脓毒症患者血清HMGB1、sTLT-1、NLR变化及其对并发急性肺损伤的预测价值

目的探讨脓毒症患者血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、可溶性髓样细胞触发受体样转录因子-1(sTLT-1)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)变化及其对并发急性肺损伤(ALI)的预测价值。方法回顾性分析2022年1月至2023年12月新乡医学院第一附属医院收治的120例脓毒症患者的临床资料,根据住院期间是否发生ALI分为ALI组35例、非ALI组85例。比较ALI组与非ALI组、ALI组不同病情程度患者血清HMGB1、sTLT-1、NLR水平,并采用受试者工作(ROC)曲线分析血清HMGB1、sTLT-1、NLR对脓毒症并发ALI的预测价值。结果ALI组患者的血清HMGB1、sTLT-1、NLR水平分别为(74.21±11.70)pg/mL、(593.06±82.45)pg/mL、5.13±1.16,明显高于非ALI组的(60.15±7.95)pg/mL、(525.73±54.84)pg/mL、4.08±0.64,差异均有统计学意义(P<0.05);ALI组中,高危组患者的血清HMGB1、sTLT-1、NLR水平分别为(86.43±5.90)pg/mL、(686.31±23.91)pg/mL、(6.49±1.11),明显高于中危组的(76.64±11.44)pg/mL、(599.28±88.40)pg/mL、5.27±1.00及低危组的(64.48±5.06)pg/mL、(539.93±35.90)pg/mL、4.27±0.71,且中危组患者均高于低危组,差异均有统计学意义(P<0.05);血清HMGB1、sTLT-1、NLR联合预测脓毒症并发ALI的曲线下面积(AUC)、敏感度、特异度分别为0.890、90.60%、92.10%,HMGB1单独检测分别为0.848、84.70%、77.10%,sTLT-1单独检测分别为0.732、71.40%、68.20%,NLR单独检测分别为0.785、62.90%、84.20%,联合检测高于各指标单独检测(P<0.05)。结论脓毒症并发ALI患者血清HMGB1、sTLT-1、NLR明显升高,且三者联合检测对并发ALI有较高的预测价值。

气道类器官研究哮喘中Lkb1调控上皮再生的机制

目的 通过气道类器官培养研究哮喘中肝激酶B1(Lkb1)调控上皮再生的机制。方法 取Lkb1~(f/f)(对照组,10只)和Scgb1a1~(CreER);Lkb1~(f/f)小鼠(Lkb1敲除组,9只),采用雾化吸入鸡卵清蛋白(OVA)的方法建立过敏性哮喘模型,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织,统计BALF中炎性细胞数量,肺组织切片免疫荧光染色比较钙激活氯离子通道蛋白3(CLCA3)阳性细胞数量。通过流式细胞术分选出Club细胞进行类器官培养,统计类器官的平均直径和类器官形成率,回收细胞通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测高脚杯细胞标志物CLCA3、纤毛细胞标志物叉头框蛋白J1(FOXJ1)和Club细胞中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的表达水平。结果 与对照组相比,Lkb1敲除组BALF中巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞数量变化差异无统计学意义;Lkb1敲除后CLCA3阳性细胞数量减少;类器官培养结果显示敲除Lkb1后Club细胞来源的类器官平均直径减小,类器官形成率降低,纤毛细胞分化标志物FOXJ1 m RNA表达水平降低,缺失Lkb1后Club细胞表达AMPKα水平降低,且Club细胞增殖受到抑制,激活Lkb1的下游信号通路AMPK可以减弱Lkb1缺失对Club细胞再生功能的影响。结论 Lkb1通过AMPK通路促进气道祖细胞增殖。

血清高迁移率族蛋白B1与可溶性髓系细胞触发受体1联合检测对脓毒症并发急性肾损伤的诊断价值

目的探讨血清高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)、可溶性髓系细胞触发受体1(soluble myeloid cell trigger receptor-1,sTREM-1)联合检测对脓毒症并发急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的诊断价值。方法回顾性选择徐州市中心医院2020年1月1日至2022年1月31日收治的156例脓毒症患者,另选取同期68例体检健康者为对照组。对比两组受试者血清HMGB1、sTREM-1水平,多因素Logistic回归分析脓毒症并发AKI的影响因素,受试者工作特征曲线分析血清HMGB1、sTREM-1水平对脓毒症并发AKI的诊断价值。结果脓毒症组患者血清HMGB1[172530(133870,204010)ng/L比83720(63480,99870)ng/L]、sTREM-1[(49.56±8.03)ng/L比(24.96±5.24)ng/L]水平明显高于对照组(P<0.05);多因素Logistic分析显示,血肌酐(OR=1.079,95%CI:1.037~1.122)、HMGB1(OR=1.933,95%CI:1.376~2.714)、sTREM-1(OR=1.201,95%CI:1.101~1.309)为脓毒症并发AKI的独立危险因素(P<0.05);受试者工作特征曲线显示,HMGB1联合sTREM-1[曲线下面积(area under the curve,AUC)=0.928,95%CI:0.876~0.963]诊断脓毒症并发AKI的敏感度、特异度、准确度高于HMGB1(AUC=0.790,95%CI:0.718~0.851)、sTREM-1(AUC=0.778,95%CI:0.705~0.840)诊断。结论脓毒症患者血清HMGB1、sTREM-1水平明显增高,是脓毒症并发AKI的独立危险因素。

阿米卡星联合哌拉西林钠/他唑巴坦钠治疗重症肺炎的疗效及对血清HMGB1、sTREM-1、miR-233的影响

目的研究阿米卡星联合治疗哌拉西林钠/他唑巴坦钠治疗重症肺炎的疗效及对血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)、微RNA(miR)-233的影响。方法前瞻性选择2018年1月至2022年12月黄石市中心医院收治的重症肺炎患者100例,依据随机数字表法分为阿米卡星组与对照组,各50例。两组均行祛痰、补液、扩张支气管及营养支持等常规治疗。在常规治疗基础上,对照组行哌拉西林钠/他唑巴坦钠治疗,阿米卡星组在对照组基础上行阿米卡星治疗。治疗14 d后,观察两组临床疗效、临床症状指标(发热时间、痰液颜色改变时间、肺部炎症吸收时间、机械通气时间及细菌清除率),观察两组治疗前及治疗14 d后血清指标[HMGB1、sTREM-1、miR-233水平、血清肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)、白细胞介素(IL)-6、L-10]、肺功能指标[用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积(FEV1)、功能残气量(FRC)、深吸气量(IC)]和不良反应情况。结果治疗14 d后,阿米卡星组总有效率为94.00%,高于对照组(76.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗14 d后,阿米卡星组发热时间、痰液颜色改变时间、肺部炎症吸收时间、机械通气时间为(3.26±0.35)、(4.19±0.44)、(8.24±0.85)、(8.64±0.89)d,均短于对照组[(6.31±0.66)、(7.08±0.73)、(9.31±0.95)、(10.78±1.30)d],细菌清除率为(92.75±9.54)%,高于对照组[(76.29±7.93)%],差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗14 d后,阿米卡星组血清HMGB1、sTREM-1、miR-233水平为(112.08±13.96)μg/L、(42.84±4.50)ng/L、1.19±0.13,均低于对照组[(140.17±17.64)μg/L、(51.07±6.38)ng/L、(1.51±0.17)],差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗14 d后,阿米卡星组的血清TNF-ɑ、IL-6水平为(1.01±0.12)ng/mL、(22.65±2.49)pg/mL,均低于对照组[(1.32±0.16)ng/mL、(26.83±2.94)pg/mL],阿米卡星组的IL-10水平为(15.98±1.82)pg/mL,均高于对照组[(12.74±1.53)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗14 d后,阿米卡星组FVC、FEV1、IC为(3.22±0.35)、(2.14±0.23)、(2.56±0.28)L,均大于对照组[(2.94±0.32)、(1.93±0.21)、(2.27±0.25)L],FRC为(2.02±0.22)L,小于对照组[(2.35±0.26)L],差异均有统计学意义(P<0.05)。两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(16.00%vs.8.00%)(P>0.05)。结论阿米卡星联合治疗哌拉西林钠/他唑巴坦钠治疗重症肺炎可有效清除致病菌,抑制炎症反应,缩短临床恢复时间,改善肺功能,降低血清HMGB1、sTREM-1、miR-233水平,疗效显著,安全性好。

布地奈德吸入气雾剂联合多巴胺治疗小儿重症肺炎的疗效及对血清HMGB1、sTREM-1水平的影响

目的:探讨布地奈德吸入气雾剂联合多巴胺治疗小儿重症肺炎的疗效以及对血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)水平的影响。方法:将2021年5月至2023年5月石家庄市妇幼保健院收治的120例小儿重症肺炎患儿通过随机数字表法分为对照组和研究组,每组60例。对照组患儿采用盐酸多巴胺注射液治疗,研究组患儿在对照组的基础上联合布地奈德吸入气雾剂进行雾化吸入治疗。检测两组患儿治疗前后的免疫炎症因子C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6),血氧指数动脉血氧分压(PaO_(2))、动脉二氧化碳分压(PaCO_(2))和血氧饱和度(SaO_(2)),血清HMGB1、sTREM-1水平;同时统计两组患儿治疗过程中的不良反应发生情况以及治疗效果。结果:治疗后,两组患儿的TNF-α、IL-6和CRP水平,PaCO_(2)、HMGB1和sTREM-1水平均较治疗前降低,且研究组患儿上述指标水平显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组患儿的PaO_(2)、SaO_(2)水平均较治疗前升高,且研究组患儿升高幅度更大,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,研究组患儿的总有效率为91.67%(55/60),显著高于对照组的76.67%(46/60),差异有统计学意义(P<0.05)。研究组、对照组患儿的不良反应发生率分别为8.33%(5/60)、10.00%(6/60),差异无统计学意义(P>0.05)。结论:布地奈德吸入气雾剂联合多巴胺对小儿重症肺炎的治疗效果较好,可以减轻患儿症状,增加血氧含量,减轻炎症,安全、可靠。

树突状细胞肝激酶B1信号对FimH黏膜佐剂效应的影响

目的:探究口腔黏膜树突状细胞(dendritic cells,DCs)肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1)表达对于应用黏膜疫苗佐剂反应的影响。方法:使用CD11^(ccre-GFP);LKB1^(fl/fl)条件性敲除(conditional knockout,cKO)小鼠,同窝LKB1 fl/fl小鼠作为野生型(wild type,WT)对照组。首先选6~8周龄cKO与WT小鼠各12只,流式细胞术分选小鼠口腔黏膜DCs,进行转录组高通量测序;其次使用cKO与WT小鼠各16只,建立小鼠黏膜免疫模型,在第0、2和4周用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)模式抗原颊黏膜下注射免疫(cKO-OVA,WT-OVA),鼠伤寒沙门氏菌来源的FimH(FimH-S.typhimurium,FimH-ST)佐剂联合OVA模式抗原颊黏膜下注射免疫(cKO-OVA+FimH-ST,WT-OVA+FimH-ST)。在接种后第3周收集小鼠血清和唾液,通过免疫酶联吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中OVA特异性IgG1和IgG2b、唾液中OVA特异性IgA抗体水平;在接种后第6周,使用流式细胞术检测小鼠颊黏膜和包括下颌下、颈部淋巴结的口腔引流淋巴结(draining lymph node,dLN)中各免疫细胞数目和比例。结果:cKO组口腔黏膜DCs的上调基因在基因本体论(gene ontology,GO)数据库富集到先天免疫反应、B细胞介导的免疫反应;基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)中富集到Toll样受体信号通路和mTOR信号通路。WT-OVA+FimH-ST组相对WT-OVA组血清OVA特异性IgG1和IgG2b、唾液中OVA特异性IgA抗体水平升高;黏膜局部免疫B细胞与浆细胞数目与比例升高。cKO-OVA组血清IgG1和IgG2b、唾液中IgA抗体水平较WT-OVA组升高;dLN中滤泡辅助T细胞(follicular helper T,Tfh)及B细胞比例升高(P<0.05)。但cKO-OVA+FimH-ST组相对cKO-OVA组抗体分泌水平无差异,仅表现为dLN中Tfh和B细胞增多。结论:LKB1通过DCs调控先天免疫反应和B细胞功能;FimH-ST经小鼠口腔黏膜下注射具有佐剂效应;DCs激活口腔黏膜免疫反应依赖LKB1,DCs上LKB1缺陷导致FimH-ST佐剂效应丧失。

消化性溃疡患者HMGB1、PINP和CD_(4)^(+)T细胞变化及与Hp感染的关系

目的探讨消化性溃疡患者高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、I型原胶原N端前肽(PINP)和CD_(4)^(+)T细胞变化及与幽门螺杆菌(Hp)感染的关系。方法选择2019年9月—2021年9月我院收治的消化性溃疡患者97例作为研究对象,根据是否Hp感染分为Hp阳性组(n=63)与Hp阴性组(n=34);另选择同期我院健康体检者60例作为对照组。采用酶联免疫吸附法测定HMGB1和PINP水平;采用流式细胞仪测定CD_(4)^(+)T细胞水平。比较消化性溃疡组与对照组HMGB1、PINP和CD_(4)^(+)T细胞水平;不同Hp感染HMGB1、PINP和CD_(4)^(+)T细胞水平;采用Pearson分析Hp感染与HMGB1、PINP和CD_(4)^(+)T细胞相关性;采用多因素Logistic回归分析HMGB1、PINP和CD_(4)^(+)T细胞与Hp感染的关系。结果消化性溃疡组HMGB1水平高于对照组,PINP和CD_(4)^(+)T细胞水平低于对照组(P<0.05)。Hp阳性组HMGB1水平高于Hp阴性组,PINP和CD_(4)^(+)T细胞水平低于Hp阴性组(P<0.05)。经Pearson分析,HMGB1与Hp感染呈线性正相关,PINP和CD_(4)^(+)T细胞与Hp感染呈线性负相关(P<0.05)。经多因素Logistic回归分析HMGB1、PINP和CD_(4)^(+)T细胞为影响Hp感染危险因素。结论消化性溃疡患者HMGB1水平升高,PINP和CD_(4)^(+)T细胞水平下降,且与Hp感染密切相关,为影响Hp感染的危险因素。

抗磷脂综合征患者血清sVCAM-1、HMGB1与NLRP3炎症小体信号通路与血栓事件的关系

目的探讨抗磷脂综合征(APS)患者血清可溶性血管细胞黏附分子-1(sVCAM-1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)与NOD样受体P3(NLRP3)炎症小体信号通路和血栓事件的关系。方法选择2021年6月至2023年6月上海市浦东新区人民医院收治的124例APS患者作为APS组和67例健康志愿者作为对照组。检测所有受检者的血清sVCAM-1、HMGB1水平、外周血单个核细胞的NLRP3信使核糖核酸(mRNA)和下游炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平。采用Pearson相关性分析血清sVCAM-1、HMGB1水平与外周血单个核细胞的NLRP3 mRNA表达、IL-1β和IL-18水平的相关性。根据是否发生血栓事件将APS患者分为血栓组(n=32)和非血栓组(n=90)。采用多因素Logistic回归分析APS患者发生血栓事件的影响因素。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析sVCAM-1、HMGB1预测APS患者发生血栓事件的价值。结果APS组患者的血清sVCAM-1、HMGB1、IL-1β和IL-18水平以及外周血单个核细胞的NLRP3 mRNA分别为(806.35±204.75)μg/L、(125.42±24.57)μg/L、(13.62±3.09)pg/mL、(16.24±3.72)pg/mL、1.62±0.42,明显高于对照组的(395.12±77.24)μg/L、(35.01±10.30)μg/L、(3.15±0.67)pg/mL、(4.02±1.13)pg/mL、0.85±0.23,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关性分析结果显示,APS组患者的血清sVCAM-1、HMGB1水平与外周血单个核细胞的NLRP3 mRNA以及血清IL-1β和IL-18水平均呈正相关(P<0.05);血栓组患者的血清sVCAM-1、HMGB1水平分别为(915.35±70.28)μg/L、(136.42±10.17)μg/L,明显高于非血栓组的(767.59±61.43)μg/L、(121.51±15.03)μg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);经多因素Logistic回归分析结果显示,3个抗体阳性、高水平sVCAM-1、HMGB1是APS患者发生血栓事件的危险因素(P<0.05);经ROC分析结果显示,血清sVCAM-1联合HMGB预测APS患者血栓事件的曲线下面积(AUC)为0.885,高于单独预测(P<0.05)。结论APS患者血清sVCAM-1、HMGB1水平均增高,且与NLRP3及其下游炎症因子水平增加、血栓事件发生有关,NLRP3炎症小体信号通路的激活可能进一步促进血栓形成。

原因不明复发性流产患者再次妊娠早孕期HMGB1、单核细胞上Tim-3、PD-1表达与免疫失衡的关系

目的探讨原因不明复发性流产(URSA)患者再次妊娠早孕期外周血高迁移率蛋白B1(HMGB1)、单核细胞上T细胞免疫球蛋白黏蛋白结构域相关分子-3(Tim-3)、程序性细胞死亡因子-1(PD-1)表达与Th17/Treg平衡的关系。方法选取2018年1月至2019年2月在海口市妇幼保健院就诊的88例URSA早孕患者作为观察组,同时选取50例正常早孕女性作为对照组,检测并比较两组外周血HMGB1、单核细胞上Tim-3、PD-1表达水平及Th17、Treg细胞等。结果观察组外周血HMGB1水平为(103.29±34.40)ng/mL,明显高于对照组(P<0.05),而单核细胞上Tim-3、PD-1表达分别为(2.88±0.92)%和(2.65±0.90)%,明显低于对照组(P<0.05);观察组外周血Th17和Th17/Treg分别为(3.03±0.89)%和(0.94±0.32),明显高于对照组(P<0.05);而观察组Treg为(3.24±0.72)%,明显低于对照组(P<0.05);观察组和对照组外周血CD3+、CD4+和CD8+T比较,差异无统计学意义(P>0.05);HMGB1与Th17、Th17/Treg呈正相关(r=0.344、0.302,P<0.05),而与Treg呈负相关(r=-0.336,P<0.05)。结论URSA早孕期患者外周血HMGB1水平升高,而单核细胞上Tim-3和PD-1表达下调,其中HMGB1与Th17/Treg平衡紊乱有关。

肝激酶B1在小细胞肺癌中的表达及与患者临床特征的关系

目的探讨肝激酶B1(LKB1)在小细胞肺癌(SCLC)中的表达及与患者临床特征的关系。方法选取45例SCLC患者,取其SCLC组织及相应癌旁组织,采用免疫组化法检测LKB1蛋白的表达情况。比较不同临床特征SCLC患者SCLC组织中LKB1蛋白的表达情况。结果SCLC组织中LKB1蛋白的阳性表达率为71.1%,明显低于癌旁组织的95.6%,差异有统计学意义(P﹤0.01)。不同性别、吸烟史SCLC患者SCLC组织中LKB1蛋白阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);有淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期SCLC患者SCLC组织中LKB1蛋白阳性表达率分别低于无淋巴结转移、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论LKB1蛋白在SCLC中低表达,其表达与淋巴结转移和TNM分期有关,有望作为SCLC患者潜在的治疗靶点和预后评估指标。

柠檬酸盐对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤及LKB1/AMPK信号通路的影响

目的:探讨柠檬酸盐对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤及肝激酶B1(LKB1)/磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)信号通路的影响。方法:将人心肌细胞(HCM)随机分为对照组(常规培养的HCM细胞)、H/R组(缺氧处理2.5 h,复氧处理2 h)、柠檬酸盐低、中、高剂量组(20μmol/mL、40μmol/mL、80μmol/mL柠檬酸盐培养液)、柠檬酸盐高剂量+抑制剂组(3 mg/kg LKB1/AMPK通路抑制剂Doxorubicin HCI、80μmol/mL柠檬酸盐培养液)。采用细胞增殖毒性检测(CCK-8)法测定各组HCM细胞增殖抑制率,生化法测定各组HCM细胞培养液中心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)水平,流式细胞仪检测各组HCM细胞凋亡率,蛋白免疫印迹(Western Bloting)法测定HCM中凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)及LKB1/AMPK通路相关蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,H/R组HCM的细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、CK-MB、LDH及Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与H/R组相比,柠檬酸盐低、中、高剂量组HCM的细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、CK-MB、LDH及Bax蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与柠檬酸盐高剂量组相比,柠檬酸盐高剂量+抑制剂组HCM的细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、CK-MB、LDH及Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:柠檬酸盐可以促进受损的HCM细胞生存,可能与激活LKB1/AMPK信号通路有关。

黄曲霉毒素B1激活核转录因子-κB信号通路引起牛乳腺上皮细胞发生炎性反应

本试验旨在研究不同浓度黄曲霉毒素B1(AFB1)对牛乳腺上皮细胞(MAC-T细胞)中核转录因子-κB(NF-κB)信号通路介导的炎症反应的影响。向MAC-T细胞中分别加入不同浓度的AFB1处理培养液培养24 h,分析AFB1对MAC-T细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)活性、促炎细胞因子含量和基因表达以及NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响。结果显示:1)与对照组相比,2.5、5.0、10.0和20.0μmol/L AFB1处理MAC-T细胞均能显著或极显著降低细胞活力(P<0.05或P<0.01),显著或极显著升高培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性(P<0.05或P<0.01),且呈剂量依赖性。2)与对照组(0μmol/L AFB1)相比,5.0、10.0和20.0μmol/L AFB1处理MAC-T细胞使上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01);5.0μmol/L AFB1处理使MAC-T细胞中IL-1β、IL-8和TNF-αmRNA的相对表达量显著或极显著升高(P<0.05),10.0μmol/L AFB1处理使MAC-T细胞中IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的相对表达量显著或极显著升高(P<0.01),20.0μmol/L AFB1处理使MAC-T细胞中IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的相对表达量极显著升高(P<0.01)。3)与对照组相比,10.0和20.0μmol/L AFB1处理使MAC-T细胞中磷酸化P65(p-P65)、磷酸化核转录因子-κB抑制因子α(p-IκBα)蛋白的相对表达量极显著升高(P<0.01)。上述结果提示,AFB1通过促进炎症相关因子表达和激活NF-κB信号通路,引起MAC-T细胞发生炎性反应。

CCNB1在肝癌中的表达及沉默CCNB1对肝癌细胞的影响

目的:探讨细胞周期蛋白B1(CCNB1)在肝癌(HCC)中的表达及沉默CCNB1基因对肝癌细胞的影响。方法:利用Gene Expression Omnibus(GEO)和Genotype-Tissue Expression(GTEx)数据库中的HCC测序数据,对CCNB1 mRNA的表达水平及其与预后的相关性进行综合分析。在Huh7、SK两种HCC细胞系中沉默CCNB1(sh-CCNB1)检测其对HCC细胞生长、迁移、侵袭和细胞周期的影响。结果:测序数据分析发现,与正常组织比较,CCNB1 mRNA表达水平在多种肿瘤组织中显著升高,在HCC组织中也显著升高(SMD=1.69,95%CI:1.36~2.02,I2=96.2%)。在Huh7、SK细胞系中下调CCNB1表达结果发现,相对于对照组(sh-NC组),sh-CCNB1组细胞增殖受到明显抑制,细胞迁移和侵袭能力均显著下降;与sh-NC组相比,sh-CCNB1使Huh7细胞G0/G1期占比增加(P<0.05),S期减少(P<0.05);使SK细胞S期占比减少(P<0.000 1)、G2/M期占比显著增多(P<0.01)。结论:CCNB1在HCC中高表达,且沉默CCNB1抑制肝癌细胞的生长。

CDK1和CCNB1表达水平在肝细胞癌中的临床意义

目的探究细胞周期蛋白依赖性激酶1(cyclin-dependent kinase 1,CDK1)和细胞周期蛋白B1(cell cycle-related proteins cyclin B1,CCNB1)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达水平及其临床意义。方法采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测患者HCC肿瘤组织和癌旁正常组织中CDK1与CCNB1的相对表达水平,受试者工作特征(ROC)曲线评估CDK1和CCNB1以及两者并联模型在HCC中的诊断价值以及和病理分期的相关性。随访5年,评估患者CDK1和CCNB1表达水平对患者无进展生存期(progression-free survival,PFS)和总生存期(overall survival,OS)的影响。结果CDK1、CCNB1在HCC组织中表达显著上调,二者间呈正相关(r=0.769,P<0.01),且均与HCC病理分期显著正相关(r=0.828、0.726,P<0.01)。CDK1和CCNB1诊断HCC的曲线下面积(AUC)分别为0.817和0.810,联合诊断的AUC值为0.837。相比于CDK1和CCNB1高表达组,CDK1和CCNB1低表达的HCC患者PFS和OS均显著延长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CDK1、CCNB1在HCC中具有较高的临床诊断和预后价值,两者的表达水平和HCC的病理分期密切相关。

核内不均一核糖核蛋白A2/B1在舌鳞状细胞癌中的表达及作用

目的:舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)是口腔颌面部的常见癌症,严重危害人们的生命健康。核内不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1,hnRNP A2/B1)是一种RNA结合蛋白,可调控多种基因的表达,参与多种癌症的发生和发展。本研究旨在探究hnRNP A2/B1对TSCC进展的表达及作用。方法:基于基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)相关芯片GSE146483、GSE85195分析hnRNP A2/B1在OSCC及正常口腔黏膜细胞、组织中的差异表达情况,基于TSCC相关芯片GSE4676分析hnRNP A2/B1表达与TSCC患者无病生存期的相关性。收集2021年7月至12月于湖南省肿瘤医院就诊的30例TSCC患者的癌及癌旁组织样本,采用real-time RT-PCR和蛋白质印迹法验证TSCC患者样本中hnRNP A2/B1的mRNA和蛋白质表达情况。以人TSCC细胞Tca-8113为研究对象,分别转染hnRNP A2/B1空载敲减质粒(sh-NC组)、敲减质粒(sh-hnRNP A2/B1组)、空载过表达质粒(OE-NC组)和过表达质粒(OE-hnRNP A2/B1组)。采用蛋白质印迹法检测hnRNP A2/B1敲减或过表达效率,细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测Tca-8113细胞增殖活性,流式细胞术检测Tca-8113细胞凋亡率。结果:基于GEO数据库中的OSCC相关芯片GSE146483、GSE85195分析发现:hnRNP A2/B1在OSCC及正常口腔黏膜细胞、组织中均存在差异表达(均P<0.01),同时对TSCC相关芯片GSE4676的分析证实hnRNP A2/B1表达与TSCC患者无病生存期呈负相关(P=0.006)。Real-time RT-PCR和蛋白质印迹法结果显示:与癌旁组织样本相比,TSCC组织样本中hnRNP A2/B1的mRNA和蛋白质相对表达水平均显著上调(均P<0.01)。蛋白质印迹法结果显示:Tca-8113细胞在转染敲减或过表达hnRNP A2/B1质粒后,细胞内的hnRNP A2/B1表达水平被显著抑制或促进(均P<0.01)。CCK-8及流式细胞术结果显示:抑制Tca-8113细胞中hnRNP A2/B1的表达可以降低细胞增殖活性(P<0.05),增高细胞凋亡率(P<0.01);促进Tca-8113细胞中hnRNP A2/B1的表达可以增加细胞增殖活性(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.01)。结论:HnRNP A2/B1是调控TSCC细胞增殖和凋亡水平的关键因子,通过抑制hnRNP A2/B1的表达可以降低TSCC细胞的增殖活性,促进TSCC细胞的凋亡。

G_0/G_1期异时相Cyclin B1的表达对细胞凋亡的影响

目的研究G0/G1期异时相细胞周期素B1(Cyclin B1)的大量表达对细胞凋亡的影响。方法首先构建了四环素可诱导表达Cyclin B1的单克隆细胞株,其次,筛选出能最大程度阻滞细胞于G0/G1期的胸腺嘧啶核苷(Thymidine)浓度,最后,在阻滞的时间内加入四环素诱导Cyclin B1表达,并用免疫印迹和流式细胞仪检测证实后,用膜联蛋白/碘化丙啶(AnnexinⅤ/PI)双染法和API法检测细胞凋亡。结果终浓度为5mmol/L的胸腺嘧啶核苷能阻滞单克隆细胞株在G0/G1期,并至少维持48h;在细胞同步化期间加四环素诱导后,Cyclin B1表达增加,并且G0/G1期特异性细胞凋亡增加。结论 G0/G1期异时相Cyclin B1的表达能诱导细胞凋亡。

TZM-b1细胞系检测我国HIV-1病毒表型耐药性

目的利用TZM-b1细胞系检测艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)对逆转录酶抑制剂(AZT、d4T、ddI、NVP)的药物敏感性,并用该方法检测中国抗病毒治疗失败者的表型耐药。方法用两种实验室适应毒株SF33和ⅢB来评价TZM-bl细胞方法的敏感性;用外周血单个核细胞(PBMC)共培养法分离扩增抗病毒治疗失败者的临床毒株;用TZM-b1法检测16例临床毒株对逆转录酶抑制剂的表型耐药。结果AZT、d4T、ddI、NVP对SF33/ⅢB毒株的抑制50%病毒复制的药物浓度(IC_(50))分别为0.009/0.005μumol/L、0.125/0.113μmol/L、0.495/1.905μmol/L、0.093/ 0.045μmol/L。16例临床分离毒株中分别有13(81.396)株、13(81.396)株对AZT和NVP耐药。其中7株(53.8%)显示对AZT高度耐药;对NVP耐药的均为高度耐药,其中8株IC_(50)升高1000倍以上。结论TZM-b1细胞系可用来快速检测HIV-1病毒表型耐药。我国抗病毒治疗失败者的表型耐药主要表现为对AZT和NVP耐药。

Genistein对腺样囊性癌cyclinB1蛋白表达和细胞增殖周期的影响

目的研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂genistein抑制人涎腺腺样囊性癌(SACC-83)细胞生长与cyclin B1蛋白表达和细胞增殖周期的关系。方法MTT法测定genistein对SACC-83细胞体外生长的作用;流式细胞仪测定细胞增殖周期;Western Blot技术检测cyclin B1和Cdk1蛋白,并利用电泳凝胶成像分析软件对其结果进行量化分析;采用SPSS11.5统计软件对结果进行统计学分析。结果Genistein对SACC-83细胞生长有抑制作用,且当其作用到一定时间达到一定的浓度后,该作用与剂量及时间呈依赖关系;Genistein作用的细胞与对照细胞比较,G0/G1期细胞数减少,G2/M期细胞数增多,cyclin B1和Cdk1蛋白水平降低。结论Genistein对SACC-83细胞生长的抑制作用与其调节cyclin B1和Cdk1蛋白表达和细胞增殖周期有关。

AS-mCLB1重组质粒体外抗肿瘤及化疗增敏作用

研究反义全长小鼠细胞周期蛋白B1重组质粒(pAS-mCLB1)体外抗肿瘤及化疗增敏作用。扩增后少量抽提并纯化pAS-mCLB1,通过脂质体将其转染入小鼠露易丝肺癌(LL/2)细胞,RT-PCR和Western印迹测定细胞内细胞周期蛋白B1的表达,观察转染后细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。细胞转染48h后,用化疗药物健择(gemcitabine;0.2μmol/L)处理24h,MTT法测定健择对细胞的杀伤作用。研究提示pAS-mCLB1转染后LL/2细胞形态明显异常,细胞内细胞周期蛋白B1表达显著下调,细胞周期阻滞于G1期,增殖受抑,凋亡增加;健择对pAS-mCLB1转染后LL/2细胞的杀伤作用显著增强。重组质粒pAS-mCLB1体外具有明显的抗肿瘤作用,并能增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,估计上述作用与其下调肿瘤细胞内细胞周期蛋白B1表达,从而诱导细胞周期阻滞及凋亡等作用相关。

CD5阳性B1细胞增殖易感基因的定位

目的 :定位NZB、NZW及NZB WF1小鼠外周血B1细胞增殖的易感基因。方法 :建立 (NZB×NZW )F1×NZB回交小鼠模型 ,用覆盖小鼠全部常染色体的多态性微卫星遗传标记数量性状位点 (QTL)分析进行基因定位。结果 :B1细胞增殖的易感基因与小鼠的第 2、4、17号染色体上的微卫星遗传标记D2Mit 10 1、D4Mit 11及D17Mit 6 1肯定连锁 (Lods值 >3) ,其中D2Mit10 1、D4Mit11位点来源于NZB ,D17Mit 6 1位点来源于NZW。在D2Mit10 1位点附近存在Ltk、Rag1、2基因 ,在D4Mit 11位点附近存在Lck基因 ,在D17Mit6 1位点附近存在H 2及TNF α基因。结论 :NZB、NZW及NZB WF1小鼠外周血B1细胞增殖受多基因调控 ,易感基因分别位于NZB的Ltk、Rag1、2及Lck基因编码区和位于NZW的H 2、TNF α基因编码区 ,这些易感基因之间有相互促进的叠加效应。