甘草黄酮对B16黑色素瘤细胞代谢的影响

目的 研究甘草黄酮对B16黑色素瘤细胞的作用,并与一些美白药物进行比较,探讨其美白的作用及安全性。方法 测定药物对体外培养的B16黑色素瘤细胞系的细胞活力、细胞酪氨酸酶活性及细胞内黑素含量的影响,并与氢醌、熊果苷及维生素C磷酸酯的结果比较。结果 几种化合物对B16细胞酪氨酸酶活性均有抑制作用,且呈浓度依赖性;药物作用后细胞黑素生成量显著减少。甘草黄酮和维生素C磷酸酯的细胞毒性较低,而氢醌和熊果苷具有明显的细胞毒性。结论 甘草黄酮有较强的抑制酪氨酸酶活性和黑素生成的作用,同时对黑素细胞的细胞毒性较低,是较为安全有效的美白药物。

蛇葡萄素体内外对小鼠B16黑色素瘤侵袭和转移的抑制作用

目的 :研究蛇葡萄素对B16小鼠黑色素瘤体内外抗侵袭和转移的作用。方法 :B16细胞由尾静脉注入C5 7BL/ 6小鼠体内建立实验性肺转移模型 ,蛇葡萄素以 3个剂量从接种瘤细胞前一天腹腔给药 ,连续 18d ,于停药后第 2天观察肺转移瘤灶数。B16细胞经蛇葡萄素处理 3d ,用具有聚碳酸酯和重建基底膜 (Matrigel)的Tran swell小室侵袭模型 ,研究药物处理后细胞侵袭、趋化运动、粘附能力的改变。结果 :剂量为 15 0 ,2 0 0 ,2 5 0mg·kg-1的蛇葡萄素可抑制小鼠肺转移瘤灶形成 ,与溶剂对照组比 ,抑制率分别为 30 .97% ,4 0 .5 8% ,6 1.16 % (P <0 .0 5 )。经 2 0 ,4 0 ,80 μmol·L-1各浓度蛇葡萄素处理后 ,对B16细胞侵袭人工基底膜的抑制率分别为 36 .0 6 % ,5 9.5 8% ,79.0 9% (P <0 .0 1) ;对细胞的趋化运动抑制率分别为 5 1.5 9% ,5 6 .5 1% ,6 6 .75 % (P <0 .0 1) ;显著降低B16细胞与基质成分层粘连蛋白、纤维粘连蛋白及Matrigel的粘附作用。 结论 :蛇葡萄素具有抑制黑色素瘤的侵袭和转移的作用。

桃红四物汤Ⅱ号抑制小鼠B16黑色素瘤生长及VEGF,KDR/FLK-1表达

目的:观察桃红四物汤Ⅱ号对小鼠B16黑色素瘤生长、血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体-2(KDR/FLK-1)表达及肿瘤微血管密度(MVD)值的影响。方法:采用C57BL/6J小鼠皮下接种B16黑色素瘤细胞建立模型,分别给予2.5,5,10 g.kg-1桃红四物汤Ⅱ号水煎剂、环磷酰胺0.05 g.kg-1及联合用药桃红四物汤Ⅱ号10 g.kg-1+环磷酰胺0.025 mg.kg-1,检测各组肿瘤体积、重量、VEGF和KDR/FLK-1表达及肿瘤MVD值。结果:桃红四物汤Ⅱ号5,10 g.kg-1及联合用药组肿瘤体积、重量、VEGF和KDR/FLK-1表达及肿瘤MVD值均较生理盐水组明显降低(P<0.01)。结论:桃红四物汤Ⅱ号能抑制小鼠B16黑色素瘤的生长,其抗肿瘤机制可能与抗血管生成作用有关。

20(S)-人参皂苷Rg3对B16黑色素瘤生长的抑制作用

目的 :探讨 2 0 (S) 人参皂苷Rg3对B16黑色素瘤生长的影响。 方法 :体内建立B16实体瘤模型及PCNA免疫组织化学染色 ,体外应用MTT法、生长曲线观察Rg3对B16黑色素瘤生长影响。 结果 :实体瘤模型中 ,Rg3各组瘤重明显低于对照组 (P <0 0 1) ,且Rg3组PCNALI与对照组比较有差异 (P <0 0 5 ) ,随着Rg3给予浓度的增加 ,PCNALI逐渐降低。体外实验观察到Rg3对B16黑色素瘤细胞生长同样有抑制作用。 结论

土贝母苷甲对小鼠B16黑色素瘤和Lewis肺癌转移的抑制作用

目的:本研究旨在探讨土贝母苷甲对小鼠B16黑色素瘤和Lewis肺癌转移的影响。方法:采用裸BALB/c小鼠B16黑色素瘤实验转移和裸BALB/c小鼠Lewis肺癌自发转移模型研究土贝母苷甲对肿瘤转移的影响;采用免疫组织化学法检测土贝母苷甲对转移相关基因CD44v6、ErbB-2和nm23-H1表达的影响。结果:腹腔注射低于全身中毒水平剂量的土贝母苷甲明显减少接种B16黑色素瘤细胞小鼠的肺重和肺转移灶数量,而对小鼠的健康和活力无明显影响;土贝母苷甲(2、3 mg.kg-1.d-1×14 d)和环磷酰胺(50 mg.kg-1.wk-1×2 d)对B16黑色素瘤细胞肺转移的抑制率分别为68.8%、82.8%和49.1%。土贝母苷甲治疗组小鼠Lewis肺癌原发肿瘤的平均瘤重明显低于对照组(P<0.05)。土贝母苷甲(2、3 mg.kg-1.d-1×14 d)和环磷酰胺(50 mg.kg-1.w-1×2 d)治疗组小鼠的肝转移抑制率分别为46.3%、52.0%和54.7%。土贝母苷甲显著下调促转移基因CD44v6和ErbB-2的表达,上调抑转移基因nm23-H1的表达。结论:土贝母苷甲对小鼠B16黑色素瘤的实验性转移和Lewis肺癌的自发性转移都有显著的抑制作用。土贝母苷甲对肿瘤转移的这种抑制作用与其抑制原发肿瘤生长、下调促转移基因CD44v6和ErbB-2及上调抑转移基因nm23-H1的表达有关,提示土贝母苷甲是一个阻止癌扩散和转移的候补化合物。

茯苓多糖对B16黑色素瘤人工肺转移模型的影响

[目的]探讨茯苓多糖对B16黑色素瘤小鼠人工肺转移的影响,并对其作用机制进行初步研究。[方法]C57BL/6小鼠接种B16黑色素瘤,分为茯苓多糖高、低剂量组、顺铂组、模型组,茯苓多糖高、低剂量组分别给予每只小鼠茯苓多糖0.5 mg、0.33 mg,顺铂组给予顺铂0.04 mg,模型组给予生理盐水,接种瘤细胞后第2天开始尾静脉注射给药,隔天给药1次。观察小鼠一般状态,造模后21 d取肺,计数肺表面转移灶个数、HE染色检测肺微小转移灶个数,并检测外周血白细胞数量及脾质量、脾指数。[结果]顺铂能够抑制肺转移,同时降低小鼠体质量、外周血白细胞数量、脾质量和脾指数。而茯苓多糖高、低剂量组对B16荷瘤鼠的体质量无明显影响,茯苓多糖高剂量可明显降低肺表面转移灶个数,茯苓多糖高、低剂量可减少肺微小转移灶个数,高剂量组外周血白细胞数量明显降低,低剂量组与模型组无统计学差异,低剂量可增加B16荷瘤鼠的脾质量和脾指数,高剂量对B16荷瘤鼠的脾质量和脾指数无明显影响。茯苓多糖高、低剂量组脾质量和脾指数均高于顺铂组。[结论]茯苓多糖能够抑制尾静脉注射B16荷瘤小鼠肺转移,增加其脾质量和脾指数,无明显增加其外周血白细胞数量的作用,推测活化外周血白细胞,增强免疫功能可能参与茯苓多糖抑制肿瘤转移的机制。

Angiostatin的分离纯化及对B16黑色素瘤的抑制作用

目的:研究Angiostatin对黑色素瘤的治疗作用.方法:从人血浆组分Ⅲ中用亲和层析的方法分离Plasminogen和通过离子交换层析和分子筛技术得到弹性蛋白酶纯品.经此酶分离Plasminogen进行有限酶解,产物经亲和层析分离得到Angio-statin.结果:体外实验表明,Angiostatin能显著抑制牛主动脉弓内皮细胞的增殖.体内实验发现,以0.6 mg/kg·d的剂量腹腔注射14d后,B16黑色素瘤生长抑制率达77%(P<0.05);以小鼠尾静脉注射的方法建立黑色素瘤转移模型,采用同样的方法冶疗18d后,B16黑色素瘤的肺转移率降低了65%(P<0.05).结论:本研究为Angiostatin用于黑色素瘤的治疗提供了实验依据,说明Angiostin在肿瘤治疗方面有着广泛的应用前景.

马尾松树皮提取物对小鼠B16黑色素瘤细胞中黑色素生成抑制效果及其机制的初步研究

目的探讨马尾松树皮提取物(Pinus massoniana bark extract,PMBE)抑制小鼠B16黑色素瘤细胞中黑色素的生成效果及其分子机制。方法 10～50μg/ml的PMBE与小鼠B16黑色素瘤细胞共培养后进行各项细胞学研究:MTT法检测PMBE对细胞的毒性;以左旋多巴为底物测定PMBE对酪氨酸酶(TYR)活性的抑制作用;DCM法检测PMBE对细胞ROS的清除能力;比色法测定PMBE对细胞内黑色素生成的抑制效果以及对细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、GSH/GSSG的影响;RT-PCR检测酪氨酸酶及其相关蛋白1(TRP-1)和2(TRP-2)在mRNA水平表达量的影响。结果 PMBE对小鼠B16黑色素瘤细胞的增殖无明显影响,并可显著减少细胞内的黑色素含量。另外,PMBE对活性氧具有很强的清除能力,同时可上调细胞内GSH/GSSG比率,从而增强细胞的还原力。PMBE还对酪氨酸酶活性表现出了一定的抑制效果,但这种抑制却并不发生在mRNA水平。结论 PMBE对小鼠B16黑色素瘤细胞内黑色素生成具有显著抑制效果并主要通过降低酪氨酸酶活性和清除活性氧来实现。

人参皂苷Rh2对B16黑色素瘤细胞侵袭、转移能力的影响

目的探讨人参皂苷Rh2对B16黑色素瘤细胞侵袭、转移能力的影响。方法培养B16黑色素瘤细胞,同时对其进行药物处理,采用四唑盐比色(MTT)法对细胞活力进行检测。采用划痕试验观察细胞的愈合情况,评价其转移能力;Transwell小室侵袭实验观察细胞侵袭情况。结果细胞存活力实验显示,不同浓度的人参皂苷Rh20、25、50、100μmol/L对B16黑色素瘤细胞生存率的影响比较差异无统计学意义(P>0.05);随着剂量浓度的增加,经人参皂苷Rh2处理的B16黑色素瘤细胞穿越小室的细胞数明显减少,并呈剂量效应关系(P<0.05);细胞迁移的距离随人参皂苷Rh2剂量浓度的增加而缩短。结论人参皂苷Rh2能显著抑制B16黑色素瘤细胞迁移及抑制细胞穿越小室,具有抑制细胞B16黑色素瘤细胞侵袭及非定向迁移的作用;随人参皂苷Rh2剂量增加,其抑制作用增强。

人参皂苷Rg_3抑制B16黑色素瘤生长和诱导凋亡的实验研究

目的观察人参皂苷Rg3抑制黑色素瘤生长和诱导其凋亡的作用并探讨其可能的作用机制。方法采用B16黑色素瘤实体瘤模型和TUNEL(TdT-mediated dUTP nick-end labeling)染色观察Rg3对黑色素瘤生长和诱导凋亡的作用,免疫荧光染色方法检测caspase-3的表达情况。结果实体瘤模型中,Rg3各组瘤重明显低于对照组(P<0.01),并且TUNEL染色和caspase-3免疫荧光染色见Rg3各组细胞阳性率均高于对照组(P<0.05)。结论Rg3抑制B16黑色素瘤生长,并且促进肿瘤细胞caspase-3的活化和表达,诱导肿瘤细胞凋亡。

健脾理气中药对荷B16黑色素瘤小鼠肝转移的干预作用

目的观察健脾理气中药对C57BL/6小鼠肝转移的干预作用。方法雌性小鼠50只,随机分为空白组、荷瘤组、脾虚荷瘤组、中药荷瘤组、中药脾虚荷瘤组,每组各10只。以异位接种法在C57BL/6小鼠中建立B16黑色素瘤肝转移模型。空白组、荷瘤组予灌胃冷开水,脾虚荷瘤组灌胃大黄合剂,中药荷瘤组灌胃健脾理气合剂,中药脾虚荷瘤组予灌胃大黄合剂与健脾理气合剂。连续给药12d,停药后次日将所有动物脱椎处死,眼球摘除法取血进行血浆分离;对血清DNA进行定量并观察健脾理气中药对荷瘤肝转移小鼠生存质量、肿瘤生长和肝转移的影响。结果在正常小鼠中,血循环DNA为(62.4±25.52)ng/ml、荷瘤伴有肝转移小鼠为(241±73.7)ng/ml(P<0.01);用健脾理气中药抑制肿瘤生长和转移的同时,荷瘤小鼠血循环DNA也同步下降。结论健脾理气中药可显著地抑制小鼠B16黑色素瘤脾脏种植瘤的生长,能降低脾虚荷瘤组肝转移的发生率,降低脾虚荷瘤组肝转移的分期,降低荷瘤小鼠血微量DNA。

B16黑色素瘤皮内移植瘤模型的建立

背景与目的:建立B16黑色素瘤细胞(简称B16细胞)皮内移植瘤模型。材料与方法:制备商品源B16细胞悬液,按每只C57BL鼠接种0.1 ml(3×105个)B16细胞于后肢外侧皮内;分离、培养移植瘤源B16细胞,倒置显微镜下观察细胞形态。结果:移植瘤出现时间为(9.6±1.2)d,致瘤率为100%;皮内注射B16细胞18 d内,肿瘤形态呈圆形或类圆形,边缘清楚;移植瘤源原代B16细胞多为圆形、类圆形或短梭形,商品源B16细胞为梭形或不规则形;HE染色表明移植瘤内有大量B16细胞。结论:B16细胞皮内移植瘤模型易于对肿瘤生长的观察和测量,是早、中期肿瘤研究的合适模型之一。

三氧化二砷抑制小鼠B16黑色素瘤肺转移作用的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对小鼠B16黑色素瘤肺转移的抑制作用。方法 B16细胞静脉接种C57BL/6J小鼠,观察腹腔注射As2O3对小鼠肺组织重量及肿瘤肺转移结节的影响;HE染色、Ⅷ-RAg免疫组化染色观察肿瘤肺转移结节中微血管密度;CellTiter 96 Aqueous One试剂检测细胞黏附率。结果 As2O3能显著抑制小鼠B16黑色素瘤的肺转移。实验组和对照组肺组织重量分别为(0.139±0.013)g和(0.353±0.070)g;肺转移结节数分别为(20.42±1.78)个和(61.42±3.09)个;每个视野的微血管数分别为(3.25±0.75)个和(7.50±1.45)个;两组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。As2O3对细胞黏附率有显著影响,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 As2O3具有显著的抗肿瘤转移效应,可能与其抑制血管生成及增强细胞黏附有关。

血清药理学方法研究蛇葡萄素抗B16黑色素瘤的作用

目的:研究蛇葡萄素对黑色素瘤的抑制作用。方法:以血清药理学方法考察不同剂量的蛇葡萄素含药血清对B16黑色素瘤细胞的抑制作用,分别用MTT法及流式细胞术进行评价。结果:0.420mmol/kg、0.560mmol/kg剂量组的C57BL/6小鼠含药血清能有效抑制黑色素瘤B16细胞,与空白血清中加入浓度相当的蛇葡萄素的抑制率相同;两个剂量组的含药血清使肿瘤细胞的分裂增殖指数分别降低了19.1％、21.7％。结论:蛇葡萄素在血药浓度达峰期对小鼠黑色素瘤B16细胞的抑制可能以原型物形式起作用,抑制细胞的DNA合成。

丹参酮Ⅰ抑制小鼠B16黑色素瘤细胞研究

将丹参酮Ⅰ(含量为90%)配制成不同浓度作用于体外培养的B16细胞,对B16细胞用MTT法检测药物对细胞生长抑制率,收集并采用PI染色,观察细胞的形态,通过流式细胞术(FCM)检测细胞周期及凋亡率。结果表明:不同质量浓度的(5、4、3μg/mL)丹参酮I对B16细胞的抑制作用均有明显的剂量和时间效应;丹参酮I可以使B16细胞周期的构成发生明显的变化;丹参酮I对B16细胞的生长有明显的抑制作用,作用机制之一是使S期细胞的比例降低,促使细胞凋亡。

表达Angiostatin基因的B16黑色素瘤体内抑制作用

目的:研究表达Angiostatin基因的B16黑色素瘤的体内生长行为.方法:通过改造Plasminogen cDNA得到Angiostatin基因,构建成真核表达载体pAGAGS3后导入B16黑色素瘤细胞使其表达.结果:表达Angiostatin的B16黑色素瘤细胞体外生长速率和软琼脂中克隆形成能力均未改变.但接种小鼠26d后,体内生长抑制率达87%(P<0.01).结论:表达Angiostatin的B16黑色素瘤体内生长受到显著抑制.

小鼠B16黑色素瘤细胞核迁移蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

利用RT-PCR方法从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆了全长核迁移蛋白C(Nuclear distribution C,NUDC)基因,构建了该基因的毕赤酵母表达质粒pPICZaA-NUDC并在受体细胞Pichia pastorisGS115中获得表达,通过制备融合表达蛋白的多克隆抗体分析其对黑色素瘤细胞活性的影响。结果表明,克隆的NUDC基因全长1 000 bp,含有完整的编码框,经SDS-PAGE和Western blotting分析表明,该基因相对分子质量约为45 kD。表达的蛋白能与兔抗NUDC抗体发生反应,制备的NUDC蛋白抗体可抑制黑色素瘤细胞生长。

IL—2与化疗药物合用对B16黑色素瘤的细胞毒作用

目的 研究IL—2与DTIC、DDP不同联合方案对B16黑色素瘤的细胞毒作用,为临床合理应用提供依据。方法 采用MTT法检测各实验组的光密度(OD值),计算杀伤率。结果 同时加IL—2组及先加IL—2,3小时后加DTIC组对B16抑制率降低,与单药DTIC比较有显著差异(t=3.05,P<0.05;t=5.51,P<0.01)。同时给DDP和IL—2组或先加IL—2,3小时后再加DDP组对B16抑制率影响不大;与单药DDP比较没有显著差异(t=0.43,P>0.05;t=0.49,P>0.05)。先加DTIC,3小时后再加IL—2组,与单药DTIC对B16的杀伤率比有所下降,但没有统计学显著差异(t=1.65,P>0.05)。先加DDP,3小时后再加IL—2组与单药DDP对B16的细胞毒作用相比,抑制率有显著提高(t=3.99,P<0.05)。结论 IL—2能提高DDP的细胞毒作用,且应在先使用化疗药物的基础上给药。

利凡诺对B16黑色素瘤细胞生长及MMP-2、MMP-9表达的影响

目的:观察利凡诺对体外培养的B16黑色素瘤细胞生长状态及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,研究利凡诺的抗肿瘤转移作用。方法:用噻唑蓝(MTT)法检测利凡诺对B16黑色素瘤细胞的生长抑制率;酶联免疫吸附法检测细胞培养上清的MMP-2蛋白相对含量;免疫细胞化学染色检测MMP-2、MMP-9蛋白表达情况。结果:MTT法检测结果显示,不同浓度的利凡诺对细胞都有明显抑制并伴有时间及浓度依赖性;6.25、12.5μg.ml-1的利凡诺组在72 h与同时段对照组比有显著差异(P<0.05);利凡诺各药物组的MMP-2、MMP-9蛋白阳性表达随药物浓度的增加而减弱。结论:利凡诺可以抑制B16细胞的生长,并且具有潜在的抑制肿瘤侵袭和转移的作用。

B16黑色素瘤移植模型的建立

用不同密度B16小鼠黑色素瘤细胞接种于小鼠前腋部皮下,观察接种细胞密度与肿瘤生长、肿瘤出现以及与小鼠存活时间的关系.实验结果表明B16细胞的致瘤率为100%,肿瘤的出现、生长及小鼠存活时间在各个接种密度之间存在差异.