Th表位修饰的BLyS突变体的构建及活性分析

在已克隆可溶性BLyS(sBLyS)cDNA的基础上,经PCR构建了其缺失不同区域的突变体(msBLyS)cDNA,然后将msBLyScDNA与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)Th表位DNA序列重组,测序正确后分别克隆于原核表达载体pQE80L,并转化E.coliDH5α,经IPTG诱导后,融合蛋白以包涵体的形式表达,表达量均在菌体总蛋白的30%以上。包涵体经洗涤、溶解并经Ni-NTA层析纯化后,目的蛋白的纯度均在90%以上。活性检测发现,所获重组蛋白均丧失了sBLyS所具有的生物学功能,这些工作的完成为进一步探讨其治疗作用打下了基础。

人粒细胞集落刺激因子在家蚕细胞及幼虫中的高效表达

含信号肽序列的ｈＧ－ＣＳＦｃＤＮＡ基因克隆于Ｍ１３ｍｐ１８中，测序表明其基因序列与高活性ｈＧ－ＣＳＦｃＤＮＡ一致。将ｈＧ－ＣＳＦ基因插入家蚕核型多角体病毒（ＢｍＮＰＶ）转移载体ｐＢＥ２８４，经与野生型病毒ＤＮＡ共转染家蚕细胞后，通过体内同源重组的方式构建了重组病毒ＢｍＮＰＶ－Ｇ－ＣＳＦ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交表明重组病毒ＤＮＡ中含Ｇ－ＣＳＦ基因片段。重组病毒感染单层ＢｍＮ细胞后第四天表达量达１． ２×１０６ＣＦＵ／ｍｌ培养液，Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析可见分子量为１９×１０３左右一条带。家蚕幼虫感染重组病毒后第四天表达量达１．４×１０７ＣＦＵ／ｍｌ血淋巴（ｈｅｍｏｌｙｍｐｈ）。