小鼠BTLA胞外功能区基因克隆表达及其对DC表面B7分子表达的影响

目的:研究重组谷胱甘肽S-转移酶(GST)-小鼠B/T细胞弱化因子包外功能区(mBTLAext)融合蛋白(GST-mBT-LAext)对小鼠树突状细胞系DC2.4表面B7分子表达的影响。方法:采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mB-TLAcDNA。将其胞外功能区基因克隆入原核表达载体pGEX-4T-2中,构建重组表达质粒pGEX-4T-2/mBTLAext并转化E.coliBL21(DE3),以1mmol/L的IPTG诱导表达。提取包涵体,经变性、负性后,采用GlutathioneSepharose4B柱纯化可溶性的GST-mBTLAext。将不同浓度的GST-mBTLAext加入到DC2.4的培养体系中,采用流式细胞术检测其对DC上B7-1和B7-2表达的影响。结果:成功地克隆了mBTLA基因,并构建了重组原核表达载体。变性、复性,经GlutathioneSepharose4B柱纯化,获得了可溶性的GST-mBTLAext融合蛋白。经SDS-PAGE鉴定表明,融合蛋白的相对分子质量(Mr)为43000,同预期的结果一致。流式细胞术检测显示,GST-mBTLAext可上调DC2.4上B7-1的表达并呈剂量依赖性,这一作用可被抗GST-mBTLAext血清阻断。未检测到GST-mBT-LAextDC2.4上B7-2的表达有影响。结论:BTLA对DC2.4表面B7分子表达的上调可能是BTLA-HVEM途径反向信号对DC作用的结果,对进一步研究其对DC生物学行为的影响及其分子机制具有重要的理论意义。

钙离子载体上调K562细胞B7分子表达

目的:探讨钙离子载体(Calc ium ionorphore,C I)对慢性髓系白血病细胞株K562细胞表面B7分子表达的上调作用。方法:将生长状态良好的K562细胞在含C I(375 ng/m l)的培养基中培养,以不含C I培养的K562细胞作对照组。培养0、48和96小时后台盼蓝拒染法检测细胞数和细胞存活率,流式细胞仪检测培养前及培养96小时后细胞表面B7分子的表达情况,MTT比色法检测其刺激同种异体T细胞增殖的作用。结果:K562细胞表面B7分子缺如或低表达;用含C I的培养基培养96小时后,可显著上调B7分子的表达,且能明显激活同种异体T细胞。培养前后细胞形态无明显变化,加C I培养的K562细胞较不加C I培养的细胞生长缓慢。结论:慢性髓系白血病细胞株K562细胞表面存在B7分子表达缺陷,C I可上调其B7分子。C I可能有抑制K562细胞生长的作用。

趋化因子和B7分子联合应用抗肿瘤的研究进展

恶性肿瘤的发生常常是多个基因改变的结果,单一基因治疗的抗肿瘤效应往往十分有限,联合应用不同特性的细胞因子或趋化因子抗肿瘤是近年来的研究热点。本文着重综述趋化因子和B7分子在肿瘤基因治疗中的联合应用。B7分子是重要的共刺激分子,可为T细胞激活提供第二信号;趋化因子可通过趋化免疫活性细胞,部分趋化因子还可抑制肿瘤血管生成,从而产生抗肿瘤效应。共转染趋化因子和B7分子除通过“招引-活化”的机制外,还可抑制CD4+CD25+调节性T细胞亚型向肿瘤局部浸润,进而改善肿瘤局部免疫抑制状态;同时可抑制肿瘤血管生成,从而通过多个不同的途径,产生更强的抗肿瘤效应。但趋化因子具有抗肿瘤和促肿瘤双向性,因此选择合适的趋化因子与B7分子联合应用是至关重要的。

rhGM-CSF联合rhIL-4对髓性白血病细胞B7分子表达的上调作用

目的 探讨GM CSF联合IL 4对髓性白血病细胞表面B7分子表达的上调作用。方法 从初诊急性或慢性髓性白血病患者的外周血中分离出单个核细胞 (PBMNC) ,用rhGM CSF联合rhIL 4共同孵育 7～ 10d ;通过流式细胞仪检测细胞因子诱导前后细胞表面B7分子的表达。结果 未经细胞因子诱导的白血病细胞表面B7分子低表达或缺如 ,经过GM CSF联合IL 47～ 10d的诱导 ,可显著上调B7分子的表达。结论 髓性白血病细胞表面存在B7分子表达缺陷 ;用GM CSF联合IL

冷冻影响肝癌细胞HLA和B7分子表达的实验研究

目的 探讨冷冻治疗后机体免疫功能提高的机制。方法 应用流式细胞仪检测人肝癌细胞经 0℃或 -2 0℃冷冻后 ,HLA和B7分子表达率和平均荧光强度的变化。结果 0℃组与对照组比较 ,HLA Ⅰ分子和B7 2分子的表达率和平均荧光强度均无明显变化 ;HLA Ⅱ分子和B7 1分子的表达率增高 ,平均荧光强度增强。 -2 0℃组与对照组比较 ,HLA Ⅰ、HLA Ⅱ、B7 1和B7 2分子的表达率均增高 ,平均荧光强度均增强。 -2 0℃组和 0℃组比较 ,HLA Ⅱ和B7 1分子的表达率和平均荧光强度均无显著性差异 ;HLA Ⅰ和B7 2分子表达率均增高 ,平均荧光强度均增强。结论 0℃和 -2 0℃冷冻可增强人肝癌细胞HLA和B7分子的表达 ,这可能是冷冻治疗提高机体免疫功能的机制之一。

B7分子在DSS诱导的小鼠结肠炎中的作用研究

目的 研究B7分子在DSS诱导的小鼠结肠炎症中的作用。方法 用免疫组化法检测急、慢性DSS小鼠结肠炎模型中结肠粘膜B7 1和B7 2的表达。结果 结肠组织中B7 1、B7 2均为胞浆阳性。急性、慢性模型组肠粘膜B7 1 + 细胞百分比均高于对照组 ,而急性组与慢性组之间无显著差异。急性组肠粘膜B7 2 + 细胞百分率与对照组无显著差异 ,而慢性组肠粘膜B7 2 + 细胞百分比高于急性组和对照组。结论 B7 1、B7

B7分子与肿瘤免疫

Ｂ７分子与肿瘤免疫张平（综述）章崇杰（审校）肿瘤免疫主要是Ｔ细胞介导的细胞免疫反应，包括肿瘤特异性Ｔｃ细胞的活化和Ｔｃ细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，而肿瘤特异性抗原往往不能有效地活化Ｔｃ。造成Ｔ细胞对肿瘤抗原产生耐受的因素很多，如：转化生长因子（ＴＧＦ－...

B7分子家族及其配体

新近发现众多B7分子家族成员及其受体,其第二信号功能并不单纯表现为T淋巴细胞正向激活,对激活T细胞效应功能和诱导耐受也有调节作用。这些B7分子在非淋巴组织广泛表达,而它们的受体仅在激活的淋巴细胞表面诱导表达。本文对其结构、表达和功能特点作一综述。

B7分子在系统性红斑狼疮发病和治疗中的意义

B7分子与CD2 8/CTLA4结合后产生的共刺激信号是T细胞活化和自身抗体产生的必要条件。系统性红斑狼疮患者体内抗原递呈细胞表达B7分子异常 ,并与系统性红斑狼疮发病机制有关。阻断B7/CD2 8信号通路在系统性红斑狼疮动物模型上取得了良好的疗效 ,因而可能具有潜在的临床应用价值。

B7分子与血液系统恶性肿瘤的关系

人体抗肿瘤免疫是以T细胞介导的细胞免疫为主,B7分子及其受体传导的共刺激信号是T细胞活化增殖的重要辅助信号。干预共刺激途径,诱导T细胞肿瘤特异性免疫杀伤反应或诱导T细胞抗原特异性无能状态,是目前自身免疫疾病、肿瘤和器官移植治疗的研究热点。在血液系统恶性肿瘤的治疗领域,免疫基因治疗、肿瘤疫苗、抗B7-1单抗等的尝试正在积极展开。

恶性血液病细胞B7分子表达缺陷及其治疗的研究进展

本文就B7分子特征、在恶性血液病中的表达缺陷以及相应治疗的研究进展等加以综述。

干扰素γ诱导肝癌HepG2细胞表达B7分子的实验研究

目的研究干扰素γ(IFN-γ)对人肝癌细胞B7分子表达的影响。方法选用人肝癌HepG2细胞进行体外培养,经过不同浓度的IFN-γ干预后,采用MTT法检测细胞增殖作用,RT-PCR检测B7-1和B7-2mRNA的表达。结果不同浓度的IFN-γ对HepG2细胞体外生长有明显抑制作用;干预后HepG2细胞的B7基因表达明显增加。结论IFN-γ能直接抑制HepG2细胞增殖,显著上调HepG2细胞B7基因的表达,具有一定的抗肿瘤效应。

血常规衍生炎症指标及协同刺激分子B7家族在系统性红斑狼疮患者中的变化

目的:探究血常规衍生炎症指标及协同刺激分子B7家族在系统性红斑狼疮患者中的表达。方法:选取2019年6月—2022年10月当阳市人民医院收治的164例系统性红斑狼疮患者及在本院体检的健康志愿者41例。系统性红斑狼疮疾病活动度指数(SLEDAI)评分≥15分患者为A组(n=41),SLEDAI评分10~14分患者为B组(n=41),SLEDAI评分5~9分患者为C组(n=41),SLEDAI评分0~4分患者为D组(n=41),体检健康者为E组(n=41)。比较五组的血常规衍生炎症指标[中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、血小板/淋巴细胞比值(PLR)、中性粒细胞和单核细胞之和/淋巴细胞比值(NMLR)及衍生的中性粒细胞/淋巴细胞比值(dNLR)]及协同刺激分子B7家族,采用Pearson相关性分析血常规衍生炎症指标与协同刺激分子B7家族的关系。结果:A组、B组、C组及D组的血常规衍生炎症指标均显著高于E组,A组、B组及C组均显著高于D组,A组及B组均显著高于C组,A组均显著高于B组,差异均有统计学意义(P<0.05);A组、B组、C组及D组的协同刺激分子B7家族均显著低于E组,A组、B组及C组均显著均低于D组,A组及B组均显著低于C组,A组均显著低于B组,差异均有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析显示,系统性红斑狼疮患者NLR、PLR、NMLR、dNLR与协同刺激分子B7家族3(B7-H3)、协同刺激分子B7家族4(B7-H4)均呈负相关(P<0.05)。结论:血常规衍生炎症指标及协同刺激分子B7家族在系统性红斑狼疮患者中的表达显著异常,且上述指标之间有密切的关系。

早期胃癌患者血清TK1、STAT1、sB7-H4水平变化及对内镜黏膜下剥离术预后的预测价值

目的 探究早期胃癌患者血清胸苷激酶1(TK1)、信号转导和转录活化因子1(STAT1)、可溶性B7-H4(sB7-H4)水平变化,并分析其对内镜黏膜下剥离术(ESD)预后的预测价值。方法 前瞻性选取2019年1月至2022年7月郑州大学第一附属医院300例接受ESD手术的早期胃癌患者,检测围手术期(术前、术后3 d、术后7 d)血清TK1、STAT1、sB7-H4水平,术后接受为期1 a随访,根据有无复发分为复发组(22例)与未复发组(278例)。比较两组患者的临床资料及血清TK1、STAT1、sB7-H4水平。评价血清TK1、STAT1、B7-H4水平预测早期胃癌患者ESD术后复发的价值。结果 所有患者术后7 d血清TK1、sB7-H4水平<术后3 d<术前(P<0.05),所有患者术后7 d血清STAT1水平>术后3 d>术前(P<0.05)。复发组术后3、7 d的血清TK1、sB7-H4水平均高于未复发组,STAT1水平均低于未复发组(P<0.05)。术后3、7 d血清TK1、sB7-H4、STAT1联合预测复发的曲线下面积(AUC)分别为0.901、0.944,均大于各时间点三项血清指标单独预测,且术后7 d预测价值更高,此时最佳敏感度、特异度分别为90.91%、86.33%。结论 血清TK1、sB7-H4、STAT1水平变化与早期胃癌患者ESD术后复发密切相关,且在临床早期预测患者术后复发方面具有较高预测效能。

哮喘和慢性阻塞性肺疾病患者肺灌洗液Th亚群及B7分子的差异

目的 探讨哮喘和慢性阻塞性肺疾病 (COPD)及正常对照者支气管肺泡灌洗液 (BALF)中淋巴细胞分泌γ干扰素 (IFN γ)、白细胞介素 4 (IL 4 )水平和肺泡巨噬细胞 (AM)表达C80 (B7 1)、CD86(B7 2 )共刺激分子百分率有何不同及其意义。方法 分别对 16名健康自愿者、16例过敏性哮喘患者和 16例COPD患者进行了支气管肺泡灌洗 (BAL) ,获取淋巴细胞和AM ,用双抗体夹心酶联免疫吸附法 (ELASA)测定了经植物血凝素 (PHA)刺激培养的淋巴细胞上清液中IFN γ和IL 4水平 ;用生物素 抗生物素复合物 (ABC)夹心法测定了经脂多糖 (LPS)剌激培养的AM膜表面表达CD80和CD86阳性率 ,并将正常对照组中已经LPS剌激的和未经LPS刺激的AM膜表面表达CD80与CD86阳性率进行对照。结果 在反映Th2的IL 4水平 ,哮喘组为 ( 3 3 1± 15 0 )ng/L ,与正常对照组 ( 10 6± 4 2 )ng/L及COPD组 ( 4 9± 2 0 )ng/L比较 ,差异均有显著性 (P均 <0 0 1) ;COPD组IL 4水平与正常对照组比较 ,差异有显著性 (P <0 0 1) ;在反映Th1的IFN γ水平 ,COPD组 ( 3 4 2± 12 2 )ng/L与正常对照组( 188± 67)ng/L及哮喘组 ( 77± 3 2 )ng/L比较 ,差异也均有显著性 (P均 <0 0 1) ;哮喘组IFN γ水平与正常对照组比较 ,差异有显著性 (P <0 0 1)。AM表达CD86阳性?

抗B7分子抗体诱导T细胞免疫耐受研究

目的 联合应用抗B7分子的单克隆抗体 (单抗 )体外诱导T细胞免疫耐受模型 ,并探讨B7分子在T细胞免疫耐受中的作用及其机制。方法 体外联合应用抗B7单抗诱导T细胞免疫耐受 ,3H TdR掺入法检测T细胞增殖 ,逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测T细胞细胞因子mRNA合成。为了排除其它粘附分子的作用 ,应用联合转染DR7或 (和 )B7分子基因的CHO细胞系作为人工抗原递呈细胞 (APC)介导混合淋巴细胞反应 (MLR)。结果 T细胞增殖实验显示 ,B7 1(CD80 )和B7 2 (CD86 )单抗单独应用可以部分阻断MLR ,其中CD86 单抗的阻断作用更为明显。两种抗体联合应用时 ,可以明显阻断MLR。RT PCR显示 :应用抗B7单抗联合阻断后 2 4h ,IFN γ及IL 2mRNA合成明显减少 ,而IL 4mRNA合成较前明显增加。人工APC介导的MLR显示 ,仅有第一信号 (DR7)时也可以使T细胞增殖 ,但需要达到一定的信号强度 ;给予DR7信号同时给予共刺激信号CD80 可以增强T细胞反应 ,增强效应可以被抗CD80 单抗所阻断。结论 B7分子在T细胞免疫反应中具有重要的作用 ,可以非特异性增强T细胞免疫反应。阻断B7 CD2 8信号传导通路 ,可以诱导T细胞免疫耐受形成 ,其中CD86 分子的作用可能更为重要。抗B7单抗诱导的T细胞无反应性后 ,向Th2方向分化 。

肺癌患者外周血单个核细胞CD28/B7家族共刺激分子mRNA表达的初步研究

目的探讨肺癌患者外周血单个核细胞中CD28/B7家族共刺激分子mRNA的表达水平。方法收集50例(鳞癌24例,腺癌26例)肺癌患者作为疾病组,50例体检健康者作为健康对照组,提取外周血单个核细胞,用Taqman探针实时荧光定量RT-PCR检测各组CD28、CD80、CD86、CTLA-4 mRNA的表达情况。结果肺癌患者CD28、CD80、CD86、CTLA-4 mRNA表达水平均低于健康对照组(P均<0.05);鳞癌组CD28、CD80、CTLA-4 mRNA表达水平低于腺癌组(P<0.05),CD86稍高于腺癌组(P>0.05),但均低于健康对照组(P均<0.05)。结论肺癌患者CD28/B7家族共刺激分子表达降低,且与组织学类型有关,可能导致免疫系统发生紊乱。

CD28/CTLA4-B7协同刺激分子与角膜移植免疫

角膜移植排斥反应是移植失败的主要原因。致敏T淋巴细胞在角膜移植排斥反应中起着重要的作用,是角膜排斥过程中的主要效应细胞。而T淋巴细胞的激活需要两个信号刺激,即除了通过APC递呈MHC处理过的抗原给抗原特异性T细胞提供第1信号外,还需协同刺激分子作为辅助信号的协同作用,才能使T细胞产生正常的免疫应答。如果缺少协同刺激分子的第2信号,将会导致调节性T细胞的无反应性或特异性免疫耐受。