核酸疫苗p EGFPN1-MLAA34-B7H4IgV的构建及其免疫活性观察

目的构建p EGFPN1-MLAA34-B7H4IgV核酸疫苗,并检测其免疫活性,探讨核酸疫苗抗白血病效应。方法采用重叠延伸PCR技术扩增急性白血病相关抗原基因MLAA34和负性共刺激分子B7H4的融合基因(MLAA34-B7H4IgV),并构建核酸疫苗p EGFPN1-MLAA34-B7H4IgV。将28只BALB/c小鼠随机分为P、M、B、MB组各7只,分别在小鼠两侧股四头肌内侧肌内注射磷酸盐缓冲液p EGFPN1、p EGFPN1-MLAA34、p EGFPN1-B7H4IgV、p EGFPN1-MLAA34-B7H4IgV质粒100μg,在0、2、4周各行1次同剂量加强免疫;分别于0、4、8周眼球取血,8周取血后处死小鼠并摘取脾脏。ELISA法检测免疫8周血清中抗体Ig G1、Ig G2a以及免疫0、4、8周血清细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ,MMT法检测小鼠脾淋巴细胞对单核巨噬细胞THP-1的增殖抑制作用。结果 MLAA34-B7H4IgV融合基因PCR产物电泳检测约为2 000 bp,与理论值(1 922 bp)相符; p EGFPN1-MLAA34-B7H4IgV酶切后电泳检测为5 000~7 500 bp,与理论值(6 655 bp)相符。与同组免疫0周时、同时点P组比较,免疫4、8周时M、B、MB组血清细胞因子IL-2、IL-4水平升高而IFN-γ水平降低(P均<0. 05或<0. 01)。与同时点M、B组比较,MB组血清细胞因子IL-2、IL-4水平升高而IFN-γ水平降低(P均<0. 05); M、B组同时点比较,差异无统计学意义。免疫8周,MB组血清Ig G1水平高于其他各组(P均<0. 05),其他各组间差异均无统计学意义(P均> 0. 05);各组血清Ig G2a水平差异均无统计学意义(P均> 0. 05)。MB组THP-1细胞增殖抑制率高于同效靶比其他各组(P均<0. 05或<0. 01);效靶比为50∶1和25∶1时,M组和B组THP-1细胞增殖抑制率高于高于P组(P均<0. 05),两组之间无差异;效靶比为12. 5∶1时,B组THP-1细胞增殖抑制率高于M组、P组(P均<0. 05)。结论成功构建了核酸疫苗p EGFPN1-MLAA34-B7H4IgV,该疫苗激活了小鼠体内的细胞免疫和体液免疫,具有明显的抗白血病效应。