双歧杆菌冻干菌粉制备工艺的研究

优化双歧杆菌冻干菌粉的制备工艺及检测冻干菌粉在模拟人体胃肠环境中的耐受性和贮存稳定性,采用3种方法制备双歧杆菌冻干菌粉。方法1:双歧杆菌在牛奶还原培养基中的扩大培养液加入甘露醇作为保护剂制备冻干菌粉;方法2:双歧杆菌在PTYG培养基中的扩大培养液经低温离心得到菌泥,向菌泥中加入保护剂甘露醇、增量赋形剂脱脂乳粉制备冻干菌粉;方法3:同方法2得到菌泥,向其中加入保护剂甘露醇、包埋剂明胶及增量赋形剂脱脂乳粉制备冻干菌粉。由方法2得到菌粉活菌数较高,为1.31×1010CFU/g;经模拟胃肠环境处理后,活菌数仍保持在4.19×108CFU/g;对胃酸、胆汁酸具有很高的耐受力。经典加速实验证明由方法2制备的菌粉室温保存1年以上活菌数仍保持在107数量级,具有较好的贮存稳定性。

两歧双歧杆菌在牛初乳中的发酵特性研究

用经过耐氧驯化后的两歧双歧杆菌发酵牛初乳,研究了其发酵特性。结果表明,两歧双歧杆菌在牛初乳中37℃发酵10h,pH值为4.72,活菌数为3.3×109mL-1,初乳IgG活性、质量浓度基本保持不变。

双歧活性菠萝酸豆乳加工工艺的研究

研究了以大豆、鲜牛奶为主要原料，配以蔗糖、异麦芽低聚糖、葡萄糖、蜂蜜及菠萝果浆等，通过两歧双歧杆菌和嗜热链球菌发酵制备新型双歧活性酸豆乳的加工工艺，并探讨了基料的配制及主辅发酵剂接种比例对产品质量的影响。

幽门螺杆菌融合基因vacA-hpaA的克隆及在大肠杆菌和双歧杆菌中的表达

目的构建幽门螺杆菌融合基因vacA-hpaA的大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒,并观察其在大肠杆菌(E.coli)和双歧杆菌(B.bifidium)中的表达情况。方法通过PCR得到hpaA-vacA融合基因,将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-hpaA-vacA,电穿孔转化入大肠杆菌BL21和双歧杆菌。转化菌经IPTG诱导,然后用SDS-PAGE和Western blotting方法鉴定表达的重组蛋白。结果构建了重组质粒pGEX-vacA-hpaA,vacA-hpaA融合基因的分子量约为1 548 bp;经SDS-PAGE分析,在大肠杆菌中表达出85 kD的融合蛋白,表达的蛋白约占细菌总蛋白的20.5%;在双岐杆菌中也能得到正确表达,但表达量较大肠杆菌低,占细菌总蛋白约8.5%。Western blotting结果确认了该条带为hpaA-vacA融合基因的产物。结论构建的重组质粒pGEX-hpaA-vacA能够在大肠杆菌及双歧杆菌中获得表达。

优化两歧双歧杆菌培养基的增菌研究

针对两歧双歧杆菌的营养需要,采用正交实验设计优化增殖培养基。结果表明,酵母膏是短双歧杆菌的显著影响因素。最佳的优化培养基配比是:酵母膏0.9%,胰蛋白胨0.3%,大豆蛋白胨0.3%,葡萄糖2.0%,双歧因子0.8%,生长因子10%(均为质量分数)。用经优化的增殖培养基配方测定两歧双歧杆菌的生长曲线及其pH值的变化,确定该菌增殖培养的最适终止时间约为18h,此时平板菌落计数的菌数可高达2.1×1010mL-1。

双歧杆菌体外对STM拮抗作用的实验研究

目的研究体外双歧杆菌对鼠伤寒沙门菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ，ＳＴＭ）的拮抗作用；方法将两歧双歧杆菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｉｆｉｄｕｍ，Ｂｂｉｆｉｄｕｍ）与ＳＴＭ混合培养，观察ＳＴＭ生长情况。结果ＳＴＭ和Ｂｂｉｆｉｄｕｍ混合培养与ＳＴＭ单独培养对照相比较，菌量明显降低（Ｐ＜０００１）。结论Ｂｂｉｆｉｄｕｍ在体外对ＳＴＭ有拮抗作用。

燕麦生物乳的研制

本文探讨了以燕麦和脱脂奶粉为主要原料,燕麦经双酶水解所得的糖化液,配以脱脂奶粉,经杀菌冷却,以鼠李糖乳杆菌和两歧双歧杆菌为发酵剂,接种发酵而成的含有活性成分且具有保健功能的生物乳,它的活菌数高达1011个/ml,酸度为90°T,β-葡萄聚糖含量是180mg/L。

水溶性膳食纤维促进肠道益生菌生长的研究

研究了低聚异麦芽糖、燕麦β——葡聚糖、瓜尔豆胶等7种水溶性膳食纤维对肠道益生菌选择性促进生长作用。体外实验结果显示:7种水溶性膳食纤维都对双歧杆菌或嗜酸乳杆菌有显著促进生长作用,对大肠杆菌没有明显促生长作用。竞争实验结果显示:7种水溶性膳食纤维显著地促进了双歧杆菌或嗜酸乳杆菌的生长,而双歧杆菌或嗜酸乳杆菌的增殖又可对大肠杆菌的生长产生一定抑制作用。

两歧双歧杆菌促生长培养基的初步筛选

本试验首先比较了两歧双歧杆菌在TPY,PTYG和改良MRS培养基的生长情况,发现PTYG作为两歧双歧杆菌的生长培养基相对较好;然后在PTYG培养基中加入乳清蛋白水解液和乳糖,结果表明乳清蛋白水解液与乳糖对两歧双歧杆菌的生长有一定的影响,其适当添加量为10%乳清蛋白水解液(mL/mL)和1.5%乳糖(g/g)。

两歧双歧杆菌增殖培养基的优化

针对两歧双歧杆菌的营养需要,采用正交试验设计优化增殖培养基,结果表明,酵母膏是影响短双歧杆菌的显著因素,最佳的优化培养基配比是:酵母膏0.9%,胰蛋白胨0.3%,大豆蛋白胨0.3%,葡萄糖2.0%,双歧因子0.8%,生长因子10%.用经优化的增殖培养基配方测定两歧双歧杆菌的生长曲线及其pH的变化,确定该菌增殖培养的最适终止时间约为18 h,此时平板菌落计数的菌数可高达2.1×1010cfu/ml.

两种抗氧化剂在两歧双歧杆菌发酵过程中的化学去胁迫作用

采用向发酵液中添加适当的抗氧化剂的方法,消除发酵液中残存的氧对两歧双歧杆菌的胁迫作用,以达到其发酵液中产生更多活菌体的目的。结果表明,在发酵过程中,添加3.2 g/L或1.6 g/L的异抗坏血酸钠和抗坏血酸盐,可有效地减少氧对两歧双歧杆菌的胁迫作用,使发酵液中的活菌数分别增加到1.06×10^9CFU/ mL、1.29×10^9CFU/mL。

含活性多糖发酵乳的研制

探讨了以燕麦和脱脂奶粉为主要原料、燕麦经双酶水解所得的糖化液配以脱脂奶粉,经杀菌冷却,以鼠李糖乳杆菌和两歧双歧杆菌为发酵剂,接种发酵而成的含有活性成分且具有保健功能的生物乳。结果表明,该乳的活菌数高达1011mL-1。

两歧双歧杆菌ATCC 29521在小鼠肠道的定植分析

目的 :为了解两歧双歧杆菌ATCC 29521在小鼠肠道中的定植情况,应用实时荧光定量PCR技术分析小鼠粪便中双歧杆菌的菌体量。方法 :对C57BL/6雌性小鼠分组灌胃,单次灌胃组予1×10~9CFU灌胃一次,灌胃后0、2、4、6、8、10、12、16、20、24 h收取粪便;连续灌胃组同等剂量连续灌胃3周,灌胃的0、7、14、21、24、28 d取粪便,提取DNA后检测菌体情况。结果 :整体菌量变化呈先升高后降低趋势,单次灌胃组在0 h、灌胃2h后未检测到,4 h后开始逐渐升高,10 h菌量达到最高峰为6.0×10~7 CFU/g粪便,之后菌量逐渐下降,灌胃12至16 h区间下降幅度最大;连续连续灌胃组灌胃1周后菌体量达2.0×10~7 CFU/g,2周后上升至1.0×10~8CFU/g,3周后菌量增加不明显,说明灌胃2周后达到平台期,两组分别于24 h和停止灌胃1周后菌量明显下降。结论 :两歧双歧杆菌ATCC 29521的给药周期至少需要2周,如果要维持此菌的治疗作用,需要持续给药,使体内的有效菌量维持在平台期。

pH值及接种量对两歧双歧杆菌生长的影响

研究了pH值及接种量对两株两歧双歧杆菌BB01及BB03生长的影响。结果表明:BB01及BB03的最适生长pH值分别为6.5及6.0,最佳接种量分别为4.0%及5.0%。