甘草黄酮对B16黑色素瘤细胞代谢的影响

目的 研究甘草黄酮对B16黑色素瘤细胞的作用,并与一些美白药物进行比较,探讨其美白的作用及安全性。方法 测定药物对体外培养的B16黑色素瘤细胞系的细胞活力、细胞酪氨酸酶活性及细胞内黑素含量的影响,并与氢醌、熊果苷及维生素C磷酸酯的结果比较。结果 几种化合物对B16细胞酪氨酸酶活性均有抑制作用,且呈浓度依赖性;药物作用后细胞黑素生成量显著减少。甘草黄酮和维生素C磷酸酯的细胞毒性较低,而氢醌和熊果苷具有明显的细胞毒性。结论 甘草黄酮有较强的抑制酪氨酸酶活性和黑素生成的作用,同时对黑素细胞的细胞毒性较低,是较为安全有效的美白药物。

马尾松树皮提取物对小鼠B16黑色素瘤细胞中黑色素生成抑制效果及其机制的初步研究

目的探讨马尾松树皮提取物(Pinus massoniana bark extract,PMBE)抑制小鼠B16黑色素瘤细胞中黑色素的生成效果及其分子机制。方法 10～50μg/ml的PMBE与小鼠B16黑色素瘤细胞共培养后进行各项细胞学研究:MTT法检测PMBE对细胞的毒性;以左旋多巴为底物测定PMBE对酪氨酸酶(TYR)活性的抑制作用;DCM法检测PMBE对细胞ROS的清除能力;比色法测定PMBE对细胞内黑色素生成的抑制效果以及对细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、GSH/GSSG的影响;RT-PCR检测酪氨酸酶及其相关蛋白1(TRP-1)和2(TRP-2)在mRNA水平表达量的影响。结果 PMBE对小鼠B16黑色素瘤细胞的增殖无明显影响,并可显著减少细胞内的黑色素含量。另外,PMBE对活性氧具有很强的清除能力,同时可上调细胞内GSH/GSSG比率,从而增强细胞的还原力。PMBE还对酪氨酸酶活性表现出了一定的抑制效果,但这种抑制却并不发生在mRNA水平。结论 PMBE对小鼠B16黑色素瘤细胞内黑色素生成具有显著抑制效果并主要通过降低酪氨酸酶活性和清除活性氧来实现。

人参皂苷Rh2对B16黑色素瘤细胞侵袭、转移能力的影响

目的探讨人参皂苷Rh2对B16黑色素瘤细胞侵袭、转移能力的影响。方法培养B16黑色素瘤细胞,同时对其进行药物处理,采用四唑盐比色(MTT)法对细胞活力进行检测。采用划痕试验观察细胞的愈合情况,评价其转移能力;Transwell小室侵袭实验观察细胞侵袭情况。结果细胞存活力实验显示,不同浓度的人参皂苷Rh20、25、50、100μmol/L对B16黑色素瘤细胞生存率的影响比较差异无统计学意义(P>0.05);随着剂量浓度的增加,经人参皂苷Rh2处理的B16黑色素瘤细胞穿越小室的细胞数明显减少,并呈剂量效应关系(P<0.05);细胞迁移的距离随人参皂苷Rh2剂量浓度的增加而缩短。结论人参皂苷Rh2能显著抑制B16黑色素瘤细胞迁移及抑制细胞穿越小室,具有抑制细胞B16黑色素瘤细胞侵袭及非定向迁移的作用;随人参皂苷Rh2剂量增加,其抑制作用增强。

小鼠B16黑色素瘤细胞核迁移蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

利用RT-PCR方法从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆了全长核迁移蛋白C(Nuclear distribution C,NUDC)基因,构建了该基因的毕赤酵母表达质粒pPICZaA-NUDC并在受体细胞Pichia pastorisGS115中获得表达,通过制备融合表达蛋白的多克隆抗体分析其对黑色素瘤细胞活性的影响。结果表明,克隆的NUDC基因全长1 000 bp,含有完整的编码框,经SDS-PAGE和Western blotting分析表明,该基因相对分子质量约为45 kD。表达的蛋白能与兔抗NUDC抗体发生反应,制备的NUDC蛋白抗体可抑制黑色素瘤细胞生长。

利凡诺对B16黑色素瘤细胞生长及MMP-2、MMP-9表达的影响

目的:观察利凡诺对体外培养的B16黑色素瘤细胞生长状态及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,研究利凡诺的抗肿瘤转移作用。方法:用噻唑蓝(MTT)法检测利凡诺对B16黑色素瘤细胞的生长抑制率;酶联免疫吸附法检测细胞培养上清的MMP-2蛋白相对含量;免疫细胞化学染色检测MMP-2、MMP-9蛋白表达情况。结果:MTT法检测结果显示,不同浓度的利凡诺对细胞都有明显抑制并伴有时间及浓度依赖性;6.25、12.5μg.ml-1的利凡诺组在72 h与同时段对照组比有显著差异(P<0.05);利凡诺各药物组的MMP-2、MMP-9蛋白阳性表达随药物浓度的增加而减弱。结论:利凡诺可以抑制B16细胞的生长,并且具有潜在的抑制肿瘤侵袭和转移的作用。

吐温80合并温热对B16黑色素瘤细胞hsp70、c-fos、Ubiquitin蛋白表达的影响

吐温８０合并温热对Ｂ１６黑色素瘤细胞ｈｓｐ７０、ｃ－ｆｏｓ、Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ蛋白表达的影响杨耀琴杨虎川陶惠红朴文姬（上海铁道大学基础医学院组胚教研室）本研究通过免疫组织化学方法，观察吐温８０与温热合并作用后即时、４ｈ和３ｄ后，Ｂ１６肿瘤细胞热休克蛋...

鸡爪皮胶原多肽对蘑菇酪氨酸酶及B16黑色素瘤细胞的作用

研究分子质量低于3 kDa鸡爪皮胶原多肽对蘑菇蘑菇酪氨酸酶的抑制及对小鼠B16黑色素瘤细胞黑色素合成的影响。以L-多巴为底物,研究胶原肽对蘑菇酪氨酸酶抑制作用及抑制动力学。然后采用B16黑色素瘤细胞验证提取鸡爪皮胶原多肽的安全性及对黑色素合成影响的效果。结果表明,分子质量低于3 kDa的鸡爪皮胶原多肽抑制蘑菇酪氨酸酶的IC50值为0.570 mg/mL,抑制属于非竞争性抑制,米氏常数Km和抑制常数Ki分别为24.68μmol/mL和10.76 mg/mL。鸡爪皮胶原多肽在0~200μg/mL的质量浓度范围内对细胞的增殖活性没有影响,而且能够有效地抑制细胞黑色素的生成。

马鞭草经皮透过液对B16黑色素瘤细胞的作用

目的研究马鞭草经皮透过液对B16黑色素瘤细胞的作用,在细胞水平上验证其具有美白活性。方法使用MTT法测定马鞭草经皮透过液对B16细胞增殖的影响;L-Dopa氧化法测定经皮透过液对B16黑色素瘤细胞内酪氨酸酶活性的影响;NaOH裂解法测定细胞内黑色素含量的影响;DAPI染色法检测细胞凋亡情况。结果马鞭草经皮透过液对B16黑色素瘤细胞的增殖、酪氨酸酶活性以及细胞内黑色素含量均有抑制作用,且其浓度越高抑制作用越强。结论马鞭草经皮透过液不仅影响B16黑色素瘤细胞的增殖,同时也影响细胞内酪氨酸酶的活性以及黑色素的合成,提示马鞭草具有对皮肤美白活性的功效,对开发成天然美白产品具有良好前景。

栀子叶乙醇提取物对B16黑色素瘤细胞黑色素生成及酪氨酸酶活性的影响

目的探讨栀子叶70%乙醇提取物对B16黑色素瘤细胞黑色素生成及酪氨酸酶活性的影响。方法将B16黑色素瘤细胞分为空白组、模型组、阳性对照组和栀子叶70%乙醇提取物组[低浓度组(100 mg/L)、中浓度组(200 mg/L)、高浓度组(400 mg/L)]。栀子叶70%乙醇提取物处理α-促黑色素细胞激素(α-MSH)诱导的B16黑色素瘤细胞72 h,MTS检测细胞增殖活性,酶标法测定B16黑色素瘤细胞内黑色素含量和酪氨酸酶活性。结果100~400 mg/L浓度的栀子叶70%乙醇提取物对B16黑色素瘤细胞的增殖没有影响;模型组B16黑色素瘤细胞内黑色素的含量和酪氨酸酶活性明显高于空白组,差异有高度统计学意义(P<0.001);栀子叶70%乙醇提取物中浓度组和高浓度组的B16黑色素瘤细胞内黑色素含量和酪氨酸酶活性低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。阳性对照组的B16黑色素瘤细胞内黑色素含量和酪氨酸酶活性显著低于模型组,差异有高度统计学意义(P<0.001)。结论栀子叶70%乙醇提取物能有效抑制α-MSH诱导的B16黑色素瘤细胞黑色素的生成,其机制可能与其抑制酪氨酸酶的活性有关。

人BRE1B基因对眼B16黑色素瘤细胞生长的影响

目的构建人BRE1B基因真核表达载体,并初步探讨该基因对眼B16黑色素瘤细胞生长的影响。方法将传代培养的眼B16黑色素瘤细胞随机分为实验组(转染p CMV-Tag-2B-BRE1B重组质粒)和对照组(转染p CMV质粒)。以乳腺癌文库为模板应用PCR技术扩增出人BRE1B基因的CDS编码区序列,构建p CMV-Tag-2B-BRE1B重组质粒,将p CMV-Tag-2B-BRE1B重组质粒和p CMV质粒瞬时转染眼B16黑色素瘤细胞后,应用Western blot法检测BRE1B蛋白的表达,应用CCK8法和克隆形成法检测该重组质粒对眼B16黑色素瘤细胞生长的影响。结果 PCR技术扩增出人BRE1B基因CDS编码区序列,且条带与预期大小一致;与对照组相比,菌液PCR鉴定结果为阳性,双酶切的条带长度分别为大约4000 bp和3050 bp,测序鉴定人BRE1B基因的编码序列与插入的DNA序列完全一致;Western blot结果表明p CMV-Tag-2B-BRE1B重组质粒在实验组眼B16黑色素瘤细胞成功表达,对照组则未检测到特异条带;CCK8法和克隆形成法结果表明p CMV-Tag-2B-BRE1B重组质粒能够抑制眼B16黑色素瘤细胞的生长。结论本研究成功构建了带有p CMV-Tag-2B标签的人BRE1B基因真核表达载体,并发现该基因抑制眼B16黑色素瘤细胞的生长。

葛根水溶性总蛋白对小鼠黑色素瘤细胞B16的影响

目的探讨葛根水溶性总蛋白对小鼠黑色素瘤细胞B16的影响。方法给予葛根水溶性总蛋白(0.1、0.3、0.5 mg/mL)处理小鼠黑色素瘤细胞B1648 h,并设置对照组,采用MTT法观察药物对B16细胞增殖抑制的影响,多巴氧化法检测给药后细胞内酪氨酸酶的活性,NaOH裂解法检测细胞中黑色素的变化,流式细胞仪检测药物对B16细胞线粒体膜电位及细胞凋亡的影响,Western blot法检测B16细胞Bax、Bcl-2、TRP-1、TYR、MITF蛋白表达,RT-qPCR法检测B16细胞TRP-1、TYR、MITF mRNA表达。结果与对照组比较,各剂量葛根水溶性总蛋白干预后,小鼠黑色素瘤细胞B16中酪氨酸酶活性、黑色素水平、线粒体膜电位、Bcl-2、TRP-1、TYR、MITF蛋白与mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01),细胞凋亡率升高、Bax蛋白与mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。结论葛根水溶性总蛋白能够抑制小鼠黑色素瘤细胞B16增殖,其作用机制与促进细胞凋亡和抑制黑色素形成有关。

茶叶提取物对B16小鼠黑色素瘤细胞的生物学效应及机理研究

研究了茶叶提取物对体外培养的B16小鼠黑色素瘤细胞的生物学效应,并对其机理进行初步探讨。分别用茶黄素单体(TF1)、EGCG、纯度为40%的茶黄素(TF40)处理细胞,然后观察细胞形态,并以溴化二苯四偶氮法(MTT法)测定受试物对黑色素细胞活力的影响,以左旋多巴为底物测定细胞内酪氨酸酶活性,采用比色法测定细胞中的黑色素含量。实验结果表明,各化合物对B16黑色素瘤细胞形态有不同程度的影响,对细胞活性、酪氨酸酶浓度和黑色素合成量有浓度依赖性抑制作用。这3种茶提取物能通过多种途径抑制黑色素合成,从而达到美白的效果,且茶叶提取物的效果优于Vc。

白薇经皮透过液对B16黑色素瘤细胞的作用

目的:研究白薇经皮透过液对B16黑色素瘤细胞增殖的抑制效果,初步探讨白薇作为皮肤美白剂的可行性。方法:以每孔3×103个B16细胞接种于96孔板,分别加入质量浓度为20,60,100,140,180,200 mg·L-1的白薇经皮透过液,作用24,48,72 h,采用MTT法测定白薇经皮透过液对B16细胞增殖的影响;L-Dopa氧化法测定透过液对B16细胞内酪氨酸酶(TYR)活性的影响;NaOH裂解法测定透过液对黑色素含量的影响;4',6二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法及原位末端转移酶标记染色(TUNEL)法检测细胞凋亡。结果:与空白组相比,不同浓度不同提取方法的白薇经皮透过液均对B16细胞的增殖、酪氨酸酶的活性及黑色素的含量具有抑制作用(P<0.05),作用效果:95%醇提>50%醇提>水提,最佳作用质量浓度为200mg·L-1,最佳作用时间为48 h。结论:白薇具有一定的美白作用,可用于美白产品的开发。

三羟异黄酮对黑色素瘤B_(16)细胞的诱导分化作用

背景与目的：评价三羟异黄酮对黑色素瘤B16细胞的诱导分化作用。材料与方法：以4’，5，7三羟异黄酮处理黑色素瘤B16细胞1～4d后，以生长曲线反映其增殖活力，以B16细胞形态、黑色素含量、及流式细胞仪检测细胞周期变化等观察三羟异黄酮对黑色素瘤B16细胞的诱导分化作用。结果：用10、30、90μmol／L的三羟异黄酮作用肿瘤细胞，有不同程度的抑瘤作用。表现为黑色素生成能力增加，细胞生长缓慢。可使B16细胞阻断在S期。结论：三羟异黄酮不同剂量（10、30、90μmol/L）对B16细胞均有明显的分化诱导作用，对体外黑色素瘤增殖有明显的抑制作用。

6BIO通过JAK1-STAT3信号转导通路抑制小鼠B16恶性黑色素瘤细胞的增殖

目的研究（2’Z，3’E）-6-溴靛玉红-3’-肟衍生物（6BIO）对小鼠B16恶性黑色素瘤细胞增殖能力的影响。方法免疫组化法检测6BIO处理不同时间（24、36、48h）后B16细胞增殖指数Ki67的表达；Western blot法检测6BIO处理不同时间（1、6、12、24h）后B16细胞中磷酸化JAK激酶1蛋白（p-JAK1）和磷酸化信号转录子和转录激活子3蛋白（p-STAT3）的表达。结果6BIO处理不同时间后B16细胞增殖指数Ki67的表达均呈时间依赖性降低（P〈0．01）。6BIO能够时间依赖性抑制B16细胞中p-JAK1和p—STAT3蛋白的表达（P〈0．01）。结论6BIO能够通过抑制JAK1-STAT3信号转导通路抑制小鼠B16恶性黑色素瘤细胞的增殖。

榄香烯诱导小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡的实验研究

目的:观察榄香烯对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度榄香烯体外处理小鼠黑色素瘤B16细胞,采用MTT比色法、流式细胞仪分析技术及荧光染色等方法,检测榄香烯对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。结果:榄香烯能抑制B16细胞增殖,使细胞停滞于G0/G1期,S期细胞明显减少,其作用呈明显浓度依赖性。形态学及流式细胞术分析结果均提示:在本实验条件下,榄香烯可诱导B16细胞凋亡,其诱导作用亦显示明显的浓度依赖关系。在此基础上,进一步分析发现:榄香烯可诱导B16细胞原癌基因bcl-2表达降低,抑癌基因p53表达增强。结论:榄香烯在体外通过干扰细胞周期、诱导细胞凋亡明显抑制B16细胞增殖,其作用机制可能与其诱导癌基因bcl-2表达减少、p53表达增加有关。

重楼皂苷Ⅱ诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的机制研究

目的:研究重楼皂苷Ⅱ诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的作用及机制。方法:采用MTT法观察重楼皂苷Ⅱ对B16细胞增殖的抑制作用;采用DAPI染色于倒置荧光显微镜下观察重楼皂苷Ⅱ对B16细胞诱导凋亡的形态学改变;Annexin V-FITC/PI双染及流式细胞术检测重楼皂苷Ⅱ对B16细胞凋亡率的影响;JC-1染色流式细胞仪检测重楼皂苷Ⅱ作用B16细胞后细胞线粒体膜电位的变化;Western blot检测重楼皂苷Ⅱ对B16细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2的表达变化。结果:重楼皂苷Ⅱ对B16细胞的增殖有明显的抑制作用,并呈时间及浓度依赖性;重楼皂苷Ⅱ作用B16细胞后凋亡率随药物浓度的升高而升高;线粒体膜电位水平也随之显著降低,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);Western blot检测结果表明Bcl-2蛋白表达水平显著降低。结论:重楼皂苷Ⅱ可能通过线粒体氧化应激通路从而诱导B16细胞凋亡。

原儿茶酸对小鼠黑色素瘤B16细胞酪氨酸酶活力及黑色素生成的抑制效应

酪氨酸酶是生物体内黑色素合成的关键酶,其抑制剂有着广泛的应用前景.从天然药物的有效成分中筛选安全的酶抑制剂具有重要意义.以小鼠黑色素瘤B16细胞为模型,研究了天然药物有效成分原儿茶酸对黑色素生成和酪氨酸酶活力的影响.实验结果显示:原儿茶酸可显著降低细胞的黑色素含量,浓度为10μmol/L时使黑色素含量降低60%.进一步研究发现,原儿茶酸对小鼠黑色素瘤B16细胞粗提取和共培养体系中的酪氨酸酶均有较强的抑制作用.对粗提酪氨酸酶的活力半抑制浓度(IC50)约为160μmol/L,与共培养体系中酪氨酸酶活力的抑制、抑制剂浓度和作用时间有关,10μmol/L作用54h可使酪氨酸酶活力下降88%.本研究为原儿茶酸作为酪氨酸酶抑制剂的开发应用奠定了基础.

双脱甲氧基姜黄素对黑色素瘤B16-F10细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨双脱甲氧基姜黄素(bisdemethoxycurcumin)对黑色素瘤B16-F10细胞增殖与凋亡的影响。方法:双脱甲氧基姜黄素作用于B16-F10细胞24 h,MTT法检测双脱甲氧基姜黄素对B16-F10细胞的增殖抑制作用。流式细胞术检测双脱甲氧基姜黄素对细胞周期、细胞凋亡的影响。在C57BL/6小鼠上面建立黑色素瘤模型,采用静脉给药,观察其对黑色素瘤模型的增殖影响。用蛋白免疫印迹法检测双脱甲氧基姜黄素在细胞和组织层面对抗细胞凋亡蛋白BCL-1的表达影响。结果:双脱甲氧基姜黄素可以明显抑制B16-F10细胞的增殖。双脱甲氧基姜黄素诱导B16-F10细胞凋亡,抑制细胞周期于S期。采用静脉注射给药,双脱甲氧基姜黄素可以抑制黑色素瘤的生长。在细胞和组织层面,可以抑制抗凋亡蛋白BCL-1的表达。结论:双脱甲氧基姜黄素可以抑制黑色素瘤B16-F10细胞的增殖,可能与其促进细胞凋亡有关;双脱甲氧基姜黄素诱导黑色素瘤B16-F10细胞凋亡可能与抑制抗凋亡单位BCL-1有关。