花鲈b2m基因cDNA的克隆及表达分析

为探究花鲈(Lateolabrax maculatus)b2m(Beta-2 microglobulin)基因对细菌和病毒感染的响应,该研究通过RACE-PCR扩增获得了花鲈b2m基因,该基因cDNA全长为1383 bp,开放阅读框(Open reading frame,ORF)为357 bp,编码118个氨基酸。所推测的编码蛋白与已报道的鱼类B2m的氨基酸序列相似度为44.8%~63.2%。基因共线性分析显示,b2m基因座位置在鱼类基因组中高度保守。利用实时荧光定量PCR检测花鲈b2m基因在各组织器官中的分布,结果表明花鲈b2m在所检测组织器官中均有表达,脾脏中表达量最高,鳃、头肾和脑中次之。通过腹腔注射脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)、聚肌苷-脱氧胞苷酸(Poly I:C)和迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda,Edw)研究花鲈感染后b2m的表达变化,结果显示3种刺激物均可诱导花鲈b2m在鳃、肠、头肾、脾脏组织中表达上调,推测b2m基因参与了花鲈抗细菌、抗病毒感染的免疫应答过程。

狨猴B2m基因沉默位点在细胞水平的验证

目的在细胞水平筛选狨猴B2m基因的有效沉默靶点,并进行验证。方法查询人源B2m验证过的有效siRNA靶位点序列,与狨猴B2m基因序列进行同源性比较,选择匹配靶点合成shRNA序列。将体外合成的2条干扰序列分别与慢病毒载体FUGW-TDT连接,构建FUGW-TDT-shb2m干扰表达质粒,在聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)介导下转染293T细胞,转染后48h,用实时荧光定量法检测转染细胞中B2m基因mRNA的水平。结果筛选出2个与狨猴完全同源的B2m沉默靶位点,分别位于B2m mRNA的290~310 bp,665~685 bp;B2m两个靶点在转录水平的沉默效率分别为(46.54±7.91)%(P<0.05)和(83.22±4.37)%(P<0.0001),差异有显著性。结论成功构建成FUGW-TDT-shb2m重组质粒;在细胞水平筛选得到2个有效的B2m基因沉默靶点;为后续有关介导狨猴B2m基因沉默的研究奠定了基础。

B2M基因的表达与免疫性血小板减少性紫癜的相关性研究

目的检测B2M基因在免疫性血小板减少性紫癜中的表达情况,探讨B2M的表达与免疫性血小板减少性紫癜临床相关性。方法收集本医院49例免疫性血小板减少性紫癜患者及50例健康个体的静脉全血,分离出单个核细胞(PBMCs),提取总RNA,并反转录获得cDNA,利用实时荧光定量PCR技术检测B2M基因mRNA表达情况;提取PBMCs中的蛋白,利用Wesrtern Blot技术检测B2M蛋白水平的表达情况。结果B2M基因在免疫性血小板减少性紫癜患者和正常健康个体中表达存在差异,有统计学意义(P<0.05)。结论B2M基因异常表达可能与免疫性血小板减少性紫癜的发生发展密切相关,具有一定的临床意义。