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非洲猪瘟病毒B602L蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备
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作者 郭晨云 宋金星 +5 位作者 王梦翔 孙俊如 闫若潜 谢彩华 吴亚楠 张改平 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3980-3989,共10页
【目的】非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)是对生猪养殖业危害极大的一种病原体,B602L蛋白作为其重要的非结构蛋白,是衣壳蛋白p72折叠为正确的三级结构的伴侣分子之一,在病毒组装成二十面体结构的过程中发挥着关键作用。... 【目的】非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)是对生猪养殖业危害极大的一种病原体,B602L蛋白作为其重要的非结构蛋白,是衣壳蛋白p72折叠为正确的三级结构的伴侣分子之一,在病毒组装成二十面体结构的过程中发挥着关键作用。特异性抗体对于抗非洲猪瘟免疫应答机制及血清学检测方法研究具有重要意义,本研究旨在获取ASFV B602L蛋白,并制备抗ASFV B602L蛋白的多克隆抗体,为ASFV B602L蛋白功能研究及相关诊断试剂的研发提供材料。【方法】以ASFV China/2018/AnhuiXCGQ株的B 602 L基因为研究对象,应用生物信息学软件对B602L蛋白的理化性质、信号肽、跨膜结构、抗原性和蛋白结构进行分析后,利用同源重组的方法将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后经诱导表达获得B602L重组蛋白,利用镍柱亲和层析进行蛋白纯化,通过SDS-PAGE和Western blotting对B602L蛋白纯化效果进行验证。将纯化后的B602L蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过间接ELISA方法测定多克隆抗体效价,通过Western blotting和Dot blotting检测多克隆抗体特异性。【结果】生物信息学分析表明,B602L蛋白属于稳定性亲水蛋白,无跨膜区和信号肽。二级结构主要含有α-螺旋(54.91%)、延伸链(9.81%)和无规则卷曲(32.08%)。成功构建了ASFV B602L重组质粒,SDS-PAGE和Western blotting结果显示,重组菌pET-28a-B602L-BL21在16℃、0.5 mmol/L IPTG诱导下高效表达,获得的重组蛋白主要表达在BL21菌株上清中,大小约为70 ku,且能与ASFV阳性血清特异性结合。间接ELISA检测结果显示,制备的抗B602L鼠源多克隆抗体效价达1∶409600,Western blotting和Dot blotting试验结果表明,抗B602L鼠源多克隆抗体能够特异性识别B602L蛋白。【结论】原核表达的B602L重组蛋白具有良好的免疫原性,能够与ASFV阳性血清特异性结合,制备的鼠抗ASFV B602L蛋白多克隆抗体具备较好的生物学活性。本试验结果可为进一步研究ASFV B602L蛋白的生物学功能和非洲猪瘟诊断方法的建立提供生物材料和理论支撑。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒(ASFV) b602l蛋白 原核表达 多克隆抗体
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MyD88L265P及CD79B基因突变对原发性中枢神经系统淋巴瘤预后的影响
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作者 蒋皓云 金祺祺 +3 位作者 张丽田 李翠翠 岳宁宁 吴重阳 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期57-63,共7页
目的探究MyD88L265P及CD79B基因突变对原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)患者预后的影响。方法收集2018年8月-2020年11月于兰州大学第二医院经开颅手术或立体定位活检术确诊的18例免疫功能正常(无HIV感染及免疫抑制药服用病史)的PCNSL患... 目的探究MyD88L265P及CD79B基因突变对原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)患者预后的影响。方法收集2018年8月-2020年11月于兰州大学第二医院经开颅手术或立体定位活检术确诊的18例免疫功能正常(无HIV感染及免疫抑制药服用病史)的PCNSL患者临床资料进行回顾性分析。分别采用实时荧光定量PCR和一代基因测序技术检测18例PCNSL患者肿瘤组织中MyD88L265P和CD79B基因突变情况。针对可能与PCNSL首次无疾病进展生存期(PFS)和总生存期相关的指标行单因素分析,并采用Cox回归进行多因素分析。结果18例PCNSL肿瘤组织MyD88L265P突变率为38.9%,CD79B突变率为33.3%,MyD88L265P/CD79B共突变率为27.8%。单因素分析结果显示,病灶多发、病灶深部受累、肿瘤组织CD79B突变患者的PFS时间更短(P<0.05);多因素分析结果显示,病灶深部受累(HR=0.135,95%CI 0.023~0.799,P<0.05)、肿瘤组织CD79B突变(HR=0.149,95%CI 0.028~0.800,P<0.05)是PCNSL患者预后不良的独立危险因素。结论本组PCNSL患者肿瘤组织MyD88L265P、CD79B突变频率较高,这两种基因突变尤其是CD79B突变可能与PCNSL不良预后相关。 展开更多
关键词 原发性中枢神经系统淋巴瘤 MyD88l265P突变 CD79b突变 预后
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汽油车无法发动综合故障快速诊断研究分析——以大众迈腾B8L为例 被引量:1
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作者 许国永 陈炳基 《汽车维修技师》 2024年第4期81-83,共3页
本文主要分析汽油发动机作为动力主体的燃油车辆无法发动的具体故障现象以及根据故障现象快速判断故障方向的方法。详细阐述以大众迈腾B8L为例的汽油车无法发动的故障现象与原因以及测量方法,总结了汽油车无法发动故障的快速诊断诀窍。... 本文主要分析汽油发动机作为动力主体的燃油车辆无法发动的具体故障现象以及根据故障现象快速判断故障方向的方法。详细阐述以大众迈腾B8L为例的汽油车无法发动的故障现象与原因以及测量方法,总结了汽油车无法发动故障的快速诊断诀窍。内容包含汽油发动机电控系统的全部内容与要点,汽油车仍旧是社会交通工具的主体,本文仍具有一定的研究价值与意义。 展开更多
关键词 无法发动 快速诊断 b8l 电控
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大众迈腾B8L轿车启动系统工作过程与故障诊断分析 被引量:1
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作者 周云龙 《现代工业经济和信息化》 2024年第4期84-85,170,共3页
以大众迈腾B8L轿车发动机启动系统为例,分析启动系统的工作过程以及当启动系统出现故障时的诊断流程和思路。分析认为,维修人员熟悉该车发动机启动系统的工作过程,能够对启动系统工作条件是否正常进行判断,以及可以熟练掌握该车发动机... 以大众迈腾B8L轿车发动机启动系统为例,分析启动系统的工作过程以及当启动系统出现故障时的诊断流程和思路。分析认为,维修人员熟悉该车发动机启动系统的工作过程,能够对启动系统工作条件是否正常进行判断,以及可以熟练掌握该车发动机启动系统的诊断流程。 展开更多
关键词 迈腾b8l 启动系统 工作过程 故障诊断
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Rhizobium Inoculation and Micronutrient Addition Influence the Growth,Yield,Quality and Nutrient Uptake of Garden Peas(Pisum sativum L.)
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作者 MdAbdul Quddus MdAtaur Rahman +8 位作者 Razu Ahmed Mohammad Eyakub Ali Khokan Kumer Sarker MdAlamgir Siddiky Mohibur Rahman Lamya Ahmed Alkeridis Samy Sayed Ahmed Gaber Akbar Hossain 《Phyton-International Journal of Experimental Botany》 SCIE 2024年第5期901-922,共22页
Garden pea productivity and qualities are hampered in zinc(Zn),boron(B),and molybdenum(Mo)deficient soil.Thus,the combination of micronutrients(i.e.,Zn,B,and Mo)and rhizobium is necessary to increase the productivity ... Garden pea productivity and qualities are hampered in zinc(Zn),boron(B),and molybdenum(Mo)deficient soil.Thus,the combination of micronutrients(i.e.,Zn,B,and Mo)and rhizobium is necessary to increase the productivity and quality of garden peas,since this management for garden peas is neglected in Bangladesh.Therefore,the present study was made to assess the effectiveness of rhizobium inoculant singly or in combination with the micronutrients(i.e.,Zn,B,and Mo)on growth,yield,nutrient uptake,and quality of garden peas.Treatments were:T_(1)=Control,T_(2)=Rhizobium inoculation at 50 g/kg seed,T_(3)=T_(2)+Zn_(3)Mo1,T_(4)=T_(2)+B_(2)Mo1,T_(5)=T_(2)+Zn_(3)B_(2),T_(6)=T_(2)+Zn_(3)B_(2)Mo1 and T_(7)=Zn_(3)B_(2)Mo1.All treatments were arranged in a randomized complete block design and repeated all treatments in three times.The application of 3 kg Zn,2 kg B,and 1 kg Mo ha^(−1)with inoculation of Rhizobium at 50 g kg^(−1)seed(T_(6))facilitated to increase of 44.8%in the green pod and 29.7%seed yield over control.The same treatment contributed to attaining the maximum nodulation(25.3 plant^(−1)),Vitamin C(43.5 mg 100 g^(−1)),protein content(22.2%),and nutrient uptake as well as accumulation in garden peas.Among all treatment combinations,treatment T_(6)was found superior to others based on microbial activities,soil fertility,and profitability.The results of the study found that the application of 3 kg Zn,2 kg B,and 1 kg Mo ha^(−1)in combination with Rhizobium inoculation(50 g kg^(−1)seed)can improve the yield and quality of garden peas.The results of the study have the potential for the areas,where there is no use of Rhizobium inoculant or Zn,B,and Mo fertilizer for cultivation of garden pea. 展开更多
关键词 NODUlATION nutrient content Pisum sativum l. PROFITAbIlITY RHIZObIUM Zn b Mo
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迈腾B8L发动机无法启动故障诊断与排除 被引量:1
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作者 解艳超 李海岗 +2 位作者 郭丽娜 郑春伟 郝魁 《汽车实用技术》 2024年第5期143-147,共5页
以高职国赛“汽车故障检修”选用的迈腾B8L为对象,诊断与排除电气系统的典型部件损坏造成发动机无法启动的故障。首先,描述了发动机无法启动的故障现象:全车不上电、起动机无法运转及起动机运转不着车等;其次,介绍迈腾B8L的启动策略:整... 以高职国赛“汽车故障检修”选用的迈腾B8L为对象,诊断与排除电气系统的典型部件损坏造成发动机无法启动的故障。首先,描述了发动机无法启动的故障现象:全车不上电、起动机无法运转及起动机运转不着车等;其次,介绍迈腾B8L的启动策略:整车上电策略及起动机运转策略;再次,选取点火开关损坏造成的不上电故障,动力总线损坏造成的起动机不运转故障,起动继电器及其线路损坏造成的起动机不运转故障,曲轴位置传感器及其线路损坏造成的不着车故障;最后,对点火开关、动力总线、启动继电器及其线路、曲轴位置传感器及其线路的故障进行了诊断与排除。在不使用故障诊断仪的前提下,为以上四大部件损坏造成的发动机无法启动故障,提供了系统、全面、有效的排除方法,也为诊断与排除其他部件的故障提供了详细的参考依据。 展开更多
关键词 发动机 高职国赛 迈腾b8l 无法启动 典型部件 故障诊断 故障排除
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Bioactive chemical constituents from the marine-derived fungus Cladosporium sp.DLT-5
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作者 Luting DAI Qingyi XIE +6 位作者 Jiaocen GUO Qingyun MA Li YANG Jingzhe YUAN Haofu DAI Zhifang YU Youxing ZHAO 《Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2024年第3期905-914,共10页
A new isochromanone,cladosporinisochromanone(1),accompanied by 15 known compounds(2–16)were obtained from secondary metabolites produced by marine-derived fungus Cladosporium sp.DLT-5.NMR and HRESIMS spectra elucidat... A new isochromanone,cladosporinisochromanone(1),accompanied by 15 known compounds(2–16)were obtained from secondary metabolites produced by marine-derived fungus Cladosporium sp.DLT-5.NMR and HRESIMS spectra elucidation determined the planar structure of 1.Subsequent electronic circular dichroism(ECD)experiment assigned the absolute configuration of 1.Compounds 1,2,4–6,and 10 displayed different degrees of neuroprotective activities on human neuroblastoma cells SH-SY5Y.Five compounds(1,3–5,and 13)emerged resistance to protein tyrosine phosphatase 1B(PTP1B),further kinetic analysis and molecular docking study indicated that the most potent compound 13(IC50value of 10.74±0.61μmol/L)was found as a noncompetitive inhibitor for PTP1B.Surface plasmon resonance(SPR)and molecular docking studies also demonstrated the interaction between compound 12 and Niemann-Pick C1 Like 1(NPC1L1),which has been identified as significant therapeutic target for hypercholesteremia.In addition,compounds 3,6,and 14 showed attractive inhibitory activity against the phytopathogenic fungi:Colletotrichum capsici.Therefore,library of Cladosporium metabolites is enriched and new active uses of known compounds are explored. 展开更多
关键词 Cladosporium sp. marine-derived fungus neuroprotective effects protein tyrosine phosphatase 1b(PTP1b) Niemann-Pick C1 like 1(NPC1l1) antifungal activity
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Crocus sativus L.produces anti-inflammatory effects and regulates the NLRP3–NF-κB pathway
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作者 Liang Yang Huanhua Xu +14 位作者 Qian Hong Nuo Xu Yan Zhang Rui Tao Shuai Li Zizheng Zhang Jiahao Geng Zihan Wang Huizi Hu Yan Dong Zhaoyi Chu Bin Zheng Jinmiao Zhu Ming Geng Yue Gao 《Acupuncture and Herbal Medicine》 2024年第3期375-385,共11页
Objective:This study aimed to evaluate the anti-inflammatory effects of petal and stamen extracts of saffron crocus(Crocus sativus)and explore the underlying mechanism.Methods:Local and systemic inflammation models we... Objective:This study aimed to evaluate the anti-inflammatory effects of petal and stamen extracts of saffron crocus(Crocus sativus)and explore the underlying mechanism.Methods:Local and systemic inflammation models were used to investigate the anti-inflammatory effects of C.sativus.A xyleneinduced inflammation model or lipopolysaccharide(LPS)-induced inflammation model was used in this study.C.sativus petal and stamen extracts were each administered to the mice in the xylene and LPS models by gavage for 14 d at 0.1 and 0.4 g/kg doses,respectively.Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)was used to measure the concentrations of tumor necrosis factor(TNF)-αand interleukin(IL)-1βin mouse serum.Hematoxylin and eosin(H&E)staining was used to observe the pathological changes in the ear in the xylene-induced inflammation model and in the spleen in the LPS-induced inflammation model.NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3(NLRP3)protein levels within the nuclear factor-kappa B(NF-κB)pathway were assessed using western blotting.RAW264.7 cells were treated with LPS(5μg/mL)and LPS+C.sativus(0.05,0.1,and 0.2 mg/mL)for 24 h,and a Cell Counting Kit-8 was used to measure cell proliferation.Changes in NLRP3 and NF-κB levels were evaluated by western blotting.Results:Petal and stamen extracts of C.sativus attenuated the anti-inflammatory effects in local or systemic inflammatory models and repaired pathological changes in the ear in the xylene-induced inflammation model and spleen in the LPS-induced inflammation model.These extracts also decreased the concentrations of TNF-αand IL-1βin the mouse serum in the LPS-induced inflammation model.C.sativus downregulated NLRP3 protein level through the NF-κB pathway and downregulated LC-3 and BECLIN1 in vivo and in vitro.Carbonyl Cyanide3-ChloroPhenylhydrazone(CCCP)weakened the effects of C.sativus on the NLRP3–NF-κB pathway.Conclusion:C.sativus has anti-inflammatory effects and regulates the NLRP3-NF-κB pathway. 展开更多
关键词 AUTOPHAGY Crocus sativus l. INFlAMMATORY NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3 Nuclear factor kappa b
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2020款迈腾B8L发动机无法启动故障检修
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作者 黄伟 《内燃机与配件》 2024年第17期75-77,共3页
一辆2020款迈腾B8L轿车,按启动按钮,仪表正常点亮;踩刹车同时按启动按钮,启动机有吸合声音但无法转动,无着车迹象。针对该故障现象,根据故障产生机理,依次对该车发动机启动系统的相关部件及其电路等进行了检测诊断。最终排查出的故障原... 一辆2020款迈腾B8L轿车,按启动按钮,仪表正常点亮;踩刹车同时按启动按钮,启动机有吸合声音但无法转动,无着车迹象。针对该故障现象,根据故障产生机理,依次对该车发动机启动系统的相关部件及其电路等进行了检测诊断。最终排查出的故障原因是,发动机控制单元J623的P/N挡信号线与启动反馈信号线短路,对其进行修复后,发动机可正常启动,车辆故障排除。 展开更多
关键词 迈腾b8l 启动系统 故障检修
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羊口疮病毒B2L和F1L截短融合基因原核表达产物的免疫原性分析 被引量:2
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作者 鲜思美 郑维豪 +7 位作者 梁倩 张友 杨倩 顾庆林 包涛涛 青成欣 杜鹏 邱进杰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期185-190,共6页
为分析羊口疮病毒(OrfV)B2L和F1L截短融合基因表达蛋白的反应原性,本研究分别选取B2L、F1L基因序列的主要抗原区域,采用重叠延伸PCR将二者融合后克隆至原核表达载体pET-32a中,构建重组质粒pET-32a-B2L-F1L,通过PCR、双酶切和测序鉴定,... 为分析羊口疮病毒(OrfV)B2L和F1L截短融合基因表达蛋白的反应原性,本研究分别选取B2L、F1L基因序列的主要抗原区域,采用重叠延伸PCR将二者融合后克隆至原核表达载体pET-32a中,构建重组质粒pET-32a-B2L-F1L,通过PCR、双酶切和测序鉴定,结果显示获得1080 bp的B2L-F1L融合基因目的片段,测序结果经比对分析正确无误,表明正确构建了重组表达质粒pET-32a-B2L-F1L。将pET-32a-B2L-F1L转化BL21(DE3)后经IPTG诱导,SDS-PAGE检测结果显示表达了39 ku的重组蛋白rB2L-F1L。采用Ni-IDA亲和层析方法纯化重组蛋白,经western blot鉴定,结果显示获得39 ku的单一特异性条带,表明rB2L-F1L的纯化效果和免疫原性均较好。采用rB2L-F1L纯化蛋白皮下多点注射免疫羔羊,采用ELISA方法检测免疫后不同时间羔羊血清中的OrfV抗体、IL-2、IFN-γ和IL-4细胞因子。结果显示,与生理盐水组相比,rB2L-F1L能够诱导羔羊产生OrfV特异性抗体,并可显著或极显著诱导羔羊分泌IL-2、IFN-γ和IL-4细胞因子(P<0.05、P<0.01);与弱毒活疫苗组比较,除在免疫后14 d~28 d时rB2L-F1L诱导羔羊产生的IL-2水平显著低于弱毒活疫苗组外(P<0.05),其他细胞因子在各时段两组均无显著差异(P>0.05)。本研究首次将OrfV优势抗原基因融合表达并分析了融合蛋白的免疫原性,为OrfV的检测技术和基因工程亚单位疫苗的研发奠定了良好基础。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 b2l基因 F1l基因 截短表达 免疫原性分析
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非洲猪瘟病毒B646L基因序列分析及p72蛋白质结构与细胞抗原表位预测 被引量:2
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作者 罗世民 李中波 《江苏农业科学》 北大核心 2023年第16期141-146,共6页
为探究非洲猪瘟病毒B646L基因序列的碱基组成特点,及预测该基因所编码的p72蛋白质结构与细胞抗原表位,利用PCR技术对非洲猪瘟病毒B646L基因ORF框的序列进行扩增、测序及碱基组成分析;运用软件EXPASY、PRABI与SWISS-MODEL对p72蛋白质进... 为探究非洲猪瘟病毒B646L基因序列的碱基组成特点,及预测该基因所编码的p72蛋白质结构与细胞抗原表位,利用PCR技术对非洲猪瘟病毒B646L基因ORF框的序列进行扩增、测序及碱基组成分析;运用软件EXPASY、PRABI与SWISS-MODEL对p72蛋白质进行理化性质分析及二、三级结构预测;运用在线软件ABCpred Prediction、Scratch、IEDB和NetCTL对p72蛋白在B、T细胞的抗原表位进行预测。结果表明,非洲猪瘟病毒B646L基因ORF框序列全长为1941 bp,其中,碱基A含量为26.9%,T含量为28.9%,G含量为24.2%及C含量为20.0%,A+T的含量为55.8%,G+C的含量为44.2%,AT含量显著高于GC含量;该序列共编码646个氨基酸,p72蛋白大小为76 ku;在整个p72蛋白分子的二、三级结构中,α-螺旋占19.35%,β-转角占5.42%,无规卷曲占50.15%,扩展链为25.08%,以无规卷曲为主要结构;该蛋白存在细胞质的概率最大,其次是细胞核,存在于线粒体、高尔基体和内质网的概率较低;p72蛋白B淋巴细胞优势抗原表位分别为12~18 aa、27~37 aa、45~55 aa、77~88 aa、110~120 aa;T淋巴细胞优势抗原表位分别为203~212 aa、298~307 aa、520~531 aa。说明非洲猪瘟病毒B646L基因ORF框序列呈明显AT偏好性;p72蛋白为一亲水性蛋白,其高级结构主要以无规卷曲为主,且具有B、T淋巴细胞优势抗原表位,是检测试剂和疫苗研发的理想靶标。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 b646l基因 p72蛋白 序列分析 结构预测 抗原表位预测
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PRELID3B基因mRNA在不同品种乌骨鸡肌肉组织中的表达规律研究
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作者 姬改革 刘一帆 +5 位作者 屠云洁 单艳菊 邹剑敏 章明 巨晓军 束婧婷 《中国畜牧杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期156-160,共5页
PRELID3B基因(PRELIP Domain Containing 3B)是调控乌骨鸡黑色素沉积的重要候选基因。为探讨PRELID3BmRNA在不同品种乌骨鸡肌肉发育中的表达情况,以丝羽乌骨鸡和余干乌骨鸡为材料,采用实时荧光定量PCR技术,检测出雏后不同发育时期胸肌... PRELID3B基因(PRELIP Domain Containing 3B)是调控乌骨鸡黑色素沉积的重要候选基因。为探讨PRELID3BmRNA在不同品种乌骨鸡肌肉发育中的表达情况,以丝羽乌骨鸡和余干乌骨鸡为材料,采用实时荧光定量PCR技术,检测出雏后不同发育时期胸肌和腿肌中PRELID3BmRNA的表达情况,并将基因表达量与肌肉色度L值进行相关性分析。结果发现,2个品种胸肌和腿肌的肌肉色度L值都随日龄的增长呈逐渐下降的趋势;2周龄后,2个品种的胸肌和腿肌L值出现差异(P<0.05)。丝羽乌骨鸡胸肌和腿肌PRELID3B mRNA表达变化趋势基本一致,都是前高后低;余干乌骨鸡胸肌和腿肌PRELID3BmRNA表达变化趋势不一致,其中胸肌在10周龄之后呈升高的趋势。14周龄之后,2个品种的胸肌和腿肌PRELID3BmRNA表达都出现差异(P<0.05)。品种间比较,14周龄之后胸肌PRELID3BmRNA表达在品种间出现差异(P<0.05);腿肌则是在2周龄、6周龄和14周龄时品种间出现差异(P<0.05)。肌肉色度L值与基因表达的相关性结果显示,2个品种的腿肌色度L值都与基因表达量呈负相关(P<0.05)。结果提示PRELID3B基因mRNA表达在不同品种乌骨鸡腿肌中的变化规律基本一致,基因表达量与腿肌色度变化具有相关性,PRELID3B基因可能在调控乌骨鸡腿肌黑色素沉积方面具有重要作用。 展开更多
关键词 乌骨鸡 肌肉 PRElID3b基因 MRNA表达 色度l
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非洲猪瘟病毒B646L和F778R双基因PCR检测方法的构建
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作者 王慧 钟菊花 +3 位作者 杨俊 杜丽飞 王红兵 刘俊琦 《激光生物学报》 CAS 2023年第6期554-560,共7页
为建立一种能够快速检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的普通PCR方法,本研究分别以ASFV B646L和F778R基因为靶序列设计了两对特异性引物,建立ASFV B646L和F778R双基因普通PCR方法,并对其特异性、灵敏性及重复性进行检测。结果显示:该PCR体系(25.0... 为建立一种能够快速检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的普通PCR方法,本研究分别以ASFV B646L和F778R基因为靶序列设计了两对特异性引物,建立ASFV B646L和F778R双基因普通PCR方法,并对其特异性、灵敏性及重复性进行检测。结果显示:该PCR体系(25.0μL体系)的最优组合为Pfu酶0.2μL、10×Reaction Buffer 2.5μL、2.5 mmol/L d NTP Mixture 2.5μL、B646L上下游引物各1.5μL、F778R上下游引物各0.5μL、DNA模板1.0μL;退火温度为57℃、退火时间为30 s、72℃延伸2.5 min,30个循环。该方法仅针对ASFV B646L和F778R基因进行特异性扩增,无交叉反应。同时对B646L和F778R阳性质粒的最低检测下限分别为7.2×10^(7)copies/μL、1.5×10^(6)copies/μL,试验重复性良好。本研究对于提高ASFV临床诊断的准确性、特异性和高效性具有重要价值,为其快速检测提供了可靠的技术支撑。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 多重PCR b646l基因 F778R基因 快速检测
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非洲猪瘟病毒B318L蛋白的多克隆抗体的制备及应用 被引量:1
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作者 刘晓红 刘宏扬 +4 位作者 叶光强 焦爽 宿志民 黄丽 翁长江 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期922-929,共8页
非洲猪瘟病毒(ASFV)B318L是ASFV编码的晚期蛋白,具有香叶基香叶基合成酶活性。为了制备B318L的多克隆抗体并将其初步应用,本研究利用PCR方法从重组质粒p CAGGS-HA-B318L中扩增ASFV B318L基因构建重组表达质粒p GEX-6p-1-B318L,经PCR和... 非洲猪瘟病毒(ASFV)B318L是ASFV编码的晚期蛋白,具有香叶基香叶基合成酶活性。为了制备B318L的多克隆抗体并将其初步应用,本研究利用PCR方法从重组质粒p CAGGS-HA-B318L中扩增ASFV B318L基因构建重组表达质粒p GEX-6p-1-B318L,经PCR和测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导并克隆至p GEX-6p-1载体中,采用GST亲和层析柱纯化重组蛋白,利用SDS-PAGE检测该蛋白的表达,采用western blot鉴定重组蛋白的纯化效果和反应原性,采用超微量紫外分光光度计测定蛋白浓度。结果显示,在约60 ku处出现特异性条带,且重组B318L蛋白(rB318L)主要以可溶性形式表达;纯化后在约60 ku处出现了单一特异性条带,经超微量紫外分光光度计测定蛋白浓度为10 mg/m L。将纯化的r B318L 4次免疫小鼠并于3免后一周采血,采用western blot鉴定该多克隆抗体(pAb),经Protein G亲和层析介质纯化后采用SDS-PAGE进一步鉴定纯化效果,采用间接ELISA检测p Ab的效价。结果显示,制备的小鼠血清(pAb)在60 ku处出现特异性条带,其与原核表达的r B318L发生了反应;该p Ab包含重、轻链且纯度较好,且其效价可达1∶32000。将不同剂量的p CAGGS-HA-B318L(1μg、2μg、4μg)分别转染HEK293T细胞,24 h后收集细胞,将MOI 1的ASFV HLJ/18株感染猪肺泡巨噬细胞(PAM),并分别于感染后6 h、12 h、24 h收集细胞。上述细胞均经相应处理后分别采用western blot、间接免疫荧光试验(IFA)(pCAGGS-HA-B318L转染剂量为1μg)检测制备的p Ab的反应原性。Western blot结果显示,HEK293T细胞中出现约35 ku的特异性条带,并随转染质粒浓度的增加B318L蛋白表达量增多;ASFV感染24 h后的PAM在35 ku处出现特异性条带,其余时间点均无该条带。IFA结果显示,过表达B318L蛋白的HEK293T细胞中出现红色荧光;ASFV感染12 h后的PAM中出现红色荧光,24 h后PAM中红色荧光的量增加。将制备的B318L p Ab用于免疫共沉淀(Co-IP)试验检测293T细胞中过表达的B318L、ASFV感染PAM后内源表达的B318L,以及两种细胞中表达的B38L蛋白与p Ab、Protein A/G Magnetic beads三者结合物的反应性。结果显示,B318L p Ab可以检测到上述细胞中内源过表达和外源表达的B318L蛋白以及结合在beads上的B318L蛋白,均出现约35 ku的特异性条带。上述结果表明,B318L蛋白是ASFV晚期表达的蛋白,且制备并纯化的B318L p Ab反应原性较强,既可以与HEK293T细胞中过表达的B318L蛋白也可以与ASFV感染的PAM中内源表达的B318L蛋白反应,反应原性较强,且可以用于Co-IP试验检测细胞中表达的B318L蛋白,本研究为深入研究ASFV B318L的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 b318l蛋白 多克隆抗体
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基于LIN线通信的迈腾B8L汽车灯光系统原理探析 被引量:1
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作者 文富强 《科技资讯》 2023年第17期79-82,共4页
近年来,随着汽车技术的飞速发展,汽车已呈现出向电动化、智能化、电子化、共享化等多方向发展的趋势,未来的汽车会像手机一样成为人们生活的伙伴,而这一切的发展都离不开汽车数据总线技术的发展与应用。该文主要从大众迈腾B8L汽车灯光... 近年来,随着汽车技术的飞速发展,汽车已呈现出向电动化、智能化、电子化、共享化等多方向发展的趋势,未来的汽车会像手机一样成为人们生活的伙伴,而这一切的发展都离不开汽车数据总线技术的发展与应用。该文主要从大众迈腾B8L汽车灯光系统原理分析与研究出发,阐述了LIN线工作原理及故障原因分析、汽车灯光系统组成及控制原理等,从而为LIN线的故障诊断与维修提供参考。 展开更多
关键词 汽车灯光系统 迈腾b8l lIN线 原理
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羊口疮病毒内脏和口唇感染株B2L和F1L基因的比较分析
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作者 吴姣 富国文 +4 位作者 四朗玉珍 曾琴 白卫兵 班旦 樊月圆 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2023年第4期580-586,共7页
【目的】分析内脏和口唇感染羊传染性脓疱病病毒主要致病因子F1L和B2L基因和蛋白的差异,为进一步研究该病毒的致病机制提供参考。【方法】对内脏和口唇感染株F1L和B2L基因进行PCR扩增后克隆测序,运用生物信息学软件对其序列及编码蛋白... 【目的】分析内脏和口唇感染羊传染性脓疱病病毒主要致病因子F1L和B2L基因和蛋白的差异,为进一步研究该病毒的致病机制提供参考。【方法】对内脏和口唇感染株F1L和B2L基因进行PCR扩增后克隆测序,运用生物信息学软件对其序列及编码蛋白的二级结构、磷酸化位点和跨膜结构域进行预测和分析。【结果】内脏株和口唇株的F1L基因长度均为1 564 bp,分别编码342和343个氨基酸;B2L基因长度均为1 370 bp,均编码378个氨基酸。内脏和口唇感染株B2L基因核苷酸序列同源性为97.80%,氨基酸序列同源性为98.15%;两者的F1L基因核苷酸序列同源性为95.49%,氨基酸序列同源性为87.20%。氨基酸组成显示:内脏和口唇感染株B2L蛋白缬氨酸含量最高;口唇株F1L蛋白亮氨酸含量最高,内脏株F1L蛋白精氨酸含量最高。【结论】羊口疮病毒内脏和口唇感染株的B2L基因保守性良好,而F1L基因差异明显,本结果可为进一步研究羊口疮病毒致病机制提供参考。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 口唇感染株 F1l基因 b2l基因 生物信息学分析
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IVF-ET对子代胎盘PEG3、L3MBTL1、NF-κB表达的影响及临床意义
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作者 朱珍 高海燕 +2 位作者 董自江 李艳 陆薇 《中国计划生育学杂志》 2023年第10期2311-2316,共6页
目的:观察体外受精-胚胎移植(IVF-ET)对子代胎盘父系表达基因3(PEG3)、父系印记基因L3MBTL1(L3MBTL1)、核转录因子-κB(NF-κB)表达水平影响及其临床意义。方法:选取2021年6月-2022年12月在本院产科行IVF-ET的剖宫产产妇及自然受孕剖宫... 目的:观察体外受精-胚胎移植(IVF-ET)对子代胎盘父系表达基因3(PEG3)、父系印记基因L3MBTL1(L3MBTL1)、核转录因子-κB(NF-κB)表达水平影响及其临床意义。方法:选取2021年6月-2022年12月在本院产科行IVF-ET的剖宫产产妇及自然受孕剖宫产产妇各45例为IVF-ET组、对照组。胎盘娩出后收集两组胎盘组织,应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot法测定胎盘组织中PEG3、L3MBTL1、NF-κB mRNA及蛋白表达;比较不同新生儿结局IVF-ET产妇胎盘组织中PEG3、L3MBTL1、NF-κB mRNA及蛋白表达;应用Spearman相关系数分析胎盘组织中各指标表达与新生儿结局关系。结果:IVF-ET组胎盘组织中PEG3、L3MBTL1 mRNA及蛋白表达均低于对照组,NF-κB mRNA及蛋白表达高于对照组;IVF-ET组中出现不良新生儿结局产妇胎盘组织中PEG3、L3MBTL1 mRNA及蛋白表达均低于无不良新生儿结局产妇,NF-κB mRNA及蛋白表达高于无不良新生儿结局产妇(均P<0.05)。Spearman相关系数分析显示,IVF-ET产妇胎盘组织中PEG3、L3MBTL1 mRNA及蛋白表达与新生儿结局呈正相关,NF-κB mRNA及蛋白表达与新生儿结局呈负相关(均P<0.05)。结论:IVF-ET子代胎盘PEG3、L3MBTL1、NF-κB异常表达,且表达与不良新生儿结局有关。 展开更多
关键词 体外受精-胚胎移植 胎盘组织 父系表达基因3 l3MbTl1 核转录因子-Κb 新生儿结局 相关性
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非洲猪瘟病毒B602L蛋白的真核表达及多克隆抗体的制备 被引量:1
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作者 刘郁夫 林晓慧 +3 位作者 郝文茜 冯夏宁 欧阳征亮 陈瑞爱 《中国兽药杂志》 2023年第10期1-8,共8页
为表达非洲猪瘟病毒B602L重组蛋白,制备相应的多克隆抗体,根据NCBI网站上公布的非洲猪瘟病毒(Pig/HLJ/2018株)B602L基因序列进行密码子优化和基因合成,随后克隆至杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组杆状病毒质粒,再把重组杆粒转染昆... 为表达非洲猪瘟病毒B602L重组蛋白,制备相应的多克隆抗体,根据NCBI网站上公布的非洲猪瘟病毒(Pig/HLJ/2018株)B602L基因序列进行密码子优化和基因合成,随后克隆至杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组杆状病毒质粒,再把重组杆粒转染昆虫细胞Sf9,拯救重组B602L基因的杆状病毒。经间接免疫荧光和western blots鉴定结果显示,B602L重组蛋白与His标签抗体、非洲猪瘟标准阳性血清均能发生特异性反应,并且B602L重组蛋白可以细胞分泌上清的形式进行表达。通过His镍株亲和纯化的方式纯化重组蛋白,B602L蛋白大小约70 ku,与预期相符。将B602L重组蛋白与弗氏佐剂配比免疫BALB/c小鼠,制备小鼠多克隆抗体,经间接ELISA检测,该抗体效价可达1∶512000,并且与B602L重组蛋白具有良好的反应性。本研究可为进一步研究非洲猪瘟B602L蛋白的结构与功能、研制非洲猪瘟诊断制品提供生物材料。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 b602l 真核表达 多克隆抗体
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银杏内酯B抑制血小板与肿瘤细胞相互作用的实验研究 被引量:1
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作者 薛昌雯 邵小宝 +2 位作者 陈鑫 周琳 朱培元 《临床输血与检验》 CAS 2024年第2期205-212,共8页
目的研究银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对血小板活化的抑制作用,以及基于该抑制作用对血小板和肠癌HCT-116细胞间作用的影响。方法采用不同浓度GB(5、15、30μmol/L)处理健康志愿者全血或血小板,通过血栓弹力图(Thromboelastogram,TEG)检... 目的研究银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对血小板活化的抑制作用,以及基于该抑制作用对血小板和肠癌HCT-116细胞间作用的影响。方法采用不同浓度GB(5、15、30μmol/L)处理健康志愿者全血或血小板,通过血栓弹力图(Thromboelastogram,TEG)检测GB对血小板二磷酸腺苷(Adenosine diphosphate,ADP)、花生四烯酸(arachidonic acid,AA)途径的抑制率,采用流式细胞术检测GB对凝血酶和ADP激活血小板后CD62P和PAC-1表达的影响,通过细胞划痕试验观察GB对血小板与HCT-116细胞作用24、48 h后细胞迁移的影响,通过细胞黏附试验观察GB对血小板与HCT-116细胞黏附情况的影响。结果(1)TEG试验结果显示,随着GB浓度增加,AA抑制率均显著增加且呈剂量依赖(P<0.001),与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.001);药物组与空白对照组相比,ADP抑制率均显著增加且呈剂量依赖,差异均有统计学意义(P<0.001)。(2)流式细胞术检测结果显示,凝血酶和ADP激活血小板后药物组的CD62P与PAC-1阳性率随着药物浓度升高而降低且呈剂量依赖性(P<0.001),凝血酶激活途径的药物5μmol/L组的PAC-1阳性率低于对照组,差异无统计学意义(P>0.05),ADP激活途径的药物5μmol/L组的CD62P阳性率、5μmol/L和15μmol/L组的PAC-1阳性率均低于对照组,差异无统计学意义(P>0.05),余各浓度组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01)。(3)划痕试验结果显示,不同浓度药物组的24、48 h细胞迁移率分别较凝血酶组与ADP组降低,且差异有统计学意义(P<0.01),15μmol/L组的24、48 h细胞迁移率明显低于5μmol/L组,差异具有统计学意义(P<0.05),30μmol/L组迁移率低于15μmol/L组,但差异无统计学意义(P>0.05)。(4)黏附试验结果显示,活化的血小板可增强其与肿瘤细胞之间的黏附作用,但药物组各组的黏附率均低于阳性组,且随着药物浓度增加黏附率随之降低。结论GB可通过AA途径及ADP途径抑制血小板活化,进而抑制血小板与HCT-116肿瘤细胞的黏附以及血小板促肿瘤细胞迁移的能力。 展开更多
关键词 银杏内酯b 结直肠癌 血小板 黏附 迁移
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迈腾B8L起动机无法运转的故障研究 被引量:1
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作者 毛军鹏 《内燃机与配件》 2023年第19期77-79,共3页
迈腾B8L使用大众的MQB平台打造,此车起动系统的控制逻辑相对复杂,要查找起动机无法运转的故障原因,首先必须熟知其工作原理,然后根据故障现象运用恰当的诊断思路逐步进行排除。本文首先介绍迈腾B8L起动系统的工作原理(控制逻辑),然后根... 迈腾B8L使用大众的MQB平台打造,此车起动系统的控制逻辑相对复杂,要查找起动机无法运转的故障原因,首先必须熟知其工作原理,然后根据故障现象运用恰当的诊断思路逐步进行排除。本文首先介绍迈腾B8L起动系统的工作原理(控制逻辑),然后根据各个控制信号、电路、故障码、数据流等各部分不正常可能产生的对应故障现象进行反推故障原因,最后总结了故障诊断排除的思路和方法,从而为解决迈腾B8L起动机无法运转的故障提供检修的依据。 展开更多
关键词 迈腾b8l 起动系统 控制逻辑 故障诊断
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