应用B.t.和SBTi基因提高水稻抗虫性的研究

利用基因枪法将单个B .t.基因或与SBTi基因一起导入到两个华南地区优良籼稻品种中 ,获得 2 1个转B .t.单基因的植株系 ,4个转B .t.和SBTi双基因的植株系。对R1代植株的分子杂交和遗传分析表明 ,3个转双基因系中多个拷贝的B .t.和SBTi基因均是整合在植株基因组同一染色体上相同或相近位点。Northernblot证明在R2 代转基因植株中B .t .基因稳定表达。对稻纵卷叶螟的抗性实验表明 ,转B .t .单基因或B .t.和SBTi双基因的转基因植株均较原种对照有更强的抗性 ,而转双基因植株较转单基因植株又有更强的抗性。

根癌农杆菌介导B.t.基因和CpTI基因对花椰菜的转化

用根癌农杆菌介导的方法 ,将B .t.基因和Cp TI基因分别导入花椰菜“杂交 75天”的父本和母本的无菌苗下胚轴切段细胞 ,都获得了转基因植株。经过预培养的下胚轴切段用根癌农杆菌 (LBA44 0 4/ pG BI4A2B ,含B .t .基因 ;LBA44 0 4/pBRLC ,含CpTI基因 )进行感染后 ,共培养 48h ,继续培养 30d后 ,将分化芽转移至筛选培养基上。 10d后 ,大多数分化芽的顶端变成紫色 ,2 0d后紫色芽逐渐变白死亡 ,而转化芽在选择培养基上长成小植株。小植株移至大田能正常生长、开花、结籽。PCR和Southernblot分析表明B .

温度对B.t杀虫剂防治马尾松毛虫效果的影响

Different temperatures affect the effect of controlling pine caterpillars, Dendrolimus punctatus, by B.t pesticide apparently.While using B.t pesticide,the mortality of D.punctatus decreased as the temperature dropped.From the result of 4 temperature gradient tests,it was showed that 20 ℃ is the threshold that determine the effect of controlling D.punctatus by B.t. The results shows that different temperatures affect the feeding deterrence of the B.t to the D.punctatus larvae also,but in the all temperature treatments,the feeding deterrences are apparent consistently.

经高浓度味精废水驯化的B.t菌株伴胞晶体特性及其活性成分研究

对 3株能在味精废水中生长的苏云金芽孢杆菌菌株T .4、G .1、S - 2 .5进行了废水茄子瓶培养基培养 ,应用液体双相法分离晶体 ,通过SDS -PAGE电泳确定了它们的分子量为 12 0KD、10 4KD、6 7- 6 8KD、43-45KD ;选取菌珠G .1经分离后的晶体通过DEAE -纤维素离子交换层析和SephadexG - 10 0凝胶排阻层析分离到两个峰 ,分子量分别为 12 0KD、6 8KD ,致死中浓度LC50 分别为 0 .6 0 9、>2 5。

农杆菌转化获得转B.t.基因水稻及其生物学鉴定

以水稻主栽品种“秀水 11”和“春江 11”预培养 4d未成熟胚为转化受体 ,经农杆菌LBA44 0 4/ pG BI4A2B(含B .t.基因 )感染后 ,筛选出抗性愈伤组织并获得转化植株。其中抗性愈伤组织产生频率达44 % 70 % ,转化植株产生频率达 2 7% 6 4%。转基因植物总DNA经PCR和Southernblot分子杂交试验表明 ,T DNA上的外源基因已整合到水稻的基因组里。对转B .t .基因水稻植株进行了两种水稻主要害虫纵卷叶螟和二化螟的饲虫试验。与对照相比 ,7d后纵卷叶螟幼虫死亡率达 31% 49% ,同时纵卷叶螟对转基因水稻叶片的危害程度大大减轻。二化螟在咬食转B .t.基因水稻植株 7d后的校正死亡率达 15 % 71% ,30d后多数转基因水稻仍能正常抽穗 。

青菜的高效再生和农杆菌介导B.t.及CpTI基因的转化

分别对培养基中适宜的激素组成和AgNO3 添加浓度进行研究 ,建立了青菜下胚轴和子叶外植体的高效再生系统 ,青菜品种“矮抗青”的最高芽分化频率下胚轴可达 6 5 % ,子叶为 5 2 %左右。在此基础上 ,对影响转化频率的不同因素进行了探讨 ,共获 94株卡那霉素抗性植株。对转基因植株总DNA的Southernblot ting分析证明 ,B .t .基因和CpTI基因已整合到青菜植株的细胞核基因组中。经过抗虫性筛选试验 ,从转基因植株的T3 代筛选到 7个转B .t.基因的抗虫纯合株系和 5个转CpTI基因的抗虫纯合株系 。

氯氰菊酯和B.t.iH-14混配对致乏库蚊幼虫的实验室毒效及持效研究

目的 :提高杀虫剂对致乏库蚊幼虫的药效。方法 :将氯氰菊酯与B .t.iH 14混配 ,观察对试虫的半数致死量 (LC50 )及共毒系数。结果 :混配制剂对敏感品系致乏库蚊幼虫的LC50 为0 .0 0 56mg/L ,共毒系数为90 .8;对抗性致乏库蚊幼虫的LC50 为 0 .0 545mg/L ,共毒系数为2 84 .0 3。按 2 .5mg/L浓度对敏感品系及抗性品系试虫的灭效 >80 % ,在实验室的持效时间为 2 1d ,2 1d后灭效迅速下降 ,30d药效基本丧失。结论 :该混配制剂对敏感品系试虫的毒力表现为两者相加作用 ,对抗性品系试虫有明显增效作用 ,持效期长于单独使用 0 .5mg/L氯氰菊酯及2 .0mg/LB .t .iH 14。

氯氰菊酯和B.t.iH-14混配杀虫剂对致乏库蚊幼虫的实验室毒效及持效作用研究

目的 :研究混配杀虫剂对致乏库蚊幼虫的实验室毒效及持效作用。方法 :将 3种药物稀释成不同浓度 ,测定致乏库蚊幼虫的LC50 。结果 :混剂对敏感品系致乏库蚊幼虫LC50 为 0 .0 0 5 6mg/L ,共毒系数为 90 .8,毒力表现为两者相加作用 ;对抗性致乏库蚊幼虫LC50 为 0 .0 5 45mg/L ,共毒系数为2 84.0 3 ,有明显增效作用。 2 .5mg/L浓度对敏感品系和抗性品系的灭效 >80 % ,在实验室的持效时间为 2 1d ,持效长于单独使用 0 .5mg/L氯氰菊酯和2 .0mg/LB .t .iH - 14;混剂在 2 1d后灭效迅速下降 ,30d基本失效。结论 :该混剂既可快速有效地杀灭抗性幼虫 ,同时可延长杀灭残效 ,对提高防制效果。

应用氯氰菊酯和B.t.i H-14混配杀虫剂现场防治城市蚊幼虫的效果评价

采用常量喷雾或注射器滴注方法观察氯氰菊酯、B .t.iH 1 4混配杀虫剂对城市中小型蚊幼虫孳生地现场防治蚊幼虫的效果。结果表明用 2 5mg L、5 0mg L混配杀虫剂分别处理蚊幼虫孳生地 ,1天后蚊幼虫下降率均为 1 0 0 %。容器指数由处理前的 5 3 5和 5 1 6下降至零的持效期分别为 1 4和 2 1天。2 5mg L混配杀虫剂在 2 1天内的毒杀持效与单独使用 5 0mg LB t iH 1 4、1 0mg L氯氰菊酯相当 ,而5 0mg L混配杀虫剂持效比单独使用 5 0mg LB .t.iH 1 4,1 0mg L氯氰菊酯延长 7天 ,表明混配杀虫剂在现场能有效防治蚊幼虫 ,减少化学杀虫剂的用量。

B.t.蛋白的纯化与鉴定

通过碱溶、碱解的方法溶解B.t.蛋白,采用60%饱和度的硫酸铵粗提,SephadexG-50层析凝胶分离,加1.5倍的95%乙醇可得晶体沉淀并冻干,所得B.t.蛋白含量为92%,SDS-PAGE电泳图谱显示所纯化的B.t.蛋白分子量为130KD,生物学检测时,幼虫至3铃虫的死亡率均大于90%,生物活性达18000IU/mg,可作抗原用。

B.t.杀虫剂的发展、问题及对策

一.B.t.杀虫剂的发展历史1901年日本细菌学家 S.Ishiwata 从患病的家蚕幼虫分离得到了一种芽孢杆菌,并在1905年发表的另一报告中称之为“猝倒芽孢杆菌”。但直到1911年 Berliner 从德国苏云金地区谷仓中的患病地中海粉螟幼虫上分离得到了另一株类似的细菌之后,1915才正式将此昆虫病原细菌命名为“苏云金杆菌”(Bacillus thuringiensis)。简称 B.t.。

B.t.杀虫剂的发展、问题及对策(续)

二.B.t.杀虫剂的问题和对策B.t.作为一种生物杀虫剂,与传统的化学杀虫剂相比,有其独特的优点,也有其弱点。主要优点表现为(1)选择性极强,对哺乳动物和非目标生物安全,对生态环境影响小;(2)B.t.具有相当大的开发潜力(如高活性或不同寄主谱的新菌株);(3)成本低。其缺点有(1)寄主谱窄,没有化学杀虫剂那样广谱的杀虫活性;(2)有些天然菌株的杀虫活力低或发酵特性差;(3)田间药效不稳定,作用速度慢,持效期短,药效受环境因素影响较大;(4)抗性问题不容忽视。

目前 B.t.生产和使用的一些问题

B.t.即苏云金杆菌,是一种微生物农药.主要用于防治鳞翅日幼虫.由于它对人畜低毒、对作物害虫的天敌安全,所以逐渐受到人们的重视。在当前棉铃虫日益猖獗、对化学农药抗药性日趋严重的形势下,B.t.在对一、二代棉铃虫的防治和缓解抗性产生方面起了一定的积极作用.农业生产对 B.t.需求量的增加使其产量大幅度提高.B.t 制剂年产量由1990年的3000吨猛增到去年的1万吨,今年预计将达到3～4万吨。B.t.生产单位也由80年代初的几家增到今年的70多家(其中仅30家办理农药登记),可以说我国 B.t.生产出现了“过热”现象.

家蚕B.t.败血病及其药物防治试验研究

通过 B. t.与黑胸败血菌及灵菌对三龄蚕的感染力对比试验 ,初步发现三龄起蚕对 B. t.有很高的创伤敏感性 ,接种感染发病率极显著地高于灵菌和黑胸菌 ,而且病程较短 ,认为 B. t.也是家蚕败血病的一种重要病原 ,并对其药物防治作了初步探索 ,试验表明 ,新型抗菌素 SL对 B. t.

抗B.t.制剂昆虫细胞品系的选择及其酯酶同工酶的初步研究

逐代以９０％的选择压力选择对Ｂ．ｔ．抗性的昆虫细胞品系，结果表明：５Ｂ１细胞对Ｂ．ｔ．抗性的发展是相当缓慢的．第２３代选择细胞的抗性水平突然由原来的３倍上升到１０倍以上，此后抗性在８～１０倍间波动，一直到第３２代．被选择细胞（Ｒ５Ｂ１）和正常细胞（Ｓ５Ｂ１）酯酶同工酶的分析结果表明两种品系细胞有３条共同的酶带．另外，二者也分别拥有２条特异性酶带．被选择细胞（Ｒ５Ｂ１）的细胞酯酶同工酶有些酶带的活力明显高于正常细胞（Ｓ５Ｂ１）的酯酶同工酶活力，证明了抗性细胞品系在生理和代谢上已经发生了一些变化．

植物质杀虫剂苦皮藤乳油与B.t.及增效磷(SV_1)混用技术研究

室内生测结果表明，ＫＰＴＥＣ１０ｇ／Ｌ和ＳＶ１１ｇ／Ｌ及ＫＰＴＥＣ７５０ｍｇ／Ｌ和Ｂ．ｔ．１２５ｍｇ／Ｌ混用的协同毒力指数分别为８７９５％及１５０％。田间试验结果表明，ＫＰＴＥＣ５００ｍｇ／Ｌ和ＳＶ１１００ｍｇ／Ｌ及ＫＰＴＥＣ４００ｍｇ／Ｌ和Ｂ．ｔ．１００ｍｇ／Ｌ混用，施药后１５ｄ防效分别为６３１８％和８０５２％，而单用ＫＰＴＥＣ５００ｇ／Ｌ的防效仅为５１４１％，单用Ｂ．ｔ．５００ｍｇ／Ｌ的防效为６２８１％；混用的增产率为３１０９％和２８２９％；而单用ＫＰＴＥＣ５００ｍｇ／Ｌ的增产率仅为２１１１％，单用Ｂ．ｔ．５００ｍｇ／Ｌ的增产率为２３７４％。因而，ＫＰＴ和ＳＶ１及Ｂ．ｔ．混用均有增效作用。

32000IU/mg B.t.可湿性粉剂防治烟青虫的田间药效试验

田间试验结果表明 ,32 0 0 0IU/mgB .t.可湿性粉剂的使用剂量为 1 5 0～ 2 0 0 g/ 6 6 7m2 ,对烟青虫具有较好的防治效果 ,药后第 3～ 5d的防效为 72 .1 %～ 85 .1 % ,持效期达 1 0d ;其防治效果与对照药剂 2 .5 %g功夫乳油 2 4ml/ 6 6 7m2 的防效相当 ,而且对环境安全 ,对烟蚜和斜纹夜蛾还有一定的兼治作用。

B.t、白僵菌复配DCPV对林间松毛虫防控效果的影响

使用B.t(苏云金杆菌)和白僵菌与DCPV(松毛虫质型多角体病毒)复配,在高脂马尾松幼林进行林间试验,对其速效性及持效性进行观测,以评价微生物制剂复配DCPV对林间松毛虫防控效果的影响。结果表明:DCPV林间使用时,加入B.t复配,其速效性表现良好,但持毒期短;DCPV与白僵菌复配,在短期内白僵菌未起到明显毒杀作用,但活虫感染率较高,至用药后1年,白僵菌起到了良好的寄生及致死作用;施药后2年,药剂对松毛虫的持续控制,由DCPV起主导作用。

应用B.t.杀虫剂飞机防治松毛虫试验

该文介绍了应用B^杀虫剂飞机防治松毛虫Dendrolimussp.试验的方法,并与米螨、杀铃脲、灭幼脲Ⅲ号等仿生农药进行了比较.B.t.杀虫剂飞机防治松毛虫校正死亡率96.4%,使用最佳剂量600g/hm2.并对其应用前景及有关问题进行了探讨.

飞机喷洒“B.t”乳剂防治春尺蠖

<正>春尺蠖是危害新疆榆树、杨树的主要食叶害虫,年发生面积100×10~4亩,严重时树叶被食光。过去长期使用单一的化学农药防治,害虫产生抗药性。为了探索经济有效的防治方法,我们于1985—1986年在玛纳斯平原林场和呼图壁干河子林场用“B.t”乳剂(苏云金杆菌液剂)进行飞机常规喷雾防治试验和示范,取得了显著效果,控制了其危害,减轻了灾情。 试验区设在玛纳斯平原林场榆树林内(林内有少量小叶白蜡和杨树),树高3—15m,郁闭度0.6,有虫株率100％,虫口密度30—185头/株。