B16-F10-luc-G5黑色素瘤细胞生物学特性的研究

目的:探讨B16-F10-luc-G5黑色素瘤细胞的生物学特性。方法:倒置荧光显微镜下连续观察B16-F10-luc-G5细胞生长动态。流式细胞术检测冻存复苏后、培养基漂浮细胞、胰酶消化损伤后的细胞死亡率以评价其对实验损伤的耐受性。1×104/孔B16-F10-luc-G5细胞按1∶2梯度稀释至0.78×102/孔,加入底物荧光素后检测其生物发光特性。Babl/C和C57 bl/6雄性小鼠各10只接种该细胞,目测肿瘤生长速度和活体成像监测Babl/C小鼠移植瘤生长动态以评价其成瘤特性。结果:B16-F10-luc-G5细胞生长动态符合典型B16-F10细胞特性,无自发及激发荧光。B16-F10-luc-G5细胞冻存、漂浮细胞及对数生长期细胞消化后死亡率分别为23.8%、35.8%和4.8%。B16-F10-luc-G5细胞数与实测平均光子数之间存在线性回归关系,检测光子数可反映细胞数目。两组小鼠移植成瘤率均为100%,平均肿瘤出现时间差异显著(t=9.05,P<0.05),移植瘤病理符合B16黑色素瘤典型生长特点;活体成像监测可灵敏监测移植瘤生长动态。结论:B16-F10-luc-G5细胞具有生长快、对各种实验操作耐受性好、标记生物发光基因易追踪等优点,且其一般特性与B16-F10细胞基本相同,是肿瘤学研究良好的实验材料。

具有抑制酪氨酸酶活性乳酸菌的筛选及其成分分析

以抑制酪氨酸酶活性为筛选指标,对5株乳酸菌发酵上清液、菌体细胞和破碎提取物的酪氨酸酶抑制活性和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率进行分析,结果表明,菌株发酵上清液抑制酪氨酸酶能力远高于菌体细胞和破碎提取物,其中MNJ-9菌株发酵上清液抑制酪氨酸酶能力可达68.9%。菌体细胞和破碎提取物仅为50.9%和34.8%。MNJ-9菌株发酵上清液对DPPH自由基清除能力可达93.1%。因此,对MNJ-9菌株进行16S rDNA菌种鉴定。基于液相色谱-质谱非靶向代谢组学对MNJ-9菌株发酵上清液进行主要成分分析。对其主要成分的10种化合物进行抑制率测定,结果表明,5-氨基戊酸抑制率最高。将5-氨基戊酸对小鼠黑色素瘤细胞(B16F10)进行细胞毒性实验、黑色素含量测定、细胞酪氨酸酶活性测定评价其美白能力。结果表明,5-氨基戊酸质量浓度为70μg/mL连续培养72 h时细胞存活率≥80%,细胞无明显毒性;质量浓度为10~70μg/mL时,细胞内黑色素含量和酪氨酸酶活性分别为85.4%~45.2%和76.53%~40.5%,说明5-氨基戊酸具有一定的美白能力。