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题名儿茶酚胺氧位甲基转移酶的克隆表达及纯化
被引量:2
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作者
李付鸾
谢忠平
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机构
中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所
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出处
《中国生化药物杂志》
CAS
CSCD
2007年第1期17-19,共3页
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文摘
目的将儿茶酚胺氧位甲基转移酶基因(COMT)克隆到原核表达载体进行可溶性表达,制备纯化COMT蛋白,为深入研究COMT的功能提供材料。方法运用分子生物学方法构建融合表达质粒Pet22b+-COMT。将Pet22b+-COMT转入E.coli BL21(DE3)表达菌株,利用IPTG诱导表达,并用亲和色谱纯化COMT。结果经测序分析成功构建了融合表达质粒Pet22b+-COMT。COMT基因在E.coli BL21(DE3)中表达相对分子质量约为28000的蛋白质,纯化后,COMT蛋白的纯度大于90%。结论COMT基因在原核中得到良好的表达,得到了纯度较高的蛋白质,为酶学活性研究奠定了基础。
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关键词
儿茶酚胺氧位甲基转移酶
Pet22b^+
b121(de3)
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Keywords
catechol- O-methyhransferase (COMT)
Pet22b ^+
BL21 (de3)
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分类号
R329
[医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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题名抗黄曲霉毒素B1单链抗体在大肠杆菌中的表达及优化
被引量:2
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作者
杨炼
张艳红
丁虎生
王丽云
陈卫
张灏
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机构
江南大学食品学院
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出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第7期880-888,共9页
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基金
教育部新世纪优秀人才支持计划资助项目(NCET-06-0482)~~
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文摘
【目的】继杂交瘤技术后,重组抗体技术是新一代的抗体制备技术。然而如何用原核系统中较多地表达具有生物活性的单链抗体,避免包涵体形成仍是一个需要探讨的问题。【方法】将目的基因scFv-H4克隆到载体pET22b上,分别转入大肠杆菌BL21(DE3)和Origami(DE3)中,通过改变诱导温度和IPTG浓度,比较具有生物活性的蛋白量以及包涵体的量。【结果】在BL21(DE3)中,pET22b能产生大量表达scFv-H4,而BL21(DE3)的含有trxA和gor双突变的衍生菌Origami(DE3)表达的scFv-H4的总量较少,但是具有生物活性的蛋白量较多(35 mg/L培养物),具有生物活性的蛋白比例也较BL21(DE3)高。另外IPTG的浓度对scFv-H4表达没有显著影响,而较高的诱导温度会促使表达的蛋白形成包涵体。【结论】在较低的温度下,pET22b能在Origami(DE3)能较好地表达具有生物活性的scFv-H4,减少包涵体的比例,为后续的抗体性质研究和改造奠定了基础。
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关键词
黄曲霉毒素
单链抗体
表达
b121(de3)
Origami(de3)
pET22b
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Keywords
aflatoxin
scFv
expression
BL21(de3)
pET
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分类号
Q786
[生物学—分子生物学]
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