4-1BBL-B7-H3基因对免疫重建重症联合免疫缺陷荷瘤鼠的抑瘤作用

目的通过建立人免疫重建重症联合免疫缺陷(SCID)荷瘤鼠嵌合模型来探讨4-1BBL-B7-H3基因在非特异性抗肿瘤免疫中的作用。方法将40只SCID鼠随机分为5组,A组(对照组)行免疫重建加注射Tca8113细胞;B组(Ad4-1BBL-B7-H3组)行免疫重建加注射含有人4-1BBL-B7-H3基因腺病毒转染的Tca8113细胞;C组(空载组)行免疫重建加注射含有空载体腺病毒转染的Tca8113细胞;D组(非免疫重建组)不给予小鼠免疫重建,注射Tca8113细胞;E组(非肿瘤组)行免疫重建加注射PBS。每周定期测量肿瘤体积;酶联免疫吸附法检测人IgG蛋白含量;流式细胞仪检测外周血中人CD3+、CD56+淋巴细胞比例;免疫组织化学法观察自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)和Toll样受体2(TLR2)在肿瘤中的表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测4-1BBL-B7-H3 mRNA的表达,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测主要组织相容性复合体1类相关分子(M1C)A、B及TLR2的表达。结果 1)B组小鼠肿瘤体积最小(P<0.05);2)A、B、C、E组小鼠外周血中检测到人IgG、CD3+、CD56+淋巴细胞,B组淋巴细胞比例高于A、C和E组(P<0.05);3)B组NKG2D和TLR2的表达较其余各组明显增强;4)人4-1BBL-B7-H3基因在B组小鼠肿瘤中稳定表达;5)B组M1CA、M1CB和TLR2的表达高于A、C、D组(P<0.05)。结论 4-1BBL-B7-H3基因在肿瘤组织中的高表达能成功诱导人CD3+、CD56+细胞增殖,直接或间接活化TLR2,上调NKG2D及其配体M1CA、M1CB的表达,从而产生有效的抗肿瘤免疫应答。

B7-H3和B7-H4在鼻咽癌组织中的表达及意义

目的探讨B7-H3和B7-H4基因突变在鼻咽癌中的表达及临床意义。方法以60例鼻咽癌标本作为病例组,以30例正常子鼻咽部组织作为对照组,应用免疫组织化学技术,检测两组中B7-H3和B7-H4的表达。结果 B7-H3和B7-H4在鼻咽癌组织中阳性率均明显高于正常鼻咽组织,差异均有显著统计学意义(P<0.01);Ⅲ+Ⅳ期及淋巴结转移患者B7-H3和B7-H4阳性率分别明显高于Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移患者,差异有明显的统计学意义(P<0.05)。结论 B7-H3和B7-H4与鼻咽癌发生和发展密切相关。

siRNA沉默B7-H4表达对人肺腺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:探讨靶向B7-H4基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对人肺腺癌细胞A549增殖、侵袭和迁移的影响。方法:体外化学合成B7-H4特异性siRNA(B7-H4-siRNA),转染A549细胞,MTT法、流式细胞术、Western blotting分别检测A549细胞的增殖、细胞周期,以及B7-H4和Cyclin D1蛋白的水平;Transwell实验检测A549细胞体外侵袭和迁移能力。结果:B7-H4-siRNA成功转染入A549细胞,Western blotting结果显示,B7-H4-siRNA转染抑制A549细胞中B7-H4和Cy-clin D1蛋白的表达。B7-H4-siRNA转染后A549细胞增殖活性明显下降,B7-H4-siRNA组A549细胞的倍增时间明显长于未转染组、Ctrl-siRNA组和转染试剂对照组[(33.78±0.26)h vs(28.69±0.18)、(27.32±0.13)、(26.93±0.19)h,P<0.05]。B7-H4-siRNA转染使A549细胞阻滞在G1期。B7-H4-siRNA组A549细胞的侵袭细胞数明显少于未转染组[(89.80±0.99)个vs(186.20±1.33)个,P<0.05]。B7-H4-siRNA组A549细胞的迁移细胞数明显少于未转染组、Ctrl-siRNA组和转染试剂对照组[(60.20±0.37)个vs(102.57±0.52)、(100.72±0.31)、(98.65±0.21)个,P<0.05〗。结论:B7-H4-siRNA能沉默A549细胞中B7-H4的表达,抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移,B7-H4可能成为肺癌基因治疗的候选靶点。