CTLA-4Ig对B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠脾脏Th17和Treg细胞表达的影响与其对小鼠狼疮样病征干预作用的相关性研究

目的:初步探讨B7阻断剂CD28与细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA-4Ig)对B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠脾脏Th17和调节性T细胞(Treg细胞)表达的影响与其对小鼠狼疮样病征干预作用之间的相关性。方法:将4个月龄大小雌性B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠16只,随机分为观察组(Ⅰ组)和对照组(Ⅱ组),分别静脉注射CTLA-4Ig及等量PBS,检测小鼠干预前后24 h尿蛋白、ANA抗体、ds-DNA抗体及干预结束2周后血清IL-17A、脾脏中Th17细胞和Treg细胞百分比。结果:末次干预2周后Ⅰ组的24 h尿蛋白、血清ANA及ds-DNA较Ⅱ组下降均有统计学意义(均P<0.05)。末次干预2周后Ⅰ组血清中IL-17A、脾脏Th17细胞比例均较Ⅱ组低,而脾脏的Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的比例高于Ⅱ组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:CTLA4-Ig具有减轻B6.MRL-Faslpr/J狼疮鼠狼疮样病征的作用;上调Treg细胞、下调Th17细胞可能是CTLA-4Ig减轻B6.MRL-Faslpr/J狼疮鼠狼疮样病征的重要机制之一。

脂肪干细胞联合巴戟天提取物对B6.MRL-Faslpr/Nju狼疮小鼠肾损伤及免疫炎性因子的影响

目的探讨脂肪干细胞(adipose tissue derived stem cells,ADSCs)联合巴戟天提取物(Morinda officinalis How,MOH)对B6.MRL-Faslpr/Nju(B6.MRL/lpr)狼疮小鼠肾损伤及免疫炎性因子的影响。方法取C57BL/6J(C57)小鼠腹股沟脂肪分离培养ADSCs,CCK-8检测MOH对ADSCs细胞活性的影响。将10只C57小鼠设为正常组,40只B6.MRL/lpr小鼠随机分为模型组、ADSCs组、MOH组、ADSCs+MOH组。正常组和模型组灌胃生理盐水;ADSCs组尾静脉注射ADSCs(1×105个);MOH组灌胃MOH(10 mg·kg-1);ADSCs+MOH组应用ADSCs和MOH联合治疗,共8周。ELISA法检测血清中抗dsDNA抗体浓度变化,检测肾组织匀浆液中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-17、IL-10、IL-6的表达水平,考马斯亮蓝法检测24 h尿蛋白的浓度变化;HE染色观察肾脏病理组织学变化。结果MOH浓度在20~200μg·mL-1范围内可以促进ADSCs增殖(P<0.01)。与正常组比,模型组抗dsDNA抗体、尿蛋白、TNF-α、IL-17、IL-10、IL-6明显升高(P<0.01);与模型组比,ADSCs组抗dsDNA抗体、尿蛋白、TNF-α、IL-17、IL-6均明显降低(P<0.01)。MOH组抗dsDNA抗体、尿蛋白、IL-17、IL-10、IL-6均显著降低(P<0.01)。ADSCs+MOH组抗dsDNA抗体、尿蛋白、TNF-α、IL-17、IL-10、IL-6均显著降低(P<0.01)。肾脏病理检查显示ADSCs、MOH、ADSCs+MOH均可明显改善B6.MRL/lpr小鼠的肾脏病理结构,减轻肾小球细胞增生,而ADSCs+MOH联合治疗效果较好。结论ADSCs、MOH、ADSCs+MOH均可改善B6.MRL/lpr小鼠肾脏病理结构,调节肾脏的免疫炎性因子,降低抗dsDNA抗体、尿蛋白的浓度,而ADSCs+MOH联合治疗效果最明显。MOH在体外可以促进ADSCs细胞的活性。ADSCs、MOH联用治疗B6.MRL/lpr小鼠具有协同作用。

柯萨奇病毒B3诱导的病毒性心肌炎C57BL/6J小鼠模型的建立

目的：建立由柯萨奇病毒B3（CVB3）Nancy株诱导的病毒性心肌炎（VMC）C57BL/6J小鼠模型。方法：4周龄、6周龄C57BL/6J小鼠各50只,每个年龄组随机选取15只作为对照（腹腔注射PBS）,剩余35只腹腔接种含CVB3 Nancy株的病毒悬液（1×10^5PFU/只）,于感染后第14天取心脏,行HE染色和CD3、CD45免疫组化染色,进行病理学评价,检测血清白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,并做心肌组织中病毒滴度检测,采用Western blot法检测磷酸化AKT、Ik Bα、GSK3β的表达。结果：4周龄小鼠造模过程中有19只（54.3%）死亡;与对照小鼠比较,模型小鼠心肌呈现弥漫性炎性细胞浸润和片状心肌细胞变性坏死,CD3、CD45阳性细胞弥漫浸润于心肌间质,血清IL-1β、TNF-α水平明显升高（P〈0.05）,心肌组织中磷酸化AKT、Ik Bα、GSK3β表达增高（P〈0.05）。6周龄小鼠造模过程中有3只（8.6%）死亡,模型小鼠心肌组织中炎症反应轻于4周龄模型小鼠（P〈0.05）。结论：成功建立了VMC的C57BL/6J小鼠模型,4周龄C57BL/6J小鼠更适用于模型的建立。

B6. MRL-Fas^(lpr)/J狼疮小鼠脾脏组织中Th17细胞比例及其与病情的相关性

目的探讨Th17细胞在系统性红斑狼疮发生、发展中的作用。方法观察组为B6.MRL-Faslpr/J(简称B6.Fas)狼疮小鼠9只,对照组为雌性C57BL/6J小鼠6只。采用流式细胞术检测两组脾脏组织匀浆中的Th17细胞比例;采用ELISA法检测血清IL-17A、ANA及dsDNA抗体水平,磺基水杨酸—硫酸钠比浊法检测小鼠24 h尿蛋白量;分析观察组各指标间的相关性。结果观察组Th17细胞比例、IL-17A、ANA、dsDNA抗体水平及24 h尿蛋白量均明显高于对照组,P均<0.05;观察组脾脏Th17细胞比例与血清IL-17A、ds-DNA抗体及24 h尿蛋白量呈正相关,与血清中ANA无明显相关性;IL-17A水平与血清中ds-DNA及24 h尿蛋白量呈正相关,与血清ANA无明显相关性。结论 Th17细胞可能与狼疮的发病及病情活动、肾脏损害有一定相关性。

C57BL/6J小鼠及鸡胚B16细胞移植瘤血管生成拟态的观察及其MMP7和MMP9的表达

【目的】探讨黑色素瘤B16细胞鸡胚和小鼠移植瘤组织中MMP7和MMP9的表达与血管生成拟态形成的关系,初步探讨宿主微环境对肿瘤细胞的影响。【方法】分别建立黑色素瘤B16细胞鸡胚和小鼠移植瘤模型,通过HE切片观察血管生成拟态的分布情况,利用免疫组化方法检测MMP7和MMP9的表达。【结果】B16细胞鸡胚和小鼠移植瘤组织中均可见血管生成拟态,并且前者显著多于后者。鸡胚移植瘤组织和小鼠移植瘤组织中MMP7的阳性细胞百分比分别为34.55±8.98和15.27±4.21,前者显著高于后者(P<0.01),MMP9的阳性细胞百分比分别为16.38±3.34和10.53±1.95,前者显著高于后者(P<0.01)。【结论】鸡胚移植瘤可用于研究肿瘤生长早期的生物学行为,MMP7和MMP9的表达可能与肿瘤生长早期血管生成拟态的形成有关。

CAST/EiJ小鼠外周血和脾中免疫细胞及亚群分析

目的探索CAST/EiJ小鼠对多种病原体易感的可能原因,分析CAST/EiJ小鼠外周血和脾内的免疫细胞表型,明确CAST/EiJ小鼠的免疫细胞构成。方法利用流式细胞术,通过细胞表面标记物CD3、CD4、CD8、CD11b、CD11c、CD19、CD27、CD49b和TCRβ检测CAST/EiJ小鼠和C57BL/6J小鼠外周血和脾内经典型树突状细胞(cDCs)、自然杀伤细胞(NK)、B淋巴细胞、T淋巴细胞及其亚群的细胞比例。结果CAST/EiJ小鼠与C57BL/6J小鼠的cDCs细胞比例无明显差异,但cDC1细胞亚群比例偏低;CAST/EiJ小鼠的NK细胞(主要是成熟NK细胞亚群)和T淋巴细胞(主要是CD8+T细胞)比例都显著低于C57BL/6J小鼠,而CAST/EiJ小鼠的B淋巴细胞比例高于C57BL/6J小鼠。结论CAST/EiJ小鼠中NK和T淋巴细胞比例显著低于C57BL/6J小鼠。

C57BL/6J小鼠黑色素瘤肺转移模型的构建

目的探讨建立C57BL/6 J小鼠黑色素瘤肺转移模型的影响因素,包括肿瘤的接种方式、细胞接种数量和成瘤周期。方法体外培养小鼠黑色素瘤细胞B16F10。1)取6~8周龄,雄性小鼠18只,随机分三组,每组6只,分别采取尾静脉注射、腹腔注射和皮下注射方式,每只小鼠注射100μL(3×10~6个细胞)B16F10细胞悬液,2周后,解剖小鼠并观察黑色素瘤的生长和转移情况;2)分3组,同上,经尾静脉分别注射3×10~6个细胞、1×10~6个细胞、3×10~5个细胞,2周后,解剖小鼠并观察黑色素瘤的生长和转移情况;3)分3组,同上,尾静脉注射1×10~6个细胞,分别于1周、2周、3周解剖小鼠,观察黑色素瘤的生长和转移情况。结果 1)尾静脉注射小鼠黑色素瘤细胞,小鼠发生肺转移的成功率为100%,而腹腔注射和皮下注射未发生肺转移。2)接种小鼠黑色素瘤细胞数量为1×10~6时,发生肺部转移的黑色素瘤细胞数量适中;接种细胞数量为3×10~6时,发生肺部转移的黑色素瘤细胞数量过多;接种细胞数量为3×10~5时,发生肺部转移的黑色素瘤细胞数量较少。3)尾静脉注射1×10~6个小鼠黑色素瘤细胞,饲养2周后,可以观察到黑色素瘤细胞明显的肺部转移,且不会导致小鼠死亡;饲养3周,黑色素瘤细胞肺部转移数量过多,且小鼠死亡过半;饲养1周,黑色素瘤细胞肺部转移数量较少。结论经尾静脉注射1×10~6个小鼠黑色素瘤细胞,生长2周时间,为构建C57BL/6 J小鼠黑色素瘤肺转移模型的推荐方法。

GHGKHKNK八肽对小鼠黑色素瘤细胞B16-F10侵袭和转移的抑制作用

目的:观察GHGKHKNK八肽对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞侵袭和转移的抑制作用,为开发具有我国独立的知识产权、针对性强的抗癌小肽类药物奠定临床前的实验基础。方法:MTT法检测GHGKHKNK八肽对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞的细胞毒作用;应用C57BL/6J小鼠,尾静脉注射小鼠黑色素瘤B16-F10细胞建立人工肺转移模型,通过免疫组化分析检测GHGKHKNK八肽对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞肺转移瘤形成的影响。结果:1×10-4mol.L-1GHGKHKNK八肽作用48h对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞的增殖抑制率为17.4%;高剂量组(500μg.kg-1.d-1)GHGKHKNK八肽明显抑制小鼠黑色素瘤B16-F10细胞的肺转移。结论:GHGKHKNK八肽具有抑制小鼠黑色素瘤B16-F10细胞生长和侵袭转移的作用。

PRX2和AKR1B10在二阶段化学诱发小鼠肝癌形成过程中的表达及意义

目的探讨PRX2和AKR1B10在二阶段化学诱发小鼠肝癌形成过程中的表达及意义。方法 90只C57BL/6J雄性小鼠随机分为实验组(60只)和正常对照组(30只),用DEN/CCl4/乙醇诱发小鼠肝癌。于第4周、第8周、第12周、第16周和第20周5个时点处死小鼠,观察其肝脏病理组织的改变,应用实时荧光定量PCR法、免疫组化SP法分别检测小鼠肝组织PRX2 mRNA和AKR1B10 mRNA及蛋白质的表达水平。结果①实验诱发小鼠肝癌过程中的第4周见肝细胞肿胀,炎细胞浸润,肝脏呈炎症病变;第8周见肝组织炎症病变加重,出现纤维组织增生及肝细胞再生;第12周见肝组织呈不典型增生;第16周有典型假小叶形成;第20周可见典型的小鼠肝癌病理改变。②化学诱癌的第4周至第20周实验组小鼠肝组织PRX2 mRNA和AKR1B10 mRNA和蛋白质的表达均高于正常对照组(P<0.05),且两者的表达水平随着时间的延长,均呈逐步升高的趋势;至第20周肝癌形成时,实验组两者的表达均显著高于癌前各时间点(P<0.05)。③在二阶段化学诱发小鼠肝癌形成过程中,PRX2 mRNA和AKR1B10 mRNA的表达水平呈正相关(r=0.674,P=0.05)。结论在二阶段化学诱发小鼠肝癌形成过程中PRX2和AKR1B10的高表达是化学诱发小鼠肝癌形成的早期事件,PRX2和AKR1B10可能在化学诱发小鼠肝癌的发生、发展和促进过程中起重要作用。

金匮肾气丸对B6.MRL-Faslpr/NJU自发狼疮小鼠抗dsDNA抗体及狼疮性肾炎病理改变的影响

目的研究金匮肾气丸对B6.MRL-Faslpr/NJU自发狼疮小鼠抗ds DNA抗体及狼疮性肾炎病理改变的影响,探讨肾气丸对B6.MRL-Faslpr/NJU自发狼疮小鼠的疗效。方法 B6.MRL-Faslpr/NJU自发狼疮小鼠24只,随机分为金匮肾气丸组、泼尼松组、模型组,分别给予肾气丸、泼尼松、生理盐水灌胃14 d。观测小鼠血清抗ds DNA抗体含量及肾脏解剖病理结果。结果金匮肾气丸组和泼尼松组血清抗ds DNA抗体含量与模型组比较,差异有统计意义(P<0.05);金匮肾气丸组与泼尼松组比较,差异无统计意义(P>0.05);金匮肾气丸组肾脏组织病理改变较模型组明显改善,与泼尼松组病理表现相似。结论金匮肾气丸对B6.MRL-Faslpr/NJU自发狼疮小鼠有一定的疗效。

趋化因子CCL20及CCL22在狼疮鼠浆膜腔液中的表达及意义

目的探讨趋化因子CCL20及CCL22在狼疮鼠浆膜腔液中的表达及意义。方法以9只B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠为观察组,6只同系C57BL/6J小鼠为对照组。取2组小鼠胸膜及腹膜腔液,用ELISA方法检测其中CCL20及CCL22的表达水平,并与小鼠血清中ANA、dsDNA抗体的含量以及小鼠24 h尿蛋白含量进行关联性分析。结果 CCL20在狼疮鼠浆膜腔液中高表达,与对照组相比两者差异有统计学意义(P<0.05),而CCL22与对照组相比两者差异无统计学意义(P>0.05);狼疮小鼠浆膜腔液CCL20含量与血清ds-DNA和24 h尿蛋白量呈正相关(P<0.05),与血清中ANA无明显相关性(P>0.05);而狼疮小鼠浆膜腔液CCL22含量与血清ds-DNA、ANA及24 h尿蛋白量均无明显相关性(P>0.05)。结论趋化因子CCL20可能参与狼疮鼠浆膜腔病变的发生,与狼疮鼠的病情活动、肾损害有一定相关性。

β-氨基丙腈饮水联合血管紧张素Ⅱ埋泵建立小鼠主动脉夹层模型

目的应用β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile,BAPN)饮水联合血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)皮下埋泵建立小鼠主动脉夹层模型。方法 40只3周龄雄性C57Bl/6J小鼠随机分为两组,均每日给予0.1 g/(kg·bw)BAPN饮水,BAPN饮水后第28天给予皮下埋泵,BAPN饮水+生理盐水埋泵组持续泵入生理盐水,BAPN饮水+Ang II埋泵组持续泵入Ang II,每分钟1000 ng/(kg·bw)。采用小鼠无创血压测量计尾套法检测小鼠血压和心率。实验中死亡小鼠立即解剖,分离主动脉。埋泵72 h后,未死亡小鼠注射过量戊巴比妥钠处死,留取主动脉。苏木素-伊红染色显微镜下观察主动脉壁假腔形成情况。结果 BAPN饮水+Ang II埋泵组小鼠总的夹层发生率为95%,死亡率为24%(夹层动脉瘤破裂死亡),BAPN饮水+生理盐水埋泵组夹层发生率为5%,死亡率为0;镜下主动脉病理切片显示夹层主动脉有假腔形成。结论成功建立高主动脉夹层发生率的小鼠模型。

视网膜新生血管形成中Cathepsin B的变化

目的通过观察Cathepsin B的变化,探讨视网膜新生血管的发病机制。方法取C57BL/6J7d龄小鼠30只,随机分为对照组和实验组,实验组在缺氧环境中建立视网膜新生血管动物模型。采用苏木精-伊红染色、视网膜ADP酶染色铺片及免疫组织化学法进行检测,同时测定眼组织Cathepsin B活性。结果组织病理学见突破内膜新生血管内皮细胞核数,无血管区面积及无血管区面积/视网膜面积,实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);对照组与实验组Cathepsin B平均光密度、Cathepsin B活性比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论C57BL/6J构建小鼠视网膜新生血管动物模型后,小鼠视网膜组织Cathepsin B表达增加、活性增强,CathepsinB可能是视网膜新生血管产生的一个重要因素。

OX40/OX40L分子在B6.MRL-Fas^(lpr)/J狼疮小鼠脾脏组织中的表达及意义

为了探讨OX40和OX40L分子在B6.MRL-Faslpr/J(简称B6.Fas)狼疮小鼠淋巴细胞上的表达及其在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)发病机制中可能的作用,本课题采用流式细胞仪检测技术对小鼠脾脏T细胞上OX40和B细胞上OX40L的表达水平进行分析并采用Albustix试纸法检测小鼠24h尿蛋白量。结果显示,20周龄B6.Fas狼疮小鼠伴有异常升高的蛋白尿(++～+++)、28周龄B6.Fas狼疮小鼠蛋白尿含量进一步升高为++++,12周龄B6.Fas狼疮小鼠及正常小鼠均为≦+。与正常对照小鼠相比,12周龄B6.Fas狼疮小鼠T、B细胞上OX40/OX40L的表达无显著差异(P>0.05);20周、28周龄B6.Fas狼疮小鼠CD4+T细胞上OX40表达水平以及B细胞上OX40L表达水平明显升高(P<0.05),而CD8+T细胞上OX40表达水平无显著差异(P>0.05);并且28周龄B6.Fas狼疮小鼠T、B细胞上OX40/OX40L的表达水平高于20周龄小鼠(P<0.05)。这表明伴随蛋白尿量的增加,狼疮小鼠脾脏T细胞和B细胞上OX40和OX40L分子表达异常升高,提示OX40/OX40L信号可能与狼疮的发病以及病情发展有一定的相关性。

Toll样受体5激动剂CBLB502蛋白的辐射防护作用

目的研究CBLB502蛋白辐射防护作用。方法 HCT116细胞经CBLB502刺激后,Western印迹法检测NF-κB入核,碱性磷酸酶报告基因法检测CBLB502对NF-κB报告基因的激活。150只C57BL/6J小鼠接受8.0 Gy60Coγ射线照射前随机分为PBS,WR2721,CBLB502 0.02、0.05和0.2 mg/kg共5组,观察小鼠受照后30 d存活率和平均生存时间。另外40只小鼠接受6.5 Gy60Coγ射线照射前随机分为PBS、WR2721、CBLB502 0.2 mg/kg组和正常对照组,照射前1 d和照后30 d内检测外周血细胞。结果 CBLB502可明显促进HCT116细胞NF-κB入核(P<0.01)并呈剂量依赖性激活NF-κB报告基因(r=0.998 3)。CBLB502显著提高8.0 Gy60Coγ射线照射后小鼠的存活率,PBS,WR2721,CBLB502 0.02、0.05和0.2 mg/kg组小鼠照后30 d存活率分别为0、83.3%、13.3%、66.7%和100%;照射后小鼠平均存活时间除0.02 mg/kg给药组与PBS对照相比无差异外,其余各给药组较PBS对照组有显著提高。6.5 Gy60Coγ射线照射后小鼠外周血白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板急剧下降,CBLB502 0.2 mg/kg组上述指标降低持续时间较照射对照组明显缩短,开始恢复时间提前,各指标最低值亦明显高于照射对照组。结论 CBLB502蛋白具有体外生物学活性并对急性放射病小鼠有明显的辐射防护作用。

PTP1B抑制剂改善胰岛素抵抗作用的实验研究

目的：研究苯并呋喃．苯氧乙酸类化合物CCF06240对蛋白酪氨酸磷酸酶1B（Protein tyrosine phosphates 1B，PTP1B）活性的抑制作用，探讨其对高脂饮食诱导的胰岛素抵抗小鼠的胰岛素增敏作用及其作用机制。方法：以体外酶学方法观察药物对基因重组人PTP1B活性的影响。雄性C57BL／6j小鼠经高脂高糖饲料诱导形成肥胖的胰岛素抵抗动物模型（IRF）。以小鼠口服葡萄糖耐量实验（OGTT）中葡萄糖负荷后血糖水平的变化评价动物对葡萄糖的耐受能力。采用胰岛素耐量实验（ITT）和正常葡萄糖水平的高胰岛素钳夹（正糖钳）实验评价机体的胰岛素敏感性。结果：化合物CCF06240对基因重组人PTP1B活性有较强的抑制作用，其IC50为9．6×10^-7M。连续灌胃给予IRF小鼠CCF0624010mg／kg／day，与模型对照组比较，CCF06240组动物体重降低17％（p〈0．001），血甘油二酯降低77％，总胆固醇降低7I％，非禁食状态下血糖降低20％，禁食2h后血糖降低25％（p〈0．001）。

FB1对树突状细胞生物物理学特性和免疫功能的影响

目的探究伏马菌素B1(fumonisin B1,FB1)对树突状细胞(dendritic cells,DCs)的免疫抑制作用机制,为真菌毒素毒性机制研究提供思路。方法体外分离C57BL/6J小鼠骨髓细胞,利用rmGM-CSF和rmIL-4诱导分化为DCs。用不同浓度的FB1处理之后,检测DCs的细胞活力、渗透脆性、膜流动性、细胞电泳率、细胞骨架结构、迁移能力的变化。

Dil散射标记神经元及神经胶质细胞技术介绍

目的对标记神经元和神经胶质的DiI散射法(DiIdiolisticassay)进行改进,使操作更简捷,效果更为理想。方法用C57/B6J小鼠,对固定或培养的脑片内神经元与神经胶质细胞进行DiI散射法标记。结果该方法可以显示中枢神经系统内神经元及神经胶质细胞的细微结构,其中包括树突小棘。结论Dil散射标记法标记细胞的细微结构效果得到改善,可用于对树突棘分析,特别是可以直接在培养的脑片上对神经元与神经胶质进行活体标记。

细胞膜红色荧光探针(DiI)光学转换及其电镜样本的制备

目的对细胞膜红色荧光探针(DiI)标记的神经元进行光学转换,使其结果更稳定,更适于长期保存,并且经过处理可用于电镜观察。方法选用C57/B6J小鼠20只,采用DiI散射法标记视皮质神经元,对其进行光学转换后,制备电镜样本和观察超微结构。结果经过光学转换的DiI散射神经元可以更好地显示中枢神经系统内神经元的细微结构,其中包括树突小棘。结论经过DiI散射标记的细胞可以进行光学转换,转换后能清晰地观察到细胞的细微结构和超微结构,细胞器保存完好,突触结构清晰可见。

姜黄素衍生物对肝纤维化小鼠核因子-κB表达的影响

目的观察姜黄素衍生物C66的抗小鼠肝纤维化效果及其相关机制。方法33只C57BL／6J小鼠分为正常对照组、模型对照组和C66治疗组。正常对照组小鼠9只，普通饲料和自来水喂饲，其余24只小鼠予腹腔注射40Z四氯化碳（CCl4）混合液，首剂量为4mL／kg，以后按照剂量2mL／kg腹腔注射，每周2次，共6周。于造模6周末随机选取6只小鼠，行病理学检测，判断造模是否成功。造模小鼠随机均分成模型对照组和C66治疗组，每组9只。第6周开始，给予治疗组C6610mg／（kg·d）灌胃，其余组给予等量的0．5％羧甲基纤维素钠溶液灌胃。检测各组小鼠血清ALT、AST和肝组织羟脯氨酸（Hyp）含量；肝组织行HE染色及Masson染色，光学显微镜下观察病理学改变，并进行肝纤维化半定量评分；采用实时荧光定量PCR检测I型胶原、r平滑肌肌动蛋白（a-SMA）mRNA表达情况；Western印迹法检测各组I型胶原、α-SMA及核因子-xBp65p65、核因子-κB抑制蛋白α（IκBα）蛋白表达情况。样本均数比较采用单因素方差分析。结果模型对照组ALT、AST水平分别为（202．71±19．66）U／L和（233．42±23．97）U／L，C66治疗组分别为（102．00±11．04）U／L和（120．87±13．83）U／L，正常对照组分别为（36．66±6．37）U／L和（43．33±8．08）U／L，模型对照组与正常对照组比较差异均有统计学意义（T值分别为23．96和22．39，均P〈0．05），C66治疗组与模型对照组比较差异均有统计学意义（t值分别为11．56和10．52，均P〈0．05）。模型对照组肝组织Hyp含量与正常对照组比较差异有统计学意义（t=17．50，P〈0．05），C66治疗组肝组织Hyp含量与模型对照组比较差异有统计学意义（t=11．45，P〈0．05）。C66治疗组I型胶原和a-SMAmRNA表达明显下降，与模型对照组比较差异有统计学意义（t值分别为7．23和7．95，均P〈0．05）。与模型对照组相比，C66治疗组I型胶原、α-SMA、核因子-κBp65蛋白表达下调，同时IκBα蛋白表达上调，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论C66具有抗肝纤维化作用，其机制可能是调节核因子-κB的表达。