SH2B3基因在髓系肿瘤中的突变位点及频率分析

目的:分析SH2B接头蛋白3(SH2B3)基因在髓系肿瘤中的突变位点及频率。方法:回顾性分析2017年11月至2022年11月首都医科大学宣武医院血液内科髓系肿瘤相关基因靶向DNA测序结果,筛选出携带SH2B3基因突变的患者,收集患者人口学资料及临床资料,分析SH2B3基因突变类型、突变位点、发生频率、共突变基因以及与疾病间的关系。结果:测序结果来自1005例患者,有19例患者检测到SH2B3基因突变,其中错义突变18例(94.74%),无义突变1例(5.26%),10例患者同时伴发其他突变(52.63%),突变等位基因频率(VAF)分布于0.03-0.66;发生频率最高的突变为p.Ile568Thr(5/19,26.32%),平均VAF为0.49,涉及1例MDS/MPN-RS(伴SF3B1突变)、1例MDS-U(伴SF3B1突变)、1例再生障碍性贫血伴PNH克隆(伴PIGA和KMT2A突变)、2例MDS-MLD(其中1例伴SETBP1突变);其余突变包括2例p.Ala567Thr(10.53%),p.Arg566Trp、p.Glu533Lys、p.Met437Arg、p.Arg425Cys、p.Glu314Lys、p.Arg308*、p.Gln294Glu、p.Arg282Gln、p.Arg175Gln、p.Gly86Cys、p.His55Asn和p.Gln54Pro各1例。结论:SH2B3基因在髓系肿瘤中突变位点分布较广,重现性低,其中p.Ile568Thr突变发生率较高,常与其他疾病特征性突变共存。

谷子B3转录因子可变剪切体分析

通过分析不同谷子品种B3转录因子基因存在的可变剪切类型,鉴定出具有功能活性的可变剪切体,并分析这些可变剪切体与谷子抽穗期是否具有相关性,为深入揭示B3转录因子可变剪切对谷子生长发育的调控作用提供依据。选择12份不同抽穗期的谷子材料,利用反转录PCR(reverse transcription PCR, RT-PCR)技术克隆了一个REM家族的B3转录因子基因,通过序列比对鉴定该基因存在的可变剪切体类型,分析这些可变剪切体的活性及其与抽穗期的关系。结果表明,B3转录因子基因在这12个谷子品种间共产生了8种可变剪切体,其中可变剪切体Ⅴ包含的品种最多(4个),其次为可变剪切体Ⅳ(2个),其余6种可变剪切体均只包含1个品种。通过可变剪切,12个品种的B3转录因子基因共可编码10种蛋白质,其中5种蛋白质缺失B3 DNA结合域;Ⅱ型蛋白质具有缩短谷子抽穗期的功能,Ⅵ型蛋白质具有延长谷子抽穗期的功能,且这种作用不受地理环境影响。以上结果表明,B3转录因子通过可变剪切参与谷子抽穗期的调控。

ATP1B3在神经胶质瘤中表达及其对细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨ATP1B3在神经胶质瘤细胞(U87MG)中的表达及其对细胞增殖和迁移的影响。方法:利用在线数据库CGGA及TCGA分析ATP1B3在不同级别神经胶质瘤细胞中差异表达,及其与患者生存、预后的关系;利用siRNA干扰技术瞬时敲减神经胶质瘤细胞系U87MG中ATP1B3的表达水平,通过RT-qPCR和western blot方法检测敲减效率;用CCK-8、transwell实验检测敲减ATP1B3后神经胶质瘤细胞增殖及迁移能力变化;western blot实验检测敲减ATP1B3后P-MTOR、MTOR蛋白的表达变化。结果:数据库分析表明ATP1B3的表达量与恶神经胶质瘤恶性程度成正相关,且与患者的预后生存成负相关。敲减ATP1B3后其mRNA和蛋白表达水平后明显降低,敲减组细胞增殖及迁移能力显著低于对照组(P<0.01);敲减ATP1B3影响P-MTOR的表达水平,P-MTOR/MTOR比值降低。结论:ATP1B3高表达与胶质瘤恶性程度相关且不利于患者的生存预后。在神经胶质瘤细胞内ATP1B3可调控MTOR细胞增殖生长信号通路,敲减ATP1B3基因能有效抑制神经胶质瘤细胞的增殖和迁移,因此ATP1B3基因可能是一个潜在神经肿瘤标志物和治疗的分子靶点。

海马过表达Ephrin-B3对颞叶癫痫大鼠突触重塑的影响

目的探讨海马内过表达酪氨酸蛋白激酶B3(Ephrin-B3)对大鼠癫痫突触重塑的可能作用机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、癫痫组、空载体组、慢病毒Efnb3过表达组,每组10只。除空白组外,其余3组均进行癫痫造模处理,造模前1周空载体组两侧海马各注射LV5-NC(5μL)载体,慢病毒过表达组海马注射包装后的Efnb3慢病毒(5μL)进行预处理。观察各组大鼠行为学变化,癫痫造模达24 h后各组取海马组织,采用qPCR检测Ephrin-B3、突触后密度蛋白95(PSD95)、离子型谷氨酸受体亚基(NR2B)的mRNA相对表达变化,蛋白质印迹法检测Ephrin-B3、PSD95、NR2B的蛋白相对表达量。结果Ephrin-B3过表达组癫痫发作潜伏期(30.2±4.38)min,较癫痫组(22.4±3.91)min和空载体组(21.0±5.29)min有所延长(P<0.05),癫痫组和空载体组造模后Ephrin-B3、PSD95、NR2B的mRNA表达量降低,转染Ephrin-B3成功组mRNA相对表达量相较于癫痫模型组明显增加(Ephrin-B3:F=25.11,P=0.0027;PSD95:F=14.80,P=0.0203;NR2B:F=19.51,P=0.0010),相较于空载体注射组亦明显增加(Ephrin-B3:P=0.0029;PSD95:P=0.0160;NR2B:P=0.0034);转染Ephrin-B3成功组相较于癫痫模型组蛋白相对表达量增加(Ephrin-B3:F=17.72,P=0.0032;PSD95:F=7.889,P=0.0145;NR2B:F=9.755,P=0.0199),较空载体注射组表达亦明显增加(Ephrin-B3:P=0.0034;PSD95:P=0.0253;NR2B:P=0.0144)。结论过表达Ephrin-B3可减轻癫痫发作损伤,其机制可能与调控突触后蛋白PSD95、NR2B的表达量控制突触重塑有关。

肝细胞癌中高OATP1B3表达增强索拉菲尼疗效的机制研究

目的探究肝细胞癌中高OATP1B3表达对索拉菲尼疗效的增强效果及相关机制。方法选取2016年1月至2018年12月福建医科大学附属第一医院收治的48例肝癌患者的病理组织样本为研究材料,观察OATP1B3在肝癌组织和距肿瘤边缘2 cm的癌旁组织中的表达情况、OATP1B3表达对服用索拉非尼患者生存期的影响。并通过转染肿瘤细胞,探究OATP1B3高表达对转染的Hep-1细胞的影响、与OATP1B3表达有关的相关信号通路分析以及索拉菲尼处理OATP1B3高表达肿瘤细胞的生物行为影响。结果48例肝癌患者的癌组织中的OATP1B3的mRNA表达、蛋白表达水平和免疫组化评分低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。转染OATP1B3的Hep-1细胞增殖能力、迁移和侵袭能力均低于阴性对照细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。转染OATP1B3的Hep-1细胞中N-cadherin、Vimentin、β-catenin、Bcl2干细胞样中CD33、OCT4、NANOG和SOX-2的表达均下调,E-cadherin、BAX、C-caspase3表达上调,且细胞凋亡率高于阴性对照细胞。经索拉菲尼处理后,OATP1B3高表达的肿瘤细胞生长和活性均下降;服用索拉非尼的肝癌患者中,高OATP1B3表达的患者生存期显著延长;且以OATP1B3表达水平可作为预测服用索拉非尼患者生存期的独立危险因素(P<0.05)。结论肝细胞癌组织中的OATP1B3高表达状态可有效增强索拉菲尼的疗效,抑制癌症发展,为相关治疗方案优化提供了一定的理论依据。

FIGO分期系统改变后Ⅰb3、Ⅱa2期宫颈癌不同治疗方式的预后分析

目的:探究基于旧分期系统的Ⅰb2期、Ⅱa2期宫颈癌治疗建议是否仍适用新分期系统Ⅰb3期、Ⅱa2期宫颈癌。方法:收集2013年1月至2017年12月在云南省肿瘤医院确诊为Ⅰb2、Ⅱa2期(2009版FIGO分期)宫颈癌患者,根据2018版分期系统筛选出Ⅰb3、Ⅱa2期患者。分别比较新旧分期系统手术组与放疗组5年总生存期(OS)、无病生存期(DFS),以及比较新旧分期系统中手术组与放疗组、新辅助化疗与未行新辅助化疗的OS、DFS。结果:依据旧分期系统手术组纳入患者253例,其中Ⅰb2期199例(78.7%),Ⅱa2期54例(21.3%);放疗组71例,其中Ⅰb2期38例,Ⅱa2期33例。依据新分期系统手术组纳入患者200例,其中Ⅰb3期160例,Ⅱa2期例40例;放疗组41例,其中Ⅰb3期19例,Ⅱa2期22例。基于旧分期系统整体手术组和放疗组的DFS分别为79.8%和77.5%(P=0.42),OS分别为82.6%和70.4%(P=0.0075)。基于新分期系统整体手术组和放疗组的DFS分别为84%和75.5%(P=0.17),OS分别为86.5%和70.7%(P=0.0068)。基于旧分期系统Ⅰb2期手术组和放疗组的DFS分别为83.4%和84.2%(P=0.84),OS分别为86.9%和81.6%(P=0.35);Ⅱa2期手术组和放疗组的DFS分别为66.7%和69.7%(P=0.8),OS分别为66.7%和55.7%(P=0.13)。基于新分期系统Ⅰb3期手术组和放疗组的DFS分别为88.1%和68.4%(P=0.028),OS分别为90.0%和73.3%(P=0.036);Ⅱa2期手术组和放疗组的DFS分别为67.5%和81.1%(P=0.39),OS分别为70.0%和68.2%(P=0.62)。基于旧分期系统:整体手术组中新辅助化疗和未新辅助化疗DFS(P=0.93)、OS(P=0.92)无显著差异;放疗组中新辅助化疗DFS(P=0.64)、OS(P=0.44)无显著差异。基于新分期系统:整体手术组中新辅助化疗和未新辅助化疗DFS(P=0.8)、OS(P=0.8)无显著差异;整体放疗组中新辅助化疗组显示较差DFS(P=0.0089)及OS(P=0.012)。结论:无论新分期系统或旧分期系统手术组OS均高于放疗组,而DFS无显著差异;基于新分期系统手术改善Ⅰb3期患者DFS、OS;无论新分期系统或旧分期系统新辅助化疗未能改善患者手术或放疗患者预后。

基于lncRNA H19/miR-19b3p/FTH1轴探讨归芪益元膏联合顺铂对Lewis肺癌小鼠的干预效应及机制

目的基于lncRNAH19/miR-19b3p/FTH1轴探讨归芪益元膏联合顺铂对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用及机制。方法60只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机取10只作为空白组,其余50只皮下接种Lewis肺癌细胞复制肺癌小鼠模型。将成模小鼠随机分为模型组、顺铂组和中药低、中、高剂量联合顺铂组,每组10只,顺铂组予顺铂5 mg/kg腹腔注射,中药低、中、高剂量联合顺铂组予归芪益元膏1.75、3.5、7.0 g/kg灌胃联合顺铂5mg/kg腹腔注射,空白组和模型组予等体积生理盐水灌胃,连续14d。观察小鼠一般状况,测量小鼠瘤质量并计算抑瘤率、脾脏指数和胸腺指数,HE染色观察肿瘤组织病理形态,检测肿瘤组织丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢(H2O_(2))、亚铁离子(Fe^(2+))含量,免疫组化和Western blot检测肿瘤组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)蛋白表达,实时荧光定量PCR检测肿瘤组织lncRNAH19、miR-19b3p mRNA表达。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量、脾脏指数和胸腺指数均降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药组小鼠一般状况不同程度改善,瘤质量减少(P<0.05),脾脏指数及胸腺指数升高(P<0.05),肿瘤细胞溶解、破裂、数量减少,肿瘤组织MDA、H2O_(2)、Fe^(2+)含量升高(P<0.05),GSH含量降低(P<0.05),Nrf2、GPX4、FTH1、SLC7A11蛋白表达降低(P<0.05),lncRNAH19mRNA表达降低(P<0.05),miR-19b3pmRNA表达升高(P<0.05);与顺铂组比较,中药高剂量联合顺铂组小鼠瘤质量减少(P<0.05),体质量、脾脏指数和胸腺指数升高(P<0.05),肿瘤组织MDA、H2O_(2)、Fe^(2+)含量升高(P<0.05),GSH含量降低(P<0.05),Nrf2、FTH1、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05),lncRNAH19 mRNA表达降低(P<0.05),miR-19b3p mRNA表达升高(P<0.05)。结论归芪益元膏联合顺铂对Lewis肺癌小鼠具有明显抑瘤作用,其作用机制可能与调节lncRNAH19/miR-19b3p/FTH1轴相关铁死亡分子表达有关。

长链非编码RNA B3GALT5-AS1抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭及体内致瘤性

目的探究过表达长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)B3GALT5-AS1对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancers,NSCLC)生长和侵袭能力的影响。方法qRT-PCR检测临床样本中B3GALT5-AS1的表达。A549细胞分对照组、pcDNA-scramble组、pcDNA-B3GALT5-AS1组,按分组分别转染pcDNA-scramble和pcDNA-B3GALT5 AS1载体。菌落形成实验评估A549细胞集落形成能力,qRT-PCR检测Ki67和Survivin的mRNA表达;流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,蛋白质印迹检测P27、P53、VEGF和Vimentin蛋白表达。转染pcDNA-scramble和pcDNA-B3GALT5-AS1的A549细胞分别皮下注射裸鼠,检测瘤组织体积和重量;qRT-PCR检测B3GALT5-AS1的表达水平;免疫组化检测Ki67和VEGF的表达。结果肺癌组织中B3GALT5-AS1 mRNA相对表达量明显低于邻近正常组织(P<0.05)。与对照组比较,过表达B3GALT5-AS1 A549细胞集落形成能力降低(P<0.05),Survivin和Ki67表达量明显下调(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),侵袭细胞数目明显减少(P<0.05),P27和P53蛋白表达显著上调(P<0.05),VEGF和Vimentin蛋白表达显著下调(P<0.05)。体内异种移植实验结果显示,与pcDNA-scramble组比较,过表达B3GALT5-AS1明显减小肿瘤体积和重量(P<0.05),瘤组织中Ki67和VEGF阳性细胞数目明显减少(P<0.05)。结论过表达B3GALT5-AS1明显抑制NSCLC细胞的增殖和侵袭并促进凋亡,而且体内阻滞瘤组织的生长,在NSCLC起到抗癌作用。

罗汉果新品系大叶B3在灵川县的种植表现及优质高产栽培技术

我国的罗汉果主要产地集中在广东、广西、湖南、江西,又以广西桂北地区的永福县和临桂县为主,这也是我国罗汉果产业栽培发展的起源地。本文介绍了罗汉果新品系大叶B3在灵川县种植表现,具有根须发达、植株健壮、极易结果、高抗病毒病、果型大等特点,同时结合近两年灵川县气候特点,总结了大叶B3品系在灵川县栽植的高产栽培技术,以便广大科技工作者和农户推广种植提供参考。

鸡OATP1B3互作蛋白筛选及其相关基因的转录表达分析

【目的】筛选鉴定鸡有机阴离子转运多肽1B3(OATP1B3)的互作蛋白,并探究其对鸡蛋绿壳颜色形成的影响,为提高绿壳蛋鸡群体选育准确性提供参考依据。【方法】以真核表达载体p EGFP-SLCO1B3和空载体pEGFP-C1分别转染绿壳型赤水乌骨母鸡蛋壳腺上皮细胞,通过免疫共沉淀(Co-IP)结合液相色谱与串联质谱联用技术(LC-MS/MS)筛选鸡OATP1B3互作蛋白,经GO功能注释分析、KEGG信号通路富集分析及蛋白相互作用网络分析鉴定出与鸡蛋绿壳性状形成相关的OATP1B3互作蛋白。同时,通过构建SLCO1B3基因沉默及过表达载体分别转染蛋壳腺上皮细胞,检测SLCO1B3基因过表达或沉默时部分OATP1B3互作蛋白基因(FXR1、CTTN、RPL12和RPS17)在蛋壳腺上皮细胞中的表达情况,并根据鸡蛋壳颜色分为白壳、浅绿和深绿3种类型,分析蛋壳颜色△a*值与FXR1、CTTN、RPL12和RPS17基因表达的相关性。【结果】共筛选鉴定出37个与鸡OATP1B3相互作用的蛋白,其中FXR1、CTTN、RPL12和RPS17与鸡蛋的绿壳性状有密切关系。SLCO1B3基因过表达能极显著下调蛋壳腺上皮细胞内FXR1基因的表达(P<0.01,下同),显著上调RPL12基因表达(P<0.05,下同),极显著上调RPS17基因表达;当SLCO1B3基因沉默后,蛋壳腺上皮细胞内FXR1和CTTN基因的表达极显著上调,而RPL12基因的表达显著下调。白壳类型赤水乌骨母鸡下丘脑中的FXR1基因相对表达量极显著高于绿壳类型赤水乌骨母鸡,肝脏中的RPL12和RPS17基因相对表达量极显著或显著高于绿壳类型赤水乌骨母鸡;此外,FXR1基因在下丘脑中的相对表达量与蛋壳颜色△a*值极显著正相关,RPL12基因在蛋壳腺和肝脏中的相对表达量与蛋壳颜色△a*值极显著正相关。【结论】筛选鉴定出的37个鸡OATP1B3互作蛋白主要定位于细胞质和细胞核,具有蛋白结合能力及结构分子活性,主要参与细胞过程、生物调节和能量代谢。在鸡壳腺上皮细胞内SLCO1B3基因与FXR1、CTTN、RPL12和RPS17基因间存在调控关系,其中,FXR1和RPL12基因在鸡蛋绿壳性状的形成过程中发挥着重要作用。

白颖苔草UDP-糖基转移酶UGT72B3基因的克隆与耐盐性分析

土壤盐渍化是影响植物生长的重要因素。糖基转移酶是植物中重要的次生代谢调节者,参与逆境胁迫的响应。以来自河北黄骅地区盐碱地的耐盐型白颖苔草为材料,利用RACE技术克隆得到UDP-糖基转移酶家族基因CrUGT72B3全长,其开放阅读框长1434 bp,编码477个氨基酸。表达模式分析表明,CrUGT72B3基因在盐胁迫处理下有较强的响应表达。对过表达CrUGT72B3基因的拟南芥种子和幼苗进行耐盐性评价,均发现CrUGT72B3基因提高了拟南芥的盐敏感性。同时,在盐胁迫过表达CrUGT72B3基因拟南芥中发现,胁迫响应相关基因和苯丙烷代谢通路相关基因的表达均显著低于野生型,推测CrUGT72B3基因通过调节盐胁迫响应基因和苯丙烷代谢途径来影响拟南芥的耐盐性。初步判定CrUGT72B3基因参与了白颖苔草盐胁迫响应的分子调控,为CrUGT72B3基因后续功能的深入研究奠定了重要基础。

lncRNA MAGI2-AS3靶向调控miR-130a-5p对柯萨奇病毒B3诱导的大鼠心肌细胞H9C2损伤的影响

目的:探讨lncRNA MAGI2-AS3靶向miR-130a-5p调控柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的大鼠心肌细胞H9C2损伤的分子机制。方法:对照组,用不含药物、病毒的DMEM处理H9C2细胞48 h。CVB3组,用含有100倍半数组织培养感染剂量CVB3的DMEM处理H9C2细胞48 h(感染)。CVB3+sh-NC组,H9C2细胞转染sh-NC慢病毒后感染CVB3。CVB3+sh-MAGI2-AS3组,H9C2细胞转染sh-MAGI2-AS3慢病毒后感染CVB3。CVB3+miR-NC组,H9C2细胞转染miR-NC后感染CVB3。CVB3+miR-130a-5p组,H9C2细胞转染miR-130a-5p mimic后感染CVB3。sh-MAGI2-AS3+抗miR-NC组,sh-MAGI2-AS3、抗miR-NC共转染H9C2细胞后感染CVB3。sh-MAGI2-AS3+抗miR-130a-5p组,sh-MAGI2-AS3、抗miR-130a-5p共转染H9C2细胞后感染CVB3。qRT-PCR检测MAGI2-AS3、miR-130a-5p相对表达量;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;ELISA法检测TNF-α、IL-6分泌水平;双荧光素酶报告实验验证MAGI2-AS3与miR-130a-5p靶向关系;Western blot检测Bcl-2、Cleaved-Caspase-3蛋白相对表达量。结果:与对照组比较,CVB3组MAGI2-AS3相对表达量、细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平及TNF-α、IL-6分泌水平升高,而miR-130a-5p相对表达量、Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。分别与CVB3+sh-NC组、CVB3+miR-NC组相比,CVB3+sh-MAGI2-AS3组、CVB3+miR-130a-5p组细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平及TNF-α、IL-6分泌水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05)。MAGI2-AS3可靶向调控miR-130a-5p表达。与sh-MAGI2-AS3+抗miR-NC组比较,sh-MAGI2-AS3+抗miR-130a-5p组细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平及TNF-α、IL-6分泌水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:沉默MAGI2-AS3可通过上调miR-130a-5p而抑制细胞凋亡、炎症反应,进而减轻CVB3诱导的H9C2细胞损伤。

自身免疫性肝病患者SH2B3基因Rs3184504单核苷酸多态性分析

目的探讨自身免疫性肝病(AILD)患者SH2B衔接蛋白3(SH2B3)基因中Rs3184504单核苷酸多态性(SNP)变化。方法2017年6月~2023年10月我院收治的58例自身免疫性肝炎(AIH)、62例原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者和同期体检的60例健康人,采用PCR法检测SH2B3基因中Rs3184504位点多态性。应用Logistic回归分析SH2B3基因Rs3184504单核苷酸多态性与AIH或PBC的患病风险度。结果AIH组SH2B3基因Rs3184504位点中TT基因型和等位基因T占比分别为53.4%和66.4%,PBC组分别为54.8%和69.4%,均显著高于健康人(分别为16.7%和26.7%,P<0.05),而AIH组和PBC组SH2B3基因Rs3184504位点中CC基因型分别为20.7%和16.1%,均显著低于健康人的63.3%(P<0.05);Logistic回归分析显示,相对于SH2B3基因Rs3184504位点中CC基因型携带者,TT基因型携带者AIH患病风险提高了2.529倍(OR=2.529,P<0.05),相对于SH2B3基因Rs3184504位点中CC基因型携带者,CT基因型携带者PBC患病风险提高了2.812倍(OR=2.812,P<0.05),TT基因型携带者PBC患病风险提高了2.370倍(OR=2.370,P<0.05)。结论AILD与SH2B3基因中Rs3184504单核苷酸多态性变化有关,其中TT基因是AIH易感基因型,CT和TT基因型是PBC易感基因型,携带T等位基因的患者发生AILD的风险增加。

Reg Ⅲγ修饰HuMSCs对柯萨奇B3病毒诱导的心肌炎炎性细胞浸润及心脏功能的影响

目的:观察胰岛再生源蛋白Ⅲγ(RegⅢγ)修饰人脐带间充质干细胞(HuMSCs)对柯萨奇B3病毒(CVB3)诱导的小鼠心肌炎炎性细胞浸润及心脏功能的影响。方法:从新鲜脐带组织中提取HuMSCs,倒置显微镜观察形态,流式细胞仪检测细胞表面抗原表达;采用含过表达RegⅢγ的慢病毒感染HuMSCs,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测RegⅢγ mRNA表达水平。将40只小鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、HuMSCs组和RegⅢγ-HuMSCs组,每组10只。模型组、HuMSCs组和RegⅢγ-HuMSCs组采用腹腔注射CVB3建立心肌炎模型,HuMSCs组和RegⅢγ-HuMSCs组再分别尾静脉注射HuMSCs、RegⅢγ-HuMSCs。14 d后,采用高分辨率小动物超声成像系统记录小鼠心脏超声指标;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组血清白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6、IL-10和IL-23含量;苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织病理损伤情况,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测心肌组织细胞凋亡水平,免疫组织化学染色测定心肌组织T淋巴细胞表面抗原(CD4、CD8)和巨噬细胞特异性抗体(CD68)的表达。结果:分离的细胞呈典型纺锤形,细胞表面抗原CD44、CD73、CD90呈高表达,CD34、CD45、人类白细胞抗原-DR蛋白(HLA-DR)呈低表达,说明成功分离到HuMSCs。经过慢病毒感染的HuMSCs有明显绿色荧光蛋白表达,RegⅢγ mRNA表达水平高于未感染的细胞(P<0.05),说明成功得到RegⅢγ修饰的HuMSCs。与对照组比较,模型组小鼠射血分数(EF)、缩短分数(FS)降低,左室舒张末期容积(LVEDV)和左室收缩末期容积(LVESV)升高,血清IL-2、IL-6和IL-23含量增加,IL-4和IL-10含量减少,心肌组织内炎性细胞浸润明显,TUNEL阳性率增加,CD4、CD8及CD68蛋白表达均呈强阳性(P<0.05);与模型组比较,HuMSCs组和RegⅢγ-HuMSCs组小鼠EF和FS升高,LVEDV和LVESV降低,血清IL-2、IL-6和IL-23含量减少,IL-4和IL-10含量增加,心肌组织炎性细胞浸润减少,TUNEL阳性率减少,CD4、CD8及CD68蛋白表达均下降(P<0.05);相较于HuMSCs组,RegⅢγ-HuMSCs组小鼠EF和FS升高,LVEDV和LVESV降低,血清IL-2、IL-6和IL-23含量减少,IL-4和IL-10含量增加,心肌组织未见明显炎性细胞浸润,TUNEL阳性率减少,CD4、CD8及CD68蛋白表达下降(P<0.05)。结论:RegⅢγ修饰的HuMSCs可减轻CVB3诱导的小鼠心肌炎心肌损伤与炎性细胞浸润,改善心脏功能。

赤水乌骨鸡SLCO1B3基因SNPs鉴定及与蛋品质的关联性分析

为了探究赤水乌骨鸡SLCO1B3基因外显子上的遗传变异位点对蛋壳颜色、蛋品质指标的影响,对300只赤水乌骨鸡SLCO1B3基因的功能突变位点EAV-HP进行基因分型,筛选出109只绿壳纯合基因型(SL/SL)的母鸡。通过直接测序方法鉴定纯合子基因型(SL/SL)个体的SLCO1B3基因外显子上存在的SNPs,并构建这些SNPs的双倍型,再与蛋品质指标进行相关性分析。结果表明:在赤水乌骨鸡SLCO1B3基因外显子上共检测到3个SNPs,第5外显子上的g.65235858G>A位点为非同义突变,突变后mRNA二级结构发生改变;关联性分析表明,赤水乌骨鸡SLCO1B3基因的这3个SNPs构建的双倍型对蛋壳颜色ΔL*值、蛋壳颜色Δb*值、蛋形指数有显著影响(P<0.05)。结果表明,SLCO1B3基因的遗传变异与蛋壳颜色、蛋形指数存在显著相关。

上皮性卵巢癌HMGB3表达及预后价值的生物信息学分析

目的 探讨高迁移率族蛋白B3(HMGB3)在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达及其与EOC患者预后的关系。方法 应用GEPIA2、UALCAN及TIMER 2.0数据库分析HMGB3在EOC组织中的表达水平及其与预后的相关性;通过UALCAN分析HMGB3可能参与调控的信号通路;利用TIMER 2.0分析HMGB3表达对肿瘤微环境中免疫细胞浸润的影响,分析HMGB3基因与PARP1、PARP2基因表达的相关性。结果 1)EOC组织中HMGB3的表达水平显著上调(P<0.05);2)HMGB3高表达EOC患者的无病生存率、总生存率均显著优于HMGB3低表达患者(P均<0.05);3)HMGB3高表达与CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞的高丰度相关(r=0.191,0.153,P均<0.05);4)HMGB3基因与PARP1、PARP2基因表达呈正相关(r=0.308,0.398,P均<0.001)。结论 HMGB3在EOC组织中显著上调,其高表达预示EOC患者预后良好,并与PARP1、PARP2基因表达相关,可作为EOC预后相关的潜在生物标志物。

circSLCO1B3在三阴乳腺癌脑转移中的作用及其调控机制

目的探讨circSLCO1B3在三阴乳腺癌(TNBC)脑转移中的作用及其可能的调控机制。方法采用qRT-PCR实验检测circSLCO1B3在乳腺癌细胞系中的表达。采用过表达质粒上调TNBC子代脑转移细胞231Br中circSLCO1B3的表达,设为circSLCOB3-OE组(转染对照质粒的为circCTR-OE组),采用Transwell侵袭实验检测circSLCO1B3对231Br细胞侵袭能力的影响。经小鼠左心室注射231Br细胞,构建体内脑转移模型,检测circSLCO1B3对TNBC脑转移能力的影响。通过CircInteractome及TargetScan在线软件分别预测与circSLCO1B3结合的miRNA及miRNA下游靶基因,并使用双荧光素酶报告基因和qRT-PCR、Western blotting实验验证其调控关系。结果相对正常乳腺上皮细胞,circSLCO1B3在TNBC细胞系中均显著下调,且在TNBC子代脑转移细胞231Br中下调最为显著(P<0.05)。与circCTR-OE组比较,circSLCOB3-OE组231Br细胞的侵袭能力、脑转移结节数目均显著降低(P均<0.05)。与细胞核比较,circSLCO1B3在细胞质中的相对含量高(P<0.05)。与野生型circSLCO1B3+miR-NC共转染组相比,野生型circSLCO1B3+miR-155组的相对荧光酶活性显著降低(P<0.05);与circCTR-OE组相比,circSLCO1B3-OE组miR-155的相对表达量显著降低(P<0.05)。与野生型PTEN+miR-NC共转染组相比,野生型PTEN+miR-155组的相对荧光酶活性显著降低(P<0.05)。与转染miR-NC相比,转染miR-155细胞PTEN mRNA的相对表达量显著降低(P<0.05)。与circCTR-OE组比较,circSLCOB3-OE组PTEN mRNA的相对表达量及PTEN蛋白表达显著增加,而与circSLCOB3-OE组比较,circSLCOB3-OE+miR-155组PTEN的表达则显著降低(P均<0.05)。结论circSLCO1B3通过吸附miR-155,上调PTEN蛋白的表达,进而抑制TNBC脑转移。

乳腺癌组织miR-10a-5p、HOXB3水平对预后的预测价值

目的探讨乳腺癌组织中微小RNA-10a-5p(miR-10a-5p)、同源异型盒基因B3(HOXB3)水平对患者预后的预测价值。方法选取2016年1月至2017年5月于该院就诊的75例乳腺癌患者,收集患者的乳腺癌组织及癌旁正常组织。采用实时荧光定量PCR检测乳腺癌组织及癌旁正常组织中miR-10a-5p水平,免疫组织化学染色观察乳腺癌组织及癌旁正常组织中HOXB3表达,蛋白质印迹法检测乳腺癌组织及癌旁正常组织中HOXB3水平;对患者进行5年随访,将生存的59例患者(生存组)记为预后良好,死亡的16例患者(死亡组)记为预后不良;比较乳腺癌组织和癌旁正常组织、生存组和死亡组乳腺癌组织miR-10a-5p、HOXB3水平;采用Spearman相关分析乳腺癌组织miR-10a-5p与HOXB3水平的相关性;采用受试者工作特征曲线评估乳腺癌组织miR-10a-5p、HOXB3水平及二者联合检测对患者5年内死亡的预测价值;采用Logistic回归分析乳腺癌患者5年内死亡的影响因素。结果乳腺癌组织miR-10a-5p水平低于癌旁正常组织,HOXB3高表达比例和HOXB3水平均高于癌旁正常组织(P<0.05);乳腺癌组织miR-10a-5p水平与HOXB3呈负相关(P<0.05);与生存组比较,死亡组低分化、淋巴结转移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期患者比例均较高(P<0.05);死亡组乳腺癌组织miR-10a-5p水平低于生存组,HOXB3高表达比例和HOXB3水平均高于生存组(P<0.05);乳腺癌组织miR-10a-5p、HOXB3、二者联合检测预测患者5年内死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.881、0.836、0.948,二者联合检测的AUC优于miR-10a-5p、HOXB3单独检测的AUC(P<0.05);肿瘤分化程度低分化、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期、miR-10a-5p低水平、HOXB3高水平均是影响乳腺癌患者5年内死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论乳腺癌组织中miR-10a-5p表达下调,HOXB3表达上调,二者与患者预后密切相关,可作为预测乳腺癌患者预后的指标。

PAFAH1B3表达水平与多发性骨髓瘤患者自体造血干细胞移植后疾病进展风险的相关性

目的:探讨接受自体造血干细胞移植(AHSCT)治疗的多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓CD138^(+)细胞中血小板激活因子乙酰水解酶1B3(platelet-activating factor acetylhydrolase 1B3,PAFAH1B3)基因表达水平与2年内预后之间的相关性。方法:选取2014年5月至2019年5月间于南通大学第一、第二附属医院就诊的147例行AHSCT治疗的MM患者作为研究对象,检测患者骨髓CD138^(+)细胞中PAFAH1B3 mRNA的表达水平,并将随访2年间疾病进展或死亡者纳入进展组,其余纳入预后良好组。比较两组患者的临床资料和PAFAH1B3 mRNA表达水平,以入组患者PAFAH1B3 mRNA表达水平中位数为界将患者分为PAFAH1B3高表达组和低表达组,采用Kaplan-Meier法比较两组患者的无进展生存率(PFSR)。应用单因素分析和多因素COX回归分析法分析患者2年内预后的相关因素。结果:随访结束时共有13/147例患者失访,最终进展组纳入44例,预后良好组纳入90例。进展组年龄高于预后良好组,移植后达CR^(+)VGPR患者比例低于预后良好组,两组ISS分期例数分布差异有统计学意义(均P<0.05);进展组PAFAH1B3 mRNA表达水平和LDH>250 U/L患者比例均高于预后良好组,PLT值低于预后良好组(均P<0.05);PAFAH1B3高表达组2年PFSR显著低于低表达组(log rankχ^(2)=8.167,P=0.004);LDH>250 U/L(HR=3.389,P=0.010)、PAFAH1B3 mRNA表达水平(HR=50.561,P=0.001)和ISSⅢ期(HR=1.000,P=0.003)为患者预后的独立危险因素,ISSⅠ期(HR=0.133,P=0.001)为患者预后的独立保护因素。结论:接受AHSCT治疗的MM患者骨髓CD138^(+)细胞中PAFAH1B3 mRNA表达水平与预后相关,检测PAFAH1B3 mRNA表达水平对预测患者的PFSR和预后分层具有一定意义。

高效液相色谱双柱串联技术用于维生素B3的高效分离测定

建立了一种基于双色谱柱串联技术的高效液相色谱法,用于功能饮料以及药物中的维生素B3的测定。C18柱在前亲水相互作用色谱(HILIC)柱在后进行串联,流动相为乙腈-0.1%醋酸水溶液=10∶90 (V/V),柱温为30℃,流速为0.4 mL/min,紫外检测波长为262 nm。结果表明:在2个功能饮料样品中没有检测到维生素B3,在维生素B3粉末中检测到维生素B3的含量为0.15 mg/g。所建立方法的线性方程为y=1.85x-0.13,相关系数r为0.999 9,检出限为0.033 mg/L。加标回收实验的回收率在93.05%~119.35%之间,相对标准偏差在0.15%~4.50%之间。该方法能够对复杂基质样品中的维生素B3进行有效测定。