能、X连锁无丙种球蛋白血症的临床表现等方面的内容加以综述,着重探讨Btk参与B细胞信号通路、TLR信号通路和肥大细胞脱颗粒等过程的具体机制.