脂肪干细胞联合巴戟天提取物对B6.MRL-Faslpr/Nju狼疮小鼠肾损伤及免疫炎性因子的影响

目的探讨脂肪干细胞(adipose tissue derived stem cells,ADSCs)联合巴戟天提取物(Morinda officinalis How,MOH)对B6.MRL-Faslpr/Nju(B6.MRL/lpr)狼疮小鼠肾损伤及免疫炎性因子的影响。方法取C57BL/6J(C57)小鼠腹股沟脂肪分离培养ADSCs,CCK-8检测MOH对ADSCs细胞活性的影响。将10只C57小鼠设为正常组,40只B6.MRL/lpr小鼠随机分为模型组、ADSCs组、MOH组、ADSCs+MOH组。正常组和模型组灌胃生理盐水;ADSCs组尾静脉注射ADSCs(1×105个);MOH组灌胃MOH(10 mg·kg-1);ADSCs+MOH组应用ADSCs和MOH联合治疗,共8周。ELISA法检测血清中抗dsDNA抗体浓度变化,检测肾组织匀浆液中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-17、IL-10、IL-6的表达水平,考马斯亮蓝法检测24 h尿蛋白的浓度变化;HE染色观察肾脏病理组织学变化。结果MOH浓度在20~200μg·mL-1范围内可以促进ADSCs增殖(P<0.01)。与正常组比,模型组抗dsDNA抗体、尿蛋白、TNF-α、IL-17、IL-10、IL-6明显升高(P<0.01);与模型组比,ADSCs组抗dsDNA抗体、尿蛋白、TNF-α、IL-17、IL-6均明显降低(P<0.01)。MOH组抗dsDNA抗体、尿蛋白、IL-17、IL-10、IL-6均显著降低(P<0.01)。ADSCs+MOH组抗dsDNA抗体、尿蛋白、TNF-α、IL-17、IL-10、IL-6均显著降低(P<0.01)。肾脏病理检查显示ADSCs、MOH、ADSCs+MOH均可明显改善B6.MRL/lpr小鼠的肾脏病理结构,减轻肾小球细胞增生,而ADSCs+MOH联合治疗效果较好。结论ADSCs、MOH、ADSCs+MOH均可改善B6.MRL/lpr小鼠肾脏病理结构,调节肾脏的免疫炎性因子,降低抗dsDNA抗体、尿蛋白的浓度,而ADSCs+MOH联合治疗效果最明显。MOH在体外可以促进ADSCs细胞的活性。ADSCs、MOH联用治疗B6.MRL/lpr小鼠具有协同作用。

CTLA-4Ig对B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠脾脏Th17和Treg细胞表达的影响与其对小鼠狼疮样病征干预作用的相关性研究

目的:初步探讨B7阻断剂CD28与细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA-4Ig)对B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠脾脏Th17和调节性T细胞(Treg细胞)表达的影响与其对小鼠狼疮样病征干预作用之间的相关性。方法:将4个月龄大小雌性B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠16只,随机分为观察组(Ⅰ组)和对照组(Ⅱ组),分别静脉注射CTLA-4Ig及等量PBS,检测小鼠干预前后24 h尿蛋白、ANA抗体、ds-DNA抗体及干预结束2周后血清IL-17A、脾脏中Th17细胞和Treg细胞百分比。结果:末次干预2周后Ⅰ组的24 h尿蛋白、血清ANA及ds-DNA较Ⅱ组下降均有统计学意义(均P<0.05)。末次干预2周后Ⅰ组血清中IL-17A、脾脏Th17细胞比例均较Ⅱ组低,而脾脏的Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的比例高于Ⅱ组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:CTLA4-Ig具有减轻B6.MRL-Faslpr/J狼疮鼠狼疮样病征的作用;上调Treg细胞、下调Th17细胞可能是CTLA-4Ig减轻B6.MRL-Faslpr/J狼疮鼠狼疮样病征的重要机制之一。

B6. MRL-Fas^(lpr)/J狼疮小鼠脾脏组织中Th17细胞比例及其与病情的相关性

目的探讨Th17细胞在系统性红斑狼疮发生、发展中的作用。方法观察组为B6.MRL-Faslpr/J(简称B6.Fas)狼疮小鼠9只,对照组为雌性C57BL/6J小鼠6只。采用流式细胞术检测两组脾脏组织匀浆中的Th17细胞比例;采用ELISA法检测血清IL-17A、ANA及dsDNA抗体水平,磺基水杨酸—硫酸钠比浊法检测小鼠24 h尿蛋白量;分析观察组各指标间的相关性。结果观察组Th17细胞比例、IL-17A、ANA、dsDNA抗体水平及24 h尿蛋白量均明显高于对照组,P均<0.05;观察组脾脏Th17细胞比例与血清IL-17A、ds-DNA抗体及24 h尿蛋白量呈正相关,与血清中ANA无明显相关性;IL-17A水平与血清中ds-DNA及24 h尿蛋白量呈正相关,与血清ANA无明显相关性。结论 Th17细胞可能与狼疮的发病及病情活动、肾脏损害有一定相关性。

金匮肾气丸对B6.MRL-Faslpr/NJU自发狼疮小鼠抗dsDNA抗体及狼疮性肾炎病理改变的影响

目的研究金匮肾气丸对B6.MRL-Faslpr/NJU自发狼疮小鼠抗ds DNA抗体及狼疮性肾炎病理改变的影响,探讨肾气丸对B6.MRL-Faslpr/NJU自发狼疮小鼠的疗效。方法 B6.MRL-Faslpr/NJU自发狼疮小鼠24只,随机分为金匮肾气丸组、泼尼松组、模型组,分别给予肾气丸、泼尼松、生理盐水灌胃14 d。观测小鼠血清抗ds DNA抗体含量及肾脏解剖病理结果。结果金匮肾气丸组和泼尼松组血清抗ds DNA抗体含量与模型组比较,差异有统计意义(P<0.05);金匮肾气丸组与泼尼松组比较,差异无统计意义(P>0.05);金匮肾气丸组肾脏组织病理改变较模型组明显改善,与泼尼松组病理表现相似。结论金匮肾气丸对B6.MRL-Faslpr/NJU自发狼疮小鼠有一定的疗效。

趋化因子CCL20及CCL22在狼疮鼠浆膜腔液中的表达及意义

目的探讨趋化因子CCL20及CCL22在狼疮鼠浆膜腔液中的表达及意义。方法以9只B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠为观察组,6只同系C57BL/6J小鼠为对照组。取2组小鼠胸膜及腹膜腔液,用ELISA方法检测其中CCL20及CCL22的表达水平,并与小鼠血清中ANA、dsDNA抗体的含量以及小鼠24 h尿蛋白含量进行关联性分析。结果 CCL20在狼疮鼠浆膜腔液中高表达,与对照组相比两者差异有统计学意义(P<0.05),而CCL22与对照组相比两者差异无统计学意义(P>0.05);狼疮小鼠浆膜腔液CCL20含量与血清ds-DNA和24 h尿蛋白量呈正相关(P<0.05),与血清中ANA无明显相关性(P>0.05);而狼疮小鼠浆膜腔液CCL22含量与血清ds-DNA、ANA及24 h尿蛋白量均无明显相关性(P>0.05)。结论趋化因子CCL20可能参与狼疮鼠浆膜腔病变的发生,与狼疮鼠的病情活动、肾损害有一定相关性。