9～10周龄CB6F1与B6CF1小鼠血生化、主要脏器质量及脏器系数测定

目的测定CB6F1与B6CF1小鼠血生化、主要脏器质量和脏器系数,并进行比较分析。方法随机选取9~10周龄SPF级CB6F1与B6CF1小鼠各40只,雌雄各半。分别称重,麻醉后摘眼球采血后,颈椎脱臼处死,运用全自动生化分析仪测定血生化指标,并采集脏器测定脏器质量,计算脏器系数。结果 14项血生化指标比较,CB6F1小鼠雌雄之间有11项指标(11/14)、B6CF1小鼠雌雄之间有9项指标(9/14)、CB6F1与B6CF1小鼠雌性之间有10项指标(10/14),雄性之间11项(11/14)指标均存在显著性差异(P<0.05)。CB6F1与B6CF1小鼠主要脏器质量与脏器系数比较,同品系雌雄之间,同性别2个品系之间,均有部分指标存在显著性差异(P<0.05)。结论以BALB/c和C57BL/6为父母本杂交产生的不同F1代小鼠CB6F1和B6CF1,其血生化指标、脏器质量和脏器系数有所不同。

高脂诱导的C57BL/6 (H-2b)2型糖尿病小鼠十二指肠空肠旷置术模型的建立

目的：探讨建立一种C57BL／6（H-2b）高脂诱导的2型糖尿病小鼠保留全胃的十二指肠空肠旷置术（DJB）新型降糖术式动物模型的可行性和操作要点。方法：16只C57BL／6（H-2b）高脂诱导的2型糖尿病小鼠随机分为实验组和对照组各8只，规范的术前、术中及术后操作，实验组和对照组分别行DJB和假手术，比较两组小鼠术前及术后7、14、28d平均空腹血糖，评价手术造模是否成功以及成活率。结果：术后1-28d对照组小鼠存活7只，手术组小鼠成活6只，两组成活率差异无统计学意义（P〉0．05）；与术前比较，实验组术后7d空腹血糖明显下降（P〈0．05），术后14、28d血糖趋于稳定，对照组空慢血糖术后第14、28天与术前比变化无统计学意义（P〉0．05），提示模型建立成功。结论：成功地建立C57BL／6（H-2b）高脂诱导的2型糖尿病小鼠DJB动物模型。十二指肠空肠旷置术是一种可行、安全有效的降糖术式，规范实验操作程序可以降低术中风险。

不同浓度弗氏佐剂对B6AF1小鼠免疫性卵巢早衰模型建立的影响

目的观察不同浓度弗氏佐剂对透明带3多肽(pZP3)诱导的B6AF1小鼠免疫性卵巢早衰(POF)模型的影响。方法取6~8周龄雌性B6AF1小鼠80只,随机分为空白组、不完全弗氏佐剂组、完全弗氏佐剂组[含结核分枝杆菌(TB)1 mg/mL)和不完全弗氏佐剂+TB(3.3 mg/mL)组,应用HE染色法比较不同注射量的弗氏佐剂对POF模型小鼠免疫效果的影响。结果免疫后模型组小鼠卵巢体积萎缩,闭锁卵泡增多,卵泡周围见间质淋巴细胞浸润。不完全弗氏佐剂+TB(3.3 mg/mL)组免疫效果最好,完全弗氏佐剂组次之。结论不同浓度弗氏佐剂联合pZP3均可诱导B6AF1小鼠成功构建POF疾病模型,引起免疫性卵巢炎;含高浓度TB造模效果较好。

胰腺部分切除诱导胰岛细胞再生小鼠模型的建立及研究

目的探讨小鼠部分胰腺切除手术诱导的糖尿病以及对胰岛细胞再生的影响,以建立研究胰岛细胞再生的动物模型。方法对3月龄近交品系C57B6小鼠胰腺切除65%～70%,通过代谢方法、糖耐量和免疫组织化学的方法,研究该方法对血糖和胰岛细胞的再生影响,以确定该模型是否能用于糖尿病的研究。结果小鼠胰腺部分切除,术后一周内小鼠糖耐量受损。术后第14天和第28天的糖耐量实验结果表明3月龄小鼠的糖耐量随着时间的推移而逐渐恢复。免疫组化结果显示3月龄小鼠术后1周胰岛β细胞再生率为(15.1±10.0)%,2周为(25.4±8.1)%,4周为(45.7±14.6)%。结论胰腺部分切除手术能够一定程度上诱导小鼠产生糖尿病,并且诱导胰岛β细胞的再生,从而可用于研究胰岛β细胞再生的基础研究。

角膜混浊小鼠突变候选基因Map3k1克隆与序列分析

对具有角膜混浊表型的B6-Co突变系小鼠突变候选基因Map3k1进行克隆及测序分析,寻找该突变系小鼠Map3k1基因的突变位点。以小鼠Map3k1基因的mRNA、全长及上游5 kb序列设计引物,分别以基因组DNA和mRNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术分段扩增目的基因,将目的片段连接在T载体上,转化至感受态细胞,筛选阳性克隆,质粒DNA分子提取,电泳检测,EcoRⅠ酶切释放目的片段,送上海生工生物工程技术服务有限公司测序。成功扩增出Map3k1基因的20个外显子和上游调控序列,B6-Co小鼠测序结果与基因组数据库序列比对,该基因位于13号染色体第112 559 574的碱基由T突变为A,编码的蛋白质第314氨基酸由亮氨酸变为谷氨酸,但是该基因的表达调控及蛋白质剪切机制仍有待深入研究。

视网膜抗原免疫联合内毒素诱导的新的EAU小鼠模型

背景 葡萄膜炎的发病机制和治疗仍是目前的研究热点,但多年来该领域的基础研究仍是沿用传统的造模方法制备相关的动物模型,与人类的葡萄膜炎自然病程有较大偏差. 目的 本研究用大肠杆菌内毒素,即脂多糖（LPS）替代百日咳毒素（PTX）作为主要诱发因素,建立更符合人类自然发病环境的新型实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎（EAU）的动物模型,并与传统的造模方法进行比较,为研究该病的发病机制和有效的治疗方案提供实验依据.方法 6～8周龄的无特定病原体级雌性C57BL/6（H-2b）小鼠20只,按随机数字表法分为正常对照组、单纯内毒素注射组（EIU组）、多肽＋完全弗氏佐剂（CFA）注射组（EAU组）、多肽＋CFA＋LPS组（LPS-EAU组）.LPS-EAU组先用人类光感受器间维生素A类结合蛋白（IRBP 1-20）＋CFA免疫小鼠,免疫后第7天小鼠足底注射LPS,诱发小鼠EAU模型.采用组织病理学损害、眼球组织病理学评分、迟发型过敏反应、特异性淋巴细胞增生反应等评价指标对动物模型进行鉴定,并与LPS诱导的EIU及IRBP 1-20＋ CFA免疫诱导的EAU进行比较.结果 正常对照组小鼠虹膜睫状体及视网膜组织结构未见异常;EIU组小鼠虹膜睫状体可见轻微血管扩张、蛋白及纤维素渗出,但玻璃体和视网膜组织内未见血管异常及炎症反应;EAU组小鼠虹膜睫状体未见血管扩张及炎性渗出,但可见视网膜轻微血管周围炎及神经纤维层肿胀;LPS-EAU组小鼠视网膜结构紊乱,可见较多的炎性细胞浸润、光感受器细胞损伤及视网膜全层破坏.正常对照组小鼠和EIU组小鼠病理评分均为0分,EAU组病理评分为0.5分,而LPS-EAU组小鼠病理评分为3.0分,显著高于EAU组,差异有统计学意义（U=16.246,P=0.001）.LPS-EAU组小鼠耳廓增厚值为（35.60±0.55） tm,显著高于EIU组小鼠的（12.60±0.55）μm,差异均有统计学意义（q=23.003,P＜0.01）;但与EAU组小鼠的（34.80±0.84）μm比较,差异无统计学意义（q=0.820,P＞0.05）.LPS-EAU组小鼠的脾细胞体外培养的克隆数显著增加,其3 HTdR掺入值（CPM）为（8 540.00±54.77）/min,而EAU组的cpm为（8 484.00±47.75）/min,差异无统计学意义（q=56.634,P=0.069）,但与EIU组的cpm（2 050.00±50.00）/min比较,LPS-EAU组明显升高,差异有统计学意义（q=195.683,P=0.000）. 结论 LPS可以成功诱发小鼠的EAU,该动物模型在模拟病因方面更符合人类自然发病环境,为研究人类EAU的病因和发病机制提供了一个可能更好的动物模型.

小鼠正畸牙移动中牙周组织自噬相关基因表达的初步研究

目的研究小鼠正畸牙移动模型中移动牙牙周组织自噬相关基因的表达,探讨自噬在正畸牙移动骨塑建中的作用。方法 30只11周龄雄性C57B/6小鼠随机分为3组,每组10只。A组构建小鼠正畸牙移动模型,安放镍钛拉簧并施加矫治力;B组放置拉簧但不加矫治力;C组空白组。加力装置均安放于上颌左侧第一磨牙与左侧切牙之间,加力至第12 d处死小鼠。取左侧上颌骨标本,制作左侧上颌第一磨牙牙周组织标本切片,采用微计算机断层扫描技术测量牙移动距离,使用苏木精-伊红(HE)染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和实时荧光定量聚合酶联式反应(RT-qPCR)观察牙移动情况,检测牙周组织中骨塑建相关基因[骨保护因子(OPG)和破骨细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)]和自噬相关基因(包括Atg5、Atg7和Beclin-1)的表达。结果 A组平均牙移动距离0.09 mm,HE染色显示A组牙根张力侧与压力侧的牙周膜间隙不均等,压力侧细胞受到挤压、张力侧细胞受到拉伸。TRAP染色显示A组第一磨牙牙根近中侧见到阳性破骨细胞且A组压力侧破骨细胞数大于张力侧,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-qPCR显示A组牙周组织OPG信使RNA(mRNA)表达显著降低,RANKL、Atg5、Atg7及Beclin-1 mRNA表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 正畸力作用下牙周组织自噬相关基因表达水平升高,自噬可能通过影响牙周组织中破骨水平参与了正畸牙移动骨塑建过程。

细胞周期蛋白B在不同发育阶段Rd1小鼠眼球中的表达及意义

为了研究细胞周期蛋白B(CCNB)在不同发育阶段Rd1小鼠眼球中的表达及意义,采用荧光定量PCR方法对其进行检测。结果表明:与对照组(B6小鼠)相比,CCNB1在出生后21天Rd1小鼠眼球中的表达量极显著升高(P<0.01),约为对照组的146倍。两因素方差分析结果显示,两种属间CCNB1的表达量差异极显著(F=57.64,P<0.000 1),21天时试验组CCNB1的表达量与对照组相比差异极显著(t=24.23,P<0.000 1)。CCNB2在出生后7,14,28天Rd1小鼠眼球中的表达量均比对照组低,而在出生后21天Rd1小鼠眼球中的表达量极显著增加(P<0.01),约为对照组的435倍。在不同发育阶段,试验组CCNB2的表达量与对照组相比有差异。对照组CCNB3的表达量在出生后28天下降,且与对照组相比差异极显著(P<0.01)。在不同发育阶段,试验组CCNB3的表达量与对照组相比有差异。说明细胞周期蛋白B家族在Rd1小鼠视网膜神经细胞退化过程中参与了视神经细胞凋亡进程,在视神经细胞发育中可能发挥重要作用。

莪术对黑色素瘤细胞转移相关能力的影响

目的:研究中药莪术对小鼠黑色素瘤高转移细胞B16-BL6转移相关能力的影响。方法:分别采用cck-8法、细胞粘附实验、重组基底膜侵袭实验、趋化性运动能力实验以及小鼠黑色素瘤自发性转移模型,观察莪术对B16-BL6细胞生长、粘附、侵袭、运动及转移能力的影响。结果:莪术水提液在较高浓度下能显著抑制B16-BL6的增殖;显著抑制B16-BL6对LN的粘附能力,侵袭性及趋化性运动能力,显著抑制黑色素瘤的在体生长及肺转移。结论:莪术水提液能够抑制黑色素瘤高转移细胞株B16-BL6的转移,可能与其能够抑制B16-BL6与细胞外基质的粘附以及降低B16-BL6的侵袭性和运动能力有关。

自身免疫型卵巢早衰模型的研究

目的为了更好地建立自身型卵巢早衰模型,采用不同的造模时间和佐剂观察ZP3诱导的免疫型卵巢早衰模型建立的相关因素。方法将动情周期正常的B6AF1小鼠,随机分为正常组、模型A组、模型B组、模型C组、模型D组。造模结束后取小鼠血清检测性激素,取卵巢观察病理改变、透明带的变化、颗粒细胞的凋亡。结果除模型A组外,其余3组均表现出动情周期紊乱、高促性腺激素低雌激素、闭锁卵泡增多、透明带明显、卵巢凋亡细胞增多的现象,与各组相比模型C组和D组在闭锁卵泡数量、卵巢凋亡细胞和透明带的变化上更加明显。结论ZP3诱导可造成免疫型卵巢早衰,其中3次免疫的两组成模效果更好,成模率在80%,可作为今后建模的参考。

麻黄附子细辛汤配合电针介导TGF-β1/Smad通路调控钙通道改善窦房结纤维化

目的 探讨麻黄附子细辛汤配合电针对窦房结纤维化小鼠钙离子通道的影响及可能机制。方法 C57B6小鼠随机分为对照组(Control组)、模型组(Model组)、麻黄附子细辛汤配合电针治疗组(MFXE组);其中Model组、MFXE组饲养至18月龄进行实验,MFXE组灌胃麻黄附子细辛汤配合电针处理,持续21天。电生理仪监测各组小鼠心率;取心脏窦房结,分别进行HE、Masson染色,观察窦房结病理损伤及纤维化程度;Western blot检测Klotho、Trpv3、Trpv6蛋白的表达;Western blot与qRT-PCR方法检测TGF-β1/Smad通路相关TGF-β1、Smad2、Smad3和Smad7蛋白和mRNA的表达。结果 麻黄附子细辛汤配合电针治疗能够提高窦房结纤维化小鼠的心率,从而改善窦房结纤维化损伤,同时上调Klotho蛋白的表达,增加钙通道调节蛋白Trpv3、Trpv6蛋白的表达,抑制TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达。结论 麻黄附子细辛汤配合电针通过调控TGF-β1/Smad通路降低窦房结纤维化损伤,促进窦房结纤维化小鼠的钙离子转运。