乌贼墨多糖提取物的制备及其对B16F10细胞的影响

为了探索乌贼墨多糖(SIP)对体外培养的B16F10细胞的生物学效应,以乌贼墨为原材料,对SIP进行提取分离,并研究SIP提取物对B16F10细胞活力、细胞内酪氨酸酶活性及黑色素合成等的影响。结果表明,SIP提取的最优条件为提取温度40℃,料液比1∶3,提取时间4h,提取次数3次,在此条件下SIP得率为14.12 mg·g^(-1)。SIP提取物对B16F10细胞形态有一定影响,对细胞活性、酪氨酸酶活性和黑色素合成均有一定抑制作用,且呈现一定剂量效应。综上可知,SIP提取物能抑制黑色素合成,具有作为美白剂的发展前景,这为乌贼墨合理利用提供了一定科学依据。

光甘草定诱导小鼠黑色素瘤B16F10细胞凋亡的机制研究

通过体外和体内模型研究光甘草定对小鼠黑色素瘤B16F10细胞增殖的抑制作用及其分子机制。B16F10细胞经光甘草定处理后可抑制其增殖,且具有浓度依赖性;诱导B16F10细胞凋亡,观察到明显的细胞凋亡状态,细胞内凋亡相关基因及蛋白Bax表达显著上升,Bcl-2则表达下调。进一步的研究发现,经光甘草定处理后的B16F10细胞中,培养基中葡萄糖含量升高,而ATP含量、乳酸生成均降低;细胞内糖酵解相关基因及蛋白HK2、Ldha表达下调。同时,经光甘草定处理后,移植瘤小鼠的肿瘤组织生长受到明显抑制,肿瘤组织内细胞凋亡率显著升高,Bax表达明显上升,而Bcl-2、HK2和Ldha则表达均下调。说明,光甘草定在一定浓度范围内抑制了小鼠黑色素瘤B16F10细胞的增殖,诱导细胞凋亡,而其诱导细胞凋亡的机制可能与调控糖酵解相关基因的表达相关。

大蒜素对小鼠黑色素瘤B16F10细胞体外增殖和迁移能力的影响

旨在研究不同浓度的大蒜素对色素形成关键基因小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)表达的影响,以及对B16F10细胞增殖和迁移的作用,为家养宠物及畜牧行业中的动物黑色素瘤治疗提供一个新思路。将添加不同浓度大蒜素的黑色素瘤B16F10细胞分为对照组(0μg·mL^(-1))和试验组(5、10、15、20μg·mL^(-1))。采用qRT-PCR检测B16F10细胞中MITF mRNA的表达水平;Western blot检测MITF蛋白质的表达水平。通过吸光度值计算细胞的增殖率,进而确定不同浓度大蒜素对细胞增殖的抑制情况。不同浓度大蒜素处理B16F10细胞42 h后,采用细胞划痕评价细胞迁移能力。结果显示,随大蒜素浓度升高,B16F10细胞中色素形成关键基因MITF mRNA的表达量逐渐降低;Western blot结果显示,MITF蛋白表达量呈浓度依赖性降低。在细胞增殖检测中,发现5、10、15、20μg·mL^(-1)大蒜素对B16F10细胞的增殖能力具有显著的抑制效果(P<0.001),且抑制率随浓度升高而加强。细胞划痕结果显示,大蒜素浓度在10、15、20μg·mL^(-1)时对细胞的迁移抑制较大。综上表明,大蒜素能够影响黑色素瘤B16F10细胞特异性标记基因MITF的表达,并抑制了黑色素瘤B16F10细胞的增殖和迁移。

GnRH/M2融合蛋白致敏DC疫苗对黑色素瘤B16F10细胞移植瘤的抑制

目的:制备促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)与M2的融合蛋白(GnRH/M2),研究由该融合蛋白致敏而成的DC疫苗对黑色素瘤B16F10细胞小鼠移植瘤的抑制作用。方法:构建表达载体p ET28a-ans B-CGnRH3-hinge-MVP-M2质粒,该质粒转化的工程菌在乳糖的诱导下,融合蛋白ans B-C-GnRH3-hinge-MVP-M2以包涵体形式表达,经超声破碎、洗涤和乙醇分级沉淀纯化后,通过酸水解将蛋白多肽GnRH3-hinge-MVP-M2释放出来,并通过DEAE-52阴离子交换层析进行分离。将此融合多肽致敏DC获得DC疫苗。构建黑色素瘤B16F10细胞小鼠移植瘤模型,按接种疫苗不同,分为:环磷酰胺组(CTX)、GnRH/M2融合蛋白致敏DC组(GDC)、肿瘤细胞裂解物致敏DC组(BDC)、GnRH/M2融合蛋白致敏DC+环磷酰胺组(GDCTX)、肿瘤细胞裂解物致敏DC+环磷酰胺组(BDCTX)和生理盐水组(NS),观察GnRH/M2疫苗对模型小鼠的移植瘤生长、CTL杀伤能力和T细胞增殖的作用。结果:成功构建p ET28a-ans B-C-GnRH3-hinge-MVP-M2质粒并高效表达融合蛋白。GDC组移植瘤生长明显慢于NS组(P<0.05),且与BDC组相似(P>0.05);GDCTX组抑瘤效果虽进一步提高,但与CTX组相比差异无统计学意义(P>0.05)。各实验组对B16F10细胞的杀伤作用和对T细胞增殖作用均优于阴性对照组(P<0.05或P<0.01),且GDC组与BDC组间差异不显著(P>0.05)。结论:初步证明融合多肽GnRH/M2致敏的DC疫苗能有效抑制黑色素瘤B16F10细胞小鼠移植瘤的生长。

Beclin-1基因shRNA慢病毒载体的构建及其对B16F10细胞自噬及活力的影响

利用RNA干扰技术构建稳定沉默Beclin-l基因的B16F10小鼠黑色素瘤细胞系,分析稳转细胞系的自噬水平和活力,为探讨Beclin-1基因、自噬与肿瘤三者关系奠定基础。构建小鼠Beclin-l基因干扰载体,转染至293T细胞,获得慢病毒颗粒,将病毒颗粒感染B16F10细胞,通过加压筛选、有限稀释、细胞驯化得到稳定转染m-Beclin-1-shRNA1的B16F10细胞系。采用RT-PCR和免疫荧光技术检测对Beclin-l的干扰效果,Western blot和透射电镜分析稳转细胞系中自噬标志物LC3蛋白表达及自噬小体形成情况,CCK-8法检测稳转细胞系的活力。结果表明,成功构建了靶向抑制Beclin-l基因表达的shRNA,纯化的慢病毒滴度为1×10^(8) TU·mL^(-1),建立的细胞系中Beclin-1 mRNA和蛋白表达都受到不同程度的抑制,mRNA的沉默效率约为75%(P<0.01),发现干预Beclin-1表达能够抑制LC3-Ⅱ蛋白的表达及自噬小体的形成数量,降低B16F10细胞活力。以上结果表明,干扰Beclin-1表达能够有效降低B16F10细胞自噬活性,促进B16F10细胞死亡,这为探讨Beclin-1基因功能及自噬在抗肿瘤中的作用奠定重要基础。

白芨水提物对小鼠黑色素瘤B16F10细胞增殖与迁移的影响

目的探讨白芨水提物对小鼠黑色素瘤B16F10细胞增殖与迁移的影响。方法使用水提醇沉法提取白芨粗多糖,同时保留有机小分子物质部分;采用CCK8试剂检测不同浓度的两部分提取物对B16F10细胞存活率及增殖的影响;细胞划痕检测提取物对B16F10细胞迁移的影响,以及ELISA法检测迁移相关蛋白的表达情况。结果与对照组相比,白芨水提物均能降低B16F10细胞的存活率和增殖能力,并与浓度呈正相关,其中多糖和有机小分子物质的半数抑制浓度(IC_(50))分别为51.14μg/mL和40.61μg/mL;此外,白芨水提物对细胞迁移也具有抑制作用,并能下调MMP-2和MMP-9的表达,与对照组相比,中、高浓度的下调作用具有显著性差异。结论白芨水提物能够抑制B16F10细胞的增殖与迁移能力,其作用可能通过下调迁移相关蛋白MMP-2和MMP-9的表达有关。

热休克蛋白gp96表达对B16F10细胞生长的影响

目的 探讨热休克蛋白gp96表达对B16F10细胞株生物学行为的影响。 方法 构建gp96正义和反义真核重组表达质粒 pcDNA hgp96和 pcDNA anti96P ,并转染B16F10细胞 ,G 418筛选稳定转染的阳性细胞克隆 ,然后Western印迹分析细胞gp96的表达情况 ,绘制细胞生长曲线 ,观察 gp96表达对细胞生长特性的影响。 结果 转染了 gp96正义表达质粒的B16F10细胞gp96表达水平升高 ,细胞生长缓慢 ,倍增时间延迟 ;反义gp96表达质粒明显抑制了B16F10细胞 gp96表达 ,使细胞倍增时间提前。结论 热休克蛋白 gp96表达水平升高可抑制肿瘤细胞的生长 ,而 gp96表达水平下降则肿瘤细胞生长速度加快 。

羟喜树碱对黑素瘤B16F10细胞侵袭和凋亡的影响及作用机制

目的:观察羟喜树碱(hydroxycamptothecin,HCPT)对黑素瘤B16F10细胞侵袭能力以及凋亡相关蛋白p53和Bcl-2表达的影响,并探讨其抑制黑素瘤细胞的作用机制。方法:分别用5、10、20、50μmol/L的HCPT处理B16F10细胞24 h及48 h,采用Transwell实验评价细胞的侵袭能力。采用Western blot和RT-PCR检测p53和Bcl-2蛋白表达和mRNA表达。结果:Transwell实验结果显示,与空白组比较,HCPT不同浓度组(除HCPT 5μmol/L组外)B16F10细胞体外侵袭能力明显下降(P<0.01)。HCPT能显著升高p53的mRNA和蛋白水平,同时降低Bcl-2的mRNA和蛋白水平(P<0.01),并呈现出明显的剂量依赖性和时间依赖性。结论:HCPT能够明显降低B16F10细胞的体外侵袭能力,干预B16F10细胞中p53和Bcl-2的表达,从而促进肿瘤细胞凋亡。

全反式维甲酸对小鼠黑色素瘤B16F10细胞生物学行为的影响

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对小鼠黑色素瘤B16F10细胞体外增殖、迁移、凋亡、致瘤性的影响及其初步作用机制。方法采用MTT法检测ATRA对小鼠黑色素瘤细胞B16F10和小鼠成纤维细胞L929增殖能力的影响。显微镜下观察给药后两种细胞的形态变化,应用划痕实验和Transwell实验检测ATRA对B16F10细胞迁移能力的影响,分别采用DAPI染色和Annexin V-FITC/PI染色观察B16F10细胞凋亡情况,JC-1染色实验检测B16F10细胞线粒体膜电位,荧光分光光度计检测B16F10细胞中Caspase-9、Caspase-3的活化情况,利用体内成瘤实验观察ATRA对B16F10细胞致瘤性的影响。结果 MTT结果显示ATRA呈浓度依赖性地抑制B16F10细胞和L929细胞增殖,但B16F10细胞的存活率明显低于L929细胞的存活率(P<0.05);分别以低、中、高3个浓度(6.25、16、40μmol/L)的ATRA处理细胞24 h后,显微镜下可见B16F10细胞在中浓度时呈凋亡样改变,高浓度时细胞基本死亡,丧失正常形态;而L929细胞形态仅在高浓度时发生显著变化;划痕实验和Transwell实验提示B16F10细胞的体外迁移能力在中浓度即受到明显抑制(P<0.05);继续以中浓度(16μmol/L)的ATRA作用B16F10细胞24 h,DAPI染色可见细胞核裂解,甚至可见凋亡小体;Annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞仪测得细胞凋亡率为(37.27±4.42)%;JC-1染色实验提示线粒体膜电位明显降低;荧光分光光度计测得给药后Caspase-9、Caspase-3显著被活化,活性分别增加了(1.54±0.00)、(3.09±0.01)倍(P<0.05);成瘤实验结果显示ATRA处理后的B16F10细胞致瘤性显著降低(P<0.01),甚至消失。结论 ATRA能显著抑制B16F10细胞体外增殖、迁移能力,并能通过降低线粒体膜电位,活化Caspase-9、Caspase-3蛋白诱导细胞凋亡,进而抑制B16F10致瘤性。

大蒜提取物对B16F10细胞内黑色素生成的抑制作用

采用MTT法测定大蒜提取物、二胜肽和六胜肽3种物质对B16F10细胞活力的影响,且在非毒剂量下,分别评价此3种物质对B16F10细胞黑色素生成和细胞形态的影响;在单因素试验基础上,采用正交试验设计大蒜提取物、二胜肽和六胜肽组合物中各组分的用量,检测组合物对B16F10细胞黑色素生成抑制率的影响,并利用Western blot检测最佳组合物对黑色素合成相关蛋白TYR、TRP-1和TRP-2表达的影响。结果表明:0.00~2.50μg/mL的大蒜提取物、0.00~4.00μg/mL的二胜肽或六胜肽对B16F10细胞的细胞活力和细胞形态均没有显著影响;大蒜提取物在0.00~2.50μg/mL、二胜肽和六胜肽在0.00~4.00μg/mL内呈剂量依赖性的抑制黑色素的生成;当大蒜提取物、二胜肽、六胜肽质量浓度分别为2.50、1.00、0.50μg/mL时的组合物抑制黑色素的生成作用效果最佳;该最佳组合物对黑色素合成相关蛋白TYR、TRP-1和TRP-2的表达具有明显的抑制作用,表明组合物抑制黑色素的生成与TYR、TRP-1和TRP-2蛋白水平的降低有关。

新狼毒素A抑制小鼠黑色素瘤B16F10细胞糖酵解和迁移

目的研究新狼毒素A(Neochamae jasmin A,NCA)在体外对小鼠黑色素瘤B16F10细胞糖代谢及迁移的影响。方法采用黄酰罗丹明B(SRB)法检测NCA对细胞增殖的影响;采用划痕实验检测NCA对细胞迁移的影响;利用试剂盒检测NCA对B16F10细胞中乳酸(LD)水平、葡萄糖摄取量和ATP含量的改变及对己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响;利用RT-PCR法检测糖酵解及迁移相关基因的表达。结果NCA显著抑制小鼠黑色素瘤B16F10细胞增殖和细胞划痕愈合,下调MMP-2和MMP-9 mRNA的表达,上调TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表达;下调GLUT1、PKM2、LDHA mRNA的表达,浓度依赖性的抑制ATP的产生和乳酸的释放,减少葡萄糖的摄取,降低糖酵解关键酶HK、PK、LDH的活性。结论推测NCA抑制B16F10细胞增殖和迁移可能与调节肿瘤细胞糖酵解有一定相关性。

构建稳定表达小鼠RAE1ε的B16F10细胞株

目的 通过转染及流式细胞术筛选获得稳定表达小鼠RAE1ε分子的B16F10细胞株。方法 将本研究团队前期构建的含有小鼠RAE1ε基因的真核表达载体通过脂质体法转染B16F10细胞,经流式细胞仪(flow cytometry,FCM)筛选后,建立稳定高表达的B16F10细胞株,将该细胞株与NK细胞共培养后,检测IFN-γ的分泌情况。结果 建立了稳定表达RAE1ε基因的B16F10细胞株,该细胞株上的RAE1ε具有刺激NK细胞高分泌IFN-γ的功能。结论 获得了稳定表达RAE1ε分子的B16F10细胞株,为后续研究奠定了物质基础。

构建稳定表达PDL1的B16F10细胞株

目的通过转染及流式细胞仪(flow cytometry,FCM)筛选出稳定表达小鼠细胞程式死亡配体1(Programmed cell death ligand 1,PDL1)的B16F10细胞株。方法将携带PDL1的真核表达质粒通过脂质体法转染到B16F10细胞株中,经FCM进行多次分选,筛选出稳定表达PDL1的B16F10细胞株,将其与抗CD3/抗CD28抗体活化的CD4^+T细胞共培养48 h后,FCM检测CD4^+T细胞表面CD69以及CD25的表达。结果建立了稳定表达PDL1的B16F10细胞株,该细胞株表面的PDL1可诱导CD4^+T细胞高表达CD25。结论成功地得到了稳定表达PDL1的B16F10细胞株,为后续研究奠定了物质基础。

灵芝多糖对小鼠黑素瘤B16F10细胞分泌VEGF的抑制作用

目的:探讨灵芝多糖对B16F10黑素瘤细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法:用不同浓度的灵芝多糖处理B16F10黑素瘤细胞,以正常培养基代替灵芝多糖培养B16F10黑素瘤细胞为对照。分别采用Western blot法和RT-PCR法检测灵芝多糖作用48h后B16F10黑素瘤细胞VEGF蛋白和m RNA表达的变化。结果:浓度为0.8μg/ml、3.2μg/ml、12.8μg/ml的灵芝多糖处理B16F10细胞后,B16F10细胞VEGF蛋白和m RNA的表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:灵芝多糖可能通过抑制B16F10黑素瘤细胞分泌VEGF起到抑制肿瘤的作用。

甘草查尔酮A对小鼠黑色素瘤B16F10细胞体外迁移能力的影响

目的：探讨甘草中黄酮类化合物甘草查尔酮A（licochalcone A,LCA）对小鼠黑色素瘤B16F10细胞株体外迁移能力的影响。方法：取对数生长期B16F10细胞按8 000个/孔接种于96孔板中,磺酰罗丹明B（SRB）法测定LCA（0,5,10,15,20μmol·L-^1）作用24 h对细胞活力影响;取对数生长期B16F10细胞按1×10^5个/孔接种于24孔板中,划痕实验检测LCA（0,5,10,15μmol·L^-1）作用24 h细胞体外迁移能力;取对数生长期B16F10细胞按5×10^5个/瓶接种于细胞培养瓶中,LCA（0,5,10,15μmol·L^-1）作用24 h后,明胶酶谱法检测细胞培养上清基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）活性;ELISA检测MMP-2和MMP-9蛋白含量;实时荧光定量PCR（Q-PCR）和半定量PCR（RT-PCR）法检测MMP-2和MMP-9基因表达水平。结果：5-15μmol·L-1的LCA对小鼠黑色素瘤B16F10细胞作用24 h,对细胞活力没有显著的影响;划痕试验结果说明,LCA可剂量依赖性地降低B16F10细胞的体外迁移能力;明胶酶谱结果显示,LCA可明显抑制B16F10细胞分泌MMP-2和MMP-9的活性;ELISA试验表明,LCA可明显降低MMP-2和MMP-9蛋白表达;Q-PCR和RT-PCR结果显示,LCA可明显降低MMP-2和MMP-9的mRNA基因表达量。结论：甘草查尔酮A能抑制B16F10小鼠黑色素瘤细胞体外转移侵袭作用,其机制可能与抑制MMP-2和MMP-9表达有关。

茶多酚对小鼠黑色素瘤细胞B16F10体外增殖和迁移的影响

【目的】研究茶多酚对小鼠黑色素瘤细胞B16F10增殖和迁移的影响,以期为将茶多酚用于肿瘤的治疗提供依据。【方法】用不同浓度茶多酚(0.05、0.10和0.15 g/L)处理B16F10细胞,不处理(0 g/L)的作为对照组,采用CCK-8法检测各组细胞生长情况,计算生长抑制率;不同浓度茶多酚处理细胞24 h后,采用划痕试验评价细胞的迁移能力;通过实时荧光定量PCR和Western blotting检测B16F10细胞中小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)和黑色素形成限速酶(tyrosinase,TYR)mRNA和蛋白的表达水平。【结果】与对照组相比,0.05 g/L茶多酚对B16F10细胞增殖无明显抑制作用(P>0.05),0.10和0.15 g/L茶多酚对B16F10细胞的增殖能力有极显著的抑制作用(P<0.01),且浓度越高,抑制作用越强;0.05、0.10和0.15 g/L茶多酚对B16F10细胞的迁移均有极显著的抑制作用(P<0.01);实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示,随着茶多酚浓度的升高,MITF和TYR mRNA和蛋白的表达量均呈浓度依赖性降低,与对照组相比,0.05 g/L茶多酚显著降低MITF mRNA和蛋白的表达(P<0.05),0.10和0.15 g/L茶多酚均极显著降低MITF mRNA和蛋白的表达(P<0.01),0.10和0.15 g/L茶多酚均极显著降低TYR mRNA和蛋白的表达(P<0.01)。【结论】0.10和0.15 g/L茶多酚对B16F10细胞的增殖和迁移均有明显的抑制作用,并且能降低黑色素生成基因MITF和TYR的表达,表明茶多酚能抑制黑色素瘤的进展。

喜树碱对B16F10细胞增殖及黑色素合成抑制机理

为研究喜树碱(Camptothecin,CPT)对B16F10小鼠恶性黑色素瘤细胞的增殖及黑色素合成抑制机制,利用噻唑蓝(Methylthiazoletetrazolium,MTT)检测法、显微观察法、Na OH裂解法和多巴氧化法分析不同浓度的CPT对细胞增殖、形态、黑色素合成及酪氨酸酶活性的影响.结果显示:随着CPT浓度的增高和处理时间的延长,B16F10细胞的增殖抑制增强. 160μmol/L CPT处理72 h,B16F10细胞增殖抑制率达77. 0%,一定范围内呈现时间和浓度依赖性(P <0. 05).同时不同浓度CPT对细胞黑色素合成和酪氨酸酶活性也具有明显抑制作用,40μmol/L CPT处理72 h,细胞中黑色素的合成量为85. 37%,酪氨酸酶的活性为56. 4%(P <0. 05).结果表明,喜树碱能有效抑制小鼠黑色素瘤细胞B16F10的增殖和细胞内的黑色素的产生,其机制可能与抑制酪氨酸酶的活性有关.

人参皂苷Rb1对过氧化氢诱导的B16F10鼠黑素瘤细胞凋亡的保护作用

目的:确定人参皂苷Rb1对过氧化氢诱导的B16F10黑素瘤细胞凋亡的保护作用。方法:将B16F10细胞随机分为对照组,H_2O_2组和Rb1+H_2O_2组(细胞培养液中分别加入10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L的人参皂苷Rb1和H_2O_2)。分别测定B16F10细胞活力、LDH漏出量、线粒体膜电位及细胞凋亡水平。结果:H_2O_2作用24 h后,B16F10细胞活力降低至对照组的53.77%,而Annexin V和PI阳性细胞比例为25.6%,显著高于对照组(P<0.01)。50 mg/L人参皂苷Rb1预处理后,B16F10细胞活力为对照组的77.75%,较H_2O_2组增加44.6%(P<0.01)。Annexin V和PI阳性细胞比例为14.4%,明显低于H_2O_2组(P<0.01),并且LDH漏出率明显降低,线粒体膜电位显著升高。结论:人参皂苷Rb1对H_2O_2所致的B16F10黑素瘤细胞凋亡具有保护作用,有效提高其抗氧化应激能力。

T-钙黏蛋白对B16F10黑素瘤细胞周期调节的研究

目的探讨T-钙黏蛋白对B16F10黑素瘤细胞周期的影响。方法应用脂质体LipofectamineTM2000将构建的pEGFP-N1-T-钙黏蛋白以及pEGFP-N1空载体转染至B16F10细胞,OPTI-MEM培养基体外培养6 h后RPMI-1640继续培养24 h,应用碘化丙啶标记,流式细胞仪检测T-钙黏蛋白对B16F10黑素瘤细胞周期的影响。结果转染T-钙黏蛋白组G0/G1期和G2/M期细胞比率分别为(60.917±1.897)%、(8.513±0.651)%,明显高于未转染组的(53.563±1.856)%、(2.627±0.434)%和pEGFP-N1空载体组的(53.880±2.164)%、(2.770±0.466)%,差异有显著性(P<0.05);转染T-钙黏蛋白组S期细胞比率为(30.570±1.368)%,低于未转染组的(43.810±2.003)%及pEGFP-N1空载体组的(43.350±2.629)%,差异有统计学意义(P<0.05)。未转染组与转染pEGFP-N1空载体组各期差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 T-钙黏蛋白使B16F10细胞G0/G1期和G2/M期比率增高,S期比率降低。

T-钙黏蛋白对B16F10黑素瘤细胞增殖凋亡的影响

目的探讨T-钙黏蛋白(T-cadherin)对B16F10黑素瘤细胞增殖凋亡的影响。方法体外培养转染T-cadherin的黑素瘤细胞株B16F10(转染T-cadherin组),以及转染pEGFP-N1空载体(转染空载体组)和未转染的黑素瘤细胞株B16F10(未转染组),采用MTT法和流式细胞技术检测黑素瘤B16F10细胞株的增殖凋亡情况。结果 MTT结果显示,转染T-cadherin组细胞吸光度(OD)值(0.383±0.116)明显低于未转染组(1.142±0.053)和转染空载体组(1.250±0.055),差异有统计学意义(P<0.05),未转染组与转染空载体组间差异无统计学意义(P>0.05);流式细胞仪检测结果显示,转染T-cadherin组细胞的凋亡率[(28.157±3.692)%]远远高于未转染组[(2.893±0.454)%]和转染空载体组[(2.350±0.578)%],差异有统计学意义(P<0.05);未转染组与转染空载体组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 T-cadherin对B16F10黑素瘤细胞的增殖有抑制作用,对其凋亡有促进作用。